万乃洛韦抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的 观察万乃洛韦在体内抗鸭乙型肝为病毒（DHBV）的作用,为临床治疗乙型肝炎病人提供实验依据。方法 采用重庆麻鸭乙型肝炎动物模型,用万乃洛韦治疗1个月,检测用药前后血清中的DHBV DNA及转氨酶、肝转氨酶、肝细胞病理、肝细胞中的DHBV DNA等。结果 万乃洛韦用药1月能使血清DHBV DNA总体水平显著降低（P＜0．05或P＜0．01）,各剂量组血清DHBV DNA有阴转现象。肝脏病理检查及血清转氨酶 检查发现,万乃洛韦对肝组织无明显影响,大剂量用药组ALT虽有轻度升高,但停药后即恢复正常。Southem Blot检测肝组织内DHBV DNA,提示该药能抑制病毒在肝内的复制,但不能彻底清除超螺旋DNA。结论 万乃洛韦在体内有抗鸭乙型肝炎病毒的作用。     

阿的福韦在鸭乙型肝炎模型及2.2.15细胞中抗乙型肝炎病毒的药效研究

目的:观察阿的福韦体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用及体外抗乙型肝炎病毒(HBV)效果.方法:采用鸭乙型肝炎动物模型,用阿的福韦口服治疗10天,检测用药前后血清中的DHBV DNA、DHBsAg,并取肝脏样本提取总DNA,作Southern Blot分析.此外,以2.2.15细胞为靶细胞,给药后通过检测细胞培养液中HBsAg、HBeAg和HBV DNA观察阿的福韦抗HBV效果.结果:阿的福韦各剂量组用药后均能使血清中的DHBVDNA显著降低或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01),但停药后有DHBV DNA回升现象;用药前后DHBsAg无明显改变.肝组织Southern Blot分析亦显示用药后肝脏中DHBV DNA有明显降低,停药后DHBV DNA反跳明显.大剂量阿的福韦加入细胞培养12天,对HBsAg抑制率为17.01%,对HBeAg抑制率为26.80%,对HBV DNA抑制率为26.92%.结论:阿的福韦在鸭体内有抗鸭乙型肝炎病毒的作用,但停药后DHBVDNA有"反跳"现象;体外实验无明显抗HBV病毒作用.     

叶下珠复方Ⅱ号体内抗鸭乙肝病毒的实验研究

【目的】观察叶下珠复方Ⅱ号体内抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的作用。【方法】采用聚合酶链反应（PCR）法筛选DHBV—DNA阳性的先天感染鸭30只,随机分为5组：病毒对照组,叶下珠复方Ⅱ号高、中、低剂量组（剂量分别为33．6、18．6、8．4g·kg^-1·d^-1）、拉米夫定组（剂量为20mg·kg^-1·d^-1）。各组于用药前后分别采用荧光定量PCR法检测血清DHBV—DNA含量变化。【结果】在给药第7、14、21、28天及停药后第5天叶下珠复方Ⅱ号高、中剂量组鸭血清DHBV—DNA含量显著降低,与给药前和病毒对照组比较差异均有显著性意义（P〈0．05或P〈0．01）。【结论】叶下珠复方Ⅱ号具有一定的抑制DHBV复制作用。     

乙型肝炎病毒在宿主内不受核苷类药物影响的机理探讨

目的 探讨乙型肝炎病毒在宿主中不受药物影响而得以长期与宿主共存的机理。方法 以核苷类药物拉米夫定（3TC）和无环鸟苷（ACV）对鸭乙肝病毒（DHBV）感染一日龄广州麻鸭模型进行治疗，以斑点杂交法检测治疗前后和停药后鸭血清中鸭乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（DHBV－DNA）的变化，并取提鸭的肝，肾，脾，肺，心组织中的DNA，用聚合酶链反应（PCR）方法检测DHBV－DNA在各脏器组织中存在的情况。结果 以斑点杂交法检测鸭血清DHBV－DNA，3TC和ACV两个治疗组在治疗后5－10d内血清DHBV－DNA含量持续下降（与模型组比较均P＜0．05），但停药后有回升倾向；用PCR方法检测各组的肝，肾，脾，肺，心组织，显示治疗后DHBV－DNA在各脏器组织中存在的情况与模型组比无显著性差异（P＞0．05）。进一步比较了斑点杂交法和PCR法检测的结果，显示斑点杂交法检测组织中病毒远不如PCR法敏感，并提示可能组织中病毒复制量很低，以致用斑点杂交法检测出现很多假阴性。结论 乙型肝炎病毒感染宿主后，药物治疗只对宿主血清DHBV－DNA含量有影响，但未发现对肝和肝外脏器组织中DHBV－DNA有影响，乙肝病毒不受药物影响而长期在宿主中存在并低水平持续复制，可导致宿主机体对其无法识别和清除而形成慢性感染。建议使用较敏感的PCR法监控组织中DHBV－DNA含量，作为评价药物长期疗效的指标之一。     

