Effect of oxymatrine on murine fulminant hepatitis and hepatocyte apoptosis

目的　观察氧化苦参碱 (oxymatrine ,OM)对实验性小鼠暴发型肝炎 (fulminanthepatitis,FH)及其早期肝细胞凋亡的保护作用 ,并研究其药理机制。方法　腹腔注射 (ip)脂多糖 (LPS) +氨基半乳糖 (GalN)造成小鼠FH模型。两次实验均设生理盐水对照组、暴发型肝炎组和OM预保护组 (5 0mg/kg ,ip ,bid× 3d)。分别于注射GalN/LPS后 5h、7 5h取血清检测肿瘤坏死因子(TNFα) ,同时在 5h点取肝组织作原位凋亡细胞检测 ,并于电镜下观察凋亡细胞超微结构 ;在 7 5h点取肝组织作HE染色及Fas及其配体 (FasL)的免疫组化检测。结果　与模型组相比 ,OM治疗组 5h、7 5h点TNFα水平明显减低 (P <0 0 5和 0 0 1) ,5h点肝细胞凋亡亦明显减少 (P <0 0 1)。OM组 7 5h点肝组织损伤及Fas、FasL表达程度均较模型组减轻 (P <0 0 1和P <0 0 5 )。结论　OM对GalN/LPS诱导的小鼠FH有保护作用 ,其机制可能为抑制TNFα释放及Fas、FasL表达 ,从而阻断肝细胞凋亡及坏死。     

氧化苦参碱对苯巴比妥钠诱导的肝细胞凋亡小鼠肝细胞bcl-2、bax基因表达的影响

目的：探讨氧化苦参碱（OM）阻断苯巴比妥钠（PB）诱导的肝细胞凋亡的机制。方法：105只雄性昆明种小鼠随机分为5组。空白对照组：腹腔注射生理盐水，连续7d，停药12h后处死。PB组：5g/L PB75 mg/kg,1次／d，腹腔注射，连续7d，停药后12h处死。PB撤除组：5g/L PB 75mg/kg,1次／d，腹腔注射，连续6d，停药后36h处死。OM治疗I组：首先腹腔注射5g/L PB 75mg/kg,1次／d；第6d后腹腔注射OM 150mg/kg,3次／d，至停PB后36h，将动物处死。OM治疗Ⅱ组：首先腹腔注射5g/L PB 75mg/kg,1次／d，第6d后腹腔注射OM 75mg/kg,3次／d，至停PB后36h，将所有动物脱颈处死，取出肝脏，体积分数为4％多聚甲醛固定，石蜡包埋。用Tunel法检测肝细胞凋亡，用免疫组化和原位杂交技术检测bcl-2、bax基因的表达。结果：仅PB撤除组Tunel法检测到细胞凋亡。Bcl-2蛋白在OM治疗I、Ⅱ组的表达较PB撤除组显著增强（P＜0．05），在OM治疗I组和Ⅱ组之间差异无统计学意义。Bax蛋白在PB撤除组表达较其他各组显著增强（P＜0．05），而在其他各组之间差异无统计学意义（P＞0．05）。bcl-2、bax基因表达的mRNA阳性信号强度与Bcl-2、Bax蛋白免疫组化反应的强度一致。结论：氧化苦参碱可能通过上调bcl-2基因的表达来阻断肝细胞凋亡。     

IGF-I对NOD鼠胰岛Fas/FasL表达的影响

目的　观察腹腔注射胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )对NOD鼠胰岛炎和糖尿病的发生情况以及其对胰岛Fas FasL表达的影响。方法　 2 0只 4周龄NOD雌鼠随机分为 2组 ,每组 10只 ,实验组每周 2次腹腔注射 1mlIGF Ⅰ(40ng ml) ,对照组注射 1ml生理盐水 ,共 8周。实验动物在发生糖尿病 7天后或至 2 0周龄处死 ,观察血清胰岛素及C肽浓度、胰岛HE染色、免疫组织化学染色 检测胰岛Fas FasL的表达。结果　IGF Ⅰ可明显减少NOD鼠胰岛炎和糖尿病的发生 (P <0 .0 1) ;IGF Ⅰ组胰岛Fas的表达少于对照组 (P <0 .0 1) ;FasL的表达多于对照组 (P <0 .0 1)。结论　早期应用IGF Ⅰ腹腔注射可以减少NOD鼠的胰岛炎症和糖尿病发生 ,其机制与Fas FasL介导的胰岛B细胞凋亡有关。     

