TOLL样受体2及4在脊柱关节炎患者外周血CD14^＋单核细胞表面的表达及意义

目的观察脊柱关节炎（SpA）患者外周血CD14＋单核细胞Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的表达变化及其与临床指标的关系,探讨其在SpA的发病中的作用。方法选择2008年7月~2009年1月蚌埠医学院第一附属医院风湿免疫科确诊SpA患者71例,并选择30名健康体检者作为正常对照组。采用流式细胞术检测外周血CD14＋单核细胞表面TLR2、TLR4阳性细胞的表达的百分率及平均荧光强度（MFI）。根据BASDAI评分将SpA患者组分为活动组54例（BASDAI评分〉4分）和非活动组17例（BASDAI评分≤4分）,分别比较活动组、非活动组和正常对照组三组间TLR2、TLR4阳性细胞表达百分率和MFI的差异,并分析TLR2、TLR4阳性细胞表达百分率和MFI与相关临床和实验室指标的相关性。结果 TLR2＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达百分率在活动组、非活动组及正常对照组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR2＋外周血CD14＋单核细胞表面MFI在各组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率在活动组和非活动组[（42.5±11.1）%、（32.9±9.4）%]与正常组相比[（22.3±7.5）%],差异有高度统计学意义（P〈0.01）,活动组和非活动组之间相比差异有高度统计学意义（P〈0.01）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的MFI在各组间比较差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率与ESR和IgA呈正相关（P〈0.05）,TLR2＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率与ESR和IgG呈正相关（P〈0.05）。结论 TLR4在SpA患者外周血CD14＋单核细胞表面表达有显著性变化,提示TLR4可能与SpA发生及病情存在一定的关联,TLR4和TLR2的表达可作为疾病活动度的参考指标。     

系统性红斑狼疮病人外周血髓样树突状细胞TLR2和TLR4表达情况及其临床意义研究

目的：检测系统性红斑狼疮(SLE)病人外周血中髓样树突状细胞(mDC)表面Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)的表达情况及血清白细胞介素(IL)-10、IL-17A表达水平,探讨其在SLE发病机制中的作用及临床意义。方法：纳入SLE病人54例作为研究对象,根据SLEDAI-2000将SLE病人分为稳定组和活动组,同时选取本院30例健康志愿者作为对照组,应用流式细胞术检测SLE病人及健康志愿者外周血中mDC表面TLR2、TLR4的表达情况,并用ELISA法检测SLE病人及健康志愿者血清中IL-10、IL-17A的表达水平。结果：活动组SLE病人mDC-TLR2表达率高于稳定组、对照组(P<0.01),mDC-TLR4表达率高于对照组(P<0.01)。SLE病人血清中IL-10、IL-17A表达水平均高于对照组(P<0.01)。mDC-TLR2表达与抗Sm抗体呈正相关(P<0.05),与血清IgG、24 h尿蛋白定量呈负相关(P<0.05);mDC-TLR4表达与血小板计数呈正相关(P<0.05)。结论：SLE活动组病人mDC-TL...     

系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞中TLR9的表达及其临床意义

目的:研究Toll样受体9(TLR9)在系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血B淋巴细胞中的表达,分析TLR9与疾病活动和药物治疗的关系。方法:使用流式细胞仪检测63例确诊的SLE患者和25例健康人外周血CD19+B淋巴细胞上TLR9的表达情况,比较活动期治疗前后、非活动期和健康对照组B细胞上TLR9的表达差异。结果:活动期SLE患者治疗前外周血CD19+B细胞TLR9的表达率高于治疗后、非活动期SLE患者及正常对照组(P<0.01);活动期SLE患者经治疗B细胞TLR9表达率明显降低,但仍高于非活动期和正常对照组(P>0.05);SLE患者外周血B细胞TLR表达与系统性红斑狼疮疾病活动度评分(SLEDAI)正相关(P<0.05)。结论:TLR9在外周血B细胞可作为判断SLE患者疾病活动度和药物治疗效果的参考指标。     

