miRNA-223在子宫肌瘤组织中的表达及临床意义分析

目的:探讨miRNA-223在子宫肌瘤组织中的表达及临床意义。方法:选取2018年1-6月在本院行子宫肌瘤剔除术的子宫肌瘤患者60例为子宫肌瘤组,另选同期到本院体检的30例健康女性为正常对照组。采用RT-PCR法检测两组血清、子宫肌瘤组织和瘤旁正常组织中miRNA-223的表达,并分析miRNA-223表达与子宫肌瘤患者临床病理特征的关系。结果:子宫肌瘤组miRNA-223表达水平明显高于正常对照组(P0.05);子宫肌瘤组织miRNA-223表达水平明显高于瘤旁正常组织(P0.05);子宫肌瘤组织中miRNA-223的表达水平与年龄、肌瘤大小、肌瘤个数、病理类型及月经情况均有关(P0.05);由ROC曲线可知,其曲线下面积为0.847,95%CI(0.628,1.395),当miRNA-223的截断值为≥6.50时,其诊断敏感度为91.43%,特异度为80.26%。结论:miRNA-223在子宫肌瘤组织中呈高表达,其表达可能与子宫肌瘤的发生发展密切相关。     

血清外泌体miRNA-21在肝癌诊断中的应用

目的 探究血清外泌体miRNA-21的表达水平在肝癌诊断中的应用。方法 收集2018年12月-2019年12我院收治肝癌患者30例为研究对象，另选取正常健康体检者30例做对照组，收集所有受试者外周血血清，提取血清外泌体，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测血清外泌体miRNA-21表达水平；分析血清外泌体miRNA-21表达水平与肝癌患者临床病理参数的关系。绘制ROC曲线分析miRNA-21检测对肝癌的诊断价值。Logistic回归分析影响肝癌患者发生的危险因素。结果 与对照组比较，肝癌患者血清外泌体miRNA-21表达水平明显升高；miRNA-21表达水平与患者年龄、性别、AFP水平无关；血清外泌体miRNA-21-5p和miRNA-21-3p表达水平诊断的肝癌患者的AUC分别为0.711、0.977，特异度分别为80%、100%，灵敏度分别为66.7%、90%,miRNA-21诊断肝癌患者的AUC为0.982，特异度为90%，灵敏度为96.7%。结论miRNA-21-5p和miRNA-21-3p在肝癌患者血清外泌体中显著高表达，两者联合检测可提高对肝癌诊断的特异度及灵敏度...     

循环microRNA-4281对肝癌的诊断与预后评估研究

目的 探讨循环miRNA-4281在肝癌患者血清中的表达情况及对诊断的临床意义。方法运用QRT-PCR技术分别检测45例肝癌患者(肝癌组)及正常人(对照组)血清中miRNA-4281的表达量。结果与对照组相比,肝癌患者血清标本中miRNA-4281的表达量明显高于正常人,且差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线下面积是0.805,microRNA-4281作为肝癌诊断的灵敏度为84.40%,特异度是73.30%。miRNA-4281的表达与AFP无明显相关性。Kaplan-Meier分析提示miRNA-4281表达水平高的患者具有较短的生存期限(P<0.05)。结论检测miRNA-4281有利于肝癌的诊断,可作为HCC 潜在的临床诊断标志物,同时其对于评估患者的预后具有重要作用。     

miR-223基因家族的分子进化与靶基因预测

目的:分析所有miR-223基因家族成员的序列特征,并对miR-223靶基因进行预测,然后分析miR-223靶基因的生物学功能。方法:利用Clustal X 1.83软件分析miR-223基因序列特征,MEGA 5.0软件分析进化关系,再运用TargetScan、PicTar和miRDB进行靶基因预测,最后GO和KEGG进行功能分析。结果:在miRBase数据中获得miRNA-223基因家族成员的序列27条,绝大部分位于基因间隔区,少数成员的基因位置未知。大部分定位于X染色体,部分成员位于常染色体。miRNA-223成熟序列长度在20-23nt之间,同源性较高。系统进化树分析表明,miRNA-223基因家族成员分为三支。预测获得人类miRNA-223的可能具有27个靶基因,它们主要与信号转导、转录调控以及细胞生长发育等密切相关。结论:本研究结果不仅有利于理解miR-223基因家族的生物学功能,也可为后续研究提供理论依据。     

