实验教学中颗粒性抗原与可溶性抗原制备抗血清的方法及其应用

目的比较颗粒性抗原与可溶性抗原制备抗血清的效价,寻求获取符合实验教学需要的高效价抗血清的较佳方法。方法牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin,BSA）作为可溶性抗原,伤寒“H”菌液作为颗粒性抗原,采用1周间隔的免疫程序,以BSA和伤寒杆菌“H”菌液免疫家兔,用对流免疫电泳和双向琼脂扩散试验、肥达试验检测并比较其血清抗体效价。结果浓度为7×109个/ml伤寒杆菌“H”菌液免疫家兔后获取的伤寒“H”抗血清几何平均滴度（geometry mean titer,GMT）为1∶9051.07,浓度为5mg/ml BSA免疫家兔后测得抗血清GMT分别为1∶3.668和1∶6.17。结论颗粒性抗原与可溶性抗原1周间隔免疫程序制备的抗血清可获取符合实验教学的抗血清效价。     

牛血清白蛋白的抗血清在免疫学沉淀反应实验中的应用

目的 :制备牛血清白蛋白 (BSA)抗血清 ,以探讨获取高效价抗血清的方法。方法 :用BSA配制一定的浓度 ,免疫家兔 ,以制备兔抗 -BSA血清。利用免疫电泳、双向琼脂扩散试验分析和测定抗血清的效价。结果 :双向琼脂扩散在BSA 0 . 5g/mL的浓度时 ,测得抗血清效价为 1∶32 ,对流免疫电泳结果显示BSA 0. 5g/mL与抗BSA在 1∶16时形成一条清晰可见的沉淀线。结论 :BSA免疫家兔可获取效价较高的抗血清。     

不同免疫程序制备伤寒抗血清的效价比较

目的 比较两种免疫程序制备伤寒杆菌抗血清的效价,寻求获取符合实验教学需要的高效价伤寒抗血清的较佳方法.方法 采用2天短期间隔的免疫程序和常规2周间隔的免疫程序,分别以伤寒沙门菌O、H菌液免疫家兔,用试管凝集法检测并比较其血清抗体效价.结果 免疫后获取的伤寒沙门菌O抗原和H抗原抗血清的几何平均滴度(GMT),2天间隔免疫程序分别为1∶22807和1∶25600,2周间隔免疫程序分别为1∶2691和1∶5702.结论 2天短间隔免疫程序所制备的伤寒杆菌抗血清效价较高,不失为获取实验教学用抗血清的较佳免疫程序.     

两种免疫方法制备兔抗绵羊红细胞溶血素的效价观察

目的比较两种免疫程序和途径制备抗血清的效价,并在免疫学溶血反应中的运用效果比较,寻求获取符合实验教学需要的高效价溶血素的较佳方法。方法采用不同浓度的绵羊红细胞（Sheep red blood cells,SRBC）间隔1天和间隔3天腹腔、耳静脉免疫家兔,用血球凝集法浓度为1.5%SRBC悬液检测并比较两种免疫程序和途径所制备溶血素的效价结果免疫后获得的溶血素效价几何平均滴度,A组脱纤维绵羊RBC全血皮内多点注射家兔为1：22286.09,B组10%脱纤维绵羊RBC悬液耳静脉注射家兔为1：72407.73。结论 10%脱纤维SRBC悬液耳静脉注射家兔制备的溶血素效价高于脱纤维SRBC全血皮内多点免疫家兔,是获取实验教学用溶血素的较佳免疫程序     

糖化牛血清白蛋白及其抗体的制备

目的制备特异性强、效价高的抗晚期糖化终末产物(AGEs)的多克隆抗体,以用于AGEs免疫化学方法的检测。方法用牛血清白蛋白与葡萄糖在体外共同孵育,制备糖化牛血清白蛋白(AGEs-BSA),经凝胶层析纯化后,免疫新西兰家兔,获取抗AGEs-BSA抗血清,经硫酸铵盐沉淀法制备多克隆抗体。结果荧光光谱和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定结果表明,成功制备出AGEs-BSA。ELISA结果证实,制备出特异性强、效价高的抗AGEs的多克隆抗体,其效价高达1:2 000。结论应用高糖孵育BSA可以制备出AGEs-BSA,通过AGEs-BSA免疫新西兰家兔成功制备特异性强、效价高的抗AGEs的多克隆抗体,可以用于AGEs免疫化学方法的检测,并为进一步研究AGEs在阿尔茨海默病发病中的作用奠定基础。     