尖锐湿疣患者外周血CD14^＋单核细胞Toll样受体的表达

目的探讨CD14+单核细胞Toll样受体(TLRs)的表达在尖锐湿疣发病机制中的作用. 方法采用双色免疫荧光染色流式细胞术检测了34例尖锐湿疣患者外周血CD14+单核细胞表面TLR1、TLR2及TLR4的表达. 结果尖锐湿疣患者外周血CD14+单核细胞TLR4表达水平为(4.8±1.7)%,明显高于对照组的(2.6±1.0)%(P＜0.001);CD14+单核细胞TLR1的表达水平为(11.8±3.8)%,明显低于对照组的(16.4±5.1)%(P＜0.001);TLR2为(90.8±6.6)%,与对照组的(90.4±6.7)%相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论单核细胞表面的TLR4在对病毒识别、增强特异性的信号传导、启动抗病毒的固有免疫反应中起着重要作用.     

慢性阻塞性肺疾病患者和吸烟者CD14+单核细胞Toll样受体的表达及意义

目的 探讨稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者和肺功能正常的吸烟者外周血CD14+单核细胞Toll样受体(TLR)表达的变化及意义.方法 选择COPD稳定期患者30例(COPD组)、健康吸烟者21例(吸烟组)及健康不吸烟者25例(不吸烟组),用肺功能仪测定第一秒用力呼气容积(FEV1)占预计值的百分比(FEV1占预计值%)和FEV1/用力肺活量(FVC);应用流式细胞仪全血双色免疫荧光直标法检测外周血CD14+单核细胞的TLR2、TLR4表达水平,结果 以CD14+细胞TLR相对平均荧光强度(rmfi)和TLR相对阳性细胞百分率(rpcp)表示,并进行TLR2、TLR4表达与肺功能指标相关性分析.结果 COPD组CD14+单核细胞TLR2表达的rmfi(6.3±1.4)和rpcp(52.9%±20.5%)均明显低于吸烟组(分别为8.2±2.2和73.5%±19.O%,均P<0.01)和不吸烟组(分别为11.0±2.4和82.8%±17.9%,均P<0.01);TLR4表达的nnfi(2.2±0.9)明显低于不吸烟者组(3.0±0.5,P<0.01),与吸烟组(2.5±0.6)差异无统计学意义(P>0.05),而rpcp(M=1.3%,Q1～Q3为0.7%～2.4%)则明显低于吸烟组(M=4.7%,Q1～Q3为2.7%～9.4%,P<0.01)和不吸烟组(M:5.3%,Q1～Q3为2.6%～8.4%,P<0.01).吸烟组CD14+单核细胞中TLR2、TLR4表达的rmfi均明显低于不吸烟组(P<0.01,P<0.05);而rpcp与不吸烟组差异无统计学意义(P0.05).CD14+单核细胞TLR2和TLR4的表达与FEV1占预计值%、FEV1/FVC呈显著正相关(均P<0.01).结论 稳定期COPD患者和吸烟者外周血CD14+单核细胞TLR2及TLR4表达显著下调,固有免疫可能受到抑制,TLR表达下调与肺功能下降有关.     

