枸杞多糖对细胞膜流动性及蛋白激酶C的体外效应

目的：研究枸杞多糖（LBP）体外免疫调节效应的作用机制。方法：以DPH作为荧光深剂，采用荧光偏振法观察LBP对免红细胞膜流动性的影响。并以32P-组蛋白内参入的放射性强度检测法，观察LBP对淋巴细胞胞膜和胞浆蛋白激酶C（PKC）活性的影响。结果：100mg／LLBP可明显促进兔红细胞细胞膜的流动性，并能增强10mg／L和25mg／LConA对膜流动性的促进作用。同时100ms／LLBP尚可增加ConA活化后的小鼠脾淋但细胞膜上的PKC的活性，但对胞浆PKC的活性无影响。结论：LBP的体外作用途径可能是作用于细胞膜，通过促进细胞膜的流动性及促进ConA活化的小鼠脾淋巴细胞胞浆内PKC从胞浆到胞膜的激活移位而发挥免疫调节效应的。     

蛋白激酶C在人子宫平滑肌正常细胞与肌瘤细胞中活性变化的研究

目的：通过比较人子宫平滑肌细胞（human myometrium cell,HMC)及其肌瘤细胞（human myometrium myona cell,HMMC)的细胞浆和细胞膜中蛋白激酶C（protein kinaseC,PKC)活性的异同,探讨PKC在肿瘤发生中的作用。方法：同位素放射结合实验TAKAI法。结果：基础状态下,HMC胞膜PKC比活性高于胞浆PKC比活性;HMMC胞膜PKC比活性高于胞浆PKC比活性;且HMMC的PKC总活性高HMC,乙酰胆碱（acetylcholine,Ach)可使HMC及HMMC的胞膜PKC比活性升高、胞浆PKC比活性轻度下降、总活必增加;佛波酯（TPA）则可使二者的胞膜PKC比活性升高、胞浆PKC比活性升胞浆PKC比活性下降、总活性基本不变;阿托品（atropin,Atr)使Ach升高的PKC总活性降低;1-（5-异喹啉磺酰基）-2-甲基哌嗪（H7）抑制TPA对PKC活性的诱导,结论：HMMC胞浆、胞膜和总的PKC活性均高于HMC,提示PKC在肿瘤发生中起作用;PKC对激动剂反应性不同,提示对PKC活化机制不同。     

糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性和血管内皮细胞生长因子的关系

目的 研究糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶C（PKC）活性变化和血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的动态变化。探讨两者之间相互关系以及它们与糖尿病肾病（DN）发生发展之间的关系。方法 用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠实验模型，将大鼠随机分为正常对照组（N）、糖尿病2周组（DM2）和糖尿病4周组（DM4）。断头处死，分离肾小球，提取纯化胞浆及胞膜蛋白，利用（1—32P）ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC活性。用免疫组化和400倍光镜检测VEGF在各组大鼠肾脏的表达。结果糖尿病大鼠肾小球细胞内总的PKC活性与对照组差异无显著性，胞浆PKC活性略有下降，相差不显著；肾小球细胞膜PKC活性明显高于正常对照组，膜结合PKC百分比显著增加，且细胞膜PKC活性与肾脏肥大指数及Ccr呈正相关。糖尿病组VEGF的表达多于正常对照组。肾小球细胞膜PKC活性与肾组织VEGF的表达正相关。结论高血糖慢性刺激可引起肾小球PKC活性增高，并诱导VEGF的高表达。PKC的激活在DN的发生发展中发挥着重要的调控作用。     

PKC在NGF促进胚胎大鼠脊髓神经元生长发育中的作用

目的：研究蛋白激酶C(PKC)在神经生长因子（NGF）促进胚胎大鼠脊髓神经元生长发育中的作用。方法：体外培养胚胎大鼠颈段脊髓神经元，施加NGF，观测神经元生长发育情况并检测胞膜及胞浆PKC活性。结果：培养2，4d时，实验组与对照组相比细胞膜PKC活性增强；膜质比增高，4，7d时神经元存活数量增多，神经突起生长明显增强。结论：在NGF促进体外培养的胚胎大鼠脊髓神经元生长发育过程中，PKC有可能发挥了正向调节作用。     

