肠胃清对结肠癌细胞草酸铂药代动力学的影响

目的：研究肠胃清逆转人结肠癌耐草酸铂（oxaliplatin,L—OHP）细胞（HCT116／L—OHP）的耐L—OHP作用,并从药代动力学角度探讨其逆转耐药作用与细胞内铂含量,细胞摄入、排出L—OHP以及铜转运蛋白等的关系。方法：以四甲基偶氮唑盐比色法确定人结肠癌耐药细胞株的耐药性,明确药物血清对HCT116／L-0HP细胞耐L-OHP的逆转作用;采用原子吸收分光光度法测定细胞中铂的浓度,并检测加入药物血清后细胞内铂含量以及L—OHP摄入和排出的变化;采用蛋白质印迹法检测铜转运相关蛋白人铜转运蛋白1（humancoppertransporter1,hCTRl）、铜转运蛋白0t链（ATPaseCu”transportingalphapolypeptide,ATP7A＇）、P型铜转运ATP酶（copper—transportingP—typeadenosinetriphosphatase,ATP7B）、谷胱甘肽S一转移酶n（glutathioneS—transferase-π,GST-π）和多药耐药相关蛋白MRP2）的表达。结果：7．5％药物血清联合L—OHP对HCTll6／L—OHP细胞作用后,HCT116／L-OHP细胞对L—OHP的敏感性增加,半数抑制浓度由89μg／mL下降到32．45μg／mL,逆转指数达到2．74。HCTll6／L—OHP细胞内铂含量比HCT116细胞株降低;HCT116和HCT116／L—OHP细胞株经过7．50A中药血清联合L—OHP处理后,胞内铂-DNA含量比单独L—OHP处理细胞增加。肠胃清药物血清可剂量依赖性地增加人结肠癌细胞HCT116及HCT116／L—OHP对L—OHP的吸收,同时抑制其排出。肠胃清药物血清联合L—OHP处理后HCT116／L-0HP细胞中ATP7A、ATP7B表达量相对于单独L—OHP处理者减少,hCTR1蛋白表达增多,但对GST-π、MRP2蛋白的表达无明显影响。结论：肠胃清通过上调hCTR1蛋白的表达,下调ATP7A、ATP7B蛋白的表达,促进HCT116和HCT116／L—OHP细胞对L—OHP的摄入,抑制其对L—OHP的排出,增加细胞内铂-DNA加合物含量,从而逆转其耐药株HCT116／L—OHP对L-OHP的耐药性。     

Bcl2抑制NNK诱导的DNA损伤后修复的分子机制研究

目的 为了探索Bcl2抑制NNK诱导的DNA损伤后修复的分子机制.方法 Western Blotting检测Bcl2、APE1和XRCC1蛋白的表达情况,定量检测AP位点来观察DNA损伤程度,免疫沉淀检测Bcl2蛋白和APE1蛋白,APE1蛋白和XRCC1蛋白相互作用,免疫荧光染色检测Bcl2蛋白的细胞分布情况及其变化,亚细胞结构分离提取蛋白观察Bcl2蛋白在细胞核及线粒体中表达水平及其变化.同位素测定APE1核酸内切酶活性观察Bcl2对APE1核酸内切酶活性的影响及其Bcl2的BH结合域的关系.结果 Bcl2下调APE1核酸内切酶活性与抑制AP住点修复有关.4-(N-甲基-N-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-丁酮(NNK)与细胞接触导致Bcl2在细胞核中积聚,并且与APE1相互作用,这种相互作用需要Bcl2的所有BH结合域参与.Bcl2的BH结合域的任一缺失导致Bcl2与APE1相互作用的能力和对APE1活性、AP位点修复的抑制作用消失.Bcl2在细胞中的过度表达减少了APE1/XRCC1修复复合物的形成,并且Bcl2纯蛋白在体外直接使APE1/XRCC1复合物分裂从而抑制APE1核酸内切酶活性.结论 Bcl2蛋白下调APE1核酸内切酶活性抑制NNK诱导的DNA损伤后AP位点的修复.     

