CysLT受体与脑缺血

在脑缺血病变中,CysLT受体中起重要作用。在缺血损伤脑组织,CysLT受体mRNA和受体蛋白表达增加,CysLT受体拮抗剂可抑制缺血诱导的CysLT受体表达并保护脑缺血损伤。CysLT受体是脑缺血病理途径中的关键因子,在脑缺血的治疗及抗脑缺血药物研制中具有重要意义。本文就上述脑缺血损伤过程中的CysLT受体作用机制进行综述。     

鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞半胱氨酰白三烯受体1表达变化

目的:制备和鉴定半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)抗体,以此观察鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞损伤过程中CysLT1受体表达变化。方法:以KLH偶联的CysLT1受体多肽(小鼠)免疫家兔制备多克隆抗体,用ELISA法测定抗体效价,以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性。用新制备的抗体以Western blotting检测鱼藤酮(0.01～1μmol/L,作用24 h)损伤BV2细胞过程中,BV2细胞上CysLT1受体的表达变化,并以RT-PCR检测验证CysLT1受体mRNA表达水平,同时以免疫组化观察CysLT1受体的亚细胞分布变化。结果:ELISA测定显示,制备的兔抗小鼠CysLT1受体抗体的效价大于1/32728,对CysLT1受体的特异性强,对CysLT2受体和GPR17基本无交叉反应。Western blotting和RT-PCR显示,鱼藤酮作用BV2细胞24 h剂量依赖性诱导CysLT1受体mRNA及蛋白水平表达升高;免疫组化显示在鱼藤酮诱导BV2细胞损伤过程中,随鱼藤酮剂量增加,CysLT1受体发生核移位。结论:制备的CysLT1受体多克隆抗体具有高效价和高特异性,能满足Western blott...     

半胱氨酰白三烯受体的研究进展

半胱氨酰白三烯(CysLTs)是一类重要的缩气管物质和炎性介质,包括白三烯C4、D4和E4.细胞膜上一种特异性G蛋白偶联受体介导CysLTs信号的转导,这种受体依据其是否能被抑制剂拮抗而分为两类:CysLT 1类受体(CysLT1)和CysLT 2类受体(CysLT2).CysLT1和CysLT2的基因克隆已经完成,这有利于我们致力于CysLT受体表达调节方面的研究以及探寻CysLTs在病理和生理情况下的新功能.     

半胱氨酰白三烯受体调节脑内炎症病变的研究展望

脑内炎症是脑缺血、退行性脑变性疾病等病变的主要特点之一,小胶质细胞是主要的炎症细胞,小胶质细胞激活对于慢性神经功能损伤有重要的影响。半胱氨酰白三烯受体(CysLT1和CysLT2受体以及GPR17)参与这些过程的调节,并且,不同亚型之间可能存在相互调节作用。随着这方面研究的深入,将为开发新型治疗药物奠定基础。     

半胱氨酰白三烯受体1参与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的调节

目的:观察半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的关系.方法:鱼藤酮及CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特处理PC12细胞后,以MTT方法检测PC12细胞活性变化;以Western blotting检测鱼藤酮处理前后,PC12细胞CysLT1受体的表达变化;不同浓度鱼藤酮处理24 h及3μmol/L鱼藤酮处理不同时间,以免疫细胞化学方法观察CysLT1受体分布变化.结果:鱼藤酮(0.3 ～30 μmol/L)可诱导PC12细胞损伤,孟鲁司特(1、5μmol/L)可显著减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤.1～ 10 μnol/L鱼藤酮作用PC12细胞24 h及3μmol/L鱼藤酮处理3h和24 h,均可诱导CysLT1受体蛋白水平表达升高.鱼藤酮能浓度和时间依赖性引起CysLT1受体从细胞核移位到细胞浆.结论:CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤.     