白细胞介素18上调大肠癌细胞Fas配体表达

我们曾用 Western印迹法检测发现 TNF- α和 IFN- γ可上调人大肠癌细胞株 Fas配体 (Fas L)的表达 [1 ]。为探讨新型细胞因子 IL- 18对大肠癌细胞 Fas L 表达水平的调控作用 ,本研究用 Western印迹法测定 IL - 18处理后大肠癌细胞的Fas L表达水平。1　材料和方法1.1　细胞和试剂　人大肠癌细胞株 RPMI 4 788、HCT- 116、DL D- 1、L o Vo、Wi Dr和 SW6 2 0均为日本冈山大学田中教授惠赠 ,人外周血单核细胞 (PBMC)以 Ficoll液分离。乙酸肉豆蔻佛波醇 (PMA)和离子霉素 (ionomycin)购自 Sigma公司。IL- 18为日本林原生化研究…     

Fas和Fas-L在醋氨酚中毒致大鼠肝损伤中的表达

目的 :探讨醋氨酚中毒大鼠肝组织中Fas和Fas 配体 (Fas L)的表达及其与醋氨酚药物剂量之间的关系。方法 :采用免疫组化方法对醋氨酚中毒大鼠肝组织中Fas和Fas L的表达进行检测。结果 :在绝大多数的大鼠肝组织中均有Fas和Fas L的表达 ,阳性率均为 93 .3 %。醋氨酚中毒剂量与Fas和Fas L的表达之间关系密切(P <0 .0 1) ,醋氨酚剂量越大 ,Fas和Fas L表达越强 ,呈显著正相关 (r =0 .42 5 / 0 .461)。部分阳性肝细胞发现同时有Fas和Fas L的表达 ,但并无淋巴细胞浸润。结论 :醋氨酚介导的Fas和Fas L表达在肝细胞凋亡和坏死中起重要作用 ,肝细胞的直接自杀或自分泌及旁分泌杀伤机制 ,可能是醋氨酚中毒致肝细胞坏死的重要因素之一。     

胸腺内注射Fas抗体对心脏移植大鼠Fas/FasL表达的影响

目的研究受体胸腺内注射Fas抗体对心脏移植大鼠Fas/FasL表达的影响。方法应用大鼠同种异位腹腔心脏移植模型,将24只模型动物随机均分为三组,A组移植前后不给处置,B组给环孢素A,按每日8mg/kg的剂量于术前一天开始口服,C组胸腺注射Fas抗体。观察术后移植心脏局部的Fas及FasL的表达情况（免疫组化法和RT-PCR法）。结果与A组相比,C组移植心脏局部的Fas/FasL基因表达（RT-PCR法半定量结果P＜0.05）和蛋白表达减少（免疫组化法P＜0.05）。结论受体胸腺内注射Fas抗体是一种有效的抑制心脏移植急性排斥反应的方法,引起移植心肌局部Fas/FasL表达下调。     

Fas及Fas配体在盘状红斑狼疮皮损中的表达

目的　研究细胞凋亡与红斑狼疮发病的关系。方法　采用免疫组化法检测了 30例盘状红斑狼疮 (DL E)患者皮损及 5例正常对照皮肤 Fas及 Fas配体 (Fas L )的表达。结果　 DL E皮损中表皮角质形成细胞、真皮血管周围及部分皮肤附属器周围浸润的淋巴细胞可见较多的 Fas、Fas L阳性表达。少数毛囊、汗管可见 Fas阳性表达。正常对照的 Fas及 Fas L表达弱阳性或阴性。结论　 Fas、Fas L途径诱导的细胞凋亡可能与红斑狼疮发病有关。     