微小RNA在急性脑出血患者血清中的表达及其临床意义

目的 探讨脑出血患者急性期外周血微小RNA (miRNA)表达水平及其与患者预后的关系.方法 检测45例脑出血患者发病48h时外周循环血液中miRNA-16、miRNA-223、miRNA-19b、miRNA-107、miR-NA-92a和miRNA-124的表达量,病后3个月所有患者以改良Rankin量表评分进行预后判断.另选45例健康人员设为对照组.结果 病例组miRNA-16、miRNA-223、miRNA-19b、miRNA-107、miRNA-92a和miR-124表达水平均高于对照组(均P＜0.05);预后不良组与预后良好组miRNA-16、miRNA-223、miR-NA-19b、miRNA-107、miRNA-92a表达水平差异均无统计学意义(均P＞0.05),而两组miR-124差异有统计学意义(P＜0.05).结论 早期检测外周血miR-124表达水平对脑出血患者预后的判断具有重要意义.     

miRNA-34a靶向Bcl-2对肝癌细胞HepG2的生长和迁移能力的影响

通过过表达miRNA-34a检测Bcl-2的表达及对肝癌细胞的生长和迁移能力的影响，为肝癌的治疗提供新靶点。方法 通过生物信息学方法预测miRNA-34a的潜在作用靶点；采用双荧光素酶报告实验检测miRNA-34a与Bcl-2的靶向调控关系；体外培养肝癌细胞，将肝癌细胞分为对照组（转染miRNA-34a阴性对照物mimic NC）及miRNA-34a转染组（转染miRNA-34a模拟物）。分别转染miR-34a模拟物和阴性对照，转染36 h后，CCK8检测细胞增殖，Trans-well检测细胞迁移能力，q-PCR和Western blot方法检测miRNA-34a对肝癌细胞中Bcl-2表达量的影响。结果 miRNA-34a对肝癌HepG2细胞的活力和迁移能力具有抑制作用（P＜0.01）；miRNA-34a可以直接靶向下调Bcl-2（P＜0.01）的表达。结论 miRNA-34a可靶向并负向调控Bcl-2,降低肝癌细胞HepG2的活力和迁移能力。     

microRNA-122在乙型肝炎病毒感染及相关疾病中的研究进展

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)与宿主肝细胞存在复杂的相互作用并与病毒复制及相关慢性肝病、肝硬化、肝癌的发生\发展有关。microRNA(miRNA)-122是肝脏含量最多的特异性miRNA,大量研究揭示了其在肝细胞脂质代谢、增殖、生物钟调节及丙型肝炎病毒感染过程中的重要性。近几年的研究发现肝细胞miRNA-122与HBV复制及HBV的致病机制存在密切关联,并与乙肝肝硬化及肝癌的发生及预后相关,基于miRNA-122的诊断及治疗方法的探索也取得了一定的进展。本文综述了miRNA-122与乙型肝炎病毒复制及相关疾病进展的研究现状。     

中国冠心病患者中血小板miRNA-223预测氯吡格雷抵抗的研究

目的探讨miRNA-223与氯吡格雷反应性的关系。方法选取200例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者,利用流式细胞术和实时荧光定量技术监测血小板反应性(PRI)和miRNA-223在血小板的表达量,根据血小板反应性将患者分为血小板高反应性(HPR)和非血小板高反应性(n HPR)患者,分析miR-223表达量与血小板反应性之间的关系。结果 HPR组的平均VASP-PRI为82.8±10.1%,n HPR组则为29.7±12.1%。VASP-PRI与miR-223表达量之间有着负相关关系,且相关性较好,R~2=0.964,P0.01。结论 miRNA-223的表达量可能对于血小板反应性预测具有一定的意义。     

循环microRNA-122a和microRNA-6086在肝癌诊断及预后中的作用

目的:检测肝癌患者血清中miR-122a、miR-6086含量,研究其在肝癌诊断及预后中的作用.方法:采用real-time PCR方法进一步检测血清中miR-122a和miR-6086的表达水平.结果:观察组血清中miRNA-122a的相对含量低于对照组;miR-6086的含量高于对照组,差异均有统计学意义;统计分析发现,在不同年龄、分期、分型、肿瘤大小及AFP水平、肝功能等,患者间相对表达量差异均无统计学意义;MiRNA-122a的AUC面积为0.842,大于miRNA-6086的0.782 AUC面积,且对原发性肝癌的诊断的敏感性高于miRNA-6086,特异度无明显区别;MiRNA-6086的表达量越高患者的生存时间越短,相反表达量越低生存时间越长;miRNA-122a的表达量较正常人下调,但是其生存曲线上低表达量生存时间长于高表达的生存时间.结论:MiRNA-6086、miRNA-122a的表达水平较正常人有显著差异,可以作为肝癌诊断及预后的新指标.     