半胱氨酰白三烯受体1参与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的调节

目的:观察半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的关系。方法:鱼藤酮及CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特处理PC12细胞后,以MTT方法检测PC12细胞活性变化;以Western blotting检测鱼藤酮处理前后,PC12细胞CysLT1受体的表达变化;不同浓度鱼藤酮处理24 h及3μmol/L鱼藤酮处理不同时间,以免疫细胞化学方法观察CysLT1受体分布变化。结果:鱼藤酮(0.3～30μmol/L)可诱导PC12细胞损伤,孟鲁司特(1、5μmol/L)可显著减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤。1～10μmol/L鱼藤酮作用PC12细胞24 h及3μmol/L鱼藤酮处理3 h和24 h,均可诱导CysLT1受体蛋白水平表达升高。鱼藤酮能浓度和时间依赖性引起CysLT1受体从细胞核移位到细胞浆。结论:CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤。     

半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂普鲁司特调节SK-N-SH细胞分化

目的:观察半胱氨酰白三烯受体激动剂LTD4以及受体1(CysLT1)拮抗剂普鲁司特对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞分化的影响。方法:以维A酸为阳性对照,观察LTD4、普鲁司特、LTD4 普鲁司特诱导SK-N-SH细胞形态学变化;用免疫印迹法观察SK-N-SH细胞CysLT1和CysLT2受体的表达;用免疫荧光法观察神经元分化标记物微管相关蛋白(MAP-2)的表达。结果:免疫印迹显示,SK-N-SH表达CysLT1受体和CysLT2受体,CysLT2受体表达较多。形态学结果显示,维A酸、普鲁司特、LTD4 普鲁司特诱导SK-N-SH细胞发生形态学改变,表现为胞体变小,有明显的突起生长;而LTD4无明显作用。免疫荧光结果显示,在对照组和普鲁司特组MAP-2主要分布于胞体;在维甲酸组MAP-2除了分布于胞体外,还分布于突起。普鲁司特增加MAP-2阳性细胞数。结论:CysLT1受体拮抗剂普鲁司特参与SK-N-SH细胞分化的调节。     

白三烯D4体外诱导小胶质细胞激活的作用

目的:观察白三烯D4(LTD4)激活小胶质细胞株BV2细胞的作用,探讨介导BV2细胞激活的半胱氨酰白三烯受体(CysLT受体)亚型。方法:以Western blotting和免疫组化鉴定BV2细胞上CysLT受体的表达;以LTD4及CysLT受体拮抗剂处理BV2细胞后,采用MTT还原法检测细胞活性,微珠示踪法(以流式细胞仪检测)观察细胞吞噬的变化,RT-PCR检测炎症因子IL-6 mRNA的表达变化。结果:LTD4不影响BV2细胞增殖,但随着LTD4浓度增高可增强细胞吞噬、增加IL-6mRNA的表达,100 nmol/L LTD4使细胞吞噬增高为对照的1.4倍(P<0.001),IL-6 mRNA的表达增高为对照的2倍(P<0.01);LTD4诱导BV2细胞上调表达IL-6 mRNA可被CysLT1受体选择性拮抗剂孟鲁司特和CysLT1/CysLT2非选择性拮抗剂BAY u9773抑制,而CysLT2受体选择性拮抗剂HAMI 3379对此无明显影响;HAMI 3379和BAY u9773(100 nmol/L)能进一步增强LTD4诱导的BV2细胞吞噬。结论:体外LTD4可激活BV2细胞,LTD4诱导细胞IL-6 mRNA上调表达由CysLT1受体介导,LTD4诱导的细胞吞噬增强受CysLT2受体负性调节。     

