重楼皂苷Ⅶ对裸鼠胰腺癌的治疗作用及机制研究

【目的】观察重楼皂苷Ⅶ对裸鼠胰腺癌的治疗作用及其机制。【方法】以人胰腺癌细胞AsPC-1皮下注射裸鼠构建胰腺癌移植瘤模型。将胰腺癌移植瘤裸鼠随机分为5组,即对照组,重楼皂苷Ⅶ低、中、高剂量组和5-氟尿嘧啶组,对应给药治疗。给药结束后,测量移植瘤体积、质量;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)法测定移植瘤组织细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测移植瘤组织Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,重楼皂苷Ⅶ低、中、高剂量组和5-氟尿嘧啶组移植瘤体积、质量显著降低,TUNEL阳性表达细胞比例显著升高,移植瘤组织Caspase-3、Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低(均P<0.01)。【结论】重楼皂苷Ⅶ可有效抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制肿瘤细胞凋亡有关。     

白藜芦醇抑制胰腺癌裸鼠移植瘤生长的实验研究

目的:观察白藜芦醇(Res)对人胰腺癌Miapaca-2(PC-2)细胞构建的胰腺癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型并随机分组,分别给予3种不同浓度的白藜芦醇干预后处死胰腺癌裸鼠,取出移植瘤,观察其体积、重量的变化情况;HE染色法观察移植瘤组织病理学变化;采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和Western bolt法测定移植瘤组织Bcl-2、Bax、p53蛋白和mRNA表达水平。结果:Res组移植瘤的体积、重量明显低于阴性对照组,随着浓度增加变化越明显(P<0.01);3个浓度组白藜芦醇作用于胰腺癌裸鼠后,移植瘤组织中Bcl-2、Bax、p53蛋白和mRNA表达水平较阴性对照组差异具有统计学意义(P<0.01),且随着浓度增加表达水平的差异越明显。结论:白藜芦醇可能通过调节Bcl-2、Bax、p53的表达来抑制胰腺癌移植瘤的生长。     

重组质粒hTERT-siRNA对胰腺癌细胞移植瘤hTERT相关基因及蛋白表达的影响

目的探讨重组质粒pSilencer4.1CMV neo-hTERT-siRNA对胰腺癌细胞BxPC-3裸鼠皮下移植瘤hTERT相关基因及蛋白表达的影响.方法建立人原发性胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为4组：（1）肿瘤对照组,未作任何处理;（2）空载组,即pSilencer4.1-CMV neo空质粒组;（3）T1组,即重组质粒pSilencer4.1-CMV neo-hTERT1-siRNA组;（4）T2组,即重组质粒pSilencer4.1-CMV neo-hTERT2-siRNA组）.荷瘤裸鼠分组处理30d后,RT-PCR检测各组瘤体中hTERT、Bcl-2、Bax mRNA的表达,免疫组织化学检测各组瘤体中Bcl-2、Bax、p53、VEGF、端粒酶蛋白表达,Western blot检测各组瘤体中端粒酶蛋白表达情况.结果 T1组和T2组hTERT和Bcl-2 mRNA表达较肿瘤对照组和空载组明显降低,BaxmRNA表达明显升高（P〈0.01）.与肿瘤对照组和空载组比较,T1组和T2组Bcl-2 Telomerase、p53和VEGF蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高（P〈0.01）.结论 （1）重组质粒T1和T2能够下调裸鼠移植瘤体内抗凋亡基因hTERT mRNA、Bcl-2 mRNA和蛋白、p53和端粒酶蛋白表达水平,上调促凋亡基因Bax mRNA和蛋白表达水平,其抗胰腺癌作用可能与促进胰腺癌细胞凋亡有关.（2）重组质粒T1和T2能够显著下调裸鼠移植瘤体内VEGF蛋白表达水平,可能具有抑制肿瘤血管生成的作用。     

