乙型肝炎病毒（ayw型）转基因小鼠的建立

目的：建立遗传上稳定的、带有乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型的转基因小鼠品系。方法：通过对受精卵显微注射进行基因转移的途径制备转基因小鼠，以ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂产、ＥＬＩＳＡ、组织切片免疫组化和透射电镜等方法，分析所导入ＤＮＡ在转基因小鼠体内的功能情况。结果：得到２１只建立者小鼠，在它们的血清中检测到了ＨＢｓＡＧ和ＨＢｅＡｇ的存在，还在肝细胞中观察到了ＨＢＶ样病毒颗粒。结论：ＨＢＶ基因组ＤＮ     

一步法PCR检测大鼠肺支原体核酸的研究

用ＨＢｓＡｇ特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞给ＨＢＶ转基因ＩＣＲ小鼠过继性输液，通过肝组织病理学和免疫组化观察，发现其能诱发类似急性肝炎病变，提示抗原特性性ＣＴＬ在ＨＢＶ抗原所引起的宿主细胞免疫应答而导致肝细胞损伤的过程中有作用。     

乙型肝炎病毒转基因小鼠病理学观察

目的 观察乙型肝炎病毒（HBV）ayw亚型转基因小鼠的肝、肾等组织的病理改变。方法 选取15只5-48周龄的清洁级C57BL/6J-HBV转基因小鼠及15只C57BL/6J小鼠为对照进行病理大体观察，并取心、肝、脾、肺、肾、肠等组织，切片HE染色和免疫组化特殊染色后进行光镜观察。结果 C57BL/6J-HBV转基因小鼠肝脏产生局部明显的炎症反应；肝细胞肿胀，毛玻璃样变性，灶性坏死伴淋巴样细胞浸润，可见肝细胞质内嗜酸性小体，局部可见巨核肝细胞，偶见多核肝细胞，心，脾、肺、肾、肠等脏器未见明显的病理改变，免疫组化分析说明，血清HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原）为阳性的15只小鼠肝组织有HBsAg的存在，且HBsAg的分布呈胞质型，但不存在于脾、肺、心等组织中，血清HBsAg为阴性的15只小鼠其心、肺，肝，脾，肾，肠等组织中均未见HBsAg的存在；发现两只48周龄C57B羁J-HBV转基因小鼠患肝细胞癌。     

PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９份乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比斑点杂交高（Ｐ＜０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５７．１％（１２／２１）；血清阳性率为６１．３％（１３／２１）；两者总阳性率为８０．９％（１７／２１），说明用ＰＣＲ同时检测肝组织和血中ＨＢＶＤＮＡ，可明显提高ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

乙型肝炎合并HFRS与HFRS临床对比分析

目的探讨乙型肝炎合并肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）对ＨＦＲＳ临床及乙肝病毒血清学标志（ＨＢＶＭ）的影响。方法采用Ａｕ－５６０全自动生化分析仪检测肝、肾功能，酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测ＨＢＶＭ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测ＨＢＶＤＮＡ，并与３０例ＨＦＲＳ进行临床对比分析。结果合并感染肝、肾损伤轻，对乙肝病毒（ＨＢＶ）有短期抑制作用。结论两种嗜病毒合并感染并未加重病情及肝脏损伤。     

原位PCR技术检测肝中HBV—DNA的应用

目的：探讨原位ＰＣＲ技术在ＨＢＶ低水平感染中的意义。方法：用原位ＰＣＲ方法检测４２例肝炎患者石蜡包埋肝组织的ＨＢＶ－ＤＮＡ并与原位杂交技术检测结果进行比较。结果：原位ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为５０％，明显高于原位杂交法（１９％，Ｐ〈０．０１），肝组织中ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率与临床诊断无关。阳性杂交信号均位于肝细胞浆，呈簇状和弥散状分布。结论：原位ＰＣＲ检测肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ具有快速、灵敏、     

