TPO对MO7e细胞的作用探究

目的了解Thrombopoietin（TPO）对人原巨核细胞白血病细胞株MO7e细胞的影响,间接了解TPO使用剂量和时机与血小板动力学的关系。方法MTT法测定MO7e细胞的计数,得出TPO浓度—MO7e细胞增值曲线,倒置显微镜下观察MO7e细胞的计数和形态。结果TPO可提高MO7e细胞增值,当TPO浓度为256ng/ml时细胞计数达到最高,加入TPO48h后MO7e细胞计数达到最高。结论TPO可促进MO7e细胞增值,TPO最佳的用药剂量和用药时机是256ng/ml和48h。     

紫杉醇联合顺铂对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖抑制作用及其机制

目的:研究紫杉醇联合顺铂对人乳腺癌细胞MCF-7增殖抑制作用,探讨药物作用过程中与MAPK通路?Bcl-2基因家族关系及相关机制?方法:采用CCK-8试剂盒检测不同浓度紫杉醇?顺铂单独或联合作用MCF-7细胞48 h后对细胞增殖的50%抑制浓度(IC50),以及紫杉醇?顺铂分别联合ERK通路阻断剂(U0126)?JNK通路阻断剂(sp600125)对细胞增殖的抑制率;采用流式细胞仪检测紫杉醇?顺铂作用细胞48 h后的细胞周期分布情况;应用Western blot分别检测紫杉醇?顺铂及两药联合作用MCF-7细胞48 h后MAPK通路蛋白及Bcl-2?Bax蛋白表达?结果:紫杉醇(0.025~0.400 μmol/L)?顺铂(1~16 μmol/L)联合作用细胞时呈协同作用(CI < 0.95)?sp600125对MCF-7细胞增殖具有明显的抑制作用,sp600125联合紫杉醇?顺铂的抑制作用强于紫杉醇?顺铂单独作用细胞时的抑制作用?两药联合时处于G2期的细胞较紫杉醇单独作用时减少,较顺铂单独作用增加?紫杉醇?顺铂联合作用细胞48 h后p-ERK?Bcl-2蛋白表达较两药单独作用时降低,p-JNK/SAPK?p-p38蛋白表达较对照组明显增加?结论:紫杉醇联合顺铂作用MCF-7细胞时具有协同作用,两药与JNK通路阻断剂联用时对细胞的抑制作用强于单独用药时?紫杉醇联合顺铂时可以减少细胞在G2/M期的积聚,同时可以激活JNK?p38通路,抑制ERK通路的激活?     

厄贝沙坦对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用及对VEGF表达的影响

目的研究厄贝沙坦对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制作用及对血管表皮生长因子(VEGF)表达水平的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测厄贝沙坦对乳腺癌MCF-7细胞分别作用24 h、48 h、72 h后的抑制率,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测厄贝沙坦高、中、低三个剂量(7.2μg/ml、3.6μg/ml、1.8μg/ml)对乳腺癌MCF-7细胞干预前后,乳腺癌MCF-7细胞中VEGF表达水平的差异,以顺铂作为阳性对照组(给药浓度为5μg/ml)。结果厄贝沙坦对乳腺癌MCF-7细胞的半数抑制浓度(IC50)为2.3μg/ml;厄贝沙坦对细胞增殖有显著抑制作用,且随着浓度的增加而增强,三个剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或0.01);厄贝沙坦作用组中VEGF的表达水平与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),厄贝沙坦高剂量组和顺铂阳性对照组VEGF的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论厄贝沙坦对乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有显著抑制作用,可以下调血管表皮生长因子的表达水平。     

DC-CIK细胞与顺铂对乳腺癌细胞杀伤作用的研究

目的：研究DC-CIK细胞和不同浓度顺铂对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用。方法将DC细胞和CIK细胞共同培养得到的DC-CIK细胞与顺铂分别作用于MCF-7细胞,共同培养12h、24 h和48 h,MTT法检测MCF-7细胞的增殖抑制情况,对比DC-CIK细胞和顺铂对MCF-7细胞的增殖抑制效果。结果与DC-CIK细胞共培养12 h、24 h与48 h,MCF-7细胞均出现一定的凋亡,增殖受到明显的抑制;与5×106个DC-CIK细胞共培养12h与40 ng/mL顺铂对其作用12 h的抑制效果相同,共培养24 h与50 ng/mL顺铂对其作用24 h的效果相同,共培养48 h与60 ng/mL顺铂对其作用24 h的效果相同。结论该研究为DC-CIK法治疗乳腺癌作出了实验室基础性研究,为临床DC-CIK细胞抑制乳腺癌细胞提供了理论依据。     

