不同牙龈卟啉单胞菌菌株对人牙周膜细胞MMP-3和MMP-9表达的影响

【目的】比较3种牙龈卟啉单胞菌菌株P.gingivalis W83、P.gingivalis ATCC33277、P.gingivalis FDC381刺激人牙周膜细胞表达基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)MMP-3、MMP-9水平的差异。【方法】厌氧培养细菌P.gingivalis W83、P.gingivalis ATCC33277和P.gingivalis FDC381,原代培养人牙周膜细胞,3种菌株分别与人牙周膜细胞混合培养5 min、30 min、60 min、120 min、24 h、48 h,采用ELISA法测定上清液中MMP-3和MMP-9的浓度。【结果】在各时间点,受细菌刺激的人牙周膜细胞表达MMP-3和MMP-9的浓度均高于未受细菌刺激组(P<0.01)。P.gingivalis W83刺激人牙周膜细胞表达的MMP-3、MMP-9浓度明显高于P.gingivalis ATCC33277和P.gingivalis FDC381,经方差分析,差异具有显著性(P<0.01)。【结论】高毒力株P.gingivalis W83可以通过细菌-细胞间相互作用导致局部牙周组织中MMP-3、MMP-9高表达,造成牙周组织破坏。     

牙龈卟啉单胞菌感染血管内皮细胞对NF-κB和p38MAPK信号通路的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞茵(P.gingivalis)ATCC 33277和W83感染血管内皮细胞对NF-κB和p38 MAPK信号通路的影响.方法 建立体外P.gingivalis感染血管内皮细胞模型,蛋白质印迹技术和免疫荧光法检测NF-κB和p38 MAPK信号通路表达的变化;多组均数之间的比较采用重复测量资料的方差分析.结果 P.gingivalis ATCC 33277和W83感染血管内皮细胞后迅速导致p38 MAPK磷酸化、IκB-α降解及NF-κB p65核移位.结论 P.gingivalis感染血管内皮细胞导致NF-KB和p38MAPK信号通路的激活,在慢性牙周炎致病机制的研究中具有一定的提示意义.     

抑制消减杂交技术分析牙龈卟啉单胞菌基因差异初探

目的:对比牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)低毒力株标准参考菌ATCC 33277与高毒力株W83之间的差异核苷酸序列,查找高毒力株W83缺失基因。方法:抑制消减杂交技术对比牙龈卟啉单胞菌低毒力株标准参考菌ATCC 33277与高毒力株W83的基因差异。以低毒力株ATCC 33277为tester,高毒力株W83株为driver,将提取的基因组DNA用内切酶RsaⅠ酶切,连接特殊设计的adaptor进行两次消减杂交和PCR扩增,并与TA克隆载体连接,转化到JM109中,建立差异消减文库,经PCR筛选鉴定阳性克隆,进而对部分片段进行测序和同源分析。结果:经SSH筛选鉴定得到62个片段大小为125～632bp的阳性克隆基因片段。结论:这些差异基因为研究牙周病的发生和发展提供重要线索。     

唾液牙龈卟啉单胞菌、MMP-8及TIMP-1水平与牙周炎的相关性分析

目的 探讨唾液生物标志物牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）、基质金属蛋白酶-8（MMP-8）及金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）水平与牙周炎的相关性。方法 选取2020 年10 月至2021 年1 月首都医科大学附属北京口腔医院牙周科收治的牙周炎患者25 例作为牙周炎组，另外同期该院牙周健康者22 名作为牙周健康组。记录所有研究对象牙周临床参数，收集非刺激性唾液，实时定量PCR 测定P.gingivalis 水平，ELISA 测定MMP-8 及TIMP-1 水平。比较牙周炎组和牙周健康组唾液P.gingivalis、MMP-8、TIMP-1 水平及MMP-8/TIMP-1 比值，分析生物标志物单独或联合应用对牙周炎的诊断效能。结果 牙周炎组唾液P.gingivalis、MMP-8 水平及MMP-8/TIMP-1 比值高于牙周健康组，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组TIMP-1 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。唾液P.gingivalis、MMP-8 水平及MMP-8/ TIMP-1 比值与牙周临床参数均呈正相关。P.gingivalis 和MMP-8 单独对Ⅱ期及以上牙周炎的预测价值中等，MMP-8/TIMP-1 比值单独、P.gingivalis 联合MMP-8 和P.gingivalis联合MMP-8/TIMP-1 比值对Ⅱ期及以上牙周炎的预测价值均较高。结论 唾液P.gingivalis，MMP-8，尤其是MMP-8/TIMP-1 比值及其联合是检测Ⅱ期及以上牙周炎的潜在候选，唾液生物标志物的联合应用进一步提高了牙周诊断的准确性。     

