环孢菌素A对体外NIT-1胰岛β细胞增殖及其增殖相关基因表达的影响

目的观察环孢霉素A(CsA)对体外培养的NIT-1胰岛β细胞增殖和pol α1 mRNA表达的影响。方法用MTT法检测不同浓度的CsA (0.05~10 μmol/L)作用48和72 h后NIT-1胰岛β细胞增殖的情况。利用半定量RT-PCR法检测10 μmol/L CsA处理NIT-1胰岛β细胞48 h后pol α1 在mRNA水平上的表达。结果CsA可抑制NIT-1胰岛β细胞的增殖,且与时间、剂量正相关。另外,CsA还下调了pol α1 mRNA的表达。结论CsA可抑制NIT-1胰岛β细胞增殖,其机制可能与下调pol α1 mRNA表达有关。     

环孢霉素A抑制NIT-1胰岛β细胞胰岛素释放并下调线粒体氧化磷酸化酶系基因的表达

目的 研究免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)对NIT-1胰岛β细胞胰岛素分泌的影响及在基因水平上对线粒体氧化磷酸化水平的影响。方法 体外培养NIT-1胰岛β细胞，用10μmol／LCsA处理24和48h。放射免疫测定法(RIA)检测胰岛素释放，半定量RT-PCR检测CsA处理NIT-1胰岛β细胞后线粒体氧化磷酸化酶系中的几种主要成员(Nuox23、Cox7c和Atp5K)在mRNA水平上的表达。结果 CsA处理24和48h可显著抑制胰岛素的释放并下调Nuox23、Cox7c和Atp5K基因mRNA表达。结论 CsA下调线粒体氧化磷酸化酶系基因的表达可能是其降低ATP合成引起胰岛素释放下降的机制之一。     

环孢霉素A抑制NIT-1胰岛β细胞胰岛素释放并下调线粒体氧化磷酸化酶系基因的表达

目的研究免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)对NIT-1胰岛β细胞胰岛素分泌的影响及在基因水平上对线粒体氧化磷酸化水平的影响。方法体外培养NIT-1胰岛β细胞,用10 μmol/L CsA处理24和48 h。放射免疫测定法(RIA)检测胰岛素释放,半定量RT-PCR检测CsA处理NIT-1胰岛β细胞后线粒体氧化磷酸化酶系中的几种主要成员(Nuox23、Cox7c和Atp5K)在mRNA水平上的表达。结果CsA处理24和48 h可显著抑制胰岛素的释放并下调Nuox23、Cox7c和Atp5K基因mRNA表达。结论CsA下调线粒体氧化磷酸化酶系基因的表达可能是其降低ATP合成引起胰岛素释放下降的机制之一。     

环孢霉素A对NIT-1胰岛β细胞基因表达谱的影响

目的采用基因芯片技术,观察免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)对NIT-1胰岛β细胞基因表达谱的影响。方法体外培养NIT-1胰岛β细胞,以10μmol/LCsA处理24h。应用基因芯片分别检测CsA处理24h及空白对照组NIT-1胰岛β细胞的基因表达谱。结果CsA作用于NIT-1胰岛β细胞24h后,在4096条基因中,有38条基因表达上调,其中已知功能基因13条,主要是与应激反应、蛋白质合成及细胞生长相关的基因。有46条基因表达下调,其中已知功能基因25条,主要是与细胞生长发育、氧化磷酸化过程及蛋白合成有关的基因。RT-PCR技术验证了Zfr、Tpi和Pax63个基因表达的变化。结论CsA作用于NIT-1胰岛β细胞24h后,可影响NIT-1细胞中多种基因的表达,其中对细胞生长发育、氧化磷酸化等有关基因表达的抑制作用,可能与CsA抑制NIT-1细胞胰岛素释放的作用机制相关。本研究为进一步深入研究CsA对胰岛β细胞的作用机制提供了线索和依据。     

