豫医无毛小鼠无毛基因突变部位的定位和分析

目的:研究豫医无毛小鼠(YYHL)突变的分子机制.方法:对豫医无毛小鼠和昆明小鼠的基因组DNA进行PCR扩增,对扩增片段克隆后测序,并与Mus muscnlus进行同源性分析.结果:共测出YYHL DNA序列1 824bp和昆明小鼠DNA序列1816 bp,其不同之处有27处,变异方式包括插入、缺失和点突变.其中在12外显子中有一无义突变(G→A),导致该部位由编码色氨酸的UGG转变为终止密码子UGA.结论:YYHL无毛性状的产生可能与基因组的变异有关.     

豫医无毛小鼠无毛基因部分DNA序列分析

目的：探讨豫医无毛小鼠的无毛基因突变情况.方法：采用PCR方法扩增豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列,并进行克隆测序,将测序结果与国外公布的小鼠、大鼠及人无毛基因的cDNA序列做同源性比较和分析,确定该鼠无毛基因的特异性.结果：克隆测序结果为一923 bp的片段,相当于Genbank上公布的小鼠无毛基因cDNA序列的3 150～3 565 bp位置,包含4个外显子（外显子13～16）及3个内含子（内含子13～15）;与本室以前所测昆明小鼠无毛基因部分DNA序列100%同源,其外显子部分共416 bp,可编码138个氨基酸,与国外公布的小鼠、大鼠、人的无毛基因核苷酸同源性分别为100%、95%、84%,氨基酸同源性分别为100%、97.8%、84%.结论：①克隆定序了豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列;②排除了豫医无毛小鼠无毛基因的突变发生于本段序列的可能;③无毛基因在哺乳动物体内同源性很高,应属保守基因,其蛋白质产物可能在一些基本的调节途径中起重要作用,推测豫医无毛小鼠的无毛基因可能也位于14号染色体.     

豫医无毛小鼠无毛基因的比较生物学分析

目的:分析豫医无毛小鼠与其他物种间无毛基因组成的差异.方法:采用RT-PCR方法对豫医无毛小鼠无毛基因的cDNA序列进行克隆测序,并借助生物信息学分析技术对小鼠、大鼠、猴和人的无毛基因及其所编码的氨基酸序列进行比较生物学分析.结果:获得了豫医无毛小鼠无毛基因的全长4 014 bp的cDNA序列 (GenBank 登录号:AY547390).豫医无毛小鼠与国内外报道的2种小鼠、大鼠、猴、人等5种动物的核苷酸同源性分别为99.9%、99.7%、94.3%、 81.7%、 81.8%,氨基酸同源性分别是99.8%、99.7%、94.5%、79.8%、80.0%.结论:无毛基因是一个高度保守基因,不同物种间具有高度同源性.     

豫医无毛小鼠中期染色体标本中无毛基因的原位PCR检测

目的确立豫医无毛小鼠无毛基因的原位PCR荧光检测方法。方法应用原位PCR的方法对豫医无毛小鼠中期染色体标本的无毛基因进行检测，并设立PCR反应液中无Taq DNA聚合酶、无引物、无bIo-11—dU/TP等进行多组对照。结果染色体标本上出现1—2个黄绿色的扩增信号，而对照组则无。结论本实验为以后进行该基因的精确染色体定位打下了良好基础。     

豫医无毛小鼠眼球组织学观察

目的:观察豫医无毛小鼠眼球组织学的结构,探讨豫医无毛小鼠视物能力差的原因.方法:取豫医无毛小鼠及昆明小鼠各5只,于室温(20～28 ℃)饲养,饲养期间观察2组小鼠眼睑、眼球外观,12周后采用颈椎脱臼法处死小鼠,取眼球组织进行HE染色观察.结果:豫医无毛小鼠仔鼠时期眼睑外观正常,12周龄时眼睑及皮肤有许多油脂黏附,头侧、眼睑及体侧出现皱纹和褶痕,眼睑松垂,眼球变混浊,视物能力、敏感性及行动性均降低.昆明小鼠饲养期间眼睑及眼球无明显变化.豫医无毛小鼠角膜、视网膜、睫状体组织学结构与昆明小鼠相比无明显差异.结论:豫医无毛小鼠眼球的组织学结构与昆明小鼠相同,其视物能力差可能是由眼睑松垂所致.     