顺铂与卡铂对骨肉瘤细胞株作用的分子机制

目的探讨顺铂与卡铂对骨肉瘤细胞(MG-63)作用的分子机制。方法骨肉瘤细胞混悬液与不同浓度顺铂和卡铂分别作用24、48、72 h后,用倒置显微镜观察细胞生长情况。用噻唑蓝法测定每孔的吸光度值,制作生长曲线,并求出顺铂和卡铂的半抑制浓度(IC_(50))。用IC_(50)顺铂、卡铂作用于骨肉瘤细胞24、48、72 h后用流式细胞仪进行细胞周期分析。免疫印迹技术观察细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2和Bax的表达。结果相同浓度顺铂和卡铂作用的骨肉瘤细胞死亡数量随时间增加而增加。不同浓度顺铂和卡铂对骨肉瘤细胞分别作用24、48、72 h后,对细胞的生长均起到抑制作用,相同时间内,药物浓度越高,生长抑制作用越明显(P<0.05)。骨肉瘤细胞与IC_(50)顺铂和卡铂作用24、48、72 h后,在细胞各期均未见明显凋亡峰,但随着时间增加,G_1、S、G_2期所占比例逐渐下降;顺铂和卡铂作用后不同时间点凋亡细胞所占比例比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,顺铂组和卡铂组PCNA表达下降,Bax表达增加,Bcl-2表达略减少。结论顺铂和卡铂对肿瘤细胞生长各期均有抑制作用,对于骨肉瘤细胞来说,卡铂的浓度约需25倍于顺铂才能产生相似的生长抑制效应。顺铂、卡铂与骨肉瘤细胞作用后存在凋亡现象,但是未能形成凋亡峰,这可能与铂类化合物能够对处于任何生长周期的细胞均能产生杀伤作用有关。     

卡铂诱导喉癌细胞凋亡的体外研究

目的 探讨卡铂对喉癌Hep—2细胞生长的影响及作用机制。方法 本研究采用四甲基偶氮唑盐比色分析法(MTT法)测定卡铂对喉癌细胞的抑制作用；透射电镜观察形态学变化；应用流式细胞仪研究不同浓度、不同时间细胞凋亡的发生和对细胞周期的影响。结果 卡铂明显抑制Hep—2细胞的生长，且存在时间—剂量依赖性。50％抑制浓度(IC50值)24h为201．2μg／ml，48h为90．5μg／ml。流式细胞技术证实，卡铂能非特异性地阻滞Hep—2细胞周期的全过程。结论 卡铂能够抑制喉癌细胞生长，其抑制作用是通过诱导喉癌细胞凋亡而起作用的。     

Twist基因在结肠癌Lovo细胞奥沙利铂、氟尿嘧啶耐药中的作用

目的 探讨Twist基因在结肠癌Lovo细胞奥沙利铂、氟尿嘧啶耐药中的作用.方法 体外将siRNA-Twist、pcDNA-Twist分别转染结肠癌Lovo细胞,通过Western blot和RT-PCR方法检测细胞Twist的表达.不同浓度奥沙利铂和氟尿嘧啶、不同作用时间作用于Lovo细胞,MTT法检测细胞增殖及半数抑制浓度(IC50).流式细胞术检测Lovo细胞凋亡情况.结果 siRNA-Twist转染Lovo细胞48 h后,细胞的Twist基因表达明显降低,而pcD-NA-Twist转染后,细胞的Twist基因表达明显升高.奥沙利铂、氟尿嘧啶均呈时间、剂量依赖性抑制Lovo细胞增殖.在IC50浓度奥沙利铂和IC50浓度氟尿嘧啶作用各组Lovo细胞48 h后,siRNA-Twist组细胞生长抑制率、凋亡率明显高于空白对照组及siRNA-Control组(P＜0.05),细胞对药物耐药性降低;而pcDNA-Trwist组细胞生长抑制率、凋亡率明显低于空白对照组及pcDNA-Control组(P＜0.05),细胞对药物耐药性升高.结论 Twist基因在结肠癌Lovo细胞奥沙利铂、氟尿嘧啶耐药中发挥正向作用.     