硝苯地平对人牙龈成纤维细胞MMP-1和 MMP-2 mRNA表达的影响

目的探讨硝苯地平(Nifedipine)对人牙龈成纤维细胞(gingival fibroblasts, GFs)基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1, MMP-1)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA表达的影响。方法 取牙周手术切除的健康牙龈组织,组织块法分离及培养获得GFs,免疫细胞化学法对GFs进行鉴定。对GFs进行药物刺激,分为硝苯地平组(1μg/ml)、LPS组(1μg/ml)、硝苯地平+LPS组(分别为1μg/ml),同时设空白对照组。实时定量PCR检测各组24、48h时MMP-1和MMP-2 mRNA的表达水平。结果 组织块法获得的GFs生长状态良好;免疫细胞化学显示,GFs抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性。与空白对照组相比,硝苯地平组刺激48h后MMP-1、MMP-2 mRNA表达减少(P＜0.05);硝苯地平+LPS组MMP-1 mRNA表达明显增加(P＜0.05),MMP-2 mRNA表达无明显变化。结论 硝苯地平可能通过影响GFs MMP-1和MMP-2基因的表达而影响牙龈增生。     

骨膜蛋白在慢性牙周炎患者牙龈组织中的表达及其临床意义

目的：检测慢性牙周炎患者牙龈组织中骨膜蛋白、基质金属蛋白酶8（MMP-8）和基质金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP-2）的表达情况，探讨骨膜蛋白在慢性牙周炎发生发展中的可能作用及其相关生物学机制。方法：选择23例正常牙龈组织（对照组）和19例炎症牙龈组织（病例组）。采用免疫组织化学SP法检测2组患者牙龈组织中骨膜蛋白、MMP-8和TIMP-2表达情况，采用Spearman分析法检测2组患者牙龈组织中骨膜蛋白表达与MMP-8和TIMP-2表达的相关性。结果：病例组患者牙龈组织中骨膜蛋白阳性表达率低于对照组（P<0.05）。相关性分析，对照组患者牙龈组织中骨膜蛋白表达与MMP-8表达呈负相关关系（r=-0.51，P<0.05），骨膜蛋白表达与TIMP-2表达呈正相关关系（r=0.50，P<0.05）；病例组患者牙龈组织中骨膜蛋白表达与MMP-8表达呈负相关关系（r=-0.482，P<0.05），骨膜蛋白表达与TIMP-2表达呈正相关关系（r=0.655，P<0.05）。结论：骨膜蛋白可以作为维持牙龈组织结构稳定性的初步指标，成为牙周组织再生方面的研究靶点。     

基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1 mRNA及蛋白在骨性关节炎中的表达

目的：探讨骨性关节炎（OA）中金属蛋白酶-13（MMP-13）,转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA和蛋白表达的意义.方法：采用免疫组织化学技术,对60例OA病例及20例正常对照组进行了MMP-13及TGF-β1蛋白表达的检测;通过原位杂交技术,对30例OA及10例正常对照进行了MMP-13及TGF-β1在mRNA水平表达的检测.结果：MMP-13mRNA和蛋白在OA组阳性表达的积分光密度（IOD）值均显著高于正常对照组（P〈0.01）,OA中两者的表达有显著正相关性（P〈0.01）;TGF-β1mRNA和蛋白在OA组阳性表达的IOD值均显著高于正常对照组（P〈0.01）,OA中两者的表达亦有显著正相关性（P〈0.01）;MMP-13mRNA,TGF-β1mRNA及相应蛋白在OA中的表达均呈负相关（P〈0.05或P〈0.01）.结论：OA中TGF-β1高表达通过下调关节软骨与滑膜细胞中MMP-13的表达,对OA关节软骨起保护作用.     

