胎儿股骨骺板和干骺端胰岛素样生长因子—I分布的研究

采用硬组织切片技术和ＡＢＣ免疫组织化学技术，对５例１６－２０周胎儿股骨骺板、干骺端进行胰岛素样生长因子－Ｉ（简称ＩＧＦ－Ｉ）的定位研究。作者同时讨论了在硬组织切片上进行免疫组化染色的可能性和ＩＧＦ－Ｉ在骨组织内的作用。     

雌,雄激素对鼠前列腺组织中胰岛素样生长因子I及其受体mRNA表…

目的：探讨雌、雄激素对鼠前列腺组织中胰岛素样生长因子Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）及其受体ｍＲＮＡ表达的影响。方法：采用地高辛标记探针的原位杂交技术并结合图象分析系统研究了正常组、去势组、雌激素组及去势加雄激素组鼠前列腺组织中ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－Ｉ受体基因表达情况。结果：ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－Ｉ受体ｍＲＮＡ在正常鼠前列腺组织中均有表达；去势鼠腹侧前列腺ＩＧＦ－ＩｍＲＮＡ表达量较正常明显降低，而ＩＧＦ－Ｉ受体ｍＲＮ     

胰岛素样生长因子基因在人淋巴细胞表达的探讨

目的探讨胰岛素样生长因子（ＩＧＦｓ）多肽、受体和结合蛋白在免疫调节和免疫发育中的意义。方法采用逆转录聚合酶链反应技术在ｍＲＮＡ水平观察正常成人和新生儿淋巴细胞静息和ＰＨＡ刺激不同时间ＩＧＦｓ及其受体,结合蛋白基因的表达。结果在静息和活化的成人和新生儿淋巴细胞均有ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－ⅠＲ、ＩＧＦ－ⅡＲ、ＩＧＦＢＰ－２、３、４、６基因表达,并随ＰＨＡ刺激时间的延长表达水平有所变化;ＩＧＦＢＰ－５ｍＲＮＡ在活化的淋巴细胞表达;ＩＧＦ－Ⅱ、ＩＧＦＢＰ－ⅠｍＲＮＡ仅在新生儿淋巴细胞检测到。结论ＩＧＦｓ可能通过参与淋巴细胞的增殖、分化,影响免疫系统的功能和免疫发育过程。     

食管癌高发区人群食管癌前病变癌基因EGFR、C－Jun和Ras蛋白表达的研究

为进一步了解食管癌前病变发生的分子基础，采用免疫组织化学技术测定人食管正常上皮和癌前病变组织中表皮生长因子受体ＥＧＦＲ，Ｃ－Ｊｕｎ和Ｒａｓ三种癌基因蛋白的表达状况。结果：在５４例食管粘膜活检组织中，共发现１２例正常上皮，３４例基底细胞增生和８例间变。在２９例ＥＧＦＲ测定中，正常组织未见免疫阳性反应，而基底细胞增生和间变分别出现３９％和８０％的免疫阳性反应率。在所有活检正常和癌前病变组织中未观察到Ｃ－Ｊｕｎ和Ｒａｓ蛋白表达。提示ＥＧＦＲ在食管癌前病变发生和发展中可能起一定的作用。     

食管癌高发区人群食管癌前病变癌基因EGFR,C—Jun和Ras蛋…

为进一步了解食管癌前病变发生的分子基础，采用免疫组织化学技术测定人食管正常上皮和癌前病变组织中表皮生长因子受体ＥＧＦＲ，Ｃ－Ｊｕｎ和Ｒａｓ三种癌基因蛋白的表达状况。结果：在５４例食管粘膜活检组织中，共发现１２例正常上皮，３４例基底细胞增生和８间变。在２９例ＥＧＦＲ测定中，正常组织未见免疫阳性反应，而基底细胞增生和间变分别出现３９％和８０％的免疫阳性反应率。在所有活检正常和癌前病变组织中未观察到Ｃ－     