乌司他丁对重症急性胰腺炎患者早期外周血单核细胞Toll样受体4表达的影响

目的:研究乌司他丁对重症急性胰腺炎患者早期外周血单核细胞Toll-样受体4(TLR4)表达的影响.方法:将58例重症急性胰腺炎患者随机分为乌司他丁组(29例,予以常规治疗+乌司他丁)和常规组(29例,予以常规治疗),同时选择20例健康志愿者作为对照组.入院后第1、3、5、7、14天采集静脉血,对照组仅采血1次.用流式细胞仪检测外周血单核细胞TLR4、CD14的表达,用ELISA试剂盒检测血浆TNF-α、IL-6的浓度,并分析与TLR4表达的相关性.结果:与对照组比较,在入院第1天常规组和乌司他丁组患者外周血单核细胞TLR4表达明显增高(P＜0.01),两组在入院后第3、5天TLR4表达逐渐降低,但仍高于对照组(P＜0.05).乌司他丁组与常规组相比,入院第1天治疗前,外周血单核细胞TLR4表达差异无统计学意义(P＞0.05),而在入院后第3、5、7天乌司他丁组外周血单核细胞TLR4的表达均明显低于常规组(P＜0.05).血浆TNF-a、IL-6浓度的变化与TLR4变化一致.结论:重症急性胰腺炎患者早期外周血单核细胞表面TLR4的表达明显增高,乌司他丁对重症急性胰腺炎引起的全身炎症反应的拮抗和抑制作用与其抑制单核细胞表面Toll样受体4的表达从而抑制炎症反应有关.     

外周血TLR2及TLR4表达与血管性痴呆的相关性

目的探讨中国汉族人群Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)外周血表达水平及其与血管性痴呆(VaD)的相互关系。方法采用病例-对照研究的方法,选择性别、年龄等相关因素相匹配的中国汉族VaD病人和健康人(对照组)各200例,应用聚合酶链反应(PCR)技术和流式细胞仪定量检测外周血单核细胞表面TLR2和TLR4蛋白和mRNA的表达水平。结果 VaD组TLR2和TLR4的mRNA与蛋白表达水平均明显高于对照组(t=12.30~63.50,P<0.05)。多元线性回归分析显示,两组TLR2蛋白表达水平及TLR4的mRNA和蛋白表达水平与VaD之间存在显著相关(P<0.05)。结论外周血中TLR2和TLR4的表达水平与VaD的发病之间存在相关关系。     

UC患者PBMC中TLR4、NF-κB水平的变化及其临床意义

目的 探讨溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单核细胞(PBMC)中TOLL样受体(TLR)4、NF-κB水平的变化及在UC发病中的可能机制.方法 选取武警浙江省总队医院嘉兴医院消化科2014年1月至2015年1月收治的UC患者30例作为观察组,另选取该院体检科健康体检者10例作为对照组.采用流式细胞仪检测外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率,RT-PCR检测TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB(P65) mRNA表达水平,Western blot检测TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平.结果 观察组外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率明显高于对照组(P＜0.05);对照组TLR4、MyD88、NF-κB(P65) mRNA及蛋白水平明显低于观察组(P＜0.01);TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平与UC严重程度呈正相关.结论 UC患者PBMC中TLR4、NF-κB明显增高,临床可通过检测TLR4、NF-κB水平判断UC的发展程度.     

应用高迁移率族蛋白B1与单核细胞上Toll样受体4探索系统性红斑狼疮的病情活动

目的通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及其外周血单核细胞上Toll样受体4(TLR4)的表达,评价其在SLE病情进展中的作用。方法随机选取SLE患者40例,活动期与稳定期各20例,健康对照组20名,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中HMGB1蛋白的表达,采用流式细胞术(FCM)分析外周血单核细胞上TLR4的表达。统计学分析其与SLE临床及实验室指标间的相关性。结果 SLE活动组血清HMGB1表达水平较稳定组SLE和健康对照组明显增高(P<0.05),而SLE稳定组和健康对照组之间血清HMGB1表达水平差异无统计学意义(P>0.05);活动组SLE患者外周血单核细胞TLR4的表达较稳定组SLE和健康对照组相比呈上调趋势,而TLR4的表达模式在SLE稳定组和健康对照组之间差异无统计学意义;血清中HMGB1的表达水平与单核细胞表面TLR4的表达呈正相关。结论血清HMGB1和外周血单核细胞表面TLR4均参与了SLE的病情发展过程,且其在SLE发病机制中可能具有协同作用。     

