胰岛素对NIH3T3细胞生长和Ras-MAPK信号途径的影响

目的 探讨胰岛素激活的Ras-MAPK信号途径对鼠成纤维细胞（NIH3T3细胞）生长的影响。方法 藉四唑蓝比色法（MTT法）和蛋白免疫印迹试验分别观察胰岛素对NIH3T3细胞生长和胞内丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）活性的影响。结果 胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用呈时间和浓度依赖性，10mU/ml胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用效果最佳，对NIH3T3细胞作用的EC50是0.2mU/ml(48h);0.14mU/ml(72h)。MAPK在10mU/ml胰岛素刺激1min后即出现酪氨酸磷酸化，10min达到高峰。胰岛素作用10min，MAPK酪氨酸磷酸化程度随浓度增高（0.1,1.0,10mU/ml)而递增。结论 胰岛素对NIH3T3细胞促增殖作用与激活Ras-MAPK信号途径相关。     

重组人白介素-10对TNF-α诱导的血管外膜成纤维细胞syndecan-4蛋白表达的影响

目的观察重组人白介素-10（IL-10）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激的血管外膜成纤维细胞（NIH／3T3细胞）增殖和syndecan-4蛋白表达的影响。方法采用体外培养的NIH／3T3细胞,分别应用终质量浓度为20ng／mL TNF-α、100ng／mL IL-10、200ng／mL IL-10、100ng／mL IL-10联用20ng／mL TNF-α、200ng／mL IL-10联用20ng／mL TNF-α作用24h,并设对照组进行比较,采用MTS／PMS法确定NIH／3T3细胞的增殖状态,利用Western blot蛋白免疫印迹法测定NIH／3T3细胞中syndecan-4蛋白的表达。结果（1）MTS／PMS法测定各组细胞增殖率统计分析显示：与对照组比较,TNF-α组能显著刺激NIH／3T3细胞的增殖（P〈0．001）,而IL-10不同剂量组单独应用对NIH／3T3细胞的增殖均无明显作用（P〉0．05）。IL-10联合TNF-α共同作用组与TNF—α组比较,NIH／3T3细胞增殖均显著减少（P〈0．01）。（2）Western blot蛋白免疫印迹法测定显示：与对照组比较,TNF—α组能显著刺激NIH／3T3细胞中的syndecan-4蛋白表达（P〈0．05）,而IL-10不同剂量组单独应用对NIH／3T3细胞的syndecan-4蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）。IL-10联合TNF-α共同作用组与TNF-α组比较,NIH／3T3细胞的syndecan-4蛋白表达显著降低（P〈0．001）。结论IL—10可明显抑制TNF-α诱导的NIH／3T3细胞增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达。     

玉米紫色植株色素对染氟MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度的玉米紫色植株色素（Maize Purple Plant Pigment,MPPP）对体外染氟的MC3T3-E1成骨细胞的增殖作用。方法：通过MTT法分别观察浓度范围均为10-10~10-2mol/L的MPPP和NaF对细胞增殖情况的影响,根据上述结果选择两者适宜浓度,再进行联合培养,最终观察MPPP对染氟的MC3T3-E1细胞增殖的影响。结果：氟对MC3T3-E1细胞增殖无促进作用,较高浓度的氟可抑制细胞增殖（P〈0.05）;培养48 h,终浓度为10-5mol/L的MPPP可促进染氟（10-3mol/L）MC3T3-E1细胞增殖（P〈0.05）。结论：MPPP可增强染氟MC3T3-E1细胞的增殖能力。     

高浓度胰岛素抑制人白血病细胞株K562增殖的实验研究

目的 探讨高浓度胰岛素(insulin,INS)对K562细胞株增殖的抑制作用及其机理。方法 用不同浓度胰岛素处理K562细胞,分别用CCK-8法、细胞计数法和台盼蓝拒染法检测K562细胞的增殖活性,同时检测培养基中葡萄糖浓度变化;流式细胞术检测K562细胞的凋亡效应;并分别采用不同浓度的胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和IGF-1受体非特异性阻滞剂苏拉明（Suramin）对高浓度胰岛素影响K562细胞增殖作用进行干预。结果 胰岛素在0.1～1 mU/mL浓度下具有明显促进K562细胞增殖的作用,而高浓度胰岛素（1.6～100 mU/mL）则相反;无论培养基中葡萄糖浓度高低,高浓度胰岛素都有对K562细胞增殖的抑制作用;高浓度胰岛素抑制K562细胞增殖呈时效和量效关系;0.1、1、10、100 mU/mL胰岛素处理K562细胞48 h,与对照组比较,0.1、1 mU/mL浓度下抑制细胞凋亡,而10、100 mU/mL浓度下促进细胞凋亡（P均<0.05）;IGF-1能逆转高浓度胰岛素对K562细胞增殖的抑制作用,并且具有量效和时效关系;Suramin能增强高浓度胰岛素对K562细胞增殖的抑制作用,并且具有量效和时效关系。结论 胰岛素对K562细胞有双重作用,即在0.1～1 U/mL浓度下促进细胞增殖、抑制凋亡,高浓度（1.6～100 mU/mL）下抑制细胞增殖、促进凋亡,且其抑制作用与培养基中葡萄糖代谢无关与抑制IGF-1途径有关。     