扩张型心肌病血清sFas/sFasL水平及其与心肌细胞凋亡的关系

目的 :研究扩张型心肌病 (DCM)血清 s Fas/s Fas L 水平及其与心肌细胞凋亡的关系。方法 :用 EL ISA方法检测 30例DCM患者和 30例正常对照血清中可溶性 Fas(s Fas)、可溶性 Fas配体 (s Fas L)水平 ,并对其中 1 3例 DCM患者 (A组 )和 5例死于非心血管疾病的尸检患者 (B组 )的心肌组织进行原位细胞凋亡 (TU NEL 法 )检测和凋亡细胞的半定量分析。结果 :1DCM组血清 s Fas和 s Fas L 水平均明显高于对照组 (均 P<0 .0 1 ) ,并且血清的 s Fas和 s Fas L 水平随心力衰竭加重而明显升高 (P<0 .0 1 ) ;2 A组的凋亡指数 (AI)明显高于 B组 (P<0 .0 1 ) ,并且 A组中 6例心功能 、 级患者的 AI明显低于 7例心功能 、 级的 AI(P<0 .0 1 ) ,但仍明显高于 B组 (P<0 .0 1 ) ;3AI≥ 1的 DCM患者血清 s Fas和 s Fas L 水平均明显高于AI<1患者血清的 s Fas和 s Fas L 水平 (均 P<0 .0 1 )。结论 :Fas/Fas L 介导的心肌细胞凋亡在 DCM发病中起一定作用 ,凋亡是 DCM的心肌细胞丢失和心功能不全的重要机制 ,并且血清的 s Fas和 s Fas L 水平在一定程度上可反映 DCM的心肌细胞凋亡程度     

寻常型天疱疮与大泡性类天疱疮皮损角质形成细胞Fas和Fas-L表达的研究

目的 :探讨 Fas和 Fas- L在寻常型天疱疮 (PV)和大泡性类天疱疮 (BP)皮损发生发展中的作用。方法 :采用免疫组化方法研究两病患者皮损 Fas和 Fas- L的表达情况。结果 :1角质形成细胞 Fas/Fas- L表达的部位 :PV,疱内分离的及疱周围的棘层细胞 ;BP,水泡上方及附近的棘层细胞 ;2寻常性天疱疮、大泡性类天疱疮表皮细胞 Fas/Fas- L表达都明显高于正常对照组(均 P <0 .0 1)。结论 :角质形成细胞 Fas/Fas- L表达异常与 PV和 BP皮损的发生可能有密切联系     

鼻咽癌患者血清sICAM-1、sFas及sFasL的表达及其意义

目的 :探讨鼻咽癌患者的血清可溶性 ICAM- 1 (s ICAM- 1 )、可溶性 Fas(s Fas)和可溶性 Fas L (s Fas L )表达及其意义。方法 :用酶联免疫吸附法 (EL ISA)检测 5 6例鼻咽癌患者 (鼻咽癌组 )和 2 1例正常人 (对照组 )的血清 s ICAM- 1、s Fas和 s Fas L水平。结果 :鼻咽癌组血清的 s ICAM- 1、s Fas和 s Fas L含量均明显高于对照组 (P <0 .0 1 ) ; 期和 期的鼻咽癌患者的血清s ICAM- 1、s Fas和 s Fas L含量均明显高于 、 期患者 (P <0 .0 1 ) ,而 期患者又明显高于 期患者 (P <0 .0 1 )。结论 :鼻咽癌存在与 s ICAM- 1、s Fas和 s Fas L表达相关的细胞免疫应答异常 ,血清的水平检测可作为鼻咽癌病情评估及随访监测病情变化的一项血清学指标     