肝硬化患者外周血TLR、CD14表达及其与内毒素血症的关系

目的 探讨肝硬化患者外周血单个核细胞(PBMC)表面CD14、TOLLL样受体(TLR2、TLR4)的表达情况及其与内毒素血症的关系.方法 分别采用显色基质鲎试剂试管法和流式细胞术检测50例肝硬化患者和30例健康志愿者外周血内毒素浓度及PBMC表面CD14、TLR2、TLR4的表达.结果 肝硬化患者外周血内毒素浓度及PBMC表面CD14、TLR2、TLR4的表达高于正常对照组(P相似文献   

TLR-4 介导的固有免疫在类风湿关节炎模型大鼠发病过程中的意义

[摘要] 目的 研究弗氏完全佐剂性关节炎（AIA） 大鼠外周血单核细胞（ PBMC） Toll 样受体4 （Toll-like receptor 4,TLR4）的表达及其与关节炎评分的关系。方法 流式细胞仪测定CD14+TLR4+细胞占CD14+细胞的比例和TLR4-PE的平均荧光强度（MIF） ;RT-PCR 法测定PBMC TLR4 mRNA 的表达量。比较造模后15d与正常对照组和造模后25d 时CD14+TLR4+/CD14+、MIF及其TLR4 mRNA 表达量的差异,并分析关节炎评分与TLR4 MIF的相关性。结果 在造模后15 d ,CD14+ TLR4+/CD14+、TLR4 MIF和PBMC TLR4 mRNA 的表达较正常对照组和造模后25 d 明显增高（P<0.01）,而且TLR4 MIF 与关节炎的评分有明显的相关性（15d：r=0.826,P<0.01;25d：r=0.688, P<0.05）。但造模后25d,CD14+TLR4+/CD14 +、TLR4 MIF和PBMC TLR4 mRNA的表达与正常对照组和造模前相比无统计学意义（P>0.05）。结论 TLR4 与AIA 发病有密切关系,提示固有免疫反应在类风湿性关节炎（RA）及其他自身免疫性疾病的发病中有重要的作用。     

系统性红斑狼疮病人外周血浆细胞样树突状细胞中Toll样受体7的表达及其意义

目的:检测系统性红斑狼疮（SLE）病人外周血中浆细胞样树突状细胞（pDC）中Toll样受体7（TLR7）的表达,探讨其意义。方法:选取SLE病人52例（SLE组）和正常健康人28名（对照组）,利用流式细胞术检测外周血TLR7+的pDC细胞在各组中的比例。结果:SLE病人外周血单核细胞（PBMC）中pDC相对计数显著低于对照组（P<0.01）,SLE组和正常对照组髓样树突状细胞水平差异无统计学意义（P>0.05）。感染组SLE病人外周血pDC水平显著低于非感染组（P<0.01）,初发组SLE病人外周血髓样树突状细胞水平低于复发组（P<0.05）,pDC水平与外周血CRP呈负相关关系（P<0.05）。SLE病人外周血PBMC内pDC中TLR7+细胞的比例显著高于对照组（P<0.01）。血液系统受累组pDC内TLR7+细胞比例高于无血液系统受累组（P<0.05）。TLR7+pDC细胞比例在抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体阳性组及阴性组之间差异均无统计学意义（P>0.05）;TLR7+pDC细胞比例和蛋白尿分级呈显著正相关关系（P<0.01）。结论:SLE病人外周血TLR7+的pDC细胞比例显著升高,且与临床病情活动性有一定的相关性。     

CD14与TLR4相互作用的实验研究

目的探讨CD14与TLR4(toll-like receptor 4, TLR4)在介导LPS膜信号转导中的相互作用.方法通过PCR分别克隆CD14 cDNA和TLR4胞外区cDNA,构建其酵母表达载体,将载体共转化酵母细胞行酵母双杂交实验.同时,应用Pull-down和免疫共沉淀实验在体外及体内进一步鉴定CD14与TLR4的相互作用.结果 PCR扩增获得了CD14 cDNA和TLR4胞外区cDNA,并成功地构建了pGADT7 AD-CD14和pGBKT7 BD-TLR4酵母双杂交质粒.酵母双杂交系统检测显示pGADT7 AD-CD14和pGBKT7 BD-TLR4质粒均无自主激活报告基因LacZ表达的能力,在酵母细胞中CD14和TLR4之间存在相互作用.Pull-down结果也显示,在体外反应体系中,CD14和TLR4间存在相互作用.免疫共沉淀实验结果表明,在哺乳动物细胞(HEK 293)这一体内反应体系中,CD14与TLR4间也存在交互作用.结论在酵母细胞、体外反应体系和哺乳动物细胞(HEK 293)中,CD14与TLR4之间存在物理上的相互作用.     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25high Treg上PD-1分子的表达分析