肠胃清对裸鼠结肠癌皮下移植瘤化疗的减毒作用

目的:研究肠胃清对裸鼠结肠癌皮下移植瘤奥沙利铂(L-OHP)化疗的减毒作用。方法:构建裸鼠人结肠癌细胞HCT116皮下移植瘤模型。造模后裸鼠分为空白组、L-OHP组、肠胃清组、肠胃清联合L-OHP组(联合组),每组10只,分别用0.9%Na Cl溶液、L-OHP、肠胃清、肠胃清联合L-OHP干预30 d。观察各组裸鼠体质量的变化,检测裸鼠脾脏质量,计算脾脏指数;检测裸鼠肝功能[天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)],肾功能[尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)],心功能[肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)]的水平。结果:L-OHP组裸鼠体质量减轻18.1%,较空白组明显减轻(P0.01);与L-OHP组比较,肠胃清组及联合组裸鼠体质量下降减少,差异具有统计学意义(P0.05)。各组血清AST、ALT、SCr、BUN水平差异无统计学意义(P0.05);L-OHP组CK、LDH水平较空白组明显升高(P0.05,P0.01);肠胃清组及联合组CK、LDH水平较L-OHP组明显降低,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。L-OHP组脾脏指数较空白组明显降低(P0.01);与L-OHP组比较,肠胃清组及联合组裸鼠脾脏指数明显增加,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:L-OHP对裸鼠副作用较大,肠胃清联合L-OHP后可减轻L-OHP化疗的毒副作用。     

青蒿琥酯联合奥沙利铂对人结肠癌细胞HCT116的作用研究

目的观察青蒿琥酯(Artesunate,Art)与奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)联合用药对人结肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响。方法利用不同浓度单药Art、L-OHP及Art(6.25μg·mL-1)联合不同浓度L-OHP处理结肠癌HCT116细胞株48 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分析细胞增殖变化;金正均Q值法判断两药联合效应,苏木精—伊红(HE)染色法观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度Art和L-OHP对HCT116细胞株增殖均有抑制作用,且抑制率随药物浓度提高而增高(P0.05);联合用药表现出协同或相加效应;HE染色可见随Art浓度增加,细胞膜破裂,细胞核染色逐渐加深,细胞正常结构消失;Art(6.25μg·mL-1)与LOHP(0.5μg·mL-1)联合用药,联合组早期细胞凋亡率较单药Art(20.31±3.8)%、L-OHP(14.83±3.9)%显著提高(P0.05)。结论 Art与L-OHP联合用药能够显著抑制HCT116细胞株增殖并增强对细胞凋亡的诱导作用。     

非小细胞肺癌NP方案化疗敏感性与DNA修复基因XRCC1多态性的关系研究

目的:观察为非小细胞肺癌患者采用NP方案进行治疗时其对化疗的敏感性与受体DNA修复基因XRCC1多态性之间的对应关系。方法:为2012年1月至2014年1月我院收治的82例非小细胞肺癌患者使用基于聚合酶链反应-限制性片段长度的多态性技术进行检测,检测对象包括受体外周血DNA修复基因XRCC1 194位点、XRCC1 399位点多态性的水平,根据患者的病情选择合适的NP方案进行化疗,对其化疗效果进行观察,分析在使用该方案的情况下其对化疗的敏感性与受体基因多态性之间的对应关系。结果:本组中含T等位基因(CT+T/T)患者治疗的有效率明显高于XRCC1基因194位点C/C患者,差异显著,有统计学意义(P<0.05)。本组中XRCC1基因399位点G/G患者治疗的有效率为35.14%,XRCC1基因399位点G/A患者治疗的有效率为37.84%,XRCC1基因399位点A/A患者治疗的有效率为25.00%,三者相比无显著差异(P>0.05)。结论:分析XRCCl基因codonl94和codon399位点的多态性在预测非小细胞肺癌患者采用NP方案进行化疗的敏感性方面有较高的临床价值。     

Bcl2对NNK诱导的DNA损伤后修复的抑制作用

目的 为了探索Bcl2对DNA损伤后修复的抑制作用.方法 Western Blotting检测Bcl2蛋白的表达情况,单细胞电泳、定量检测AP位点来观察DNA损伤程度.结果 NNK诱导DNA损伤产生大量的AP位点,去掉NNK后未转染Bcl2质粒的H1299细胞中AP位点数量逐渐下降,转染野生型Bcl2质粒的H1299细胞中AP位点数量也在下降,但比前一组慢,仍维持在较高水平,说明去掉NNK后来转染Bcl2质粗的H1299细胞中DNA损伤在逐步修复,而转染野生型Bcl2质粒的H1299细胞中DNA损伤后AP位点的修复受到抑制.NNK处理1h后两组H1299细胞的细胞核均有拖尾现象,说明NNK可以使H1299细胞中DNA发生损伤;去掉NNK诱导剂后24h观察发生未转染H1299细胞中DNA的细胞核未有拖尾现象现象,说明DNA损伤已得到修复,但另一组细胞中仍有部分细胞核有拖尾,说明DNA损伤仍有部分未得到修复.结论 Bcl2蛋白对NNK诱导的DNA损伤后的修复有抑制作用.     