不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型及抗病毒效果的实验研究

目的：探讨不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型的影响因素,观察应用该模型抗病毒的效果。方法：采集鸭血清,应用PCR方法定性检测鸭血清中病毒DNA;定量PCR方法检测鸭血清中病毒DNA载量变化;用抗病毒药物处理,观察其在鸭DHBV感染模型中的抗病毒效果。结果：不同种鸭DHBV自然感染率不同,樱桃谷鸭为8.75%,湖北麻鸭两个批次分别为17.80%和10.68%;静脉注射和腹腔注射两途径均能致雏鸭感染DHBV,静脉注射感染率80%,腹腔注射感染率65%;鸭感染DHBV后,体内病毒载量维持在106~108拷贝/mL,可持续20天以上;抗病毒药物处理后,在不同DHBV模型中其抗病毒效果变化趋势一致。结论：鸭的种类和人工感染途径可影响DHBV感染率;雏鸭感染DHBV后其体内有持续性的病毒血症;DHBV感染模型是药物抗病毒研究较好模型。     

野水鸭等携带鸭乙型肝炎病毒的研究初报

本文应用斑点分子杂交（Dotblot）和斑点酶免疫测定法（DotEIA）对广州和海南地区3个鸭种携带鸭乙型肝炎病毒（DHBV）进行了调查，38只野水鸭血清标本DHBV自然感染率为63．2％（24／38）．其一日龄雏鸭DHBVDNA阳性率为80％（8／10）。在国内外未见类似报导。应用野水鸭阳性DHBVDNA血清以0．02～0．2ml／只量感染8只1日龄DHBVDNA阴性的广州麻鸭，获得100％感染，且病毒血症至少可持续60天，该野水鸭经鉴定为驯养的野生绿头鸭种，此将为DHBV基因分析比较与建立一种慢性感染的鸭乙肝实验模型提供良好的线索。     

DHBVDNA在鸭胰腺组织中原位杂交的研究

目的：对慢性ＤＨＢＶ感染鸭的肝、胰、腺组织DHBVDNA作对比研究。方法：采用原位杂交技术。结果：DHBV不仅可以感染鸭肝细胞。且可感染胰、脾组织、DHBVDNA阳性细胞的分布密度以肝组织最高,胰脾次之。结论：DHBV具有组织器官泛嗜性,但其在肝外组织中的复制似不及在肝细胞中活跃。     

复方肝毒清对乙型肝炎病毒的体内外抑制作用

【目的】观察复方肝毒清的体内外抗乙肝病毒作用。【方法】体内实验采用先天感染鸭乙肝模型,检测用药前后鸭血清乙肝病毒脱氧核糖核酸(DHBV DNA)的动态变化;体外实验采用2.2.15细胞为模型,检测用药后复方肝毒清对细胞培养上清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的抑制作用。【结果】体内实验:给药第10天时血清DHBVDNA滴度显著下降(与模型组比较P<0.01).而停药第3天后又有回升,但仍低于模型组(P<0.01);体外实验:复方肝毒清对细胞分泌HBsAg的治疗指数(50％毒性浓度:50％抑制浓度)为66.81,对分泌HBeAg的治疗指数为34.18。【结论】复方肝毒清在体内外均具有抗乙肝病毒作用。     

清肝排毒饮抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的观察清肝排毒饮抗鸭乙型肝炎（DHBV）作用。方法用Dot—BLOT法筛选出DHBsAg强阳性1d龄华南麻鸭。随机分为5组，分别为模型组、拉米夫定（ACV）组和清肝排毒饮大、中、小剂量组。除模型组外，其他各组均灌胃口服治疗10d，于用药前（T0）、用药第5d（T5）、第10d（T10）厦停药后第3d（P3）分别采血，采用斑点杂交方法检测用药前后鸭血清乙肝病毒脱氧核糖核酸（DHBV DNA）的动态变化。结果清肝排毒饮中剂量治疗组第5、10d鸭血清DHBV DNA OD值明显低于培药前，差异有显著性（P〈0．05），但与拉米夫定组比较，差异无显著性意义（P〉0．05）。停药3d后无反跳。结论清肝排毒饮有一定的抑制DHBV DNA复制作用。     

不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型及抗病毒效果的实验

目的探讨不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型的影响因素,观察应用该模型抗病毒的效果。方法采集鸭血清,应用PCR方法定性检测鸭血清中病毒DNA;定量PCR方法检测鸭血清中病毒DNA载量变化;用抗病毒药物处理,观察其在鸭DHBV感染模型中的抗病毒效果。结果不同种鸭DHBV自然感染率不同,樱桃谷鸭为8.75%,湖北麻鸭两个批次分别为17.80%和10.68%;静脉注射和腹腔注射两途径均能致雏鸭感染DHBV,静脉注射感染率80%,腹腔注射感染率65%;鸭感染DHBV后,体内病毒载量维持在106～108copies/mL,可持续20 d以上;抗病毒药物处理后,在不同DHBV模型中其抗病毒效果变化趋势一致。结论鸭的种类和人工感染途径可影响DHBV感染率;雏鸭感染DHBV后其体内有持续性的病毒血症;DHBV感染模型是药物抗病毒研究较好模型。