cAMP对胰岛素刺激的NIH3T3细胞丝裂原激活蛋白激酶活性的抑制作用

目的 探讨cAMP-PKA信号途径对胰岛素激活的Ras-丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径的影响。方法 以3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)提高细胞内环腺苷酸(cAMP)浓度，藉四唑蓝比色法(MTT法)和蛋白免疫印迹试验分别观察cAMP对胰岛素刺激的小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)的生长增殖和胞内丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)活性的影响。结果 IBMX(0．5mmol/L)抑制静息的和胰岛素(10mU／mL)刺激的NIH3T3细胞的增殖，作用呈时间依赖性。在胰岛素(10mU／mL)刺激的NIH3T3细胞，MAPK出现酪氨酸磷酸化；而以IBMX(0．5mmol/L)预处理细胞30min后，再以胰岛素作用10min，胰岛素刺激的MAPK的酪氨酸磷酸化受抑制。结论：cAMP可通过抑制MAPK磷酸化活化对NIH3T3细胞增殖起抑制作用。     

桂皮醛对NIH3T3细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察肉桂主要成分桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响。方法采用MTT法观察不同浓度桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响,并采用流式细胞仪检测桂皮醛对NIH3T3细胞周期的影响。结果桂皮醛作用NIH3T3细胞48 h后,细胞增殖速度较对照组明显增加,增殖率为15%(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,桂皮醛作用24 h后NIH3T3细胞S期比例上升了3%(P<0.05),G2/M期比例无明显升高,细胞增殖指数(PrI)增加了3.5%(P<0.01)。结论桂皮醛可促进NIH3T3的增殖,这种促增殖作用可能是通过调节细胞周期使更多细胞进入S期而实现的。     

仙人掌对体外培养成纤维细胞生长增殖的影响

目的：观察仙人掌对体外培养成纤维细胞增殖的影响及其量-效关系。方法：以小鼠成纤维细胞株（NIH3T3）为研究对象,采用四氮唑盐（MTT）比色法测定仙人掌对成纤维细胞增生的影响（以OD值反映细胞活性）,采用免疫细胞化学染色法检测成纤维细胞的增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：在一定浓度范围内（0.0625～0.5mg/mL）,仙人掌能明显促进体外培养的成纤维细胞生长增殖,同时促进PCNA蛋白的表达,并随着仙人掌浓度的增加,成纤维细胞数量和PCNA蛋白的表达均不断增加,在0.5mg/mL浓度时达到高峰,呈现明显的剂量-效应关系（r分别为0.761,0.783;P均＆lt;0.01）。结论：在一定浓度范围内,仙人掌具有促进体外培养成纤维细胞增殖的作用,并表现为明显的量-效关系。     

糖基化终产物对小鼠胚胎成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的：探讨糖基化终产物（AGEs）对NIH Swiss小鼠胚胎成纤维细胞（NIH/3T3）中结缔组织生长因子（CTGF）基因表达的影响,并观察氨基胍（AG）、葛根素（Pue）对NIH/3T3中CTGF mRNA表达的干预作用。方法：葡萄糖和牛血清白蛋白（BSA）共同孵育制备AGEs,运用荧光法测定AGEs水平。用不同浓度葡萄糖（20、50和80 mmol•L^-1）制备的AGEs培养NIH/3T3细胞24 h;用50 mmol•L^-1葡萄糖制备的AGEs培养NIH/3T3细胞0、6、12、24和48 h。观察AG和不同浓度Pue（0.25、0.5、1.0和1.5g•L^-1）的干预作用。应用RT-PCR检测NIH/3T3中CTGF mRNA的表达。结果：与BSA对照组比较,用20、50和80 mmol•L^-1葡萄糖制备的AGEs培养24 h后,NIH/3T3中CTGF mRNA表达增高（P<0.01）,以50 mmol•L^-1最明显。与0 h比较,同一浓度葡萄糖制备的AGEs培养6、12、24及48 h后,NIH/3T3中CTGF mRNA的表达增高（P<0.01）,以24 h最明显。与50 mmol•L^-1葡萄糖制备的AGEs培养24 h比较,AG和不同浓度的Pue干预后NIH/3T3中CTGF mRNA的表达明显降低（P<0.01）。结论：AGEs能增强NIH/3T3中CTGF基因表达,且与孵育AGEs的葡萄糖浓度和作用时间有关,提示AGEs可能促进糖尿病并发症纤维化的发展,AG和Pue可抑制AGEs促纤维化的病理过程。     

