荧光检测孕妇感染蛋白质芯片制备的初步研究

目的：建立一种用蛋白质芯片检测血清中弓形虫、巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒（TORCH）抗体的新方法。方法：采用玻片表面修饰琼脂糖膜制备蛋白质芯片，以荧光标记抗体，检测血清中TORCH IgM抗体。结果：所制备的蛋白质芯片可检测到血清中微量TORCH抗体的存在，荧光强度和抗原质量浓度呈线性关系，抗体之间交叉反应可忽略不计。该芯片法与ELISA试荆盒检测阴阳性符合率均100％。结论：蛋白质芯片技术检测孕妇TORCH感染，具有高通量、微型化、操作简便等优点，可望应用于临床中。     

蛋白质芯片技术及其在全基因组翻译后修饰分析中的应用

蛋白质芯片技术可用于研究蛋白质-DNA、蛋白质-配基和蛋白质与蛋白质之间的相互作用,是当前生物科学研究中的重要内容。近年来,运用蛋白质芯片技术对全基因组进行生物化学分析的应用取得令人瞩目的成就。现着重总结蛋白质芯片技术及其在全基因组翻译后修饰分析中的应用。     

组织芯片技术研究进展

组织芯片技术是近年来基因芯片 (ＤＮＡ芯片 )技术的发展和延伸 ,与细胞芯片、蛋白芯片、抗体芯片一样 ,属于一种特殊生物芯片技术。组织芯片技术可以将数十个甚至上千个不同个体的临床组织标本按预先设计的顺序排列在一张玻片进行分析研究 ,是一种高通量、多样本的分析工具。它使科研人员第一次有可能同时对几百甚至上千种正常或疾病以及疾病发展不同阶段的自然病理生理状态下的组织样本 ,进行某一个或多个特定的基因 ,或与其相关的表达产物的研究。组织芯片技术可以与ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白质、抗体等技术相结合 ,与传统的病理学技术、组织…     

SELDI蛋白质芯片技术在肿瘤蛋白质组学研究中的应用

SELDI蛋白质芯片技术是结合色谱学，层析原理和SEIDI-TOF-MS技术制成的新一代生物芯片，是目前肿瘤蛋白质组学研究的重要工具之一。它的优点是能洞察肿瘤细胞、组织和生物体蛋白质含量的细微变化，且能精确分析某一特定蛋白质的理化性质。作者就SELDI蛋白质芯片联合二维电泳、激光捕获显微切割等技术在肿瘤蛋白质组学研究中所应采取的策略，SELDI蛋白质芯片在肿瘤蛋白质组学研究中的临床应用如筛选肿瘤标志蛋白、预测肿瘤转移和预后等作一综述。     

蛋白质芯片技术在肿瘤标志物筛选及鉴定中的应用

蛋白质芯片技术具有快速、并行、自动化和高通量等特点,能同时对全基因组水平上千种蛋白质进行分析,是蛋白质组学研究的重要手段。蛋白质芯片技术在揭示基因与疾病的关系上优于DNA芯片,已在研究蛋白质的性质、特征、辩识、功能及生物标志物等方面搭起快速准确的桥梁,尤其在肿瘤标志物的筛选和鉴定上取得很大进展。     

抗体芯片技术应用于慢性肾病研究的进展

抗体芯片作为蛋白质芯片的一种,具有微型化、集成化、高通量化的特点,可以用于检测某一特定的生理或病理过程相关蛋白的表达丰度,目前主要用于信号转导、基础蛋白质组学研究、肿瘤及其他疾病相关分子的发现、诊断和治疗。在慢性肾病的进程中,复杂的细胞因子网络共同参与了肾间质纤维化的发生、发展,用抗体芯片来鉴定肾组织中的异常表达蛋白,进而进行慢性肾病的早期诊断和治疗监测有较大的临床价值。     