水通道蛋白4在大鼠肺炎链球菌脑膜炎模型中的表达变化

目的观察大鼠肺炎链球菌脑膜炎模型中水通道蛋白4(AQP4)的表达变化及调节机制。方法采用肺炎链球菌脑池内注射诱导建立大鼠细菌性脑膜炎模型,以注射等量生理盐水者为对照,在造模后24 h、48 h、5 d处死大鼠,用HE染色、干湿重法、荧光定量PCR和免疫印迹法(Western blot)分别检测其脑部炎症程度、脑组织含水量、AQP4 mRNA和蛋白的表达水平。采用半胱氨酰白三烯受体(CysLTs)选择性拮抗剂在造模前30 min和造模后30 min、12 h、24 h、48 h分别腹腔注射给药1次,于造模后48 h观察AQP4的表达变化。结果与对照组相比,光镜下可见模型组所有大鼠脑室内均有大量炎症细胞浸润,造模后48 h及5 d大鼠脑含水量显著升高(P0.05)。PCR及Western blot结果显示,模型组大鼠脑组织AQP4 mRNA及蛋白的表达在24 h开始升高,48 h达高峰,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05),5 d时又下降。CysLT2受体拮抗剂HAMI3379可显著抑制模型组AQP4的表达增加(P0.05),而CysLT1受体选择性拮抗剂普鲁司特对模型组AQP4的表达增加无显著影响(P0.05)。结论 AQP4参与了大鼠肺炎链球菌脑膜炎脑水肿的形成,同时CysLT2受体可能通过对AQP4表达的调节以控制脑水肿。     

半胱氨酰白三烯受体2拮抗剂筛选方法的建立及化合物初筛

目的:建立半胱氨酰白三烯受体2(CysLT_2受体)拮抗剂筛选的细胞模型及方法,初筛系列合成化合物.方法:选用高表达CysLT_2受体的大鼠C6胶质瘤细胞,激动剂LTD_4攻击后检测细胞内钙浓度变化,作为CysLT_2受体拮抗剂的筛选方法,初步筛选有拮抗剂活性的化合物.采用CysLT1/CysLT_2受体非选择性拮抗剂Bay u9773和CysLT_2受体选择性拮抗剂AP-100984作为参照.结果:RT-PCR鉴定表明C6细胞高表达CysLT_2受体.LTD_4 1 μmol/L能显著升高C6细胞内钙,其作用约为阳性对照ATP的37 5%.CysLT_2受体拮抗剂抑制LTD_4诱导的C6细胞内钙升高,CysLT_1受体选择性拮抗剂无抑制作用.化合物中DXW-1、2、13、23、29、30能抑制LTD_4诱导的细胞内钙升高.结论:LTD_4诱导的C6细胞的钙信号变化可作为CysLT_2受体拮抗剂的筛选方法;化合物DXW-1、2、13、23、29、30具有CysLT_2受体拮抗活性.     

5-脂氧酶/半胱氨酰白三烯途径不参与大鼠C6胶质瘤细胞缺氧缺糖损伤

目的:观察缺氧缺糖(OGD)是否损伤大鼠C6胶质瘤细 胞,以及5-脂氧酶(5-LOX)/半胱氨酰白三烯(CysLT)途经是否参与OGD损伤. 方法:在OGD处理并恢复不同时间后,观察C6细胞活性变化,以及5-LOX抑制剂和Cy sLT受体拮抗剂的影响;以免疫细胞化学法观察5-LOX蛋白的细胞内分布;以RT-PCR法检测 CysLT1和CysLT2受体mRNA表达;并观察白三烯D4(LTD4)对C6细胞的作用.结果:OGD 4～8 h并恢复24～72 h后,可诱导C6细胞损伤;5-LOX 抑制剂和CysLT受体拮抗剂对OGD损伤无明显作用.OGD未诱导5-LOX的核膜移位.C6细胞高 表达CysLT2受体,但CysLT1受体表达很微弱,OGD不影响它们的表达.此外,L TD4对C6细胞没有明显作用.结论:OGD可诱导C6细胞损伤,但5-LOX /CysLT途径不参与OGD诱导的损伤.     