IGF-Ⅰ联合BMP-2促MC 3T3-E1和NIH 3T3细胞的增殖和分化及钙化效应

目的：探讨重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ（rhIGF—Ⅰ）和重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2）单独或联合应用对MC3T3-E1和NIH 3T3细胞增殖、分化和钙化的影响。方法：单独或联合应用不同浓度rhIGF—Ⅰ和rhBMP-2作用于小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1和小鼠成纤维细胞株NIH 3T3，采用四唑盐比色法（MTT）和流式细胞技术检测细胞增殖，碱性磷酸酶（ALP）试剂盒检测细胞分化，放射免疫法检测细胞分泌的骨钙素水平（OC），以及Von kossa钙化染色法观察细胞的钙化。结果：1～50ng／ml rhIGF—Ⅰ作用于MC 3T3-E1细胞或5～75ng／ml rhIGF—Ⅰ作用于NIH 3T3细胞后，均能显示明显的促细胞增殖作用（P〈0．01），使S期细胞百分率升高、G1期细胞百分率减少，以及使胞内ALP活性、钙化面积百分比增高（P〈0．05）。10～100ng／ml rhBMP-2也可促进MC 3T3-E1和NIH 3T3细胞的增殖作用（P〈0．01），使S期细胞百分率升高、G1期细胞百分率减少，并使2种细胞ALP活性、钙化面积百分比升高（P〈0．05）。各浓度rhIGF—Ⅰ或rhBMP-2对MC 3T3-E1及NIH 3T3细胞作用8h、24h和48h的MTT检测结果相似。rhIGF—Ⅰ和rhBMP-2联合作用后，对2种细胞的促增殖、增强ALP活性、促钙化的作用均较各自单独作用更为明显（P〈0．05）。单独或联合应用不同浓度rhIGF—Ⅰ和rhBMP-2对细胞分泌的OC水平均无显著性差异（P〉0．05）。结论：rhIGF—Ⅰ和rhBMP-2具有明显的促进细胞增殖、早期分化及钙化的协同作用，但对成骨末期细胞分化影响不大，而其活性主要与使用剂量有关。     

藤龙补中汤对结肠癌细胞LS174T增殖和凋亡的影响

目的：观察藤龙补中汤对结肠癌细胞LS174T增殖和凋亡的影响。 方法：用不同浓度藤龙补中汤处理人结肠癌细胞LS174T和人结肠上皮细胞CRL-1790。用细胞计数检测试剂盒检测细胞增殖,平板法检测细胞克隆形成数目并计算抑制率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,比色法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）、caspase-8和caspase-9的活性。 结果：与对照组比较,藤龙补中汤对人结肠上皮细胞CRL-1790增殖无明显影响;1 mg/mL藤龙补中汤作用72 h,2 mg/mL藤龙补中汤作用48、72 h,5~20 mg/mL藤龙补中汤作用24~72 h均可显著抑制LS174T细胞增殖;1~20 mg/mL藤龙补中汤可显著抑制LS174T细胞克隆形成;5~20 mg/mL藤龙补中汤可诱导LS174T细胞凋亡,使LS174T细胞阻滞在G0/G1期,增强LS174T细胞caspase-3、caspase-8和caspase-9活性。 结论：藤龙补中汤可抑制结肠癌LS174T细胞增殖,阻滞LS174T细胞于G0/G1期,促进LS174T细胞凋亡;藤龙补中汤促LS174T细胞凋亡作用可能与增加caspase-3、caspase-8、caspase-9活性相关。     

互隔交链孢酚对NIH3T3细胞PKA-CREB信号通路的影响

目的：探讨互隔交链孢酚（Alternariol,AOH）对小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中PKA-CREB信号通路的影响.方法：20μmol/L AOH作用NIH3T3细胞1 h,或用PKA特异性抑制剂10μmol/L H89预处理1 h,再进行20μmol/L AOH刺激实验,同时设溶剂对照组.用免疫荧光和免疫细胞化学染色法检测磷酸化PKA催化亚基表达情况,用免疫细胞化学染色法检测磷酸化CREB表达水平.结果：与溶剂对照组相比,AOH诱导NIH3T3细胞中磷酸化PKA催化亚基和磷酸化CREB水平明显增加（P〈0.05）;用PKA特异性抑制剂H89预处理,降低了AOH激活的PKA催化亚基和CREB的磷酸化水平.结论：AOH能够激活NIH3T3细胞中PKA-CREB信号转导通路,这为探讨AOH致癌的分子机制提供依据.     