应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱筛选蕈样肉芽肿组织生物标志物

目的 采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,筛选蕈样肉芽肿(MF)患者皮损组织中的生物标志物.方法 选用CMIO蛋白质芯片对12例MF患者皮损和15份正常皮肤组织提取蛋白质标本进行检测,以筛选MF患者组织中差异表达蛋白质.通过免疫沉淀方法 对部分差异表达蛋白质进行验证.结果 MF组与对照组蛋白质指纹图谱比较,发现24个差异表达蛋白质峰.将差异蛋白质峰在SWISS-PRO数据库和文献中搜索,发现相对分子质量3498的蛋白质峰与人中性粒细胞蛋白3(HNP3)相符、相对分子质量10 837的蛋白质峰与S100钙结合蛋白A8(S100A8)相符,抗S100A8特异性抗体免疫沉淀试验验证了后者.结论 SELDI-TOF-MS技术是一种快速,易行的高通量蛋白质组研究方法 ,能够鉴定出MF组织中的差异表达蛋白质,为寻找疾病相关生物学标记的提供了独特的平台.     

应用蛋白质芯片检测骨性关节炎患者基质金属蛋白酶-13的初步研究

目的:探讨应用蛋白质芯片技术检测骨性关节炎(OA)患者关节液和血清中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的方法.方法:应用低密度蛋白质芯片方法同时检测32例OA患者关节液和血清中MMP-13表达水平,24例正常关节作为对照组,进行蛋白质芯片荧光强度的对比研究.结果:OA患者关节液和血清中的MMP-13在蛋白质芯片上的荧光强度明显高于对照组关节液的荧光强度(P<0.001).OA患者关节液中MMP-13在蛋白质芯片上的荧光强度明显高于其血清的荧光强度(P<0.001).结论:OA患者关节液和血清中MMP-13表达明显高于对照组.应用低密度的蛋白质芯片技术检测OA患者关节液及血清中MMP-13的水平具有一定临床应用价值.     

2型糖尿病视网膜病变患者的血清低分子量蛋白质指纹图谱

目的研究2型糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）患者特异的血清低分子量蛋白质指纹图谱。方法应用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-MS）技术，选用H4蛋白质芯片，优化技术参数，对16例正常人，27例2型糖尿病不伴DR患者及21例2型糖尿病伴DR患者的血清标本进行检测，应用Biomarker Wizard软件筛选DR患者血清中差异表达蛋白质。结果H4芯片在激光强度210，灵敏度为9的条件下可获得较理想的图谱。在m／z2000至20000范围内共出现31个蛋白质／多肽峰；其中有5个差异表达蛋白质或多肽,m／z为7440，7639，7839，8147和8925（P〈0．05）。结论SELDVTOF-MS蛋白质芯片技术是一种快速、简便和高通量分析方法，能直接筛选出DR患者血清中的潜在标记物。     

构建玻片蛋白质芯片的实验研究

目的:探讨玻片蛋白质芯片的构建方法及其中间操作条件的选择与优化。方法:利用生物芯片点样仪将超微量蛋白质点到经特殊处理的玻璃片表面,然后选用不同的化学试剂对玻片背景进行封闭;再用荧光素标记的蛋白质与点样蛋白杂交;最后用生物芯片分析仪扫描成像并进行分析,比较不同条件下芯片的显示效果。结果:蛋白质样品与片基稳定结合,并保持原活性状态;封闭试剂选用酪蛋白或明胶效果较佳;点样探针与其特异蛋白质抗体可稳定结合,结合效果与点样蛋白浓度在一定范围内呈正相关;在1.6 cm×1.6 cm的玻璃片面积上,构建了36×36=1269点的蛋白质芯片。结论:本实验条件下,蛋白质抗原或抗体可以稳定地固定于经过处理的玻璃片表面.制成免疫型蛋白芯片,并可通过随后的抗原抗体反应与荧光素标记的相应抗体或抗原结合,用生物芯片分析仪可对其荧光信号进行检测分析。     

组织芯片制备及在肝癌研究的应用

目的 建立组织芯片的手工制备技术并探讨其用于肝癌研究的可行性.方法 利用改进的腰穿针手工制作组织芯片,进行免疫组织化学、组织化学染色和常规H-E染色,将组织芯片和普通切片的免疫组织化学结果对比观察.结果 各种染色切片上的组织芯片基本符合观察需求,组织芯片和普通切片免疫组织化学结果基本一致.结论 组织芯片具有高通量、经济节约、可比性和重复性强的特点,为高效快速地进行科研和临床工作提供一个新的技术平台.手工制备组织芯片简单易行,费用低廉,易于推广.     