环孢霉素A对NIT-1胰岛β细胞基因表达谱的影响

目的采用基因芯片技术，观察免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)对NIT—1胰岛β细胞基因表达谱的影响。方法体外培养NIT—1胰岛β细胞，以10μmol／L CsA处理24h。应用基因芯片分别检测CsA处理24h及空白对照组NIT—1胰岛β细胞的基因表达谱。结果CsA作用于NIT—1胰岛β细胞24h后，在4096条基因中，有38条基因表达上调，其中已知功能基因13条．主要是与应激反应、蛋白质合成及细胞生长相关的基因。有46条基因表达下调．其中已知功能基因25条，丰要是与细胞生长发育、氧化磷酸化过程及蛋白合成有关的基因。RT-PCR技术验证了Zfr、Tpi和Pax6 3个基因表达的变化。结论CsA作用于NIT—1胰岛β细胞24h后，可影响NIT—1细胞中多种基因的表达，其中对细胞生长发育、氧化磷酸化等有关基因表达的抑制作用，可能与CsA抑制NIT-1细胞胰岛素释放的作用机制相关。本研究为进一步深入研究CsA对胰岛β细胞的作用机制提供了线索和依据。     

甘草酸对TGF-β1诱导的NRK-49 F细胞活化及分泌细胞外基质的影响

目的 探讨甘草酸对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49 F)中纤维化相关因子表达的影响.方法 体外培养NRK-49 F细胞,不同浓度甘草酸干预细胞48 h后,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,确定对细胞活性无显著影响的作用浓度.以10μg/L TGF-β1刺激NRK-49 F细胞构建肾间质纤维化细胞模型,加入不同浓度甘草酸进行干预,免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COL1)表达情况.实时荧光定量PCR、Western Blot法检测纤维化相关因子α-SMA、COL1、Ⅲ型胶原(COL3)mRNA及蛋白表达情况,以评价甘草酸对成纤维细胞活化及细胞外基质分泌的影响.结果 CCK-8结果显示甘草酸在100～600μmol/L浓度范围内对NRK-49 F细胞活性无影响.免疫荧光结果表明,加入甘草酸后可抑制 α-SMA表达及COL1分泌,随甘草酸浓度增加,抑制作用增强.Western Blot结果显示,与模型组相比,甘草酸干预可下调α-SMA、COL1、COL3的蛋白表达,其中甘草酸150μmol/L组COL1的蛋白表达水平降低(P<0.01),甘草酸200μmol/L组COL1、COL3表达均降低(P<0.01).RT-PCR结果表明,与模型组相比,甘草酸干预可下调α-SMA、COL1、COL3表达,甘草酸150μmol/L组COL1 mRNA的表达水平降低(P<0.01),甘草酸200μmol/L组COL1、COL3 mRNA表达均降低(P<0.01).结论 甘草酸能够有效抑制TGF-β1诱导的NRK-49 F细胞中α-SMA、COL1、COL3的mRNA及蛋白表达,其作用机制有待进一步探讨.     

吡格列酮对游离脂肪酸作用下βTC-3细胞GPR40表达的干预作用

目的探讨游离脂肪酸（FFA）作用下胰岛βTC-3细胞G蛋白受体40（GPR40）mRNA表达的改变以及毗格列酮（Piog）对此改变的干预作用。方法以βTC-3细胞为研究对象,分为对照组及FFA组（0．25．0．5及1mmol／L）。半定量RT—PCR方法检测GPR40的表达。用不同浓度的Piog（0,0．1,1．10μmol／L）预孵育βTC-3细胞6h,加入1mmol／LFFA继续孵育24h,半定量RT-PCR方法检测GPR40的表达。结果（1）FFA孵育12h后。各组间GPR40的表达差别无统计学意义。（2）FFA孵育24h后,与对照组比较．0．25mmol／LFFA组GPR40的表达无差异,但0．5mmol／L和1mmol／LFFA组GPR40表达下调（P〈0．05）;0．5mmol／L与1mmol／LFFA组比较GPR40表达差别无统计学意义。（3）与1mmol／LFFA组比较,0．1μmol／L Piog＋1mmol／LFFA组GPR40mRNA表达无差异,而1μmol／LPiog＋1mmol／LFFA组和10μmol／L＋1mmol／LFFA组GPR40表达升高（P〈0．01）。结论长期高浓度FFA作用能够下调CTC-3细胞GPR40的表达,而Piog有助于保护或减轻FFA水平异常导致的BTC-3细胞GPR40表达的损害。     