胶体金对MC3T3-E1增殖、分化及RUNX2基因表达的影响

目的研究30nm胶体金对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。方法体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,在仪-MEM培养液中加入不同体积的胶体金处理细胞,利用M1Tr法检测胶体金对成骨细胞增殖活性的影响,碱性磷酸酶活性测定及RT—PCR法分别检测其对成骨细胞分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。结果浓度为10^（-10）、10^（-11）、10^（-12）mg／L的胶体金均促进成骨细胞的增殖,且ALP相对活性及RUNX2基因表达也均高于阳性对照组。结论30nm胶体金能促进小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2的表达,进而促进成骨。     

硫化氢对脂肪细胞前体增殖的影响

目的：探讨硫化氢对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。方法：培养3T3-L1前脂肪细胞,分为对照组、低剂量组和高剂量组（硫化氢浓度分别为0、10、25、50和100μmol/L）,采用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测硫化氢对3T3-L1前脂肪细胞活性的影响;用BRDU法检测细胞的增殖;结果：与对照组相比,H2S在较高浓度时,对细胞有一定的毒性作用（P〈0.05）。结论：硫化氢抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖。     

晚期糖基化终产物对大鼠血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

目的：研究晚期糖基化终产物（Advanced Glycation end Products,AGEs）对体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cells,VSMCs）增殖的影响。方法：组织贴块法培养大鼠VSMCs,给予不同浓度AGE-牛血清白蛋白（AGE-BSA）连续处理VSMCs 168 h（7 d）,每24 h采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,绘制细胞生长曲线,计算细胞增殖促进率。结果：80 mg/L终浓度的AGE-BSA在培养72、961、20 h,10、20、40 mg/L终浓度的AGE-BSA在培养96、120、1441、68 h均可显著促进细胞增殖（P〈0.05） 40 mg/L终浓度的AGE-BSA在培养96 h时细胞增殖促进率最大（72.1%）。结论：AGEs具有促进VSMCs增殖作用,这一作用在一定范围内具有剂量依赖性。     

全反式维甲酸、1,25二羟维生素D3对白血病细胞株SHI-1中几种糖基转移酶mRNA表达的影响

目的探讨在全反式维甲酸（ATRA）、1,25二羟维生素D3[1,25-（OH）2D3]的作用下,白血病细胞株SHI-1中多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶（ppGalNAcTs）和某些N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（GnTs）表达的变化。方法应用RT-PCR法研究在不同浓度ATRA、1,25-（OH）2D3作用下,白血病细胞株SHI-1中ppGalNAcTs、GnTs表达的变化。结果在SHI-1细胞株中,随着1,25-（OH）2D3浓度（10^-8～10-^6mol/L）的增加,ppGalNAcT1和T2表达增加,T3表达没有变化,T4表达减少;加入ATRA（10^-8～10^-6mol/L）后,细胞株中ppGalNAcT2、β6GnTV、O-GnT表达量升高。结论白血病细胞株SHI-1ppGalNAcTs各型表达水平不同;在不同浓度ATRA、1,25-（OH）2D3的作用下,白血病细胞株SHI-1中各型ppGalNAcTs表达变化也不同。在SHI-1细胞株加入ATRA后细胞中β2GnTI、β6GnTV发生显著变化。ppGal-NAcT1、ppGalNAcT2、GnTs与白血病细胞株的分化可能有一定关系。     

杜仲叶提取物对MC3T3-E1细胞增殖作用的实验研究

目的研究杜仲叶提取物（Euec）对小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1细胞生长、增殖的影响及其分子机制。方法采用Euec与MC3T3-E1细胞体外共同培养,MTT法检测不同浓度Euec处理MC3T3-E1细胞24、48、72h后的细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果4．0～125．0μg／ml的Euec能促进MC3T3-E1细胞增殖,其中7.8μg／ml的Euec对MC3T3-E1细胞增殖的促进作用最强。流式细胞仪检测显示,6.25μg／ml的Euec作用MC3T3-E1细胞48h后,G0/G1期成骨样细胞显著减少,S期成骨样细胞增多,G2/M期成骨样细胞显著增多。结论Euec可促进MC3T3-E1细胞向G2／M期转换,使G1期的成骨样细胞减少,G2期的成骨样细胞显著增加,从而促进细胞的有丝分裂和细胞的增殖。