顺铂联合卡铂对骨肉瘤细胞株毒性的实验研究

目的探讨半量顺铂、卡铂联合对骨肉瘤细胞株(OS-732)的细胞毒性强度,为临床应用提供实验依据.方法采用MTT法细胞毒性试验,先分别获取顺铂、卡铂对骨肉瘤细胞株的半数抑制浓度(IC50),再分别用IC50的顺铂、IC50的卡铂、1/2IC50的顺铂 1/2IC50的卡铂作用骨肉瘤细胞株48h和72h,比较3组药物对骨肉瘤细胞株的细胞毒性.结果根据相应实验结果制作生长曲线求得顺铂、卡铂对骨肉瘤细胞株的IC50分别为7.6μg/ml和199.0μg/ml.分别用8.0μg/ml顺铂、200.0μg/ml卡铂、4.0μg/ml顺铂 100.0μg/ml卡铂作用48h时,对骨肉瘤细胞株的细胞毒性指数(CI)值依次为(54.7±5.3)%、(56.9±6 3)%、(57.5±5.7)%,3组比较差别无显著性意义(P＞0.05);作用72h时CI值依次为(65.7±4.5)%、(69.4±2.2)%、(68.4±3.6)%,含卡铂的两组与单独顺铂组比较差别均有显著性意义(均P＜0.05).结论半量顺铂、卡铂联合应用能产生单独顺铂或卡铂对骨肉瘤细胞株相似的细胞毒性作用.     

胰岛素对乳腺癌细胞生长的细胞动力学和细胞形态学研究

目的:研究胰岛素对乳腺癌细胞株MCF-7细胞生长的作用.方法:分别使用0、25、50、100、200 nmol/L胰岛素作用于细胞株MCF-7细胞,在24、48、72h采用形态学观察以及MTT比色方法,观察不同浓度胰岛素对MCF-7细胞生长刺激的剂量、时间效应.结果:200 nmol/L胰岛素作用72 h后,MCF-7细胞形态学发生改变,胞质内微腔绒毛减少,线粒体明显扩张.各浓度胰岛素均可明显促进MCF-7细胞增殖,其中,50、100、200 nmol/L胰岛素作用24、48、72h后差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).胰岛素对MCF-7细胞的增殖作用呈现一定的时间和剂量依赖效应.结论:胰岛素对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖有刺激作用,且这种作用呈现一定的剂量、时间依赖效应,结果提示该种细胞因子是促进乳腺癌发生发展的因素之一.     

壁虎粗多肽对3种消化道肿瘤细胞的体外抑制作用

目的 探讨壁虎粗多肽(GCPS)对消化道肿瘤细胞体外增殖的抑制作用.方法 用不同浓度 (0.375、0.75、1.0、1.5、3.0 mg/mL) 的GCPS处理食管癌细胞EC109、肝癌细胞HepG2和胃癌细胞MGC803,于24、48、72 h后倒置显微镜下观察细胞形态变化,并使用MTT法观察GCPS对3种人消化道肿瘤细胞增殖的影响.结果 与空白对照组比较,在倒置显微镜下可观察到GCPS作用24、48、72 h后的细胞形态有不同程度的改变.MTT法结果显示GCPS具有抑制人消化道肿瘤细胞增殖作用,且作用呈浓度和时间依赖性;48 h后GCPS作用于上述3种细胞的IC50为1.1、1.2 和1.6 mg/mL.结论 壁虎粗多肽可抑制HepG2、EC109和MGC803这3种消化道肿瘤细胞增殖.     

黄荆子乙酸乙酯提取物抑制人乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤生长

目的:观察黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)对人乳腺癌(MCF-7)裸鼠移植瘤生长的影响。方法:MTT法检测6种黄荆子提取物对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响;获得目标抗肿瘤有效组分即EVn-50,人乳腺癌(MCF-7)裸鼠移植瘤模型治疗实验,评价EVn-50治疗人乳腺癌的有效性。结果:不同提取方式获得的6种黄荆子提取物对人乳腺癌(MCF-7)细胞的增殖活性具有不同程度的抑制作用,以EVn-50作用最强,其IC50值为0.89μg/mL。EVn-50对人乳腺癌(MCF-7)裸鼠移植瘤生长具有抑制作用,呈剂量依赖性。结论:EVn-50具有抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖和人乳腺癌(MCF-7)裸鼠移植瘤生长作用。     