姜黄素通过P53/P21/PCNA/eIF4E信号通路抑制A549细胞增殖

目的研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、MTT法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72 h后,FCM检测细胞周期;RT-PCR、Western blot检测P53、P21、PCNA及eIF4E mRNA和蛋白的表达水平。结果 20μmol/L姜黄素可引起A549细胞S期阻滞,抑制细胞增殖,减少细胞的克隆形成数。20μmol/L姜黄素作用A54924 h后P53、P21 mRNA和蛋白表达上调,48 h或72 h后变得尤明显。此外,20μmol/L姜黄素处理A549细胞48 h后可引起PCNA、eIF4E mRNA和蛋白表达水平下调,72 h后尤明显。结论姜黄素可抑制A549的克隆形成数和细胞增殖,其机制可能与姜黄素促进P53和P21基因表达,抑制PCNA和eIF4E基因表达有关。     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa增殖和诱导凋亡作用研究

目的:探讨葛根素对人子宫颈癌细胞株HeLa的作用及其机制。方法:取对数生长期的HeLa细胞分别用不同剂量的葛根素处理(0μmol,12.5μmol,25μmol,50μmol)。细胞培养48 h后,利用MTT法检测HeLa细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA水平。Western blotting法检测Wnt、β-catenin、Bax、Bcl-2、p53和p21表达水平。结果:葛根素成剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡,促进BaxmRNA表达,减少Wnt、β-catenin、Bcl-2 mRNA、p53和p21表达。结论:葛根素可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与减少Wnt/β-catenin信号通路活化相关。     

双氯芬酸抑制肝癌细胞增殖和促进环氧合酶-2 mRNA作用的表达

目的 观察环氧合酶抑制剂双氯芬酸钠对体外培养的肝癌细胞HepG2、Hep3B和正常肝细胞系QSG-7701增殖的作用以及药物对环氧合酶-2（COX-2）mRNA表达的影响，探讨COX-2与肝癌细胞增殖的关系。方法 采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞计数法测定药物作用24、48、72h后细胞增殖活性，半定量逆转录聚合酶链反应检测各种细胞系COX-2 mRNA的表达水平以及药物作用对基因表达的影响。结果双氯芬酸在10～200μmol/L浓度依赖性地抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖，50μmol／L作用48h后抑制率分别为40．47％和54．49％，半数抑制浓度分别为70．54和48．39μmol／L。双氯芬酸对正常肝细胞株QSG-7701的抑制作用较弱，作用48h的半数抑制浓度为189．91μmol／L。HepG2、Hep3B细胞均表达COX-2 mRNA，QSG-7701细胞几乎不表达COX-2 mRNA。双氯芬酸和化疗药5-氟尿嘧啶均可增强HepG2和Hep3B细胞COX-2 mRNA的表达。结论 双氯芬酸特异性地抑制表达COX-2的肝癌细胞HepG2和Hep3B的增殖，并且诱导COX-2 mRNA表达上调，提示COX-2在肝癌细胞增殖中具有重要意义。     

Detrimental effects of homocysteine on insulin release and apoptosis of pancreatic beta cells