胰岛素样生长因子在人前列腺增生症中作用的探讨

应用免疫组化方法完成了胰岛素样生长因子（ＩＧＦ－Ｉ）在４８例人前列腺增生中的组织定位。组织经４％甲醛固定，石蜡包埋。ＩＧＦ－Ｉ免疫反应主要定位于腺体基底层上皮细胞浆内，阳性染色也见于腺体分泌上皮、鳞状化生上皮、平滑肌细胞和神经纤维细胞内。证实：ＩＧＦ－Ｉ存在于前列腺增生患者的前列腺组织中，并且与前列腺增生的发病有一定关系。     

Bax蛋白在骺板软骨细胞中的表达

目的：研究凋亡相关基因Bax在正常骺板软骨细胞中的表达。方法：采用免疫组化ABC法。结果：Bax的免疫反应阳性物在正常骺板软骨的各个区中有不均衡的表达，在骺板软骨膜下的软骨细胞中没有Bax表达；在骺板的静止区Bax的免疫反应阳性物在软骨的细胞质中表达；在骺板的增殖区位于细胞质中的Bax免疫阳性反应增强；在骺板的肥大区Bax的免疫反应强度达到最大值，免疫反应阳性物位于软骨细胞的胞质和胞核中。结论：Bax可能通过数量的积累促使骺板软骨细胞凋亡。     

肝硬变及肝癌癌旁肝组织中小多角肝细胞性质的免疫…

应用免疫组织化学的方法对６０例ＨＣＣ，癌旁肝组织和４７例肝硬变组织中ＨＢｓＡｇ和ＩＧＦ－Ⅱ表达进行实验观察，以探讨小多角肝细胞（ＳＰＬＣ）的性质。结果显示，在癌旁肝和肝硬变的ＳＰＬＣ中ＨＢｘＡｇ和ＩＧＦ－Ⅱ的阳性表达率分别为６９．１４％和６６．６７％，其中ＨＢｘＡｇ阳性的ＳＰＬＣ中ＩＧＦ－Ⅱ阳性率为８２．１４％，而ＨＢｘＡｇ阴性的ＳＰＬＣ中ＩＧＦ－Ⅱ阳性率为３２．００％，ＩＧＦ－Ⅱ的ＨＢｘＡｇ了性     

转化生长因子—β对骺软骨细胞增殖和PCNA表达的影响

采用１４天鸡胚股骨无血清培养、５－溴尿嘧啶核苷（ＢｒｄＵ）掺入标记和细胞核增殖抗原（ＰＣＮＡ）免疫染色方法，研究转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对骺软骨细胞增殖的作用。结果显示：ＢｒｄＵ阳性软骨细胞数目与分布都位于ＴＧＦ－β作用剂量和时间密切相关，ＴＧＦ－β可以促进骺板成熟区和肥大区软骨细胞增殖，与ＢｒｄＵ标记相比，ＰＣＮＡ阳性细胞分布区域和数目远多于前者，根据染色情况可以将ＰＣＮＡ阳性细胞分为Ｓ期和Ｓ期细胞两种。结论：ＴＧＦ－β参与和调节骺软骨各部位软骨细胞增殖活动，并能诱导非增殖软骨细胞表达ＰＣＮＡ，用ＰＣＮＡ作为细胞增殖的指标是不适宜的。     

IGF－I受体cDNA的克隆及序列分析

ＩＧＦ－Ｉ受体在心血管病及肿瘤的发病过程中具有重要作用。本文应用逆转录—聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，克隆了人胎肝组织中ＩＧＦ－Ｉ受体的β亚基ｃＤＮＡ，并对这一ｃＤＮＡ进行了亚克隆和序列分析。本工作为进一步探讨ＩＧＦ－Ｉ受体在动脉粥样硬化、心肌肥厚以及肝癌中的作用奠定了基础。     

