小鼠L1210白血病微小残留病模型化疗药物造模剂量的选择

【目的】探讨构建小鼠L1210白血病微小残留病模型所需注射的化疗药物的剂量。【方法】将不同数量L1210白血病细胞接种清洁级近交系DBA/2小鼠（n=10）,观察接种的白血病细胞数量与小鼠存活时间之间的关系;将一定数量的L1210白血病细胞接种DBA/2小鼠（n=10）,接种后第3天静脉注射不同剂量的环磷酰胺（CTX）,观察药物注射剂量与小鼠存活时间之间的关系;将接种L1210白血病细胞数量与DBA小鼠存活时间关系图和CTX注射剂量与白血病小鼠存活时间关系图相结合,确定构建小鼠L1210白血病微小残留病模型所需注射的化疗药物的剂量。【结果】小鼠存活时间随接种细胞数量增加而缩短,接种500个白血病细胞小鼠的存活时间约为28 d;白血病小鼠存活时间随药物剂量增加而延长,存活时间约28 d时,需要静脉注射CTX 125 mg/kg。【结论】构建小鼠L1210白血病微小残留病模型,可于DBA/2小鼠接种L1210白血病细胞1×106个/只后第3天,给予CTX 125 mg/kg静脉注射。     

槲皮素抗小鼠P388白血病的作用

目的：研究槲皮素抗小鼠P388白血病的作用。方法：采用DBA／2小鼠腹腔注射P388细胞的方法建立白血病小鼠模型，80只小鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、高剂量槲皮素组、低剂量槲皮素组，每组20只。于第7天末次给药后每组小鼠随机抽取10只处死，收集腹水分别计数，观察腹水细胞荧光形态变化，分析细胞周期及细胞凋亡率，观察骨髓涂片及心、肝、脾、肾的组织病理学改变。观察记录其它小鼠一般情况及生存期。结果：给予槲皮素的两组小鼠平均生存期较两对照组显著延长（P〈0．05），且高剂量组小鼠平均生存期较低剂量组显著延长（P〈0．05）。在第7天处死小鼠后，高剂量组小鼠无肉眼可见腹水。低剂量组小鼠腹水细胞的密度显著减小，G0-G1期细胞比例减少，S期细胞比例增加，细胞凋亡率显著升高（P〈0．05）。各组小鼠骨髓涂片及心、肝、脾、肾组织病理切片未见明显异常。结论：槲皮素对P388白血病小鼠有延长生存期及抑制腹水细胞增殖和诱导腹水细胞凋亡的作用。     

IL－2治疗微小残留白血病的动物实验研究

本研究建立了小鼠Ｌ７８１１微小残留白血病模型，观察了白细胞介素２（ＩＬ－２）对该模型鼠的疗效。给接种Ｌ７８１１淋巴白血病细胞并已发病的６１５小鼠注射环磷酰胺治疗，小鼠生存期虽延长，但最终均死于白血病复发。用生存期推测经环磷酰胺治疗后４８小时，小鼠体内残留白血病细胞数约为１０３个，可作为小鼠微小残留白血病模型。模型鼠经－２治疗后，平均生存期明显延长．     

IL—2治疗微小残留白血病的动物实验研究

本研究建立了小鼠Ｌ７８１１微小残留白血病模型，观察了白细胞介素２（ＩＬ－２）对该模型鼠的疗效。给接种Ｌ７８１１淋巴白血病细胞并已发病的６１５小鼠注射环磷酰胺治疗，小鼠生存期虽延长，但最终均死于白血病复发，用生存期推测经环磷酰胺治疗后４８小时，小鼠体内残留白血病细胞数约为１０＾３个，可作为小鼠微小残留白血病模型。模型鼠经ＩＬ－２治疗后，平均生存期明显延长。     