人脑胶质瘤CysLT1和AQP4的表达及临床意义

目的探讨半胱氨酰白三烯受体1（CysLT1）和水孔蛋白4（AQP4）在人脑胶质瘤组织中的表达及其与病理分级和脑水肿程度的相关性。方法利用免疫组织化学方法对22例胶质瘤患者的胶质瘤组织和4例“正常脑组织样本”中CysLT1和AQP4的表达进行检测,同时结合患者的影像学资料评定瘤周水肿指数（EI）。结果22例胶质瘤组织中CysLT1和AQP4表达均呈阳性。高级别胶质瘤的CysLT1和AQP4表达明显强于低级别胶质瘤,且两者呈正相关性（P〈0．05）;高级别胶质瘤的瘤周EI也明显高于低级别胶质瘤。结论CysLT1和AQP4在胶质瘤引起的脑水肿中起着重要作用。CysLT1的受体表达增加可能会上调AQP4的表达,从而影响脑水肿的发展。     

半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠原代皮质神经元的作用

目的:观察受体激动剂LTD4对大鼠原代皮质神经元的作用,以及不同拮抗剂对LTD4及缺血性损伤的影响。方法:在大鼠原代培养皮质神经元,以细胞内钙检测、噻唑蓝(MTT)还原反应、碘化吡啶(PI)和Hoechst-33258染色观察神经元损伤;以缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)1.5h和再灌24h诱导神经元损伤。结果:LTD4(0.01~1μmol/L)不能诱导神经元内钙升高,对神经元活性也没有明显的影响。OGD1.5h,再灌24h,可显著降低神经元活性;CysLT1受体拮抗剂普鲁司特(0.2~10μmol/L)和孟鲁司特(0.2~10μmol/L)以及CysLT1/CysLT2受体非选择性拮抗剂BAY u9773(0.02~1μmol/L),对OGD损伤无明显保护作用。结论:半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠原代神经元及缺血性损伤无明显作用。     

实验性颅脑损伤后脑组织NO的变化

目的 探讨脑损伤后急性期局部一氧化氮（NO）含量变化及其与脑水肿的关系。方法 采用自由落体法制造大鼠脑损伤后,于相应时间点取出脑组织测定其含水量、NO及Ca^2 浓度。结果 在损伤后急性期脑组织含水量、NO及Ca^2 含量均升高,其中Ca^2 浓度和NO含量分别于损伤后4h、8h达高峰,且Ca^2 升高趋势持续时间长。经检验,NO含量与脑组织含水量呈正相关。结论 NO在脑损伤急性期参与了脑水肿的发生过程。     

水通道蛋白4与脑水肿的研究进展

水通道蛋白4(AQP4)是在脑高表达的一种水通道蛋白,主要表达于星形胶质细胞和室管膜细胞,尤其在与毛细血管和软脑膜直接接触的星形胶质细胞表达丰富,是控制水进出脑组织的通道。AQP4的功能和表达的失调与大脑功能障碍密切相关,包括脑水肿、脑积水、脑卒中、肿瘤、感染和癫痫等。本文综述了AQP4与脑水肿关系的研究进展。     

缺血性脑卒中后小鼠脑组织中星形胶质细胞的异质性分析

目的：基于单细胞测序技术对缺血性脑卒中（ischemic stroke,IS）后脑组织中星形胶质细胞的动态变化进行研究,以更好地理解星形胶质细胞在IS发生发展中的作用。方法：利用GEO公共数据库下载IS小鼠脑组织测序数据（GSE227651）,通过tSNE聚类降维分析获取不同的星形胶质细胞亚群,并对IS后第1、3和7天缺血损伤脑组织中不同星形胶质细胞亚群的动态变化及功能进行分析;利用Monocle软件包对不同星形胶质细胞亚群所处的发育阶段进行分析;利用CellChat软件包对星形胶质细胞与其他细胞亚群之间的配受体相互作用情况进行动态分析。结果：小鼠脑组织细胞聚类为19个细胞亚群,注释为16种不同的细胞;对星形胶质细胞重新聚类分析,进一步分为6个星形胶质细胞亚群,根据功能分析将星形胶质细胞亚群2和亚群5定义为反应性星形胶质细胞,亚群0和亚群3定义为修复性星形胶质细胞,亚群1和亚群4为静息性星形胶质细胞。根据拟时序分析结果进一步将星形胶质细胞亚群2定义为急性反应性星形胶质细胞,亚群0定义为缺血损伤后修复性星形胶质细胞。细胞配受体相互作用分析显示,星形胶质细胞与星形胶质细胞、B细胞、NK细胞、内皮细胞、巨噬细胞、上皮细胞和神经元的配受体作用关系随时间动态改变。结论：星形胶质细胞的功能状态在IS后随时间动态改变,在IS后的早期主要通过急性反应性星形胶质细胞介导损伤后的急性炎症反应,而在IS后第3天开始通过缺血损伤后修复性星形胶质细胞参与损伤后脑组织的功能重建。     