AGGF1在结直肠癌细胞DNA损伤修复及化疗敏感性中的作用

目的研究血管生成因子AGGF1在人结直肠癌细胞DNA损伤修复及化疗抵抗中的作用及机制。方法顺铂诱导结直肠 癌细胞株HCT116 细胞DNA损伤模型,运用siAGGF1 及siNC 转染结直肠癌细胞干扰AFFF1 的表达。Western blot 实验检测 AGGF1、γH2AX基因表达水平,免疫荧光法检测顺铂诱导HCT116细胞DNA损伤（双链断裂）后,γH2AX和AGGF1在损伤位点 的募集情况;MTS法检测损伤细胞的增殖情况;免疫组织化学方法检测结直肠癌及癌旁正常组织中AGGF1的表达水平。结果 Western blot结果显示顺铂处理HCT116细胞明显下调AGGF1表达,干扰AGGF1的表达抑制了γH2AX和NBS1;免疫荧光实 验表明AGGF1和γH2AX共定位,细胞增殖实验表明结直肠癌细胞对化疗的敏感性增加（P<0.01）;AGGF1在结直肠癌组织中表 达高于相应癌旁组织（P<0.01）,表明其可能与肿瘤的恶性表型相关。结论下调AGGF1基因可抑制结直肠癌细胞的DNA损伤 修复,提高其对化疗的敏感性,机制上可能与NBS1磷酸化相关。     

DNA损伤后细胞凋亡与周期停滞中△40P53的作用

目的 探讨HCT116 p53-/-细胞△40P53在脱氧核糖核酸(DNA)损伤时细胞凋亡和细胞周期停滞中的作用,明确△40P53与野生型P53的不同作用.方法 荧光素酶报告基因和免疫印迹法检测△40P53在DNA损伤后转录活性和表达情况,流式细胞技术检测DNA损伤后细胞周期停滞情况,乳酸脱氢酶(LDH)检测分析DNA损伤后细胞凋亡情况,分析△40P53的生物学功能.结果HCT116 p53+/+细胞中bax和p21基因的启动子活性在甲烷磺酸甲酯(MMS)刺激时比无MMS刺激时高3～5倍,HCT116 p53-/-细胞中bax和p21基因的启动子活性在有无MMS刺激时无显著不同;免疫印迹表明有和无MMS刺激的细胞△40P53保持在较高水平,野生型P53经MMS刺激过度表达;LDH法检测50 μg/ml的MMS刺激后52.2％的HCT116 p53+/+细胞凋亡,而只有32.5％的HCT116 p53-/-细胞凋亡,差异有统计学意义(t=84.2,P＜0.05);流式细胞仪检测MMS处理后88％的HCT116 p53-/-细胞进入G2/S期细胞,66％的HCT116 p53+/+细胞进入G2/S期细胞.结论 经MMS刺激的HCT116 p53-/-细胞的△40P53不能诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞.     

XRCC1在MMS致人细胞DNA单链断裂修复中的作用

[目的]阐明人X线修复交叉互补基因1(XRCC1)在人支气管上皮细胞DNA单链断裂修复(SSBR)中的作用.[方法]以XRCC1蛋向缺陷细胞株为模型,用标准断裂剂甲基磺酸甲酯(MMS)染毒,检测细胞存活、微核形成、彗星实验及细胞周期变化等方法测定细胞遗传毒性.[结果]XRCC1蛋白水平的降低使细胞对DNA损伤剂的杀细胞效应敏感度增加、微核形成增加、DNA单链损伤修复能力降低以及引起明显的细胞周期阻滞.[结论]结果提示XRCC1基因在DNA单链损伤修复及基因组稳定性方面起着重要的作用.     