牙龈卟啉单胞菌临床分离株的生化反应检测与分析

目的 以模式菌株作为对照,对口腔中牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）临床菌株进行生化反应检测,初步探讨其糖代谢性质。方法 利用API 20A和ATB Rapid ID 32A生化反应检测系统,以模式菌株W83和ATCC 33277为对照,对5株P.gingivalis临床分离菌株SJD2、SJD4、SJD5、SJD11、SJD12进行生化代谢反应检测和分析。结果 5株P.gingivalis临床菌株均具有β-半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性;具有水解多种氨基酸残基的能力,并能水解游离的色氨酸和精氨酸;各菌株的生化反应存在异质性。API 20A与ATB Rapid ID 32A生化反应板条的检测结果存在一定差异。结论 P.gingivalis可以多肽或氨基酸作为主要碳源或氮源,但存在部分糖代谢的能力;各菌株的生化代谢反应存在差异。ATB Rapid ID 32A可能更适合应用于龈下菌斑中革兰阴性厌氧菌的生化反应检测和鉴定。     

金属基底合金浸提液影响人牙龈成纤维细胞MMP-1、MMP-3表达的实验研究

目的观察不同种类烤瓷冠金属基底合金浸提液对人牙龈成纤维细胞中MMP-1、MMP-3表达水平的影响。方法制备镍铬合金、纯钛、金铂合金金属浸提液,组织块法培养人牙龈成纤维细胞,等量金属浸提液置换细胞培养液24 h,分别在1、6、13、24 h收集上清液,ELISA法测定MMP-1、MMP-3表达水平。结果（1）MMP-1、MMP-3在镍铬合金组的表达水平明显高于其他实验组及对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。（2）MMP-1、MMP-3在纯钛、金铂合金组的表达水平与空白组有差异,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论镍铬合金对人牙龈成纤维细胞损伤大,纯钛、金铂合金具有良好的生物相容性。     

基于Wnt/β-catenin通路探究骨痹通方对软骨基质的保护作用及其机制

背景　骨痹通方对骨关节炎（OA）具有较好的临床治疗效果,对OA模型大鼠软骨具有良好的保护作用,但其具体作用机制尚不明确。目的　基于Wnt/β-catenin通路探究骨痹通方对软骨基质的保护作用及其机制。方法　本研究于2020年6-9月完成。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTS）法检测SW1353软骨肉瘤细胞活力。通过白介素1β（IL-1β）介导的SW1353软骨肉瘤细胞建立OA细胞模型,设置A组、B组、C组、D组、E组,其中A组为空白对照,B组为阳性对照（加入10 μg/L的IL-1β）,C组、D组、E组加入10 μg/L的IL-1β后分别加入低剂量（625 mg/L）、中剂量（1 250 mg/L）、高剂量（2 500 mg/L）骨痹通方溶液。采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测基质金属蛋白酶1（MMP-1）、基质金属蛋白酶3（MMP-3）、基质金属蛋白酶13（MMP-13）mRNA表达情况,采用Western-blotting检测MMP-1、MMP-3、MMP-13、β-catenin蛋白表达情况,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测MMP-1、MMP-3、MMP-13分泌情况。结果　浓度为3 000 mg/L的骨痹通方溶液对SW1353软骨肉瘤细胞活力有一定抑制作用（P<0.05）。B组、C组、D组、E组细胞MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA相对表达量高于A组,但C组细胞MMP-1、MMP-3 mRNA相对表达量低于B组,D组、E组细胞MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA相对表达量低于B组、C组,E组细胞MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA相对表达量低于D组（P<0.05）。B组、C组、D组、E组细胞MMP-1、MMP-3、MMP-13蛋白相对表达量高于A组,但C组细胞MMP-1、MMP-3蛋白相对表达量及D组、E组细胞MMP-1、MMP-3、MMP-13蛋白相对表达量低于B组,D组细胞MMP-1、MMP-13及E组细胞MMP-1、MMP-3、MMP-13蛋白相对表达量低于C组,E组细胞MMP-1、MMP-3、MMP-13蛋白相对表达量低于D组（P<0.05）。B组、C组、D组、E组细胞上清液MMP-1、MMP-3、MMP-13含量高于A组,但C组、D组、E组细胞上清液MMP-1、MMP-3、MMP-13含量低于B组,D组、E组细胞上清液MMP-1、MMP-3、MMP-13含量低于C组,E组细胞上清液MMP-1、MMP-3、MMP-13含量低于D组（P<0.05）。分别在B组基础上加入5 μmol/L Wnt/β-catenin通路激活剂WAY-262611溶液（F组）、10 μmol/L地塞米松溶液（G组）。B组、C组、D组、E组、F组、G组细胞MMP-13、β-catenin蛋白相对表达量高于A组,F组细胞MMP-13、β-catenin蛋白相对表达量高于B组、C组、D组、E组、G组,但D组、E组、G组细胞MMP-13蛋白相对表达量及E组、G组细胞β-catenin蛋白相对表达量低于B组、C组,G组细胞MMP-13蛋白相对表达量及E组、G组细胞β-catenin蛋白相对表达量低于D组,G组细胞MMP-13、β-catenin蛋白相对表达量低于E组（P<0.05）。结论　骨痹通方对软骨基质具有一定保护作用且存在一定剂量依赖效应,抑制基质金属蛋白酶（MMPs）的过度表达及Wnt/β-catenin通路异常激活可能是其发挥软骨基质保护作用的重要机制。     