软坚散结方对肾透明细胞癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的:探究软坚散结方对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞(7860细胞系)裸鼠移植瘤生长抑制作用及对肿瘤组织Notch及凋亡信号通路相关基因蛋白的影响。方法:通过成功建立7860细胞裸鼠移植瘤模型,分为模型组、DAPT组(γ-secretase抑制剂)、软坚散结方组,分别给药4周后,检测各组瘤重,瘤体积;HE染色观察肿瘤细胞的形态变化;免疫组化检测肿瘤组织中Notch1、NICD、Bcl-2、Bax蛋白表达;RT-PCR检测Notch1、Bcl-2、Bax mRNA含量。结果:与模型组比较,软坚散结方组、DAPT组均可显著降低裸鼠体内肿瘤质量,缩小肿瘤体积,降低Notch1、Bcl-2 mRNA表达和Notch1、NICD、Bcl-2阳性率,升高Bax表达及阳性率(P0.05);与DAPT组比较,软坚散结方组可降低裸鼠体内肿瘤质量、瘤体积、Bcl-2表达及NICD、Bcl-2性率,升高Bax表达及阳性率(P0.05),差异有统计学意义。结论:软坚散结方可抑制7860细胞裸鼠移植瘤生长,其机制可能与靶向作用Notch信号通路从而诱导细胞凋亡相关。     

杆状病毒介导的DNA甲基转移酶1 siRNA对人胰腺癌细胞凋亡的影响

目的: 观察杆状病毒介导的DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1, DNMT1) siRNA(小干扰RNA)对人胰腺癌PaTu8988细胞凋亡的影响。方法： 人胰腺癌细胞PaTu8988用6孔板培养并随机分成5组：空白组、阴性组、病毒r-Bac-si-DNMT1-D1组(D1组)、r-Bac-si-DNMT1-D2组(D2组)、r-Bac-si-DNMT1-D3组(D3组)。空白组仅加10%胎牛血清和DMEM培养基培养,阴性组、D1组、D2组、D3组加血清和DMEM培养基培养24 h后,分别加入空白载体r-Bac-CMV-EGFP和重组杆状病毒r-Bac-si-DNMT1-D1、r-Bac-si-DNMT1-D2、r-Bac-si-DNMT1-D3, 150 μL/孔。72 h后收集5组细胞,用流式细胞术测肿瘤细胞凋亡,蛋白质印迹法检测抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达情况。结果：D1组、D2组和D3组的细胞凋亡率明显高于空白组和阴性组(P<0.05)。与空白组和阴性组相比,D1组、D2组和D3组Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),Bax蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论： 杆状病毒介导的DNMT1 siRNA通过抑制Bcl-2蛋白表达,增加Bax蛋白表达,诱导胰腺癌细胞的凋亡。     

裂果薯皂苷Ⅰ抗人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠移植瘤的作用机制研究

目的：探讨裂果薯皂苷Ⅰ(SSPHI)对胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响及其作用机制。方法：建立人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠移植瘤模型,成瘤裸鼠随机分为模型组、吉西他滨（GEM）组、SSPHI低剂量组（SSPHI-L）组、SSPHI中剂量（SSPHI-M）组和SSPHI高剂量（SSPHI-H）组,连续给药15 d后取瘤组织,测量肿瘤体积、瘤重,计算抑瘤率;苏木精-伊红（HE）染色法观察人胰腺癌移植瘤组织病理形态变化,TUNEL染色观察肿瘤组织细胞凋亡,免疫组织化学染色法测定裸鼠移植瘤Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达。结果：与模型组相比,SSPHI低、中、高剂量组和GEM组移植瘤体积和瘤重均降低,细胞凋亡率升高（P<0.01）,移植瘤组织Caspase-9、Caspase-3和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.01）。结论：SSPHI可抑制胰腺癌裸鼠移植瘤生长,其作用机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、Caspase-9和Caspase-3表达,诱导移植瘤细胞凋亡有关。     

三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的探讨三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑瘤效应及其作用机制。方法采用动物移植性肿瘤实验法腋下接种Lewis肺癌细胞制备小鼠荷瘤模型。观察三叶青乙酸乙酯提取物对瘤重、抑瘤率的影响;并用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,免疫组化法和real time RT-PCR法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、caspase-3的表达。结果三叶青各剂量组抑瘤率和肿瘤细胞凋亡率均高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),其效应呈浓度依赖性;各剂量组Bcl-2的蛋白和mRNA表达下降(P<0.05或P<0.01)、Bax的蛋白和mRNA表达上升(P<0.05或P<0.01)、高剂量组caspase-3的蛋白表达上升(P<0.05)。结论中药三叶青乙酸乙酯提取物能抑制小鼠Lewis肺癌细胞的生长,可能与其促进肿瘤细胞坏死及下调Bcl-2、上调Bax和caspase-3从而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

