大鼠脊髓排尿反射通路的形态学研究

目的研究大鼠脊髓水平的排尿反射路径.方法于大鼠膀胱壁注入结合霍乱毒素B亚单位的辣根过氧化物酶（CB-HRP）,研究膀胱感觉传入末梢在脊髓内的分布部位.于L1～L2 节段的中间侧细胞柱及骶副交感核分别给予辣根过氧化酶（HRP）和结合麦芽凝集素的辣根过氧化物酶（WGA-HRP）,分别在L6～S1检测逆标神经元和L1～L2检测顺行示踪末梢.结果膀胱感觉末梢从脊髓后角进入脊髓后,主要分布走向至骶副交感核和后联合核.于交感中枢给予HRP后,在副交感中枢的背内侧发现有逆标的非胆碱能性神经元,且该神经元的所在部位正好位于膀胱的感觉末梢分布的部位.于骶副交感核给予WGA-HRP后,发现在L1～L2节段中间侧细胞柱区有顺行的神经末梢.结论脊髓内部除了有盆神经-副交感中枢-盆神经的反射通路以外,可能还存在有盆神经-交感中枢-腹下神经的反射路径.     

神经干细胞移植治疗脊髓横断损伤的研究

目的研究神经干细胞移植治疗对脊髓横断损伤的修复作用.方法采用成年S-D大鼠,随机分为脊髓(胸10)横断损伤对照组(n=7)和神经干细胞移植治疗组(n=7).术后10周,感觉运动区皮质注射10?A示踪剂.动物再存活两周后取出相应的脑和脊髓组织,冰冻切片后,采用自由漂浮法行BDA染色显影,光镜观察.两组实验动物均于脊髓横断术后采用BBB评分法定期评估运动功能.结果神经干细胞移植治疗组所有大鼠BBB运动功能评分在横断损伤4周以后明显高于对照组(P＜O.05).BDA神经束路示踪技术研究显示神经干细胞治疗组7只中的6只大鼠在术后12周有部分BDA阳性标记的皮质脊髓束再生通过脊髓横断损伤部位,而对照组大鼠均未见再生的皮质脊髓束通过.结论在脊髓横断损伤后应用神经干细胞移植治疗,可明显改善损伤的运动功能.神经干细胞移植治疗促进了皮质脊髓束的再生并重新建立了部分神经纤维联系.BDA神经束路示踪技术为脊髓损伤后神经功能的恢复提供了解剖形态学依据.     

骨髓间充质干细胞移植促进大鼠损伤脊髓的功能恢复

 目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠脊髓损伤的作用。方法将大鼠MSCs移植到大鼠脊髓损伤处,移植后评估大鼠行为学改变,免疫组织化学染色法观察BrdU标记的MSCs在脊髓损伤处存活情况,辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪,观察脊髓损伤处神经通路的重构建,皮层体感诱发电位(CSEP)测定脊髓损伤处神经通路传导功能的恢复。结果术后移植组评分均高于损伤组,移植组大鼠脊髓损伤区远端检测到BrdU阳性细胞,脊髓损伤近侧端检测到HRP阳性细胞,CSEP波形恢复但波幅减低,潜伏时延长。结论MSCs可在损伤区存活并分化为神经元,在损伤局部形成神经元通路,使损伤脊髓的远端和近端建立联系,神经纤维传导功能部分恢复。     