上皮钠离子通道对大鼠破骨细胞分化和骨吸收功能的影响

目的本文探讨上皮钠离子通道（ENaC）对破骨细胞功能和活性的影响。方法采用大鼠巨噬细胞集落刺激因子和核转录 因子-κB受体活化因子配体诱导大鼠骨髓单核细胞使其分化为破骨细胞。以1.5×104密度接种到12孔板,查随机表分3孔为1 组,分为4组：Control组和不同浓度阿米洛利（Ami, ENaC的抑制剂）组。抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色进行阳性破骨细胞 鉴定;将破骨细胞和骨片共同培养,测定骨吸收陷窝的数目;用RT-PCR技术分析破骨细胞标志酶基因组织蛋白酶K（CK）的表 达。结果不同浓度的Ami处理破骨细胞后,TRAP染色阳性破骨细胞减少,抑制破骨细胞的形成和骨吸收,而且降低破骨细胞 特异性基因CK的表达。结论本次实验在细胞水平证明ENaC在破骨细胞上的表达并且调控破骨细胞的分化和骨吸收,说明 ENaC可能参与破骨细胞的功能调节,提示破骨细胞可能存在一个与ENaC相关调节的新途径,为骨代谢的研究提供了一个新 思路。     

1,25(OH)2维生素D3诱导大鼠骨髓单核细胞形成破骨细胞

目的 观察1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2 D3]诱导成年大鼠骨髓来源的单核细胞形成多核破骨细胞的作用.方法 实验分为单核细胞诱导组和全骨髓诱导组,每组各10只大鼠.密度梯度离心法分离大鼠骨髓中的单核细胞,α-MEM培养液中加入10-8 mol/L的1,25(OH)2 D3诱导单核细胞向破骨细胞分化.利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、倒置相差显微镜和扫描电镜,观察诱导不同时相TRAP阳性(TRAP )多核细胞的形态学特征、特异性酶表达、以及骨吸收陷窝.进而计数诱导的破骨细胞数量,鉴定其功能活性,并与全骨髓诱导方法比较.结果 骨髓单核细胞诱导组在培养第7 d出现TRAP 多核细胞,第14 d TRAP 多核细胞数量达峰值,第21 d TRAP 多核细胞数量开始减少.从培养第14 d到第23 d,单核细胞诱导组TRAP 多核细胞数量多于全骨髓诱导组(P＜0.05);培养第10 d到第23 d单核细胞诱导组骨吸收陷窝数量多于全骨髓诱导组 (P＜0.05).单核细胞诱导组破骨细胞数量高峰期可持续7 d,全骨髓诱导法仅持续3 d.结论 1,25(OH)2 D3能够诱导成年大鼠骨髓来源的单核细胞形成破骨细胞;所诱导的破骨细胞的数量和峰值持续时间、以及骨吸收活性均高于全骨髓诱导方法.     

三根汤含药大鼠血清对颗粒诱导的破骨细胞形成及其骨吸收功能的影响

目的：研究三根汤含药大鼠血清在体外实验中对颗粒诱导的破骨细胞形成及其骨吸收功能的影响。方法：利用核转录因子-κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子共同诱导小鼠骨髓巨噬细胞分化成破骨细胞。将骨髓巨噬细胞同骨水泥即聚甲基丙烯酸甲酯颗粒按照1：3的比例分别加入至24孔板及装有骨片的96孔板中。50只SD雄性大鼠,随机分成5组,每组10只,分别给予不同药物后,同等条件下提取空白血清、西药（伊班膦酸钠）血清及高、中、低浓度中药（三根汤）血清并分别加入至相应组的培养液中。抗酒石酸酸性磷酸酶染色进行破骨细胞分化鉴定并计数,计算机图像分析技术测定骨片上骨吸收陷窝的面积。结果：加入含药血清组破骨细胞数量低于空白组（P〈0.05）,西药组与三根汤高剂量组破骨细胞数量低于三根汤中、低剂量组（P〈0.05）,且西药组与中药高剂量组两组间差异无统计学意义（P〉0.05）。骨吸收陷窝实验显示空白组骨吸收陷窝面积大于其他组（P〈0.05）,西药组与三根汤高剂量组陷窝吸收面积小于三根汤中、低剂量组（P〈0.05）,且两组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：三根汤含药血清可以抑制颗粒诱导的破骨细胞的形成及其骨吸收功能。     