氧化苦参碱对癫痫大鼠脑组织丙二醛浓度和超氧化物歧化酶活性的影响

目的观察氧化苦参碱(OMT)对癫痫大鼠脑组织丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。方法通过腹腔注射青霉素制备癫痫动物模型，测定腹腔内注射氧化苦参碱后的癫痫鼠脑组织MDA浓度和SOD活性。结果癫痫鼠脑组织MDA浓度升高；OMT腹腔内注射可降低癫痫鼠脑组织MDA浓度，提高SOD活性。结论氧化苦参碱对于大鼠癫痫模型脑组织具有清除自由基、抗氧化作用。     

苦参碱和氧化苦参碱影响戊巴比妥钠催眠作用的实验研究

目的研究苦参碱和氧化苦参碱诱导小鼠肝药酶后对戊巴比妥钠催眠作用的影响。方法 ICR雄性小鼠98只随机分为对照组以及苦参碱和氧化苦参碱肝药酶诱导组。对照组给予生理盐水,肝药酶诱导组分别等容积灌胃给予苦参碱(20、40和80mg.kg-1)或氧化苦参碱(20、40和80mg.kg-1)预处理7d,并于末次给药24h后,各组腹腔注射戊巴比妥钠(40mg.kg-1),观察并记录小鼠催眠潜伏期和催眠时间。结果与对照组相比,苦参碱预处理组和氧化苦参碱预处理组均可使戊巴比妥钠对小鼠的催眠时间缩短(P<0.05或0.01);氧化苦参碱预处理组(40和80 mg.kg-1)还可分别缩短戊巴比妥钠对小鼠催眠的潜伏期(P>0.05)。结论苦参碱和氧化苦参碱预处理可诱导小鼠肝药酶而拮抗戊巴比妥钠的催眠作用。     

Fas系统参与介导烧伤后心肌细胞凋亡及牛磺酸的影响

目的观察Fas系统在烧伤后心肌细胞凋亡中的作用及牛磺酸的影响。方法选健康Wistar大鼠,随机分成对照组(Sham)、烧伤组(造成40%TBSAⅢ度烧伤)和牛磺酸保护组(烫伤后即刻腹腔注射牛磺酸400 mg/kg)。用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,RT-PCR检测Fas mRNA表达,免疫组化检测Fas/FasL和Caspase-8/3蛋白表达和荧光法分析Caspase-3活性。结果烧伤组大鼠伤后6 h和24 h心肌细胞凋亡指数分别为8.96±2.10和18.67±2.48,较对照组(0.92±0.34)有显著性升高,Fas蛋白阳性表达指数分别为13.51±1.56和14.55±1.89,也显著性高于对照组(2.46±0.75);Caspase-3活性分别为1.38±0.16和1.96±0.71,较对照组(0.35±0.06)有显著性差异。烧伤组凋亡指数与Fas表达之间有良好的相关性(r=0.86)。牛磺酸保护组细胞凋亡指数为2.14±0.68,Fas蛋白表达为3.71±0.82,Fas mRNA表达为0.17±0.03,Caspase-3活性为0.88±0.16,较烧伤组均有显著性降低。结论Fas系统参与了介导烧伤后心肌细胞凋亡,牛磺酸对烧伤后心肌细胞Fas表达及其信号转导有较好的拮抗作用。     

多发性硬化患者sFas、sFasL水平的研究

目的 :探讨 s Fas与 s Fas L 在多发性硬化 (MS)发病中的意义。方法 :采用固相酶联免疫分析 (EL ISA)法检测 6 6例MS患者血清 s Fas、s Fas L 水平。结果 :MS患者血清 s Fas、s Fas L 水平均高于健康对照组 ,MS患者活动期 s Fas显著高于缓解期(P <0 .0 1) ,而 s Fas L 水平未见显著差异。在 6 6例 MS患者中 ,有 37例 s Fas和 s Fas L 的水平同时升高。结论 :s Fas水平与 MS的炎症程度有关 ,血清 s Fas、s Fas L 检测有助于对 MS病情进展作出判断 ,并为 MS的免疫生物治疗提供新方法     