告达庭抑制卵巢癌生长及其机制的研究

目的 研究告达庭(caudation)对卵巢癌生长的抑制作用及其机制。方法 细胞实验分为两组,即对照组和告达庭组(30μmol/L告达庭作用卵巢癌细胞SKOV3 24h)。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞凋亡;Western blot法检测SKOV3细胞中DNMT1、Axin、Bcl-2、cyclinD1蛋白的表达。观察告达庭对卵巢癌细胞内凋亡相关蛋白的表达作用。建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察移植瘤的生长,实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因的表达。结果 与对照组比较,告达庭可抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖,并促进癌细胞凋亡,呈浓度依赖性;告达庭干预后,DNMT1、Bcl-2及cyclinD1表达均下降,Axin表达上调。在体外移植瘤实验中,告达庭可抑制移植瘤的生长,并抑制卵巢癌组织内DNMT1、Bcl-2及cyclinD1基因表达,上调Axin基因表达。结论告达庭可抑制卵巢癌生长,其机制可能与调控DNMT1/β-catenin信号通路有关。     

RNA干扰抑制裸鼠皮下移植瘤中Livin基因表达的实验研究

目的:利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术在裸鼠皮下移植瘤中抑制 Livin 基因表达,探讨 RNA 干扰用于胃癌治疗的可行性.方法:SGC-7901 细胞注射入裸鼠皮下,建立裸鼠皮下移植瘤的模型,设计靶向Livin基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),构建重组表达质粒 pTZU6+I-siRNA-Livin,并导入裸鼠皮下移植瘤中,在体内诱导RNAi,采用RT-PCR和免疫化学检测Livin基因表达,Western blot 检测 Bax 和B cl-2 改变.结果:重组质粒 pTZU6+1-siRNA-Livin 导入裸鼠皮下移植瘤后14 d 瘤体体积明显减小,Livin 的 mRNA 和蛋白表达均明显下调.结论:RNA 干扰明显抑制了靶基因 Livin 的表达及肿瘤细胞生长,可能与上调Bax的表达、下调 Bcl-2,从而诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

雷公藤甲素对裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的：观察雷公藤甲素对人胰腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用,探讨其作用的分子机制。方法：选择健康BALB/c裸鼠于右后肢皮肤移植人胰腺癌SW1990细胞,建立裸鼠荷瘤模型,将建模成功的裸鼠分为模型组、吉西他滨组和雷公藤甲素组,每组10只,另选10只健康裸鼠作为对照组。测量各组SW1990胰腺癌荷瘤裸鼠体质量,取肿瘤组织称质量,计算肿瘤抑制率;采用免疫组织化学法检测各组裸鼠胰腺组织中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况;采用Western blotting法检测各组裸鼠胰腺组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3表达水平。结果：与吉西他滨组比较,雷公藤甲素组SW1990胰腺癌的肿瘤抑制率明显升高（P<0.05）。HE染色观察,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺癌肿瘤细胞增殖受到抑制。免疫组织化学检测,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺组织中Bcl-2表达水平和Bcl-2/Bax比值明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺组织中Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：雷公藤甲素能抑制裸鼠肿瘤组织的生长,其机制可能与抑制胰腺肿瘤组织中Bcl-2的激活、促进Bax的表达、降低Bcl-2/Bax的比值、促使Caspase-9和Caspase-3激活及诱导胰腺癌移植瘤细胞凋亡有关。     