妊高征患者新生儿脐血血小板蛋白激酶C活性变化的研究

目的：探讨不同程度妊高征患新生儿脐血血小板蛋白激酶C（PKC）活性变化与妊高征患病情程度及胎儿宫内发育迟缓之间的关系。方法：底物蛋白磷酸化检测35例妊主同征患及20例健康孕妇新生儿脐血血小板胞膜和胞浆的蛋白激酶C（PKC）活性。结果：轻度妊高征患新生儿脐动，静脉中血小板的细胞膜与细胞浆PKC比活分别与正常妊娠组相比，无明显差异（P＞0．05）；中度及重度妊高征患新生儿脐动，静脉中血小板的细胞与细胞浆PKC比活均高于正常妊娠组（P＜0．01），正常妊娠组新生儿脐动，静脉中血小板的细胞膜和细胞浆PKC比活相比无明显差异（P＞0．05）。而中度及重度妊娠征患新生儿脐动，静脉中血小板的细膜PKC比活明显高于细胞浆PKC比活（P＜0．01），且随病情加重而逐渐明显，正常妊娠组及妊高征各组新生儿脐动脉与脐静脉血小 板PKC比活相比均无明显差异（P＞0．05），重度妊高征合并IUGR患新生儿脐动脉及脐静脉血小板细胞膜PKC比活均高于重度妊高征不合并IUGR患（P＜0．05）。结论：中度及重度妊高征患新生儿脐血血小板PKC存在着异常活化状态，其异常活化程度随妊高征病情加重而增高，重度妊高征患出生的15例新生儿中有6例为IUGR，为40％，其脐静脉血小板细胞膜PKC活性明显高于非IUGR，说明其可介导IUGR的发生和发展。     

逼尿肌不稳定大鼠逼尿肌组织蛋白激酶C活性变化的实验研究

目的了解逼尿肌不稳定(DI)大鼠逼尿肌细胞蛋白激酶C(PKC)活性的变化.方法建立DI大鼠模型,原代培养逼尿肌稳定(DS)及DI大鼠逼尿肌细胞,分别检测这两种细胞胞浆和胞膜PKC活性.结果DS、DI组大鼠逼尿肌培养细胞胞浆PKC活性分别为(5.10±0.67 )、(5.15±0.41)pmol·min-1·mgprotein-1,两者差异无统计学意义(P＞0.05.胞膜PKC活性分别为(1.21±0.17 )、(1.92±0.24)pmol·min-1·mgprotein-1,DS大鼠较DI大鼠显著降低(P＜0.01).结论DI大鼠逼尿肌细胞胞膜PKC发生了由胞浆向胞膜的转运激活.     

Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究

目的：研究gemistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响，探索使用genitein防治后发性白内障。方法：兔晶体上皮细胞培养，应用Casnctllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化；同位素掺入法检测gemistein及bFGF作用后，兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化。结果：不同浓度genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降，genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高，genistein对PKC活性无明显抑制作用，但可抑制bF(求诱导的PKC活性升高。结论：gerristein在体外可通过抑制生长因子激活的蛋白激酶活性升高而抑制兔晶体上皮细胞增殖。     

严重烫伤对小鼠脾脏T淋巴细胞经TCRα/β、CD28活化通路和T细胞功能的影响

目的：探讨严重烧伤对小鼠脾脏T淋巴细胞经T细胞抗原受体活化通路的影响及其与伤后T细胞增殖能力和白细胞介素2（IL－2）分泌改变的关系。方法：检测18％Ⅲ度烫伤小鼠T淋巴细胞表达抗原受体TCRα/β,共刺激分子CD28阳性表达率,及蛋白酪氨酸激酶（PTK）,蛋白激酶C（PKC）活性改变,胞浆游离Ca^2 浓度变化,观察伤后不同时相T淋巴细胞增殖功能及IL－2分泌活性,并分析上述信号转导分子活性变化与伤后T细胞功能改变的关系。结果：烧伤后T细胞膜受体TCRα/β和共刺激分子CD28表达阳性率降低,胞膜PTK活性受抑,但于伤后168h恢复,TCRα/β和CD28阳性表达率及PTK活性改变与T细胞增殖功能及IL－2分泌呈现显著相关性。胞浆游离[Ca^2 ]伤后12h明显降低,并持续到伤后168h,胞浆PKC活性出现先升后降的双相改变。结论：烧伤后T淋巴细胞经TCRα/β,CD28活化通路活性降低和胞膜PTK活性受抑是伤后T细胞功能受抑的重要分子机制。     