原发性肝癌患者血清sFas的检测及其意义

目的 :检测原发性肝癌患者血清可溶性 Fas(s Fas)的水平 ,并探讨其临床意义。方法 :采用生物素 -亲和素酶联免疫吸附试验 (Biotin- avidin enzyme- linked imm unosorbent assay,BA - EL ISA)检测来自广西的 2 7例原发性肝癌患者和 2 8例正常人血清的 s Fas。结果 :原发性肝癌组血清 s Fas水平为 (3.6 73± 1 .2 98)μg/ L ,高于正常对照组的 (2 .1 4 7± 0 .5 2 3)μg/ L (P <0 .0 5 )。肝癌患者 AFP阳性组、AFP阴性组与正常对照组血清 s Fas分别为 (3.6 5 7± 1 .0 99)μg/ L、(3.6 90± 1 .5 31 )μg/ L和 (2 .1 4 7±0 .5 2 3)μg/ L ,其中肝癌患者 AFP阳性组、AFP阴性组分别高于正常组 (P <0 .0 1 )。结论 :血清 s Fas水平增高 ,可能可作为原发性肝癌尤其是 AFP阴性的肝癌患者的诊断指标之一。     

腺病毒载体RNA干扰抑制Fas(CD95)表达作用

目的:观察串联表达Fas-shRNA的腺病毒载体pAdeno-X-siFas 1 siFas 2对脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导BALB/c鼠肝细胞Fas过表达的影响.方法:20只雄性BALB/c鼠随机分为:RNA干扰组(RNAi组)、腺病毒通用阴性对照组(HK组)、模型组(M组)和正常对照组(N组).RNAi组于0 h、24 h经尾静脉注射腺病毒载体pAdeno-X-siFas 1 siFas 2两次,HK组尾静脉注射阴性腺病毒载体;M组尾静脉注射生理盐水;24 h后上述3组腹腔注射LPS/D-GalN;N组尾静脉和腹腔均注射生理盐水.注射LPS/D-GalN 8 h后,麻醉并处死鼠取肝脏,冰冻切片荧光显微镜检测腺病毒转染率;Western Blot检测各组肝细胞Fas 表达;RT-PCR检查Fas mRNA表达.结果:RNAi组和HK组腺病毒对肝细胞的转染率差异没有显著性(P=0.935);RNAi组与M组和HK组相比肝细胞Fas表达水平显著减少(P＜0.01),其Fas mRNA水平也明显降低(P＜0.01).结论:串联重组腺病毒载体能有效转染肝细胞并抑制LPS/D-GalN诱导的BALB/c鼠肝细胞Fas基因的过表达.     

Fas-Fas L在肝脏疾病中的意义

<正>Fas-Fas L的研究始于1989年,直到近年来才较为完全认识它们分于和细胞生物学特性.Fas现命名为CD95.由于研究侧重点的差异,Fas蛋白质又称作Fas分子、Fas抗原(Fas antigen,Fas Ag)、或Fas受体(Faseceptor,Fas R).随着研究的深入,以自然形式存在的Fas配体(Fas L)、FasrnRNA 及 FascDNA也陆续被发现并进行了全面的研究.Fas及FasL是介导细胞凋亡的一对膜蛋白,细胞表面的Fas分子是一种凋亡信号受体.表达Fas R的细胞在用Fas抗体(Fas artibody,FasAb)处理或与自然存在的 Fas L相互作用后,可诱导Fas R的三聚化或寡聚化,从而活化并传导凋亡信     