同种异体皮质骨和松质骨愈合的组织学研究

目的探讨同种异体皮质骨和松质骨愈合方式的差异。方法兔左侧尺骨中段植人冻干异体骨,分为皮质骨组和松质骨组,均为32只。术后2、4、8、16周分批处死,取材进行Ⅰ型胶原基因的原位杂交研究,以及皮质骨孔隙率和松质骨平均小梁宽度的组织学定量分析。结果异体皮质骨内先出现大量的骨吸收陷窝,然后在陷窝内出现表达1型胶原mRNA的成骨细胞;其孔隙率先增大,然后缓慢减小。异体松质骨内早期就有大量表达五型胶原mRNA的成骨细胞沉积在原有骨小梁表面,附近同时有破骨细胞的活动;其平均小梁宽度持续上升。结论同种异体皮质骨的愈合是在吸收的基础上成骨,而同种异体松质骨内则可以直接成骨。     

L-苏糖酸盐对破骨细胞骨吸收功能影响的体外研究

目的　观察 L -苏糖酸盐对体外兔破骨细胞 (OC)骨吸收功能的影响。方法　制备骨磨片 ,培养 OC,并分别加入高中低浓度 (10 - 5、10 - 7、10 - 9m ol/L )的 L -苏糖酸钙、L -苏糖酸钠、阿仑膦酸钠、17β-雌二醇、葡萄糖酸钙 ,实验设以上各浓度组及对照组 (共 16组 ,每组 n=8) ,甲苯胺蓝染色 -光镜观察分析骨片上骨吸收陷窝面积 ,EL ISA测定上清液 型胶原 C-末端肽 (CTx或 Crosslaps)浓度。结果　 1L -苏糖酸钙各组陷窝面积及 CTx浓度均较葡萄糖酸钙组及对照组减少 (P<0 .0 0 1) ;L -苏糖酸钠各组作用较对照组显著 (P<0 .0 5 ) ;而葡萄糖酸钙组与对照组无显著差异 (P>0 .0 5 )。 2同浓度 L -苏糖酸钙较 L -苏糖酸钠组陷窝面积、CTx浓度减少显著 (P<0 .0 5 ) ;按 CTx水平 ,低、中浓度 L -苏糖酸钙组达到或超过中、高浓度 L -苏糖酸钠组作用 (P<0 .0 5 )。 3高浓度 L -苏糖酸钙组作用介于中、低浓度 17β-雌二醇组之间 (P<0 .0 5 ) ,但无阿仑膦酸钠各组显著 (P<0 .0 0 1) ;4上清液 CTx浓度与陷窝面积高度相关 (r=0 .876 )。 5 CTx在多个组间比较时显示比陷窝面积更敏感、更稳定 (平均变异系数分别为 10 .0 1%vs14 .6 6 %)。结论　 L -苏糖酸盐尤其是 L -苏糖酸钙在体外有一定的抑制破骨细胞骨吸收的作用 ,其     

组织块法与传统破骨细胞培养方法对骨吸收功能的比较研究

目的：比较组织块法与传统破骨细胞培养方法对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法：用组织块法与传统破骨细胞培养方法进行破骨细胞培养,抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP）染色鉴定破骨细胞,超声去除骨片上细胞后,骨片经1%甲苯胺蓝染色,光镜下观察骨片上吸收陷窝。根据骨片上陷窝数目、面积以及深度定量比较两组破骨细胞骨吸收功能。结果：吸收陷窝经甲苯胺蓝染色后光镜下可清晰识别,组织块法在骨片上的吸收陷窝数目比传统法明显少,而且骨片上陷窝面积及深度也比传统法小而浅（P〈0.05）。结论：组织块法培养的破骨细胞无论从数量上还是从功能上均没有传统法培养的好。数量大的成骨细胞对共培养破骨细胞骨吸收功能起到负面作用。     