生物素化葡聚糖胺顺行追踪标记大鼠皮质脊髓束

目的:探讨生物素化葡聚糖胺(BDA)对皮质脊髓束(CST)示踪的应用价值。方法:采用成年SD大鼠40只,随机分为单侧锥体束损伤组(n=24)、假损伤组(n=8)和正常组(n=8)。在锥体交叉上方选择性切断左侧锥体建立单侧锥体束横断损伤模型。运用Rivlin斜板试验进行运动功能检测。在双侧感觉运动皮层多点分层立体定位注射BDA,BDA注射14天后取脑和脊髓切片进行ABC免疫组织化学染色显示BDA标记信号,观察皮质脊髓束的走行。结果:Rivlin斜板试验显示单侧锥体束横断损伤组倾斜平面临界角度变化明显小于正常对照组和假损伤组(P<0.05)。正常组和假损伤组大鼠BDA示踪显示BDA标记阳性细胞定位于双侧感觉运动皮层的锥体细胞,锥体细胞发出的BDA阳性纤维束对称分布于双侧皮层、内囊、大脑脚、脑桥基底部、延髓锥体中的皮质脊髓束内,继而经锥体交叉到脊髓后索,在双侧后索最深层、灰质后连合背侧下行至脊髓骶段。锥体束横断损伤大鼠在损伤部位以上可见双侧对称的BDA阳性纤维束,损伤平面以下在右侧延髓锥体和左侧脊髓后索中见有BDA阳性纤维束,损伤侧锥体和右侧脊髓后索中未见有BDA阳性纤维束。结论:BDA顺行示踪技术可以清楚地显示皮...     

椎管内病变致神经源性膀胱尿道功能障碍的康复训练进展

脊髓外伤、肿瘤、血管病变、炎症等多种原因均可损伤脊髓致骶髓排尿中枢、脊髓上下行神经通路及脑干下部、下丘脑、大脑皮层等排尿中枢引起神经源性膀胱尿道功能障碍，表现为尿失禁或排尿困难、尿潴留，易导致泌尿系感染和梗阻，严重者发生肾功能衰竭而死亡。因此，加强膀胱尿道功能的康复训练，使其建立规律排尿、降低膀胱内压，阻止膀胱一输尿管返流，保护肾功能十分重要。现将其训练基本方法并参考国内外同道经验。综述如下：     

脊神经前根对大鼠排尿和勃起功能的选择性支配机制

目的 探讨脊神经前根小束对SD大鼠膀胱和勃起功能的选择性支配机制.方法 成年雄性SD大鼠40只,10只行逆行神经示踪,30只行电生理研究:分别刺激大鼠排尿及勃起反射中枢所在脊髓节段的脊神经前根神经小束,同时记录膀胱内压、尿道灌注压和阴茎海绵体内压的变化.结果 SD大鼠排尿和勃起功能的低级中枢主要位于L6、S1脊髓节段,电刺激L6、S1脊神经前根某些小束分别引起膀胱内压、尿道灌注压和阴茎海绵体内压的改变.结论 SD大鼠L6、S1脊神经前根小束对膀胱逼尿肌、尿道外括约肌和阴茎海绵体的支配效能不同,通过显微解剖及电刺激可以区别.     

大鼠皮质脊髓束选择性横断损伤模型的建立

目的 建立一种稳定可靠且简便实用的皮质脊髓束选择性横断损伤动物模型.方法 选择在延髓锥体切断左侧锥体束,制作大鼠皮质脊髓柬选择性横断损伤模型.采用Rivlin斜板实验评价模型的运动功能,运用Luxolfast blue(LFB)染色法、生物素化葡聚糖胺(BDA)神经示踪法和蛋白激酶Cγ(PKCγ)免疫组织化学染色法观察皮质脊髓束的形态学变化.结果 皮质脊髓束损伤组大鼠术后右侧前后肢瘫痪,运动功能受限,Rivlin试验显示倾斜平面临界角度明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);损伤区未见LFB阳性神经纤维束通过;在延髓锥体交叉平面,仅见一束BDA或PKCγ阳性纤维束经右侧锥体交叉至脊髓后索,在左侧脊髓后索最深层,紧邻脊髓灰质后连合背侧下行至骶段,而在损伤平面以下,未见有BDA或PKC γ阳性纤维束经左侧锥体交叉至右侧,在整个脊髓后索的右侧半未见有BDA或PKC γ阳性纤维束.结论 选择在延髓切断一侧锥体束,建立皮质脊髓束选择性横断损伤模型,方法 简便实用,结果 稳定可靠,是研究皮质脊髓束的可塑性和神经轴突再生的理想动物模型.     