抗人参皂苷Rg3抗血清的制备

目的:通过构建人工抗原制备抗人参皂苷Rg3的特异性抗血清.方法:采用高碘酸盐氧化法将Rg3与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)共价偶联,分别合成免疫抗原Rg3-BSA和包被抗原Rg3-OVA.用合成的Rg3-BSA免疫家兔,制得抗人参皂苷Rg3的特异性抗血清,并通过酶联免疫方法(ELISA)对抗血清进行鉴定.结果与结论:人工抗原Rg3-BSA制备成功,由其所得抗血清的效价为1:51 200,交叉反应率低于3%,具有很强的特异性.     

免疫血清制备及应用

我们用鸡蛋的卵白作为抗原，定期免疫家兔，获得抗卵白血清，为免疫学中的双向琼脂扩散实验、单向琼脂扩散实验、对流免疫电泳等实验提供材料，节省了大量资金。     

心钠素单克隆抗体的制备及鉴定

将心房肽Ⅲ(APⅢ)与牛血清白蛋白(BSA)偶联成大分子复合物,免疫BALB/C小鼠,制备出三株分泌心房肽Ⅲ单克隆抗体(APⅢ-McAb),行亚类鉴定为IgG_1型,琼脂双向扩散与BSA未出现沉淀线。应用APⅢ-McAb制备的亲和层析柱对心钠素有很高的亲和力,其洗脱峰管,有明显的降压作用。     

石杉碱甲人工抗原的合成、鉴定及免疫原性分析

目的 制备乙酰胆碱脂酶抑制活性成分石杉碱甲(huperzine A,HupA)的人工抗原及抗血清.方法 将HupA与戊二醛、载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)反应偶联,制得半抗原-载体蛋白复合物后,用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定其中结合的半抗原数目;以此抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,并通过ELISA法检测其抗体效价和特异性.结果 合成的人工抗原HupA-GA-BSA中HupA与BSA的结合比约为8:1;免疫小鼠得到特异针对HupA的抗血清,HupA抗体的效价为1:62 500.结论 成功地合成了HupA的人工抗原,且该抗原有较好的免疫原性.     

血浆雌三醇放射免疫测定

血浆雌三醇放射免疫测定,在临床上对了解胎盘功能、胎儿在宫内发育程度,以及高危妊娠的监护等有一定意义。现将我们建立的测定方法介绍如下: 抗原的制备为了使雌三醇半抗原具有免疫性,须用化学方法制成雌三醇(E_3)与牛血清白蛋白(BSA)的结合物,方可免疫动物使之产生抗体。如要雌三醇抗血清具有高度特异性,就须先将雌三醇转变成雌三醇-6-(O-羧甲基)肟,再和BSA结合,制备出雌三醇-6-牛血清白蛋白抗原,才能用以产生效价高、特异性强的抗血清(图1)。本实验的熔点测定用毛细管法来校正,红外光谱用岛津IR-27G鉴定。     

短程免疫制备实验用溶血素方法探讨

目的寻求采用短程免疫制备实验用溶血素（兔抗绵羊红细胞抗体）的较佳方法。方法采用3％的脱纤维绵羊红细胞（SRBC）,分别用连续5次注射的短程免疫和间隔一周注射的长程免疫方法,经耳缘静脉免疫家兔,用补体溶血实验检测两种免疫方法所制备溶血素的效价。结果短程免疫组溶血素效价为1：200,长程免疫组溶血素效价为1：800。结论采用高浓度的SRBC及合理搭配免疫间隔时间和次数的短程免疫程序是制备实验用溶血素的较佳方法。     