MicroRNA-223表达与肝癌根治性切除术预后的相关性

 摘要：目的  识别可以作为肝癌根治性切除术患者预后标志物的microRNA（miRNA）分子。方法  利用miRNA微阵列方法对2例原发性肝癌及对应的肺转移性肝癌进行miRNA表达分析。将原发性和转移性肝癌中表达量有2倍差异的miRNAs作为候选miRNAs分子。在miRNA验证过程中，运用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分析37例肝癌及相应癌旁非肿瘤组织中候选miRNAs分子的表达，并将其与患者的临床病理特征及生存情况进行相关性分析。结果  最终选取8种miRNAs（miR-27b、122、142-5p、196a、223、590-5p、630及944）作为候选miRNA。只有miR-223表达水平与肿瘤分期、有丝分裂指数相关。将肝癌患者分为miR-223高表达组（25例）和miR-223低表达组（12例）后发现，miR-223高表达与较高T分期、淋巴结转移、较高丝分裂指数及较高Ki-67阳性指数相关。此外，miR-223高表达还与总体生存率和无病存活率下降相关（P <0.05），中位随访时间37.9个月[疾病复发危险比为16.267（95%CI：1.732，153.789）P =0.015]。结论  肝癌组织中miR-223异常表达与肝癌患者治疗结束后发生复发转移，以及无病生存时间和总生存率有关，通过检测肿瘤组织中miR-223 qRT-PCR反应有可能预测患者预后。

     

miRNA-135b 对鼻咽癌细胞侵袭 和转移的促进作用

目的 研究miRNA-135b 对鼻咽癌CNE1 细胞系侵袭和转移的影响和作用机制。方法 用逆转录聚 合酶链反应（RT-PCR）检测miRNA-135b 在鼻咽癌CNE1 细胞系中的表达,分别在鼻咽癌CNE1 细胞系中 过表达和下调miRNA-135b,通过微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统（Transwell TM）检测肿瘤细胞迁移和 侵袭能力,采用Western blotting 检测大型肿瘤抑制因子同源蛋白2（LATS2）的表达。结果 miRNA-135b 在 鼻咽癌CNE1 细胞系中高表达,通过增强miRNA-135b 表达,鼻咽癌CNE1 细胞的侵袭和转移能力有所提升; 通过靶向miRNA-135b 干扰载体,下调miRNA-135b 表达,鼻咽癌CNE1 细胞的侵袭和转移能力有所下降。 增强miRNA-135b 表达,LATS2 活性和表达下降,而下调miRNA-135b 表达,LATS2 活性和表达上升。结 论 miRNA-135b 过表达会提升鼻咽癌CNE1 细胞的侵袭和转移能力,下调miRNA-135b 表达可有效抑制鼻 咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡。miRNA-135b 的表达可能通过影响LATS2 活性影响鼻咽癌细胞的生长。     

检测4种微小RNA对于诊断肝细胞性肝癌的价值

目的 检测4种微小RNA(miRNA)含量对于诊断肝细胞性肝癌(HCC)的临床价值。方法 连续性纳入2013年12月至2015年7月所收治的HCC患者为试验组,肝硬化及肝血管瘤患者为对照组。比较两组患者各项血清肿瘤标志物及miRNA-18、miRNA-21、miRNA-122、miRNA-192含量之间的差异性,并使用logistic回归分析进一步提取独立敏感指标,绘制相应指标的ROC曲线。结果 试验组共纳入46例符合要求的HCC患者,对照组纳入肝血管瘤患者53例、肝硬化患者40例。3组间资料比较显示:癌胚抗原(CEA)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)、甲胎蛋白(AFP)、癌抗原242(CA242)、miRNA-21、miRNA-192共7项指标存在差异(P均<0.05);多因素logistic回归分析显示AFU、AFP、TSGF、miRNA-21、miRNA-192为区分HCC患者与其他患者的独立危险因素(P均<0.05);其中miRNA-21与AFU存在正相关(r=0.621,P<0.05)、与AFP存在正相关(r=0.819,P<0.05);miRNA-192与AFU存在正相关(r=0.650,P<0.05)、与TSGF存在正相关(r=0.598,P<0.05);AFU、AFP、TSGF、miRNA-21、miRNA-192对于诊断HCC患者均具有较好的区分价值(AUC均>0.7);AFU、AFP、TSGF联合诊断HCC的ROC AUC为0.850;将miRNA-21、miRNA-192纳入上述联合诊断体系,AUC增加至0.881。结论 血清miRNA-21、miRNA-192对于HCC具有良好的诊断价值,与部分临床常用的HCC肿瘤标志物之间存在良好的线性相关趋势,将其纳入当前诊断体系有助于提升HCC的诊断效能。     