CD147对体外破骨细胞分化过程中基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9分泌的影响

目的 建立体外破骨细胞(osteoclasts,OCs)诱导分化模型,研究CD147对体外破骨细胞分化过程中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases 9,MMP-9)合成与分泌的影响.方法 采用健康成...     

一种SD大鼠实验性牙周炎模型的建立方法

目的 通过优化方法建立大鼠牙周炎动物模型,观察牙周炎动物模型牙槽骨吸收程度。方法 丝线结扎牙周炎组大鼠上颌第二磨牙。建模期间观察实验大鼠牙周情况,影像学检测大鼠牙槽骨吸收情况,体视显微镜测量牙槽骨吸收量。RT-qPCR法检测牙龈组织中TNF-α、MMP-8 mRNA的相对表达水平。结果 牙周病组大鼠上颌第二磨牙牙周组织炎症逐渐加重,牙槽骨吸收量增大,松动度逐渐加大,牙周病组TNF-α、MMP-8 mRNA相对表达量与对照组比较增高。结论 通过优化造模方法,成功建立SD大鼠牙周炎动物模型。     

巴马司他对高血压小鼠模型血压及血清基质金属蛋白酶9水平的影响

目的探讨外源性基质金属蛋白酶9(MMP-9)抑制剂巴马司他对高血压小鼠血压及其血清中MMP-9水平和活性的影响。方法将36只高血压小鼠(高血压组)平均分为3个亚组,每组12只,连续3 d分别以巴马司他30 mg/kg(高剂量亚组)、10 mg/kg(低剂量亚组)和生理盐水(对照亚组)对小鼠腹腔进行注射,依次在最后1次注射后0 h、2 h、4 h、6 h对各组小鼠血清中MMP-9及其mRNA水平进行检测;应用明胶酶谱法检测各组小鼠血清中MMP-9活性。选择健康小鼠36只为健康对照组,检测血清MMP-9、mRNA水平,并与高血压组比较。结果(1)血压变化:与健康对照组比较,高血压组用药前血压较高,差异有统计学意义(P<0.05),用药后,与对照亚组及低剂量亚组比较,高剂量亚组血压降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)血清MMP-9浓度:与健康对照组比较,用药前高血压组MMP-9蛋白浓度显著高(P<0.01),用药后,组内比较:高剂量亚组和低剂量亚组小鼠血清中MMP-9蛋白表达水平均随着药物作用时间的延长而降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与低剂量亚组、对照亚组比较,高剂量亚组在2 h、4 h、6 h血清MMP-9浓度均较低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);低剂量亚组与对照亚组比较,2 h、4 h、6 h差异亦均有统计学意义(P<0.05)。(3)MMP-9 mRNA表达:与健康对照组比较,高血压组MMP-9 mRNA水平显著升高(P<0.05);用药后,高剂量亚组和低剂量亚组小鼠血清中MMP-9 mRNA水平均随着药物作用时间的增加而降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);对照亚组、低剂量亚组、高剂量亚组两两比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。(4)MMP-9活性测定:随着巴马司他给药剂量的增加,Pro-MMP-9和Active-MMP-9活性呈减弱趋势。结论巴马司他能够降低高血压小鼠血压水平及其血清中MMP-9水平和活性。     

去整合素Kistrin对晶状体摘除术后兔晶状体上皮细胞MMP-2和TIMP-2基因表达的影响

目的 研究去整合素Kistrin作用下,晶状体摘取术后兔晶状体上皮细胞(LECs)中基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA和其抑制因子组织性金属蛋白酶抑制物2(TIMP-2)mRNA表达的变化,探讨Kistrin作用的分子机制.方法 将8只新西兰大白兔随机分为实验组和对照组,每组4只,均行右眼透明晶状体囊外摘除术(EC...     