妊娠特异性β1糖蛋白的分离纯化及特异抗血清的制备

本文采用硫酸铵盐析、DE-52离子交换层析、Sephadex G-200凝胶过滤及抗SP_1免疫亲和柱层析等方法从胎盘后血分离妊娠特异性β_1民糖蛋白(SP_1)所得SP_1纯化约207倍.纯化的SP_1与德国Behringwerke AG的SP_1抗血清在双向免疫扩散时有沉淀反应;免疫电泳时纯化SP_1移动的位置与β蛋白相当.聚丙烯酰胺凝胶电泳时纯化的SP_1呈现一条主带其分子量为90,000左右.免疫家免所得的抗血清经血浆蛋白吸收后得特异SP_1抗血清在双向免疫扩散时与正常男子或非孕妇女血清均无沉淀反应;与孕血反应形成的沉淀线与德国Behring werke AG的SP_1抗血清所形成的沉淀线相连;交义免疫电泳时呈现一个峰.此抗血清已成功地用于建立酶联免疫法测定SP_1含量     

快速制备免疫血清方法研究

目的探讨快速制备免疫血清的方法和效果,以适应其在实验教学中的需要。方法对家兔分组,采用短程免疫法,用绵羊红细胞（SRBC）抗原和鸡蛋黄抗原小剂量连续多次接种后,收集免疫血清,对其效价进行测定,并与传统免疫血清制备方法进行比较。结果经绵羊红细胞（SRBC）抗原和鸡蛋黄抗原短程免疫后的免疫血清最终分别达到1∶1200和1∶10240的高效价;经绵羊红细胞（SRBC）抗原和鸡蛋黄抗原长程免疫后的免疫血清最终分别达到1∶2400和1∶10240的效价。结论短程免疫法制备免疫血清所用时间短,效价高,亲和力强,适用于实验教学。     

短程免疫法制备抗血清效果比较

目的探讨快速制备抗血清的方法和效果,以适应其在实验教学中的需要。方法采用短程免疫法,对家兔分组,用大肠杆菌抗原菌液、绵羊红细胞(SRBC)抗原和鸡蛋黄抗原小剂量连续多次接种后,收集抗血清,对其效价进行测定,并与传统抗血清制备方法进行比较。结果经大肠杆菌抗原、绵羊红细胞(SRBC)抗原和鸡蛋黄抗原免疫后的抗血清最终分别达到1∶10240、1∶1200和1∶10240的高效价。结论此方案制备抗血清所用时间短,效价高,亲和力强,适用于实验教学。     

M13噬菌体多克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备M13K07辅助噬菌体多克隆抗体。方法：将M13K07辅助噬菌体进行大量扩增,以此作为免疫原于1、3、5周进行兔免疫,收集0周和免疫后2、4、6、8周免疫血清,用间接ELISA法对免免疫血清的效价进行检测,进一步用免疫斑点实验检测免多克隆抗体与M13K07辅助噬菌体的特异性结合能力。结果：M13K07辅助噬菌体免疫兔可产生高效价的多克隆抗体,效价达1：3200,并能特异性识别M13K07辅助噬菌体。结论：成功制备了高效价的M13K07辅助噬菌体多克隆抗体,为噬菌体展示技术研究提供了检测抗体。     

两种免疫程序下的抗体动力学曲线分析

目的通过分析抗体产生及其动力学变化的规律,为制备高效价血清提供参照。方法将EV71灭活病毒和HAV灭活病毒按照两种免疫程序注射新西兰兔,检测其在不同时间段的免疫血清效价。结果加强免疫2d后抗体效价有明显的下降,之后逐步升高并在5～7d时到达一个新的峰值,且每周加强一次与每2周加强一次所得到的抗体效价基本一致。结论再次免疫后,抗体水平的升高并非是呈光滑的曲线式上升,而是呈折线式上升;获得高效价的免疫血清,需通过3次加强免疫,再次免疫的间隔时间以一周为宜,在第3次加强7d后可收集血清,整个免疫过程应在8周内完成。     

短程免疫法制备高效价抗血清研究

目的:探索快速制备免疫血清的方法和效果。方法:采用短程免疫法,分别以伤寒沙门菌O抗原和卵黄抗原分组小剂量连续多次免疫家兔后,收集抗血清,用ELISA间接法测定抗体效价。结果:ELISA结果显示伤寒沙门菌O抗原和卵黄抗原抗血清最终分别达到1∶20 480和1∶10 240的高效价。结论:短程免疫法所制备抗血清效价高,亲和力强。