OBJECTIVE: To study the effects of homocysteine (Hcy) on the insulin secretion and apoptosis of pancreatic beta cells. METHODS: Clonal mouse pancreatic beta cells of the line NIT-1 were cultured and exposed to Hcy of 50, 100, 250, 500 and 1000 micromol/L for 6, 12, 24, and 48 hours respectively, then glucose of the concentrations of 5.6 mmol/L or 16.7 mmol/L was added for 1 h, and then the insulin concentration in the culture medium was determined by radioimmunoassay, and MTT method was used to detect the survival rate of the cells. NIT-1 cells were exposed to Hcy of the concentrations of 0, 50, 100, 250, 500 and 1000 micromol/L respectively for 24 h, another NIT-1 cells were exposed to Hcy of the final concentration of 250 micromol/L for 0, 6, 12, and 48 h respectively, then flow cytometry (FC) was used to detect the apoptosis of the cells. After exposure to Hcy of the concentrations of 50, 100, 250, 500 and 1000 micromol/L for 72 h DNA agarose gel electrophoresis was performed. RESULTS: Hcy inhibited the basal and glucose-induced insulin secretion in a time- and dose-dependent manner. The insulin secretion amounts of the NIT-1 cells after exposure to 50 micromol/L Hcy for 24 hours and to 100 micromol/L Hcy for 12 hours were significantly lower by 17.1% and 10.8% compared with the control group (all P < 0.01). Incubated with 100 micromol/L Hcy for 12 hours and 24 hours respectively, the survival rates of the NIT-1 cells were 94.56% and 87.93% respectively (P < 0.05, P < 0.01). Incubated with 100 micromol/L Hcy for 24 hours, the apoptosis rate of the NIT-1 cells was 7.21% (P < 0.01); and incubated with 250 micromol/L Hcy for 12 hours, the apoptosis rate of the NIT-1 cells was 12.93% (P < 0.01). Both FC and agarose gel electrophoresis indicated that Hcy induced cell apoptosis time- and concentration-dependently. CONCLUSION: Hcy impairs insulin secretion and induces cell apoptosis of pancreatic beta cells time- and concentration-dependently.     

辛伐他汀对低氧培养的内皮细胞合成和分泌内皮素-1的影响

目的观察羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-COA)还原酶抑制剂辛伐他汀对低氧培养的内皮细胞合成和分泌内皮素-1(ET-1)的影响。方法低氧培养人脐静脉内皮细胞,采用辛伐他汀以不同浓度(0、1、2.5、5.0、10.0μmol/L)和不同作用时间(12、24、48h)进行干预,并用甲羟戊酸(100μmol/L)调节辛伐他汀的作用。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮细胞ET-1mRNA的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测内皮细胞上清液中ET-1蛋白的浓度。结果11μmol/L浓度的辛伐他汀对内皮细胞ET-1mRNA和ET-1蛋白表达没有影响,2.5μmol/L辛伐他汀即可抑制ET-1的表达,但与0μmol/L浓度组相比差异无统计学意义;5μmol/L及10μmol/L辛伐他汀则表现出明显的抑制作用(P<0.01),尤以10μmol/L浓度组明显;2以10μmol/L辛伐他汀干预低氧培养的内皮细胞,低氧12h后,内皮细胞ET-1mRNA和ET-1蛋白表达明显减少,24h后继续降低,48h达到最低;3100μmol/L甲羟戊酸可以阻止辛伐他汀对低氧培养的内皮细胞合成和分泌ET-1的抑制作用。结论辛伐他汀对低氧培养的内皮细胞合成和分泌ET-1具有抑制作用。     