125I标记的Flt4多抗检测荷瘤小鼠前哨淋巴结的探讨

目的探讨不同接种方式制备的小鼠白血病模型的生物学特性。方法常规培养小鼠急性淋巴细胞白血病细胞系L1210,调整浓度至1×107个/ml,每只DBA/2小鼠注射细胞悬液0.1ml,分别给以静脉、皮下及腹腔注射。观察小鼠成瘤情况,定期计数各组小鼠外周白细胞数量及观察细胞形态改变,取濒死小鼠的肝、脾、肺、肾等脏器称重并制作病理切片。结果各组小鼠成瘤率均为100%,成瘤天数分别为:14、7和14d;平均存活天数分别为:24.4±3.05,24.8±1.79,18.8±1.79d。接种后2周外周血白细胞数目分别增加至18.45±1.84、22.0±4.11、28.48±6.74×109/L,接种后3周外周血白细胞数目分别增加至22.31±12.08×109/L(A组)和68.18±2.82×109/L(B组);外周血涂片中均可见白血病细胞;各组濒死小鼠肝、脾有弥漫性白血病细胞浸润,主要为幼稚淋巴细胞,正常组织结构破坏,肺和肾内有少量白血病细胞浸润,正常组织结构破坏不明显,肺脏有明显出血。结论静脉、皮下、腹腔注射体外培养的L1210细胞于DBA/2小鼠构建肿瘤动物模型的方法均是可行的方式,各种方法有不同的生物学特性和优缺点,可根据研究目的的不同,选用不同的接种方式。     

中药"拮新康"对小鼠移植性白血病模型的作用研究

目的探讨拮新康对小鼠移植白血病模型的作用,为临床应用提供实验依据.方法采用急性粒、单核细胞白血病细胞株(WEHI-3B)接种于BALB/C小鼠体内建立移植性白血病模型.然后给小鼠移植性白血病模型采用拮新康不同剂量及长春新碱80进行试验,观察小鼠骨髓未分化细胞、脾脏的重量、脾脏未分化细胞浸润情况.结果拮新康不同剂量实验组小鼠骨髓中未分化细胞较对照组明显减少(P＜0.01).拮新康与长春新碱80联合作用较长春新碱80、拮新康单药组骨髓中未分化细胞明显减少(P＜0.01).拮新康不同剂量实验组小鼠脾重量明显低于模型对照组(P＜0.01)脾脏病理所见未分化细胞浸润较对照组减少.结论拮新康对小鼠移植性白血病模型有一定的抑制作用,尤其是与长春新碱80联合抗白血病作用更加增强.     

P388白血病小鼠胸腺哺育细胞的电镜观察

作者研究了P_(388)白血病小鼠胸腺哺育细胞(thymic nurse cell,TNC)的超微结构,发现接种P_(388)白血病细胞3d后的患鼠TNC胞质内高尔基氏器,粗面内质网均较正常鼠发达,线粒体大重增加,囊泡也较丰富,在一些囊泡内可见C型病毒颗粒。以上结果表明接种P_(388)白血病细胞3d后的(C_(57)×DBA/2)F_1小鼠TNC分泌功能增强,同时也是白血病病毒出现的最早场所。     

瘀毒清对微小残留白血病作用的实验研究

目的：以615小鼠L7212微小残留白血病模型为工具,观察瘀毒清对模型小鼠骨髓有核细胞分类和白血病细胞百分率及小鼠存活时间的影响。方法：用FCM检测骨髓有核细胞DNA含量及细胞周期,并通过肝脾病理检查观察白血病细胞的肝脾浸润情况。结果：低剂量组和高剂量组白血病细胞百分率均较对照组低（P＜0．01）,而正常成熟细胞较对照组高（P＜0．05）,肝脾白血病细胞浸润程度则均较对照组轻,两个剂量组小鼠生存期均较对照组明显延长（P＜0．05）,尤以低剂量组更明显,生命延长率达194．22％;低剂量组G2和S期细胞百分率似较对照组有减低趋势。结论：瘀毒清有一定的抑制白血病细胞增殖作用。     

益气养阴活血化瘀方法治疗微小残留白血病免疫机制的实验研究

以可移植性L7212白血病小鼠腹腔一次性注射环磷酰胺250mg/kg，建立微小残留白血病模型，观察益气养阴活血化阏方治疗该模型鼠的疗效，并从细胞免疫学角度进行机制探讨。结果表明：益气养阴活血化瘀方可延长微小残留白血病小鼠的平均生存期，改善外周血象，调整紊乱的T细胞亚群，促进白介素2IL－2、白介素6IL－6、γ－干扰素INFγ等多种细胞因子的分泌水平，提高NK细胞杀伤活性，有较显著的免疫增强和免疫调节作用。     