脑内甾体激素受体

甾体激素受体在脑内的生理意义与机理所知尚少,本文应用受体放射分析技术与现代生物化学分析技术(如等电聚焦电泳,超离心技术)对鼠脑与人脑内的糖皮质激素受体(GR)、盐皮质激素受体(MR)、雌激素受体(ER)与孕激素受体(PR)的化学特性、含量检测及其临床意义作了比较系统的研究。尤其侧重在人脑肿瘤中GR,MRER和PR与脑水肿的关系和对肿瘤治疗及预后方面所起的作用。 概括地说,人脑与脑肿瘤中的GR与血管源性脑水肿的治疗和转归有密切关联;根据CT观察,进一步证实血管源性脑水肿主要原因是病变区血管的通透性呈病理性增高。糖皮质激素由于能降低和改善血管通透性,对脑水肿起到积极的治疗作用。颅内肿瘤中GR的多少与治疗因肿瘤引起的血管源性脑水肿的效果成正比。人脑与脑肿瘤,尤其是胶质细胞瘤中的MR推论与缺血性脑水肿的形成与发展有密切联系。而脑膜瘤象乳癌一样,瘤组织中含有ER及PR的阳性率分别为94％与82％;说明脑膜瘤是一种与雌激素关系密切的肿瘤,为今后对这类肿瘤的内分泌治疗开辟了道路。     

电针影响大鼠脑缺血再灌注后水通道蛋白4 (AQP4)的表达及其在血管周边的分布

 目的 研究电针干预大鼠脑缺血再灌注损伤时脑内水通道蛋白4 (aquaporin 4,AQP4)的表达与分布改变。 方法 选用SD雄性大鼠406只,分为正常对照组(n=40),脑缺血组(n=138),脑缺血+电针组(电针处理组,n=138)和脑缺血+假电针组(n=90)。利用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血1 h后实施脑血流再灌注。电针处理组在脑缺血开始后立即给予电针刺激,穴位选择“水沟”(GV 26)与“百会”(GV 20)。利用Western blot检测AQP4的蛋白表达水平,胶体金免疫电镜观察AQP4免疫阳性颗粒在血管周边的分布,常规焦油紫染色计算脑缺血后的脑梗死体积以及脑肿胀程度。神经行为学评估通过Garcia量表进行评分。结果 (1)再灌注24 h内,电针可下调因脑缺血而诱导的AQP4表达升高,再灌注后6 h和12 h分别是缺血组的0.63倍和0.72倍(P < 0.05);(2)与正常对照组相比,血管周边AQP4的免疫阳性颗粒在再灌注后6 h增多,在再灌注后24 h减少,电针干预组中血管周边AQP4的免疫阳性颗粒密度发生改变,其变化与缺血组相反,差异有统计学意义(P < 0.05);(3)电针减轻脑缺血后的脑梗死及脑肿胀,促进神经行为功能的恢复。结论 电针下调因缺血而导致的AQP4蛋白的表达升高,并动态改变其在血管周边的分布。电针对AQP4的调控作用可能与电针的神经保护作用机制相关。