阻断肾素-血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶Cα亚型的影响

目的研究肾素-血管紧张素系统（RAS）对链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠肾脏组织蛋白激酶C（PKC）α亚型的表达和转位的影响。方法将糖尿病模型大鼠随机分为伊贝沙坦组（40mg／kg）、福辛普利组（40mg／kg）、两药合用组（各20mg／kg）和糖尿病对照组。采用免疫组织化学法检测肾组织中PKCα的表达,采用Western blot法检测肾皮质、髓质PKCα的表达和胞膜转位情况。结果各用药组肾皮质PKCα总表达量和胞膜转位量均明显降低。各组间肾髓质PKCα的总量及胞膜、胞浆部分量的差异无显著性。结论RAS参与早期糖尿病大鼠肾脏中PKC途径,尤其是PKCα亚型的激活,而阻断RAS可部分纠正这种变化,提示RAS通过影响PKCα转导途径的异常参与糖尿病肾病的发生、发展机制。     

川芎嗪抑制肿瘤坏死因子诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子表达

[摘要]　目的 探讨川芎嗪（TMP）抑制肿瘤坏死因子 （TNF ）诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子（TF）表达的胞内信号转导机制。 方法　胰酶消化法分离培养人脐静脉血管内皮细胞,以一期凝固法、ELISA、RT-PCR分别测总的细胞促凝活性、TF抗原和 mRNA;放射免疫法测PKC（蛋白激酶C）活性;免疫组织化学染色观察NF－κB的变化。 结果 TMP和Staurosporine（Sta）可显著减少PMA与TNF 刺激的TF活性、抗原及mRNA的表达（P<0.01）; PMA、TNF 使胞浆中PKC活性明显降低(P<0.05),胞膜PKC活性显著增高(P<0.01),而TMP与Sta均能降低胞膜PKC活性(P>0.05);TNF 引起内皮细胞NF-κB从胞浆移入核内,TMP及吡咯二硫氨基甲酸酯（PDTC）均可抑制NF-κB的活化。 结论 TNF 诱导HUVEC TF的表达中,PKC及NF-κB的活化发挥着重要的作用;TMP通过影响PKC途径及NF-κB的活化而抑制TNF 诱导 TF的表达     

热休克蛋白90抑制剂对视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的 :探讨热休克蛋白 90 (heatshockprotein 90 ,Hsp90 )抑制剂对培养的视网膜色素上皮 (Retinalpigmentepithelial,RPE)细胞端粒酶活性以及RPE细胞增生的影响。方法 :用分子原位杂交方法分别检测对照组和Hsp90抑制剂组RPE细胞端粒酶活性 ;末端缺口标记 (terminalUTPnick endlabeling ,TUNEL)法分别检测上述 2组细胞中凋亡细胞的比率 ;在上述 2组细胞中分别用甲基偶氮唑蓝 (metheltetrazolium ,MTT)法检测细胞增生状况。结果 :与RPE细胞对照组相比 ,加入Hsp90抑制剂组RPE细胞端粒酶活性显著降低 ,凋亡细胞的比率明显增高 ,RPE细胞生长抑制率升高。结论 :Hsp90抑制剂可抑制RPE细胞中端粒酶的活性 ,从而抑制RPE细胞的增生并引起RPE细胞的凋亡     