XRCC1、XRCC3、ERCC2多态性与头颈部肿瘤患者放射性甲状腺功能异常风险的相关性

目的:探讨XRCC1、XRCC3、ERCC2多态性与头颈部肿瘤患者放射性甲状腺功能异常风险的相关性。方法:选择2019年5月～2020年12月于新疆维吾尔自治区人民医院行强调放射治疗的头颈部肿瘤患者120例作为研究对象。所有患者于放射治疗开始前收集临床资料，并抽取空腹静脉血对XRCC1、XRCC3、ERCC2多态性情况进行分析。强调放射治疗结束后进行为期1年的随访并统计随访期间出现甲状腺功能异常的情况。最后根据甲状腺功能异常情况对患者进行分组，分析XRCC1、XRCC3、ERCC2多态性与患者甲状腺功能异常的相关性。结果:异常组患者女性占比高于正常组(P<0.05)。异常组患者XRCC1单核甘酸多态性位点rs25487、rs1799782、XRCC3单核甘酸多态性位点rs861539及ERCC2单核甘酸多态性位点rs1799793基因型分布差异具有统计学意义(P<0.05)。异常组患者XRCC1单核甘酸多态性位点rs25487的G基因型频率、rs1799782的T基因型频率、XRCC3单核甘酸多态性位点rs861539的T基因型频率及ERCC2单核甘酸多态性位点rs1799...     

Association between polymorphisms of DNA repair gene XRCC1 and DNA damage in asbestos-exposed workers

INTRODUCTION Asbestos is an important environmental carcinogen and remains the primary occupational concern in many countries. The most important pulmonary disease associated with asbestos fiber exposure is asbestosis (diffuse interstitial pulmonary fibro…     

黄芪-莪术-重楼配伍降低血管内皮通透性抑制结肠癌转移作用的研究

目的 观察黄芪-莪术-重楼配伍对人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)通透性与细胞紧密连接的影响及其抑制人结肠癌细胞系(HCT116)血行转移的作用机制.方法 制备空白对照血清和黄芪-莪术-重楼配伍含药血清.构建HUVEC-HCT116共培养体系,实验分为共培养模型组,黄芪-莪术-重楼配伍低、中、高剂量(2.1、4.2、8....     

健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞迁移、侵袭的影响研究

目的:研究健脾消癌方含药血清对HCT116细胞迁移、侵袭的影响,并初步探讨其机制。方法:10%、15%、20%的健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞,划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力,Western blot检测细胞内基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达。结果:处理24 h、48 h,与相同浓度鼠血清对照组相比,10%、15%、20%的含药血清组划痕距离均增宽(P<0.05,P<0.01);与相同浓度鼠血清对照组相比,10%、15%、20%的含药血清组的迁移抑制率及侵袭抑制率均明显增大(P<0.05),均与浓度正相关。与15%的鼠血清对照组比较,15%的含药血清组MMP-2、MMP-9蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:健脾消癌方抗复发转移机制可能是通过下调MMP-2、MMP-9蛋白表达,从而抑制HCT116细胞迁移、侵袭。     

DNA修复基因XPCC3多态性与子宫内膜异位症发病相关性分析

目的研究DNA修复基因XRCC3多态性与子宫内膜异位症发病风险的关系。方法采用病例-对照研究的方法,应用PCR-RELP方法检测子宫内膜异位症患者与非子宫内膜异位症妇女XRCC3基因Thr241Met的多态性分布,并分析其多态性与子宫内膜异位症疾病病理过程的关系。结果XRCC3基因多态性在内异症组与对照组存在显著差异(P<0.05),Thr/Met基因表达在内异症组显著增强(P<0.05);Thr241Met基因多态性与内异症病理分期无相关性。结论具有XRCC3 Thr/Met基因型或Met等位基因的个体对内异症的发生有易感性,但与内异症的临床病理分期无关。     

<Emphasis Type="Italic">XRCC1</Emphasis> Arg194Trp polymorphism and risk of chronic obstructive pulmonary disease