益气养阴活血化瘀方法治疗微小残留白血病免疫机制的实验研究

以可移植性L7212白血病小鼠腹腔一次性注射环磷酰胺250mg/kg,建立微小残留白血病模型,观察益气养阴活血化瘀方治疗该模型鼠的疗效,并从细胞免疫学角度进行机制探讨.结果表明益气养阴活血化瘀方可延长微小残留白血病小鼠的平均生存期,改善外周血象,调整紊乱的T细胞亚群,促进白介素2IL-2、白介素6IL-6、γ干扰素INFγ等多种细胞因子的分泌水平,提高NK细胞的杀伤活性,有较显著的免疫增强和免疫调节作用.     

HER2/neu动物模型的建立和免疫学鉴定

目的 建立表达人HER2／neu原癌基因的动物肿瘤模型并用免疫学方法加以鉴定。方法 将重组HER2／neu原癌基因真核表达载体转染P815细胞，有限稀释法筛选出稳定表达HER2／neu基因的P815肿瘤细胞株：用Western blot方法鉴定HER2／neu基因在P815细胞中的表达。在DBA／2小鼠体内建立表达HER2抗原的肿瘤动物模型，再通过表达HER2／neu基因的重组质粒免疫小鼠，诱导小鼠产生特异性HER2／neu基因特异的CTL应答，从免疫学方面鉴定HER2／neu动物肿瘤模型建立成功。结果 在体外获得了稳定表达HER2／neu基因的P815细胞株；免疫小鼠脾细胞中诱导出特异性CTL。结论 本研究成功建立了HER2／neu动物肿瘤模型，HER2／neu原癌基因DNA疫苗免疫可在体诱导特异性细胞免疫应答。     

二乙酰二脱水卫矛醇对小鼠白血病L1210细胞增殖的影响

目的　研究二乙酰二脱水卫矛醇 (1 ,2 :5 ,6 dianhydro 3 ,4 diacetylgalactitol,DADAG)的抗脑白血病作用及机制。方法　用小鼠脑内移植瘤模型、MTT法、DNA掺入法、流式细胞仪和Westernblot法 ,观察DADAG对小鼠脑内移植瘤和体外白血病L1 2 1 0 细胞的作用 ,并探讨作用机制。结果　DADAG对DBA/ 2小鼠脑内移植白血病L1 2 1 0 有明显的抑制作用 ;对体外白血病L1 2 1 0 细胞同样有很强的抗增殖作用 ,其IC50 值为 2 4 6mg·L- 1 。DADAG不可逆地抑制L1 2 1 0 细胞内DNA的生物合成。DADAG 2 4mg·L- 1 处理L1 2 1 0 细胞 6h后 ,细胞发生G2 /M周期阻滞 ,2 4h后达最高峰。细胞周期素B1 蛋白水平在DADAG处理 2 4h后开始下降 ,而磷酸化的细胞周期依赖性激酶CDK1在DADAG处理 6h后开始上调 ,并呈时间依赖性。结论　DADAG的抗脑白血病作用与其抑制白血病细胞的增殖密切相关     

核因子-κB活化抑制对化疗药物诱导的P388白血病细胞凋亡的影响

目的　研究糖皮质激素对化疗药物诱导P388白血病细胞凋亡与核因子 κB(NF κB)活化的影响。方法　采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术 (Tunel)、DNA电泳等方法检测不同剂量阿糖胞苷 (Ara C)、环磷酰胺 (Cy)和依托泊苷 (VP16 )诱导细胞凋亡的作用 ;采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测细胞NF κB活化水平。结果　①Ara C、Cy和VP16均能诱导P388白血病细胞凋亡和NF κB活化 ;② 1 0 μmol/L地塞米松 (DXM)增强Ara C、Cy和VP16诱导的细胞凋亡作用 ,细胞凋亡率分别从 48 3%± 2 6 % ,2 1 4%± 6 0 % ,38 1%± 3 8%增加至 6 9 6 %± 7 7% ,35 6 %± 6 0 % ,71 9%±9 9%。凋亡增加率分别为 44 %、89%和 6 6 % ;同时 1 0 μmol/LDXM能显著抑制Ara C、Cy和VP16诱导的NF κB活化 ,抑制率分别为 90 %、71%和 6 8%。结论　化疗药物诱导P388白血病细胞凋亡的同时活化NF κB ,糖皮质激素可通过抑制NF κB活化 ,增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡的作用     