组织芯片和基因突变检测在肺癌及乳腺癌石蜡组织中的应用

目的:探讨利用石蜡包埋的人类肿瘤组织开展病理新技术临床应用的可能性和可行性。方法:存档肺癌、乳腺癌的石蜡组织,分别进行组织芯片的制备和基因突变的检测。结果:组织芯片用于常规切片染色和免疫组化等分子病理学研究;存档石蜡组织切片可用于基因突变检测。肺癌FFPE中的DNA经PCR扩增后,核酸电泳显示结果良好。结论:运用分子病理学技术和病理科存档蜡块,可以广泛应用于大宗病例的回顾性研究,为人类肿瘤研究提供良好的基础,也可以为临床肿瘤诊疗提供分子病理学依据。     

应用寡核苷酸芯片确定宫颈癌患者外周血生物标志物的研究

背景 目前寡核苷酸芯片技术越来越多地被应用于一些复杂疾病的基因表达谱的确定。外周血淋巴细胞与人体中几乎所有组织和器官的细胞和细胞外基质密切相关,从而提示外周血淋巴细胞基因表达谱可能可以反映人体某种疾病的存在。本研究的目的为应用人类全基因组寡核苷酸芯片技术在宫颈癌患者外周血中确定生物分子标志物。方法 从24例早期宫颈癌患者和18例健康对照者的外周血淋巴细胞中提取总RNA。应用微阵列技术,采用人类全基因组寡核苷酸芯片检测4例宫颈癌患者和3例正常对照妇女的差异表达基因,将初步筛选出的5条候选基因再对20例宫颈癌患者和15例正常对照妇女用实时定量逆转录多聚酶链反应的方法进行验证。结果 筛选得到57个差异表达基因,其中38个基因表达上调,19个基因表达下调;对初步筛选出的5个候选基因经实时定量逆转录多聚酶链反应的方法进行验证后发现粘合素-C (tenasin-c,TNC）,核仁素(nucleolin, NCL)和磷酸丙酮酸水合酶2(enolase 2, ENO2)在宫颈癌患者中较之对照组有显著的上调。结论 TNC,NCL和ENO2在宫颈癌患者外周血中的上调表达可能为确定宫颈癌外周血的生物标志物提供有益的依据。     

一种用于芯片质控的通用序列标签寡核苷酸探针的设计

目的设计一种带有通用序列标签的寡核苷酸探针以应用于寡核苷酸芯片点样的质量控制。方法以HIV寡核苷酸探针作为核心序列,在其一端或两端连接上多种通用序列标签（usz）构建新型探针。然后打印芯片,以Cy5标记的通用引物（Cy5-UP,与UST互补）进行杂交,筛选出5条荧光信号强的探针,重新打印芯片。再分别以不同浓度梯度的、Cy5标记的通用引物（Cy5-UP）和随机引物（Cy5-RP）与芯片杂交,比较两者杂交效率。结果Cy5-UP的杂交结果显著优于Cy5-RP的杂交结果,特别是在较低浓度时。结论利用Cy5标记的通用引物检测探针上的通用序列标签,可以为芯片点样的质量控制提供一种更有效的方法。     

肾阳虚骨关节炎个案与13个免疫基因的初步研究--辨证论治的个体化医学及分子疗效评定方法试探

目的通过用基因芯片方法研究肾阳虚骨关节炎温针治疗典型病例的差异表达基因，探索辨证论治的个体化医学治疗效果及分子疗效评定的新方法。方法对10例典型肾阳虚骨关节炎患者辨证评分，然后施以温针灸治疗，选出1例疗效最好者，对其治疗前、后差异基因表达谱进行分析。结果 所选患者肾阳虚证、疼痛评分分别减少26分和12分，基因芯片检测该患者治疗前、后血液获得有表达差异的基因57条，其中已知功能的基因有33条，与免疫相关者13条，约占整个已知功能基因的39．39％。结论温针治疗肾阳虚证有效病例的基因表达涉及面广，其分子机理包括免疫、能量、疾病、肿瘤等多个方面，但以免疫最为突出。这提示可以以肾阳虚证的分子生物学为基础，来探讨辨证论治的个体化医学疗效及其评价方法。     