紫草素抑制人气道平滑肌细胞的增殖

目的 研究紫草素对体外培养的人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖的影响.方法 组织块贴壁法原代培养传至4～8代的HASMCs,经40、20、10、5、2、1、0.5 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用12、24、48 h后,应用MTS法测定紫草素对HASMCs的细胞增殖的影响;经40、20、10、5 ?mol/L及0 ?mol／L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用流式细胞术分析紫草素对细胞周期的影响;经20 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用SP免疫细胞化学法检测紫草素对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 (1)与对照组相比,20 ?mol/L和40 ?mol/L的紫草素均可有效抑制细胞增殖(均P<0.05),以48 h最为显著(抑制率分别为30.1％与42.9％),但两者之间无显著性差异(P0.05).(2)20 ?mol/L及40 ?mol/L的紫草素均可显著提高G0/G1期比例(P<0.05),阻滞细胞周期进程,但两者之间无显著性差异(P0.05).(3)20 ?mol/L的紫草素可显著下调PCNA的表达(P<0.01).结论 紫草素对HASMCs具有明确的抗增殖作用.     

三氧化二砷对耐药白血病细胞血管内皮生长因子和P-糖蛋白表达的影响

目的:研究三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对K562/A02细胞表达血管内皮生长因子(vascular endo- thelial growth factor,VEGF)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gP)的影响,并对VEGF和P-gp的相关性进行探讨。方法:用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测ATO对K562/A02细胞的增殖抑制率,酶联免疫吸附双抗体夹心法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定上清VEGF含量,流式细胞术测定P-gP表达率。结果:0.05μmol/L ATO对K562/A02细胞的增殖和VEGF的表达无明显影响;0.4、3.2μmol/L ATO则对K562/A02细胞有明显的增殖抑制作用和下调VEGF的作用(P<0.05)。P-gP经0.05、0.4μmol/L ATO处理24、48、72h后无明显变化(P>0.05),3.2μmol/L ATO处理48、72 h后可显著下调P-gP表达(P<0.05)。结论:ATO逆转K562/A02细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的作用可能与其调控P-gP和VEGF的水平有关;K562/A02细胞VEGF水平与P-gP的表达率可能有一定的相关性。     

Effect of hypoxia on proliferation and alpha 1 (I) procollagen gene expression by human fetal lung fibroblasts

OBJECTIVE: The effect of 2% hypoxia on the proliferation and alpha 1(I) procollagen gene expression by human fetal lung fibroblast was studied. METHODS: Cell proliferation was determined by cell counting and nonradioactive cell proliferation assay method. alpha 1(I) procollagen gene expression was detected by Northern blot hybridization analysis. RESULTS: Cell number and 490 nm OD expressing low oxygen values were markedly increased by the 24, 48 and 72 h exposure to 2% hypoxia respectively. An obvious increase of the alpha 1(I) procollagen mRNA expression was detected after 24 h exposure to 2% hypoxia. The increase of gene expression could be inhibited by Ligustrazin (30 micrograms/ml, 10 micrograms/ml). CONCLUSIONS: 2% hypoxia plays an important role in the outcome of wound healing and pulmonary vascular remodeling by affecting the function of human fetal lung fibroblasts.     

鬼臼毒素纳米脂质体对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究鬼臼毒素纳米脂质体(PDP-SLN)对宫颈癌细胞系Hela细胞增殖及凋亡的影响.方法 不同浓度(0.0005～5.000 ?mol/L)鬼臼毒素(PDP)及PDP-SLN分别处理Hela细胞,MTT法检测细胞增殖活性.Annexin V/PI染色,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 (1)PDP-SLN及PDP对Hela细胞增殖的抑制作用为明显的剂量依赖性和时间依赖性,同药物浓度同时间孵育条件下,PDP-SLN对细胞增殖的抑制效果明显优于PDP.24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)PDP-SLN为4.10、0.65、0.20 ?mol/L,PDP为9.2、4.0、1.3 ?molFL.(2)PDP-SLN及PDP均可以明显促进细胞凋亡.PDP-SLN 24、72 h诱导的凋亡率为90.8％和94.2％;PDP 24、72 h诱导啁亡率为64.I％和68.4％.结论 PDP-SLN具有更强的增殖抑制和凋亡诱导效果.