OPGL诱导小鼠外周血单核细胞分化为破骨细胞及其破骨活性

目的 :观察在小鼠外周血单核细胞培养中破骨细胞抑制因子配基 (osteoprotegerinligand ,OPGL)诱导单核细胞分化为破骨细胞的作用 ,以及地塞米松对破骨细胞分化和骨吸收活性的影响 .方法 :将外周血单核细胞分组培养 ,在A组中加入巨噬细胞集落刺激因子和OPGL ,B组中再加入地塞米松 .多核巨细胞形成后行抗酒石酸酸性磷酸酶 (tartratere sistantacidphosphatase,TRAP)及甲苯胺蓝染色 .将象牙骨片上骨吸收面积经计算机图像分析以确定其差异 .结果 :外周血单核细胞培养 7～ 10d ,可以见到大量的多核巨细胞 ,体积巨大 .B组中 ,多核巨细胞出现较A组早 .几乎所有的多核巨细胞表现为TRAP强阳性 ,而多数单核细胞和巨噬细胞为TRAP阴性或弱阳性 .在象牙骨片上有大量的骨吸收陷窝形成 ,A、B两组的骨吸收无明显差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :OPGL可以诱导小鼠外周血单核细胞分化为破骨细胞并具有骨吸收活性 .地塞米松可加速OPGL诱导的破骨细胞分化作用 ,但对于破骨细胞的骨吸收活性无影响     

体外破骨细胞性骨吸收陷窝的动态观察

动态观察破骨细胞的功能及药物的作用。采用体外破骨细胞培养法、显微摄影、显微光密度仪及图像分析等技术。结果表明，破骨细胞具有不规则的移行性，在一定时间范围内，随着培养时间的延长，破骨细胞性骨吸收陷窝不断增多与增大，并呈不规则形状。国产帕屈磷酸钠（ＡＰＤ）可直接抑制骨吸收陷窝的数目及表面积。提示动态观察体外破骨细胞性骨吸收陷窝形态变化的方法是一种直观、简便、稳定和能反映药物作用的方法。     

碱性成纤维细胞生长因子和骨保护素的生物学作用研究进展

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)能够促进成骨细胞增殖,而骨保护素(OPG)是一种破骨细胞抑制因子,两者对于骨的再生与修复具有重要作用。近年来很多研究表明bFGF与OPG不仅在人体各组织器官中有大量表达,而且在口腔牙周组织也同样有所表达,并且有实验结果表明,OPG和bFGF的联合应用可促进犬牙槽骨缺损修复。现就bFGF和OPG的生物学特性及其作用予以综述。     

小鼠破骨细胞骨髓诱导模型的建立及功能观察

目的 获得大量高质量小鼠破骨细胞,为体外研究破骨细胞骨吸收功能提供丰富的细胞来源.方法 采用巨噬细胞集落刺激因子(maerophage colony stimulating factor,M-CSF)和破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)诱导小鼠骨髓单核细胞分化为破骨细胞,并通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phos-phatase,TRAP)染色和骨吸收实验来鉴定破骨细胞及其噬骨能力.结果 诱导3 d后可见TRAP( )多核细胞出现,诱导5 d后骨片上可见蓝紫色的吸收陷窝.随着培养时间的延长,TRAP( )多核细胞数目和吸收陷窝呈现时间依赖性增长趋势(P<0.05).结论 M-CSF和RANKL诱导小鼠骨髓单核细胞可产生大量的具有活跃噬骨能力的破骨细胞.