复制型HBV转基因小鼠的遗传与繁育研究

本文采用类似系祖建系的方法，对复制型ＨＢＶ转基因小鼠模型的１７、２１、２５三个系列进行了繁育，通过ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交的方法，检测三个系列小鼠尾组织和血清的ＤＮＡ样品，以确定ＨＢＶ基因的整合和复制情况。结果表明，ＨＢＶ基因已稳定地遗传至第五代（Ｆ５），且各世代小鼠血清中都存在ＨＢＶＤＮＡ，此外，整合阳性小鼠的血清中能测出ＨＢＶＤＮＡ的比率很高，Ｆ１代为９４．４４％（１０２／１０８），Ｆ２、Ｆ３代为９５．３１％（６１／６４），故在繁育中可以通过测血清中的ＨＢＶＤＮＡ来确定小鼠是否整合。     

乙型肝炎病毒相关性肾炎的临床病理研究

对４４例ＨＢＶ抗原血症并有尿检异常的患者进行了临床及肝,肾经皮活检病理研究,用ＰＣＲ法检测肾组织中的ＨＢＶ－ＤＮＡ,根据结果分组进行治疗观察,有尿检ＨＢＶ相关性肾炎发病率为６５．９％（２９／４４）。２９例中膜性肾病１３例,膜增殖性肾炎６例,系膜增殖性肾炎１０例,肾组织中ＢＶ－ＤＮＡ检出率为７２．４％,慢性活动性肝炎ＨＢＶ相关性肾炎发病率高,用激素及干扰素配合治疗效果好,提示ＨＢＶ可通过多种机制引肾     

胸腺肽对HBV转基因小鼠表达HBV DNA的影响

应用胸腺肽对ＨＢＶ转基因小鼠进行腹腔内注射（３ｍｇ／只）连续３个月，同时设促肝细胞生长素及生理盐水对照组，定期取血检测ＨＢＶＤＮＡ，结果发现胸腺肽组ＨＢＶＤＮＡ阴转率为２２％～５５％，停药２２ｄ后阴转率为２２％，而对照组小鼠ＨＢＶＤＮＡ无阴转，结果提示胸腺肽对ＨＢＶ转基因小鼠表达ＨＢＶＤＮＡ有抑制作用。     

PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

有用聚合酶链反庆（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９例乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比为杂交高（Ｐ〈０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ一率为５７．１％；血清阳性率为６１．３％；两者总阳性率为８０．９％，说明ＰＣ     

p21~(HBsAg/HBsAg)转基因小鼠肝脏病理学研究

Aworldtrendsuchasthefreetrade agreement(FTA)promoted bythe worldtrade organization(WTO)resultsinexpan-sion of bothimportation and exportation of industrial materials,grains,food products and domestic animals,as well aspets and wild animals.Nowadays,not onlyfoods but also various kinds of animals are arrivedfromall over the worldtoJapan,and anincrease inrisk of the invasion of zoonoses fromabroadto Japan was pointed out for many years.Thus,the Ministryof Health,Labor and Welfare(MHLW)of J…     

C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU转基因小鼠肝脏的组织病理学观察

目的:研究乙型肝炎转基因小鼠品系C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU肝脏的组织学及免疫病理学特征.方法:以168只SPF级乙肝转基因小鼠及15只正常C57BL/6小鼠为研究对象,取肝组织连续切片,常规H-E染色,并选取20例有明显单个核细胞肝内浸润的肝标本,免疫组化原位鉴定白细胞分化抗原的肝内分布.结果:37.5%的转基因小鼠肝脏出现人慢性轻度乙型肝炎样的病理改变,病变率随月龄增大显著增高;32.7%有更轻微的非特异性炎症反应;肝内浸润的单个核细胞多数为CD3 、CD4 细胞,未发现CD57 、CD8 细胞浸润.结论:乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU肝脏可出现不同程度的病理改变,与人慢性轻度乙肝组织学相类似.     