大蒜素对荷子宫内膜癌裸小鼠移植瘤生长的影响及其机制研究

目的 研究大蒜素（allitridi）对荷子宫内膜癌裸小鼠移植瘤生长的影响及其机制。方法 取对数生长期子宫内膜癌Ishikawa细胞,皮下注射接种的方法制备荷子宫内膜癌裸小鼠模型,成瘤后取60只裸小鼠模型随机分为模型组、大蒜素高（40mg/kg）、中（20mg/kg）、低（10mg/kg）剂量组和顺铂2mg/kg组,每组12只;各治疗组均隔天腹腔注射给药1次,共给药治疗5次。治疗完成后剥取肿瘤组织并称量、计算抑瘤率;HE染色法观察肿瘤组织形态学变化;TUNEL染色法观察肿瘤组织细胞凋亡状况并计算凋亡指数（apoptosis index,AI）,免疫组织化学法（immunohistochemistry,IHC）观察肿瘤组织bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达并进行半定量分析,计算Bax/bcl-2比值。结果 大蒜素各组和顺铂组裸小鼠移植瘤肿瘤组织细胞呈皱缩、片状坏死等病理性改变,凋亡细胞数量明显增多,以大蒜素高剂量组最为显著。与模型组比较,大蒜素高、中剂量组和顺铂组瘤体重量显著减轻（P<0.05,P<0.01）,抑瘤率显著升高（P<0.01）,肿瘤组织bcl-2蛋白表达显著下调（P<0.05,P<0.01）,Bax和caspase-3蛋白表达显著上调（P<0.05,P<0.01）,Bax/bcl-2表达比值显著升高（P<0.01）。与顺铂组比较,大蒜素高剂量组Bax/bcl-2表达比值显著升高（P<0.05）。结论 大蒜素对荷子宫内膜癌裸小鼠移植瘤生长具有抑制作用,其机制可能与大蒜素能够下调bcl-2表达、上调Bax和caspase-3表达、提高Bax/bcl-2表达比值进而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1抑制肝癌裸鼠移植瘤生长的研究

目的 研究X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1（XAF1)基因对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠荷瘤模型,每组5只裸鼠分别在瘤内分3点注射相同感染滴度的重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、Ad5/F35-Null对照空病毒及等体积的磷酸缓冲液（PBS）,隔天注射1次,疗程2周。每3天测量各组裸鼠移植瘤的体积,观察Ad5/F35-XAF1组移植瘤的生长与其他两组的差异。原位末端标记TUNEL法检测移植瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤中XAF1蛋白表达和微血管密度（MVD）。结果 与PBS组和Ad5/F35-Null组比较,瘤内注射Ad5/F35-XAF1组裸鼠移植瘤体积、质量和MVD显著减小（P<0.05或P<0.01）,而移植瘤细胞的凋亡指数和XAF1蛋白的表达率均明显增高（P<0.01）。结论 腺病毒介导XAF1基因可抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,可能与该基因诱导肝癌细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关。     

POFUT1对人胃腺癌裸鼠移植瘤微血管生成的抑制作用

目的探讨POFUT1对人胃腺癌裸鼠移植瘤微血管生成的影响及其作用机制。方法制备人胃腺癌BGC823的POFUT1慢病毒低表达及对照组、过表达及对照组细胞模型,分别命名为shRNA-POFUT1-BGC82组、shRNA control-BGC823组、PLV-POFUT1-BGC823组及PLV control-BGC823组。采用皮下成瘤的方法,分别用这4组细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型（每组5只）,观察和测算肿瘤体积。30d后处死裸鼠并取瘤,采用免疫组化方法检测裸鼠瘤组织中VEGF和CD31的表达;Western印迹法检测裸鼠瘤组织中POFUT1和VEGF的表达。结果20只裸鼠全部成瘤,实验过程无死亡。与PLV control组相比,PLV-POFUT1组裸鼠肿瘤体积显著增加（P<0.05）;shRNA-POFUT1较shRNA control组裸鼠肿瘤体积明显偏小（P<0.05）。免疫组化结果显示,与PLV contro1组相比,PLV-POFUT1组瘤组织中VEGF和CD31表达显著增高（P<0.05）;与shRNA control组相比,shRNA-POFUT1组则明显降低(P<0.05)。与shRNA control组相比,shRNA-POFUT1组POFUT1和VEGF蛋白表达水平均显著下调;PLV-POFUT1组较PLV contro1组,其POFUT1和VEGF蛋白水平均显著增强（P<0.05）。结论过表达POFUT1可以显著促进裸鼠移植瘤的增殖和肿瘤微血管形成,低表达POFUT1可抑制裸鼠移植瘤的增殖和肿瘤微血管形成,表明POFUT1在人胃 腺癌裸鼠移植瘤的微血管形成中起着重要的作用,其机制可能与VEGF密切相关。     