目的：检测系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者外周血CD4＋CD25highTreg及其程序性死亡受体-1（programmed death-1,PD-1）分子的表达,探讨Treg和PD-1表达在SLE中的意义。方法：流式细胞仪检测SLE患者组、正常对照组外周血CD4＋T细胞中的CD4＋CD25highTreg和CD4＋CD25lowT细胞的比例,及其PD-1分子的表达率。结果：CD4＋CD25highTreg在SLE患者组外周血中CD4＋T细胞的比例（0.63±0.31）%与正常对照组（2.07±0.74）%相比明显降低（P〈0.05）,该亚群细胞上PD-1＋的百分率（24.99±18.65）%与对照组（6.97±1.92）%相比显著增高（P〈0.05）;CD4＋CD25lowT细胞的百分率（13.40±8.47）%及其PD-1＋的百分率（2.70±3.06）%与正常对照组（20.16±11.89）%和（0.43±0.36）%相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：外周血CD4＋CD25highTreg数量下降及其PD-1分子表达上调可能在SLE中有重要意义。     

5岁以下喘息患儿哮喘预测指数与外周血单核细胞TLR4表达的相关性研究

目的 探讨5岁以下喘息患儿外周血单核细胞(PBMCs)表面Toll样受体4(TLR4)及血清白细胞介素6(IL-6)的表达.方法 选取该院门诊或住院患儿共224例,其中哮喘预测指数(API)阳性组116例,阴性组108例.两组患儿均在喘息症状缓解1个月后分别抽取外周血,流式细胞仪检测PBMCs TLR4阳性率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-6水平.结果 API阳性组患儿CD14+单核细胞表面TLR4阳性率明显高于API阴性组[(34.9±10.0)％vs.(30.2±8.8)％];API阳性组患儿血清IL-6水平明显高于API阴性组[(46.4±15.1)ng/L vs.(40.5±13.6)ng/L];且两组TLR4阳性率和IL-6水平均呈线性相关(P＜0.05).结论 TLR4的激活诱导IL-6等细胞因子表达可能和哮喘的发生、发展有关,TLR4可能可以作为喘息发展为哮喘的预测指标.     

1-alpha-calcidol modulates major human monocyte antigens and toll-like receptors TLR 2 and TLR4 in vitro

Since vitamin D derivatives are known to interfere with the cellular immune response, we analysed the possible effect of 1-alpha-calcidol (AC) on major monocyte antigens CD14 (an endotoxin receptor), HLA-DR, and toll-like recptors 2 and 4 (TLR2, TLR4). Peripheral blood monocytes were isolated from healthy donors and cultured by standard protocol followed by incubation with various concentrations of AC in unstimulated and LPS-activated cells. After 24, 48 and 72 hours cells were harvested and analysed for the expression of antigens by flowcytometry. Compared to the controls AC increased the expression of CD14 in a dose and time dependent manner (after 72 hours culture time p < 0.01). AC was capable of further stimulating CD14 expression in LPS activated monocytes (p < 0.05). Both LPS and AC downmodulated HLA-DR dramatically after 24 (p < 0.05), 48 (p < 0.01) and 72 hours (p < 0.0001). The expression of TLR2 but not of TLR4 was inhibited by 10-7M AC. The data reveal that AC significantly modulates the expression of CD14, HLA-DR as well as of TLR2, all involved as targets and effector molecules in antigen recognition and processing, relevant to overcome infections and organ lesions.