白细胞介素-1受体拮抗剂在急性胰腺炎中作用及机制探讨

目的 从胰腺腺泡细胞凋亡的角度探讨白细胞介素-1受体拮抗剂（IL-1Ra）在急性胰腺炎中的作用及机制。方法 用牛磺胆酸钠建立大鼠急性坏死性胰腺炎模型,IL-1Ra腹腔注射诱导胰腺腺泡细胞凋亡,并应用细胞凋亡原位标记检测(TUNEL) 染色、免疫组化等技术检测胰腺细胞凋亡及Fas/FasL的蛋白表达。结果 干预组1、2、6、12 h胰腺细胞凋亡指数显著高于胰腺炎组相应时间点(均P <0.01);对照组见较弱的Fas的表达,干预组各时间点胰腺细胞Fas染色阳性率明显高于胰腺炎组(均P < 0.01) ;胰腺炎组、干预组中均没有见到胰腺腺泡细胞中FasL 表达,但是在间质中均可见浸润的炎性细胞FasL免疫组化染色阳性。结论 IL-1Ra减轻急性胰腺炎的机制可能不仅限于对炎症反应的抑制,它可能是通过上调凋亡调控基因Fas/ FasL系统的表达,诱导胰腺腺泡细胞的凋亡从而减轻胰腺炎的严重程度。     

哮喘豚鼠气道上皮细胞Fas、NOS-2的表达

目的 :检测哮喘豚鼠气道上皮细胞Fas、NOS 2的表达 ,评价两者在哮喘发病机制中的作用。方法 :2 4只豚鼠随机分为 3组 :①哮喘组。用 10 %卵白蛋白 1ml腹腔注射致敏 ,2周后 ,用 1%卵蛋白超声雾化吸入 ,连续激发10次 ,复制豚鼠哮喘模型。②地塞米松 (Dxm)处理哮喘组。诱喘同哮喘组 ,在每次激发前 5min腹腔注射Dxm 0 .5mg/kg。③正常对照组。用生理盐水代替诱喘剂。应用免疫组化方法 (SP法 )检测气道上皮细胞Fas、NOS 2的表达。结果 :哮喘组豚鼠气道上皮细胞Fas的表达上调 [0 .2 2 37± 0 .0 32 4 ,与正常组 (0 .16 6 6± 0 .0 2 86 ) ,P <0 .0 0 1];Dxm促进Fas的表达 (0 .2 4 19± 0 .0 36 2 ,与正常组相比 ,P <0 .0 0 1;但与哮喘组相比 ,差别无显著性 ) ;正常对照组有较少的阳性表达。哮喘组豚鼠气道上皮细胞NOS 2的表达明显上调 (0 .2 5 6 7± 0 .0 345 ) ,Dxm组阳性信号稍弱 (0 .2 318± 0 .0 2 2 9) ,正常对照组有较少的阳性表达 (0 .182 9± 0 .0 2 5 9)。但哮喘组与Dxm组之间差别无显著性 (P >0 .0 5 )。哮喘豚鼠气道上皮细胞NOS 2、Fas的改变呈总体正相关 (r =0 .789,P <0 .0 1)。结论 :NOS 2为上皮损伤性因素 ,Fas可能为修复性因素。两者表达的同时上调说明气道上皮的损伤与修复同时进行     

Fas系统介导的细胞凋亡与桥本氏甲状腺炎关系的研究

目的:为了研究Fas/FasL介导的细胞凋亡在桥本氏甲状腺炎发病机制中的作用,评价其在治疗中的意义.方法:采用流式细胞仪、双抗体夹心ELISA法及免疫组化方法分别测定桥本氏甲状腺炎(HT)及正常时照组外周血T淋巴细胞Fas抗原表达情况,血浆中sFas水平及甲状腺腺泡细胞Fas抗原及Fas配体的表达情况.结果:发现HT组甲状腺细胞Fas和FasL表达强度显著高于正常对照组(P<0.01),血浆sFas水平(2.05ng/ml±0.54ng/ml)明显低于正常组(3.59ng/ml±0.68ng/ml,P<0.001),HT外周血T淋巴细胞Fas抗原阳性细胞数(79.99％±16.08％)显著高于正常对照组(57.22％±11.57％,P<0.001).结论:Fas系统介导的细胞凋亡与桥本氏甲状腺炎发病密切相关。