豫医无毛小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验研究

采用骨髓嗜多染红细胞微核技术对豫医无毛小鼠进行骨髓微核实验研究。结果:(1)豫医无毛小鼠嗜多染红细胞自发微核率与正常昆明小鼠无显著性差异P>0.05。(2)腹腔注射环磷酰胺后,豫医无毛小鼠与昆明小鼠骨髓微核率均显著升高,但两者之间无显著性差异P>0.05。提示:豫医无毛小鼠与昆明小鼠自发微核率相似,对环磷酰胶诱变剂的敏感性相一致。     

豫医无毛小鼠末梢血T淋巴细胞酯酶染色法的观察

目的：观察豫医无毛小鼠Ｔ淋巴细胞及其亚群与正常昆明小明鼠有无差异。方法：用α醋酸萘酯酶法（ＡＮＡＥ）对豫医无毛小鼠进行了末梢血Ｔ淋巴细胞及其亚群的观察。结果：１月龄和２月龄豫医无毛小鼠Ｔ淋巴细胞总数和Ｔ抑制细胞数无显著差异，Ｔ辅助细胞数高于正常昆明小鼠，但６月龄无毛小鼠与正常昆明小鼠Ｔ淋巴细胞及其亚群无明显差异。结论：豫医无毛小鼠６月龄后Ｔ淋巴细胞及其亚群趋于正常，与正常昆明小鼠无显著差异。     

Uncv无毛小鼠无毛基因的分子克隆及序列分析

目的 探讨Unev无毛小鼠的无毛性状与无毛基因(hairless gene,hr)的相关性.方法 参照Gen-Bank上公布的小鼠的hr序列,设计5对引物,用RT-PCR方法对本单位培育的Unev无毛小鼠hr的编码区序列进行了克隆与分析.结果 获得了Unev无毛小鼠及野生型hr的全部编码区序列(3546 bp).Unev无毛小鼠hr基因与野生型小鼠hr基因的长度及序列完全一致,同源性为100%.与GenBank上发表的国外小鼠hr基因序列(Z32675)相比,同源性为99.7%,共10个碱基发生了突变,其中2个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;和昆明小鼠的hr(AY547391)相比,同源性为99.6%,共12个碱基发生了突变,其中3个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;但这些突变是由种属差异造成的.结论 Uncv无毛小鼠的无毛性状产生与hr基因无关.     

豫医无毛小鼠封闭群的生物学特性

目的：对培育的豫医无毛小鼠封闭群的生物学特性进行研究。方法：以昆明小鼠作对照,分别对不同日龄豫医无毛小鼠的体重、体长及脏器重进行测定。测交实验测定突变基因的类型。一般组织学方法研究其皮肤结构,并观察描述了无毛小鼠的脱毛规律。结果：无毛小鼠生长发育迟缓,寿命缩短,且皮肤组织学结构变化显著,突变基因经测交试验证实为常染色体上的单一隐性基因。结论：无毛小鼠有别于裸鼠和昆明小鼠,具有独特的生物学特性     

豫医无毛小鼠皮肤组织细胞凋亡及神经细胞黏附分子检测

目的：研究豫医无毛小鼠皮肤组织细胞凋亡及细胞黏附分子（NCAM）的表达情况。方法：以21日龄、4月龄和9月龄昆明小鼠和豫医无毛小鼠背部皮肤为标本,采用TUNEI法检测皮肤细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测NCAM。结果：豫医无毛小鼠毛母质和毛乳头均有细胞凋亡,昆明小鼠仅毛母质细胞存在凋亡,毛乳头细胞不发生凋亡。随鼠龄的增长,昆明小鼠及预医无毛小鼠毛乳头NCAM表达均逐渐降低（P〈0.05）;同昆明小鼠比较,豫医无毛小鼠毛乳头部位NCAM表达较弱（P〈0.05）。结论：无毛基因可能通过诱导小鼠皮肤毛乳头细胞的凋亡而影响毛囊的正常生长发育。     