The DNA damage, caused by cigarette smoking, can cause airway cell apoptosis and death, which may be associated with the development of chronic obstructive pulmonary disease （COPD）. However, just 20%-30% smokers develop COPD, which suggests that different degrees of DNA repair cause different outcomes in smokers. X-ray repair cross-complementing group 1 （XRCC 1）, a base excision repair protein, has multiple roles in repairing ROS-mediated, basal DNA damage and single-strand DNA breaks. The present study investigated the association between polymorphism in XRCC1 （Arg399Gln） and susceptibility of COPD. A total of 201 COPD cases and 309 controls were recruited and frequency-matched on age and sex. XRCC1 genotype was determined by PCR-restriction fragment length polymorphism analysis. Overall, compared with those with the XRCC1 Arg/Arg genotype, the risk for COPD had no significant difference among individuals with Trp/Trp genotype. However, after stratifying by smoking status, in former smokers, compared with those with the XRCC1 Arg/Arg genotype, the risk for COPD was significantly reduced among individuals with Trp/Trp genotype （adjusted OR=0.22, 95% CI 0.06-0.85, P=0.028）; after stratifying by smoking exposure, in light smokers, compared with those with the XRCC1 Arg/Arg genotype, the risk for COPD was significantly reduced among individuals with Arg/Trp genotype and Trp/Trp genotype （adjusted OR=0.39, 95% CI 0.16=0.94, P=0.036; 0.24, 95% CI 0.07-0.79, P=0.019, respectively）. In conclusion, XRCC1 Arg194Trp genotype is associated with a reduced risk of developing COPD among former and light smokers.     

XRCC1基因在维吾尔族、汉族乳腺癌组织中的表达及差异

目的:检测DNA修复基因XRCC1在维吾尔族、汉族乳腺癌组织及癌旁组织中的表达状况,探讨其与乳腺癌发生的关系及种族差异.方法:选取维吾尔族和汉族乳腺癌患者各70例,应用实时荧光定量PCR测定癌组织及癌旁组织中XRCC1 mRNA的表达.其中随机选取维、汉各27例,采用Western blot法检测癌组织及癌旁组织中XRCC1蛋白表达.结果:XRCC1 mRNA在维、汉乳腺癌组织中表达均高于相应癌旁组织(P＜0.05),蛋白在维、汉乳腺癌组织中表达均低于相应癌旁组织(P＜0.05),在转录水平表现出种族差异(P＜0.05).结论:XRCC1在乳腺癌组织及癌旁组织中存在转录及翻译水平的差异表达,并表现出种族差异性.     

XRCC1、ERCC1单核苷酸多态性与非小细胞肺癌对铂类化疗的敏感性

目的：探讨人类X射线交错互补修复基因1（XRCC1）和核苷酸切除修复交叉互补组基因1（ERCC1）单核苷酸多态性（SNP）与非小细胞肺癌（NSCLC）对铂类化疗的敏感性。方法：选择2009年1月～2011年3月江苏省肿瘤医院收治的经病理组织学确诊的NSCLC患者204例,采用MALDI-TOFMS法检测接受铂类药物化疗的NSCLC患者XRCC1（399）和ERCC1（118）的基因型,并随机抽取5%的样本进行基因测序来验证该方法的准确性。比较不同基因型与铂类药物化疗后生存期的关系。结果：204例NSCLC患者中,部分缓解61例,疾病稳定116例,疾病进展27例;有效例数占29.9%（61/204）,无效例数占70.1%（143/204）。携带XRCC1（399）G/G、G/A＋A/A基因型的NSCLC患者铂类化疗后有效率分别为36.9%（38/103）和22.8%（23/101）,两者间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）,携带ERCC1（118）C/C、C/T＋T/T基因型的NSCLC患者铂类化疗后有效率分别为24.0%（29/121）和38.6%（32/83）,两者间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。XRCC1（399）G/G基因型患者对顺铂类药物的敏感性是G/A＋A/A基因型患者的1.983倍（95%CI：1.073～3.662,P=0.028）。ERCC1（118）C/C基因型患者对顺铂类药物的敏感性是C/T＋T/T基因型患者的0.502倍（95%CI：0.274～0.923,P=0.025）。携带XRCC1（399）G/G、G/A＋A/A基因型的NSCLC患者铂类化疗后中位生存期MST、1年生存率、2年生存率分别为12.0个月、52.4%、11.7%和10.0个月、37.6%、3.0%,两者间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;携带ERCC1（118）C/C、C/T＋T/T基因型的NSCLC患者铂类化疗后MST、1年生存率、2年生存率分别为9.0个月、34.7%、4.1%和12.0个月、60.2%、12.0%,两者间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：XRCC1（399）、ERCC1（118）基因多态性与NSCLC患者铂类药物化疗后的生存期有显著相关性,有可能成为铂类药物化疗后生存期的预测指标。