半夏总生物碱对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨半夏总生物碱(total alkaloids from pinellia ternate,TATP)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolil tetracolium,MTT)比色法以及集落形成率实验,检测不同浓度的TATP对MDA-MB-435S细胞株的生长抑制作用。应用单细胞凝胶电泳分析检测TATP导致MDA-MB-435S细胞的DNA损伤情况。结果人乳腺癌细胞MDA-MB-435S经TATP处理后,其体外增殖能力受到明显抑制且与药物剂量、作用时间呈正相关,经TATP作用24、48、72h后的半数抑制浓度分别为:98.37μg/ml、52.16μg/ml、33.63μg/ml。单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)中,TATP组细胞尾DNA含量、尾长及尾动量与对照组有统计学差异(P<0.01),且呈现浓度依赖性。结论在体外培养条件下,TATP能明显抑制MDA-MB-435S细胞增殖,其机制可能与DNA的损伤作用有关。     

超分子铂类药物对消化道肿瘤作用的观察

目的:对超分子铂类药物对消化道肿瘤的作用进行观察。方法:选用西茜铂和卡铂对半数抑制浓度(IC50)人胚肺成纤维细胞胰腺癌、肝癌、结肠癌和胃癌6株消化系癌细胞进行体外试验。结果:体外试验6株肿瘤细胞的IC50值CCP明显低于卡铂,约为卡铂的1/3～1/2,但人胚肺成纤维细胞的IC50值CCP和卡铂均在240 ml/L以上。结论:超分子铂类药物对消化道肿瘤有明显的抑制作用,高于卡铂的临床疗效。     

鱼藤素抑制MCF-7、H1299增殖及下调微小染色体维系蛋白3、CDC45表达

目的 探究鱼藤素对MCF-7及H1299细胞的增殖作用,并从mRNA水平研究了鱼藤素对微小染色体维系蛋白3(MCM3)和CDC45在MCF-7及H1299细胞中的影响.方法 利用MTT法研究不同浓度的鱼藤素分别处理MCF-7和H1299细胞48、72、96 h后的抑制增殖作用;利用显微镜观察MCF-7和H1299细胞的生长状态;荧光定量PCR探究鱼藤素对MCF-7和H1299细胞中MCM3-CDC45表达的变化.结果 0.25、0.5、1、5、10、30、50μmol/L的鱼藤素作用MCF-7细胞48、72、96 h后,能明显抑制其增殖,且呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用MCF-748、72、96 h的IC50分别为9、3、2μmol/L;0.5、1、5、10、30、50、100μmol/L的鱼藤素作用H1299细胞48、72、96 h,抑制率呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用H1299细胞96 h的IC50为2μmol/L.光学显微镜下,观察到药物处理组中,细胞数目减少,形态皱缩明显.鱼藤素干预MCF-7及H1299细胞,MCM3-CDC45的表达量减少.结论 鱼藤素可抑制MCF-7、H1299细胞增殖,并可下调细胞中MCM3和CDC45的表达.     

乳胞素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用和促凋亡作用

目的：探讨蛋白酶体抑制剂乳胞素（LAC）对体外卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法：体外培养卵巢癌SKOV3细胞,采用0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol·L^-1 LAC干预SKOV3细胞48 h,5μmol·L^-1 LAC干预SKOV3细胞0、24、48和72 h;将细胞分为对照组（细胞不经药物干预）、LAC组（加入5μmol·L^-1 LAC）、卡铂组（加入10、20、40及80μmol·L^-1卡铂）和LAC联合卡铂组（加入5μmol·L^-1 LAC和10、20、40、80μmol·L^-1卡铂）。采用MTT法和流式细胞术（FCM）检测各组卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制率和凋亡率。结果：MTT检测,随着LAC作用时间的延长和浓度的升高,SKOV3细胞的增殖受到明显抑制,48 h时LAC的半数抑制浓度（IC₅₀）为5.36μmol·L^-1;LAC联合卡铂组细胞的增殖抑制率较相同浓度卡铂组明显升高（P<0.05）,卡铂的IC₅₀由58.08μmol·L^-1下降至18.37μmol·L^-1。FCM检测,随着LAC作用时间的延长,SKOV3细胞凋亡率呈升高趋势;与卡铂组和LAC组比较,LAC联合卡铂组SKOV3细胞凋亡率明显升高（P<0.05）。结论：LAC可有效抑制卵巢癌SKOV3细胞的体外增殖且能诱导其凋亡,并可以明显增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞株的增殖抑制作用。     