SARS病原导致人体脏器发生的病理及超微结构改变

对SARS死亡患者的尸检标本进行了光镜和电镜观察。结果:SARS病原体引起人体多个脏器的超微结构发生病理变化,表现为肺泡壁增厚,肺泡腔有絮状渗出物、间质可见纤维素及少量炎细胞浸润;心肌纤维断裂,线粒体肿胀;脾和淋巴结细胞膜崩解破坏;肾小管上皮细胞坏死脱落。在病变组织中可见少量病原颗粒。提示:SARS病原引起人体的细胞免疫病理反应,引起机体多个脏器,特别是肺、心及免疫器官的损害。     

原发三叉神经痛神经根部的病理观察报告

目的探讨原发三叉神经痛神经根部的病理变化。方法同期观察78例原发三叉神经痛患者在行三叉神经根微血管减压并蛛网膜松解时的三叉神经根部病理变化(神经根,蛛网膜,责任血管及其相互关系。),并随机抽样留取蛛网膜送病理检查。结果术中观察78例三叉神经根部的蛛网膜均有炎性反应,47例蛛网膜与神经,血管有粘连但能分离,31例不易分离,且神经根无光泽并不同程度的变细。有明确的责任血管压迫48例,无责任血管压迫30例。40例随机抽样病理结果全部存在炎性反应,其中32例炎性细胞浸润及合并轻度至中度水肿,8例同时合并钙化,其中有责任血管压迫28例,未见责任血管12例。结论原发三叉神经痛患者三叉神经根部除微血管压迫、神经纤维脱髓鞘变外,还存在炎性反应。     

原位肝肿瘤血管生成及自发转移的荧光成像

目的建立增强型绿色荧光蛋白标记的腺样囊性癌肺高转移株（ACC-M-GFP）的原位肝肿瘤种植模型,探讨通过荧光成像观察肿瘤血管生成及侵袭转移的可行性和影响因素。方法2只BALB／cnu／nu裸小鼠上肢皮下注射10^7／ml ACC-M-GFP细胞悬液0．2ml。瘤结节直径接近0．5cm时切取皮下肿块,分割成1mm^3瘤块,采用隧道包埋法植入另外8例裸小鼠肝左叶。从第4周起,每隔2周同时采用整体荧光成像系统及体视荧光显微镜观察肿瘤生长转移及肿瘤血管生成情况;每次观察结束后随机处死裸鼠1只,取出肝、肺及邻近脏器,如纵隔淋巴结,行脏器荧光成像观察。肝肿瘤组织行连续冰冻切片,荧光显微镜下直接观察肿瘤血管生成。荧光成像结果与常规石蜡切片苏木素-伊红（HE）染色对照。结果8只裸鼠原位肝肿瘤均种植成功。采用整体荧光成像,肝肿瘤种植后第6-8周需通过皮瓣窗方能观察到肿瘤荧光;第8-10周透过皮肤可直接观察肿瘤荧光;第12-14周时肿瘤巨大,可观察到腹腔脏器转移荧光;第16-18周观察到肺转移及淋巴结转移。体视荧光显微镜下肝肿瘤种植后第4周可观察到肿瘤血管生成;第12-14周后,体视荧光显微镜下可观察到大量丰富的肿瘤血管形成,呈现为绿色背景下的树枝状黑色条纹。瘤组织冰冻切片后荧光显微镜观察发现肿瘤血管呈绿色背景下的黑色管状结构。结论采用荧光成像可实现对肝肿瘤生长浸润转移和肿瘤血管生成的实时动态观察。     

桥本氏病的手术治疗（附30例临床分析）

目的：研究桥本氏病的诊断和手术治疗的适应证及其疗效。方法：本对30例手术治疗的桥本氏病的诊断和治疗进行了回顾性分析。结果：共有13例作TGA和TMA测定，TGA和TGM均为阳性6例，均为弱阳性5例，TGA阳性及TGM弱阳性1例，均为阴性1例。甲状腺B超共做26例，诊为结节性甲状腺肿13例，甲状腺腺瘤8例，甲亢2例，甲状腺癌2例，桥本氏病1例。术前诊断结节性甲状腺肿13例，甲状腺腺瘤7例，甲状腺癌3例，甲亢1例，慢性甲状腺炎6例。术后病理均为桥本氏病，合并其他甲状腺疾病26．7％。其中行双侧次全切10例，单侧次全切11例，单侧部分切除活检6例，峡部切除3例。30例病人术后均痊愈出院。术后远期出现甲低2例，无其他并发症发生。结论：桥本氏病诊断有赖于TGA、TGM、B超、穿刺细胞学或手术病理学检查。因桥本氏病合并其他甲状腺疾病比例较高，误诊率高，为了确诊和治疗，有选择的对一些病人施行手术，是安全而必要的。在甲状腺手术中施行冰冻活检应视为常规，可明确诊断及指导术式选择。     