近交培育的豫医无毛小鼠H抗原系统的同源性

目的：研究豫医无毛小鼠Ｈ 抗原系统的同源性。方法：采用近交培育２０ 代２ 月龄雌性豫医无毛小鼠皮肤异体移植法。结果：经１００ ｄ 观察,受试小鼠无急慢性排斥反应发生,移植皮片全部为永久性接受。结论：豫医无毛小鼠突变种群经２０ 代近交培育,组织相容性抗原一致,基因具有高度同源性     

豫医无毛小鼠近交系与HLC小鼠近交系遗传纯度检测

目的:检测豫医无毛小鼠近交系(YYHL)与HLC小鼠近交系的遗传纯合程度.方法:依据GB/T14927.1-2001检测分布于8条染色体上的13个生化标记基因位点:Car-2、Hbb、Es-1、Trf、Mod-1、Idh-1、Es-2、Es-3、Mup、Pgm-1、Gpd-1、Ce-2、Gpi-1;每个品系抽样4只,并用标准近交系C57BL/6、DBA/2、615、BALB/c作对照,对YYHL小鼠近交系和HLC小鼠近交系进行遗传检测.结果:YYHL与HLC小鼠近交系在所检测的13个生化标记基因位点上达到100%纯合.但2个近交系在Hbb、Idh-1、Ce-2生化标记基因位点上不同.结论:YYHL小鼠近交系与HLC小鼠近交系在遗传纯度方面均已达到近交系要求,可作为新的近交系应用于科学研究.     

突变无毛小鼠近交系的育成及特性

目的 :培育突变无毛小鼠分离近交系 ,鉴定其基因纯合度 ,明确其生物学特性。方法 :采用强迫杂合性全同胞兄妹交配法进行分离近交系培育。生化标记检测、皮肤移植试验和毛色基因测试法对其基因纯合度进行鉴定。并采用相应方法对其基本生物学特性进行研究。结果 :育成具有独特生物学特性、基因高度纯合的豫医无毛小鼠分离近交系。现已达 3 0代。结论 :可以认为 ,豫医无毛小鼠分离近交系是一个遗传上高度纯合的新品系。     

人类Vimentin基因第1,2,6,7内含子序列的测定

[目的]人vimentin(VIM)基因位于10号染色体短臂1区3带,属于第Ⅲ型中间丝纤维蛋白基因.目前已知全部外显子序列及部分内含子序列,本文测定了部分未知的VIM基因内含子序列.[方法]通过已知VIM基因的外显子序列设计引物,用PCR扩增其未知的内含子片段,将PCR产物进行克隆测序.[结果]共测得未知的4个内含子序列,内含子1长692bp,测得其全部序列;内含子2长2kb,测得其两端与外显子相接的序列,共1kb;内含子6长456bp,测得其全部序列;内含子7长404 bp,测得其全部序列.[结论]本研究PCR检测多例人VIM基因的内含子7大小为404 bp,与文献报道人类vi-mentin基因的内含子7大小为800bp相差很大,但引物两端外显子序列相同.另外,文献报道的人类vimentin基因与外显子3相邻的第2内含子末端41nt的核苷酸序列与本研究所测的第2内含子末端序列完全不同.     

无毛小鼠封闭群与昆明小鼠生长特性比较

比较无毛小鼠封闭群与昆明小鼠生长特性的差异。方法：分别测量０至１０周龄两种小鼠的体重,体 长,尾长。结果：第２,４,５,６,７,８,９和１０周龄的体重差异非常显著;第２,４,５周龄的体长差异显著;第４,５周龄的尾长差 异非常显著。结论：与昆明小鼠相比,无毛小鼠生长发育迟缓,性成熟较晚。     

昆明无毛小鼠近交系培育及其生物学特性的研究

目的 培育无毛小鼠近交系。方法 采用全同胞兄妹对交配,20代后用毛色基因测试、皮肤移植、生化标记基因法测定该近交系的纯度。结果 表明毛色基因测试该品系小鼠基因型为aabbccDD;经过皮肤移植的小鼠全部存活;对AKP-1等25个生化标记基因的检测,未发现杂合型。     

分离近交系YYHL小鼠的皮肤移植

利用小鼠皮肤异体移植法研究分离近交系YYHL小鼠F20 的基因纯合性,经100d 观察,受试小鼠均无急、慢性排斥反应发生,全部为永久性接受。结果表明,该突变种群经过20 代的近交培育,组织相容性抗原一致,基因具有高度纯合性,已达到近交系要求