大黄素对胰腺癌裸鼠皮下移植瘤抑癌基因去甲基化作用

目的 通过建立胰腺癌Panc1细胞株皮下移植瘤模型,探讨大黄素对胰腺癌皮下移植瘤抑癌基因p16、RASSF1A、ppENK启动子区CpG岛的去甲基化作用的影响。方法 首先建立人胰腺癌细胞裸鼠模型,后给予不同药物浓度的大黄素（0、30、50、70mg/kg）处理裸鼠,观察大黄素对裸鼠移植瘤生长的影响,采用MSP、RT-PCR以及Western blot法分别检测不同组别移植瘤的3个抑癌基因甲基化状态以及mRNA、蛋白的改变。结果 大黄素能够抑制胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的生长,随着大黄素浓度的升高,其对胰腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制率逐渐升高,特别50、70mg/kg浓度组与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。MSP结果显示大黄素可使裸鼠移植瘤组织的甲基化条带减弱,非甲基化条带增强,同时可以使经RT-PCR和Western blot法结果证实的低表达或无表达的mRNA和蛋白表达增强或者重新表达,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 通过体内实验笔者证实大黄素可以对胰腺癌裸鼠移植瘤抑癌基因p16、RASSF1A、ppENK发挥不同程度的去甲基化作用,使因启动子区甲基化而失表达的抑癌基因重新表达,大黄素抑制胰腺癌裸鼠移植瘤生长可能和其具有对抑癌基因去甲基化作用有关。     

复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562／A02移植瘤mdr1基因表达的影响

目的：探讨复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562／A02移植瘤多药耐药基因mdr1表达的影响。 方法：将人红白血病多药耐药细胞系K562／A02细胞接种于BALB／c—nu裸小鼠腋前皮下构建多药耐药移植瘤模型,给予不同剂量复方浙贝颗粒灌胃联合阿霉素腹腔注射治疗。治疗14d后处死小鼠,剥离肿瘤,检测各组移植瘤的瘤质量,计算抑瘤率;荧光定量聚合酶链式反应法检测各组移植瘤mdr1基因表达,2^-△△Ct法计算各组mdr1倍增变化率。 结果：各剂量复方浙贝颗粒联合阿霉素组的瘤质量明显低于模型组（P〈0．05）;高、中剂量复方浙贝颗粒联合阿霉素组的瘤质量明显低于阿霉素组（P〈0．05）;高、中剂量复方浙贝颗粒联合阿霉素组移植瘤mdr1基因表达较阿霉素组明显减少（P〈0．05）。 结论：复方浙贝颗粒（高、中剂量）联合阿霉素能够减少多药耐药移植瘤mdr1基因的表达。     

Claudin-7基因敲减细胞对裸鼠原位移植胰腺癌模型的致癌作用

[摘要]　目的　研究Claudin-7基因敲减细胞对裸鼠原位移植胰腺癌模型的致癌作用。　方法　采用Claudin-7基因敲减表达质粒和pcDNA6-Scramble空载质粒转染的人胰腺癌细胞BxPC-3建立裸鼠原位移植胰腺癌模型,裸鼠随机分为两组,即Claudin-7敲减组和阴性对照组。制模30 d后比较两组间成瘤情况,并采用病理学方法检测两组肿瘤细胞生长程度。　结果　Claudin-7敲减组成瘤率和大体观肿瘤大小测量值明显高于对照组,两组间差异有显著性意义（P<0.05）。胰腺肿瘤组织的病理学检测发现肿瘤细胞生成率和肿瘤最大直径两组间差异有显著性意义（P<0.05）。　结论　Claudin-7基因敲减能有效促进裸鼠原位移植胰腺癌模型的形成。