p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏病理学研究

目的观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏病理学改变.方法分别选取2、6、12、18、24月龄的SPF级p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠和p21+/+野生型小鼠,剖检进行大体观察,取肝脏及肝脏肿瘤组织,进行组织学HE染色及电镜超微结构观察.结果 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏大体、光镜和电镜下均有明显病理改变.随着月龄的增加,肝脏色暗质硬,表面有结节和肿瘤形成;光镜下,肝细胞浊肿,炎症细胞浸润,脂肪变性,点状、灶状和碎屑状坏死,非典型增生,肝细胞癌.癌细胞分化良好,类似肝细胞,形成索状和腺泡状结构.癌细胞核深染,具核分裂像.电镜下,癌细胞核变形,核膜曲折凹陷,线粒体肿胀,数目增多,嵴减少.4例18月龄转基因小鼠发生肝细胞癌(4/10),6例24月龄的转基因小鼠发生肝细胞癌(6/10),其中2例发现远处转移.结论 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏出现明显病理损害,18月龄小鼠开始发展成高分化的肝细胞癌,高龄小鼠形成的肝细胞癌能够转移.     

Endothelial progenitor cell mediates transport of hepatitis B virus into myocardial tissue

Background Hepatitis B virus （HBV） replication has been reported to be involved in many extrahepatic viral disorders; however, the mechanism by which HBV is transinfected into extrahepatic tissues such as myocardium and causes HBV associated myocarditis remains largely unknown.
Methods In this study, endothelial progenitor cells （EPCs） were infected by HBV and then transfused into ischemic model of mice. HBV surface and core antigen as well as mutation of HBV particles were detected by immunohistochemistry, fluorescent activated cell sorter and transmission electron microscopy in vitro and in vivo.
Results Human cord blood EPCs, but not human umbilical vein endothelial cells （HUVECs） could be effectively infected by taking up HBV in vitro. HBV envelope surface and core antigen expressions were first detectable in EPCs at day 3 after virus challenge, sustained for up to 11 days, and decreased thereafter. Similarly, the virus particles were the most abundant in EPCs in the first week observed by a transmission electron microscope, and declined in 3 weeks after HBV infection. HBV DNA but not HBV cccDNA in EPCs were detectable even 3 weeks after virus challenge, as shown by PCR analysis. Furthermore, intravenous transplantation of HBV-treatod EPCs into myocardial infarction Sprague ＆ Dawley rats model resulted in incorporation of both EPCs and HBV into injured endothelial tissues of capillaries in the ischemic border zone.
Conclusions These results strongly support that EPCs serve as virus carrier mediating HBV trans-infection into the injured myocardial tissues. The findings might suggest a novel mechanism for HBV-associated myocarditis.     

北京市大鼠、小鼠、豚鼠的病理学调查

目的实验动物的健康状况对科学研究的发展有重要的影响,为了保证实验用鼠的健康质量,自从2009年起本实验室对北京市多家实验动物单位的实验用鼠进行了病理学抽检,从病理学的角度来调查北京市部分实验鼠的主要脏器的情况。方法我们主要对实验鼠的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠进行取材,通过甲醛固定,石蜡切片HE染色、冰冻切片油红"O"染色、PAS染色等方法对实验用鼠进行病理学分析。结果根据病理学的调查结果,部分实验动物在以肝脏和肾脏为代表的器官中出现了不同程度的病变。结论结合对实验鼠的微生物学检测,分析认为,北京市的啮齿类实验动物中几乎无细菌、病毒和寄生虫等病原微生物的阳性感染个体,对人、动物及周围环境无明显危害;但是少部分实验鼠在临床上出现一定程度的病理学异常。