血清microRNA-21在食管鳞状细胞癌中表达的临床意义

目的 探讨食管鳞状细胞癌（ESCC）患者血清中外核体microRNA-21（miRNA-21）表达水平的临床意义.方法 从51例ESCC患者（ESCC组）血清中分离出外核体,提取总RNA,通过实时定量PCR技术检测miRNA-21的表达情况.以良性病变且无全身性炎性反应的41例患者作为对照组.结果 ESCC组患者血清中外核体miRNA-21表达水平明显高于对照组患者（P〈0.01）,而在已去除外核体的剩余血清中检测不到miRNA-21.ESCC患者血清外核体能在体外诱导食管鳞状细胞癌细胞增殖.外核体miRNA-21高表达亚组中年龄≥68岁患者比例、T3/T4型比例、III/IV期患者比例明显高于低表达亚组,而发生癌症转移患者的比例明显降低（P〈0.05,P〈0.01）.结论 ESCC患者血清中外核体miRNA-21表达明显上调,外核体miRNA-21表达水平与肿瘤进展和侵袭性密切相关,提示外核体miRNA-21可能是肿瘤治疗的一个有效靶标.     

非小细胞肺癌早期诊断的潜在生物标志物:血浆miRNA-23a和miRNA-451

目的研究血浆中miRNA23-a及miRNA-451 作为潜在生物标志物在非小细胞肺癌（NSCLC）中早期诊断的价值。方法 选取本院50例NSCLC病例和50例健康对照,通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）测定组织和血浆中miRNA23-a及miRNA-451 的表达水平,分析miRNA23-a及miRNA-451在组织和血浆中的表达差异及相关性。同时使用受试者工作特征曲线（ROC曲 线）和线下面积（AUC）评估miRNA23-a、miRNA-451及CEA在NSCLC中的诊断能力。通过瞬时转染技术,在NSCLC细胞系 A549 中分别抑制miRNA-23a 和miRNA-451 的表达,使用qRT-PCR 检测SPRY2 mRNA及MIF mRNA的表达水平。结果 miRNA-23a及miRNA-451在NSCLC组织中的表达与吸烟状态、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期显著相关（P<0.05）。与对 照组相比,miRNA-23a在NSCLC患者的肿瘤组织和血浆中显著升高,而miRNA-451明显低于对照组。这2种miRNA的水平 在肿瘤组织与血浆中表现出相同的表达趋势,呈高度相关。ROC分析显示,miRNA-23a和miRNA-451较之传统的肿瘤标志物 CEA,AUCROC、灵敏度和特异度均显著高于后者（P<0.05）。当miRNA23-a及miRNA-451联合检测时,AUCROC/灵敏度/特异度均 得到改善,分别为0.900/78%/86%。在NSCLC细胞系A549中分别抑制miRNA-23a和miRNA-451的表达后,SPRY2 mRNA及 MIF mRNA表达水平显著升高。结论miRNA-23a和miRNA-451可用作NSCLC早期诊断的候选标志物,这2种标志物联合检 测对NSCLC诊断更有效。     

miRNA-3679抑制下游ZADH2-靶基因促进肝癌细胞增殖的机制研究

  目的   寻找miRNA-3679与肝癌细胞系之间的关系,并验证其下游靶基因。   方法   通过PCR检测miRNA-3679在肝癌细胞系中的表达,使用ENCORI、miRDB、TargetScan数据库预测miRNA-3679的下游靶基因;通过qPCR检测（空白对照组、转染组及转染阴性对照组）转染靶基因表达水平确定靶基因为含锌结合醇脱氢酶结构域-2（ZADH2）;Western blot检测转染miRNA-3679抑制剂后ZADH2蛋白表达;EdU染色检测转染miRNA-3679抑制剂及同时转染miRNA-3679、ZADH2抑制剂后对细胞增殖的影响;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡。   结果   miRNA-3679在肝癌细胞系中的表达水平均高于正常人肝细胞株（P<0.05）,数据库中共筛选出6个在肝癌中下调的基因:GLUD1、B3GAT1、SLC46A3、MAP2K3、ATF5、ZADH2;qPCR检测转染miRNA-3679抑制剂后ZADH2表达升高（P<0.01）;转染miR-3679抑制剂后荧光素酶活性升高（P<0.01）;Western blot检测miR-3679 inhibitor组中的ZADH2蛋白表达高于NC组（P<0.01）;EdU分析检测miRNA-3679 inhibitor组阳性细胞数低于NC组及Inhibitor NC组（P<0.05）;miR-3679 inhibitor+si-ZADH2组克隆计数多于miR-3679 inhibitor组（P<0.01）;流式细胞术检测提示miR-3679 inhibitor+si-ZADH2组细胞凋亡数目低于miR-3679 inhibitor组（P<0.01）。   结论   miRNA-3679在肝癌细胞中显著高表达,可直接作用于ZADH2基因并影响其表达,且通过抑制ZADH2发挥促进HCC细胞的增殖及抑制其凋亡。