SCP对人乳腺癌细胞增殖抑制作用的研究

目的：研究SCP对人乳腺癌细胞生长，抑制效应，探讨其抗癌作用机制。方法：用不同浓度的SCP加入体外培养的人乳腺癌细胞（MCF－7）中，观察加药后细胞生长和有丝分裂指数（MI）的变化，用MTT法检测其细胞毒作用；Hoechst33342/PI荧光双染色方法检测细胞凋亡。结果：SCP明显抑制MCF－7细胞生长，IC50值为1mg/ml;MI于加药后48h较对照组明显降低；凋亡细胞比例在用药后48h达63．3％，结论：SCP可有效抑制人乳腺癌细胞的增殖。     

青蒿素类药物对结肠腺癌细胞LS174T的细胞毒作用

目的考察青蒿素（ART）、双氢青蒿素（DHA）及蒿甲醚（AM）对结肠腺癌细胞LS174T增殖的影响,为建立青蒿素类药物自身诱导代谢机制的体外研究体系奠定基础。方法采用噻唑蓝（MqT）法检测不同浓度药物、分别作用不同时间后对细胞增殖的抑制情况,计算抑制率并求得半数抑制浓度（IC50）。结果抑制率均随药物浓度的增大和时间的延长而增加,ART作用24、48、72h对LS174T的IC50分别为〉240．00μmol／L、〉240．00μmol／L、211．18μmol／L,DHA对LS174T的IC50分别为91．46、80．45、45．60μmol／L,AM对LS174T的IC50分别为〉320．00、262．90、163．93μmol／L。结论3种药物对LS174T增殖的抑制程度不同,但均呈浓度依赖性和时间依赖性。     

原蛋白转变酶2基因表达对肿瘤细胞增殖的影响

目的 探讨原蛋白转变酶2基因(proprotein convertase,PC2)对不同肿瘤细胞增殖的影响,为肿瘤治疗提供新的研究方向.方法 PC2重组质粒pcDNA3.1-PC2单独或与其分子伴侣7B2重组质粒pcDNA3.1-7B2混合转染小鼠乳腺癌细胞4T1、人肝癌细胞HepG2、小鼠黑色素瘤细胞B16、人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞MCF-7和小鼠肥大细胞瘤细胞P815,以pcDNA3.1(+)空载体为对照,通过PC2酶活性测定法、Western blot检测野生型和转染后的4T1细胞的PC2酶活性和表达,MTT法检测肿瘤细胞增殖率的变化.通过DAPI染色检测转基因细胞和TUNEL染色检测荷瘤模型瘤组织中癌细胞的凋亡情况.结果 1:1比例的PC2:7B2共转染显示了在4T1细胞中的最高PC2活性和表达,在荷瘤小鼠瘤组织中显示明显的凋亡现象.该共转染对4T1、HepG2、B16、A549和MCF-7细胞半数抑制剂量分别为128.3、97.8、137.3、51.5、214.3μg/mL,呈剂量依赖性,P815细胞的抑制率与基因剂量之间没有关系.结论 PC2上调可以抑制多种肿瘤细胞的增殖,呈现凋亡现象.     

靶向Livin反义寡核苷酸对结肠癌LoVo细胞增殖及对卡铂敏感性的影响

目的探讨靶向Livin反义寡核苷酸(ASODN)对结肠癌LoVo细胞增殖及Livin基因表达的影响,并观察其对卡铂敏感性的变化。方法 (1)用靶向Livin ASODN、随机寡核苷酸(RODN)分别转染LoVo细胞,反转录-聚合酶链式扩增反应检测Livin mRNA表达量变化;(2)流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;(3)采用CCK-8法检测卡铂联合靶向Livin ASODN作用对肿瘤细胞的增殖抑制率。结果 Livin ASODN转染LoVo细胞明显抑制Livin mRNA表达,与空白对照组、RODN组比较差异均有统计学意义(P<0.01);流式细胞术碘化丙锭单染色显示,空白对照组、RODN组均未出现细胞亚二倍体峰;Livin ASODN组存在LoVo早期凋亡细胞,200、400 nmol.L-1的Livin ASODN组细胞亚二倍体百分率分别为(10.59±1.05)%、(11.63±1.27)%;卡铂单药半数抑制浓度(IC50)为3.33 mg.L-1,卡铂与Livin ASODN(100 nmol.L-1)联合,IC50为0.22 mg.L-1,表现为协同作用(Q≥1.15),增敏倍数15.14。结论靶向Livin ASODN下调Livin mRNA表达,诱导LoVo细胞凋亡并提高其对卡铂的敏感性。