复方莪术散对子宫内膜异位症患者cAMP-PKA信号通路及MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的:观察复方莪术散对子宫内膜异位症患者c AMP-PKA信号通路及异位内膜基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)表达的影响。方法:86例子宫内膜异位症患者随机分为对照组和观察组各43例。对照组给予孕三烯酮胶囊和手术治疗;观察组在对照组治疗基础上给予复方莪术散。两组均治疗3个月。比较两组患者治疗前后血清肿瘤标志物糖抗原(carbohydrate antigen-125,CA125)、CA199、异位内膜组织和在位内膜组织cyclin D、P16、MMP-2、MMP-2 mRNA、TIMP-2和TIMP-2 mRNA水平。结果:与治疗前比较,治疗后两组患者的血清CA125、CA199水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,观察组患者治疗后血清CA125、CA199水平低于对照组(P0.05);观察组异位内膜组织中cyclin D、MMP-2 mRNA、MMP-2蛋白表达水平明显低于对照组(P0.05);观察组异位内膜P16、TIMP-2 mRNA、TIMP-2蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05)。结论:复方莪术散可以通过调节c AMP-PKA信号通路,提高子宫内膜异位症患者异位内膜TIMP-2 mRNA、TIMP-2蛋白表达水平,降低MMP-2 mRNA、MMP-2蛋白表达水平。     

去甲肾上腺素诱导人巨噬细胞MMP-9的表达及机制

目的观察去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)预处理人巨噬细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及其致动脉粥样硬化机制。方法体外培养的U937巨噬细胞,以10-10、10-9、10-8、10-7mol/L NE分别刺激细胞0、1、3、6、12、24 h。RT-PCR法测细胞MMP-9 mRNA水平,Western blot法检测细胞MMP-9蛋白表达,ELISA法测细胞培养液上清中MMP-9蛋白水平的表达。预先加入抗氧化剂NAC(10 mmol/L)和NAD(P)H氧化酶抑制剂DPI(10-5mol/L)孵育1 h后再用不同浓度的NE分别刺激细胞24 h,用荧光探针法检测细胞内ROS的生成;用RT-PCR及ELISA法检测细胞MMP-9mRNA和蛋白的表达。结果 NE浓度时间依赖性地增加巨噬细胞MMP-9 mRNA(10-7mol/L NE为对照组的4.65倍,P<0.01)及蛋白(10-7mol/L NE为对照组的4.14倍,P<0.01)表达;随着NE浓度的升高,ROS的生成分别为对照组的2.18、3.22、3.64、4.50倍(P<0.01)。NAC和DPI都一定程度地抑制了MMP-9 mRNA[DPI组为NE组的0.752倍(P<0.05),NAC组为NE组的0.500倍(P<0.01)]和蛋白(DPI组为NE组的0.698倍,NAC组为NE组的0.671倍,均P<0.05)的表达。结论 NE浓度和时间依赖性地诱导人巨噬细胞U937 MMP-9的表达,通过NAD(P)H氧化酶介导的ROS通路而促进炎症反应,促进AS的发生、发展。     

MMP-13在大鼠退行性变腰椎间盘中的表达及意义

目的检测MMP-13在大鼠退行性变腰椎间盘中的表达,探讨其在大鼠腰椎间盘退变中的作用。方法雄性大鼠24只,随机分为两组,实验组建立大鼠手术制备腰椎间盘退变模型,正常组不做处理,采用免疫组织化学方法检测两组椎间盘组织中MMP-13的表达。结果组织病理学显示实验组髓核细胞数目较正常组减少。实验组和正常组椎间盘组织中均有MMP-13的表达,实验组表达较对照组显著增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 MMP-13在腰椎间盘退变的过程中发挥着重要作用。