PKC信号传导通路对缺氧人视网膜色素上皮细胞表达VEGF的作用

目的 :探讨蛋白激酶C(PKC)信号传导通路对缺氧状态下培养的视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞表达VEGF的作用 .方法 :在缺氧状态下分别培养人RPE细胞 6 ,1 2和 2 4h ;将不同浓度的PKC激动剂佛波醇 1 2 豆蔻酰 1 3乙酸 (phorbol 1 2 myristate 1 3 acetate,PMA)及PKC抑制剂Chelerythrine分别加入人RPE细胞培养液 ,在缺氧状态下培养 2 4h .用免疫组化方法检测各组RPE细胞中VEGF的表达 ,经计算机图像处理 ,定量分析 .结果 :在缺氧状态下 ,RPE细胞对VEGF的表达较非缺氧组RPE细胞显著增加 (P <0 .0 1 ) ;较对照组 ,PMA可增强缺氧状态下RPE细胞VEGF的表达 (P <0 .0 1 ) ,Chelerythrine则减弱VEGF的表达 (P <0 .0 1 ) .结论 :缺氧诱导VEGF在RPE细胞中的表达 ,其信号传导途径部分是通过PKC通路实现的     

肿瘤坏死因子上调人视网膜色素上皮细胞c-jun的表达

目的:检测肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-α对培养人视网膜色素上皮(Retinal pigment epithelium,RPE)细胞c-jun表达的影响.方法:40 ng/ml TNF-α作用于体外培养人RPE细胞不同时间(0、10、20、40、60 min),采用免疫荧光染色法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察c-jun蛋白和mRNA的表达变化.结果:在未受刺激的RPE细胞中,c-jun表达微弱或不表达,细胞浆和部分细胞核为浅黄绿色荧光.40 ng/ml TNF-α刺激后,RPE细胞的荧光强度逐渐增强并出现核移位.随着TNF-α的作用,c-jun mRNA的表达开始逐渐增强,于40min时达峰值,随后表达略有减低.结论:TNF-α可在短期内迅速上调体外培养人RPE细胞c-jan蛋白和mRNA的表达,且蛋白表达出现核移位现象,提示TNF-α可引起RPE细胞c-jan的活化.     

妊娠高血压综合征大鼠肾脏组织PKC活性变化的研究

目的:观察妊娠高血压综合征(妊高征)大鼠肾脏组织蛋白激酶C(PKC)活性变化,探讨其关系.方法:Takai法检测妊高征大鼠(妊高征组)、正常妊娠大鼠(正常妊娠组)及同龄未孕大鼠(对照组)肾脏组织细胞膜和细胞浆的PKC比活,同时测定尿蛋白、血肌酐、尿素氮,对肾脏组织进行光镜观察.结果:正常妊娠组肾脏组织细胞膜和细胞浆活性明显低于对照组(P<0.01); 妊高征大鼠肾脏组织细胞膜PKC活性明显高于正常妊娠组(P<0.01),而细胞浆PKC活性显著降低(P<0.01).妊高征组肾脏组织细胞膜PKC活性与肾功能变化呈正相关关系.结论:PKC活性升高可能是导致妊高征肾脏病变的机制之一.     

The fast release of mucin secretion from human colonic cells induced by Entamoeba histolytica is dependent on contact and protein kinase C activation.

The mucus producing colonic cell line, LS174T, was used as a model to study E. histolytica-induced mucin secretion. E. histolytica trophozoites in contact with the mucus layer overlying the LS174T cells and in response to PMA, a protein kinase C activator, and Ca2+ ionophore A23187 which elevates intracellular Ca2+ ([Ca]i), caused a time-dependent (0.25-2.00 h) release of mucin. PKC inhibitors, H7 and staurosporine inhibited E. histolytica (37 and 75%) and PMA (46 and 100%)-induced mucin secretion, whereas in response to Ca2+ ionophore mucin secretion was augmented (56 and 17%). Both PMA and E. histolytica-induced the translocation of the PKC enzyme from the cytoplasm to the membrane fraction with increased enzyme activity. These results suggest that even though mucin secretion can be induced by PKC and Ca(2+)-dependent pathways, E. histolytica evokes the fast release of mucins by a PKC-dependent mechanism.