二乙酰二脱水卫矛醇抗脑白血病的作用及机制

目的　研究二乙酰二脱水卫矛醇 (1,2 :5 ,6 -dianhydro - 3,4-diacetylgalactitol,DADAG)的抗脑白血病作用及机制。方法　用小鼠脑内移植瘤模型、MTT法和DNA掺入法 ,观察DADAG对小鼠脑内移植瘤和体外白血病L12 10细胞的作用 ,并探讨作用机制。结果　DADAG对DBA/ 2小鼠脑内移植白血病L12 10细胞有明显的抑制作用 ;对体外白血病L12 10细胞同样有很强的抗增殖作用 ,其IC50 值为 2 4.6mg·L-1。DADAG不可逆地抑制L12 10细胞内DNA的生物合成。结论　DADAG的抗脑白血病作用与其抑制白血病细胞的增殖及DNA合成密切相关     

人参多糖对移植性人白血病模型小鼠作用观察

目的建立重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠人白血病模型,观察人参多糖在体内对白血病细胞的药理学作用。方法在SCID小鼠尾静脉分别接种K562细胞建立SCID小鼠人白血病模型,应用组织细胞化学、RT-PCR、流式细胞术、组织病理监测在给予人参多糖前后白血病模型SCID小鼠的外周血、骨髓、肝、脾中的白血病细胞。结果SCID小鼠人白血病模型外周血象在疾病早期无明显变化,第18天白细胞数略有升高,光镜下可检测到1%~4%人白血病细胞,病程后期,白细胞明显增高,血涂片检查人白血病细胞占10%;经GPS注射后,SCID小鼠一般状况明显好于对照组,其肺、肾等脏器的炎症及病理变化减轻。结论人参多糖在体内能有效地治疗髓系白血病,且未发现有明显的毒副作用。     

扶正祛邪法治疗微小残留白血病探析

微小残留白血病是急性白血病经治疗获全缓解后体内残留微量白血病细胞的状态,其中医病机是气阴两虚而余毒伏留。以扶正祛邪之品,不仅缓解气阴两虚之证,增强机体的免疫功能,而且对残留白血病细胞也具有杀伤作用。     

组织型基质金属蛋白酶抑制剂-2对白血病SHI-1细胞生长及体内浸润的影响

目的研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)过表达对白血病 SHI-1细胞增殖、侵袭能力以及于裸鼠体内浸润、转移能力的影响。方法用流式细胞术检测 SHI-1细胞膜表面TIMP-2的表达。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT 法)及与白血病患者骨髓基质细胞共培养跨人工基底膜侵袭实验检测高表达 TIMP-2的 SHI-1细胞体外增殖及侵袭能力的改变。经尾静脉接种进行预处理后的6周龄裸鼠,于接种后第30天处死部分裸鼠,检测 SHI-1细胞在各脏器中浸润生长情况。结果 SHI-1/TIMP-2细胞膜表面 TIMP-2的表达为99.3％±0.1％,显著高于 SHI-1/MSCV 细胞TIMP-2表达(85.9％±2.6％,P<0.05),平均荧光强度也提高2.06倍。SHI-1/TIMP-2细胞体外增殖能力及跨人工基底膜侵袭能力强于 SHI-1/MSCV。接种 SHI-1/TIMP-2细胞的裸鼠平均生存期为33.7 d,而接种 SHI-1/MSCV 细胞的裸鼠为40 d,两者之间平均生存期差异有统计学意义,体内浸润转移现象显著增强。结论膜表面高表达 TIMP-2的人单核细胞白血病细胞株 SHI-1/TIMP-2较 SHI-1/MSCV 细胞具有更强的增殖、浸润和转移能力。