Construction of metastatic spinal cancer tissue microarrays

Objective： To explore the construction of metastatic spinal cancer （MSC） tissue microarrays and validate its value in immunohistochemical study of MSC. Methods： Paraffin-embedded specimens from 71 MSC cases and 6 primary tumor cases were selected as donor blocks and prepared into MSC tissue microarrays by tissue array arrangement, the steps of which included location, punching, sampling, sample seeding, and re-diagnosis by hematoxylin-eosin （HE） as well as MMP-9 and MMP-14 immunohistoehemical staining. Results： The MSC tissue microarrays thus constructed were intact and craekless, containing 154 complete and well arranged microarray points. None of the sectioned tissue microarrays was lost, and the results of HE staining was consistent with the primary pathologic diagnoses. Immunohistochemical staining was also good without non-specific or marginal effect. Conclusion： The MSC tissue microarrays have a high value in the immunohistochemical study of MSC.     

利用cDNA微阵列进行宫颈鳞癌的分子筛查

目的使用cDNA微阵列筛选浸润性宫颈鳞癌的淋巴结转移相关基因。方法应用包含18 432个基因的cDNA微阵列测定IB期宫颈鳞癌的全基因序列,包括已知功能的人类转录子和表达序列标签ESTs,分为正常组、淋巴转移组、无淋巴转移三组宫颈组织。为了证实不同的基因表达,选择3个基因进行了冰冻组织的RT-PCR检测和石蜡组织的免疫组化检测。结果经统计学分析,与无淋巴转移浸润性宫颈鳞癌组织比较,有淋巴转移的癌组织有677个基因大于2倍差异,其中上调494个(72.97%),下调183个(27.03%),表达序列标签EST为61个(9.01%),这些基因涉及代谢、发育、信号传导、分化、DNA结合转录和离子通道等。6倍差异基因14个,其中只有nel(chicken)like-2下调,其余为上调基因。RT-PCR和免疫组化的结果与cDNA微阵列结果一致。结论利用cDNA微阵列检测基因的表达状态可以预测宫颈鳞癌淋巴结转移和宫颈癌的预后情况。Cx43的低表达、ETV5和整合素alpha 2的高表达可能会成为评估浸润性宫颈鳞癌恶性程度的重要指标。这些分子有利于预测浸润性宫颈鳞癌的预后及其相应的分子治疗。     

电针对慢性应激抑郁模型大鼠海马CXCR4和IP-10蛋白表达的影响

目的基于抗体蛋白芯片技术观察电针对慢性应激抑郁模型大鼠海马组织趋化因子受体-4(CXCR4)和趋化因子10(IP-10)表达的影响,探究电针抗抑郁的机制。方法将40只SD大鼠随机平均分为正常组、模型组、电针组和氟西汀组。电针组于每日给予应激前1 h电针"百会"和"印堂"穴,氟西汀组于每日给予应激前1 h药物灌胃,均连续28 d。应用抗体蛋白芯片技术检测大鼠海马CXCR4和IP-10蛋白表达的变化,以倍数变化(fold change)来判断蛋白的差异表达。结果与正常组比较,慢性不可预知性温和应激可使模型组大鼠海马CXCR4和趋化因子IP-10表达上调(fold change分别为1.21、1.50);电针和氟西汀可逆转模型大鼠海马CXCR4和IP-10的上调表达(电针组fold change分别为0.65、0.72;氟西汀组fold change分为0.57、0.62)。结论电针对慢性应激抑郁状态的改善作用可能是通过调节海马CXCR4和IP-10的表达来实现的。