神经干细胞移植在恢复损伤脊髓传导功能中的作用

目的：探讨神经干细胞（NSCs）移植在恢复损伤脊髓传导功能中的作用。方法：30只Wistar大鼠随机分为对照组（A组）、损伤组（B组）和移植组（C组），每组10只；将培养的大鼠NSCs悬液注入C组损伤脊髓处，B组注射等量的生理盐水。采用皮层体感诱发电位（CSEP）和HRP逆行示踪技术观察大鼠脊髓传导功能的恢复情况。结果：①脊髓损伤后，B组的CSEP波消失，术后2月C组的波形有所恢复，但潜伏期延长；②A组脊髓前角可见互许多HRP标记阳性神经元，B组未见阳性神经元，C组可见有阳性神经元，但数目较A组少。结论：NSCs脊髓内移植能促进损伤脊髓传导功能的部分恢复。     

间歇导尿术在膀胱功能障碍患者的应用

控制膀胱的中枢或周围神经发生病变后引起的排尿功能障碍,称为神经源性膀胱尿道功能障碍.这是康复医学中常见的合并症之一,尤以脊髓损伤为突出. 　　……     

大鼠中枢神经系统对脾脏神经支配的调控--假狂犬病毒跨突触标记

为探讨大鼠中枢神经系统与脾脏之间的神经通路联系及大鼠中枢神经系统对脾脏免疫功能的调控机制,采用免疫组化法及荧光金(Flouro-Gold, FG)神经追踪法研究了假狂犬病毒(PRV)及FG注入脾脏72小时、96小时后逆行标记的FG神经元在腹腔神经节内、跨突触标记的PRV神经元及神经纤维在脾脏及神经系统内的分布.结果:①各时间组大鼠脾被膜及实质内均见PRV标记的呈串珠状的神经纤维,有的纤维以终末与免疫细胞密切接触.②各时间组大鼠下胸段(T10～12)脊神经节实质内见PRV标记阳性神经元,被膜内及实质的神经元之间可见 PRV阳性神经纤维.③各时间组大鼠腹腔神经节内见散在的FG标记神经元.④各时间组大鼠中胸段(T5～9)脊髓侧角中间外侧柱,后角背侧固有核及胶状质,延髓迷走神经背核和孤束核内均见PRV标记阳性神经元胞体及突起.⑤96小时组大鼠除上述阳性结果外,标记细胞还可见于下丘脑室旁核.由此推测神经系统与脾脏之间可能存在下列神经通路联系:①下丘脑室旁核→延髓迷走神经背核→脊髓侧角中间外侧柱的交感神经节前神经元→交感神经腹腔节神经元→脾脏.②脾内感觉神经纤维→脊神经节感觉神经元→脊髓后角背侧固有核和胶状质联络神经元→延髓孤束核神经元→下丘脑感觉中枢.     

大鼠脊髓损伤后尿动力学改变及P2X3表达的研究

目的探讨大鼠不同平面脊髓损伤(SCI)造成神经源性膀胱后尿动力学,和P2X3的表达情况。方法成年健康SD雌性大鼠52只,将其随机分为正常组、骶上脊髓损伤组、骶下脊髓损伤组。采用脊横断法制备大鼠神经源性膀胱模型。四周后行尿流动力学检查,免疫组化法和Western blotting检测P2X3表达情况。结果骶上脊髓损伤组组逼尿肌漏尿点压较对照组、骶下脊髓损伤组组明显升高,骶下脊髓损伤组组逼尿肌漏尿点压较对照组显著降低;骶上脊髓损伤组组P2X3表达较对照组、骶下脊髓损伤组组明显升高,骶下脊髓损伤组组P2X2表达较对照组明显降低。结论尿流动力学检查为神经源性膀胱的早期诊断及选择个体化治疗方案提供了一种有效的检查手段。骶上脊髓损伤组组为逼尿肌反射亢进,骶下脊髓损伤组组为逼尿肌反射无力,膀胱逼尿肌P2X3表达增高可能是逼尿肌反射亢进机制之一。     

脊髓损伤致大鼠神经源性膀胱尿动力学变化及P2Y4的表达意义

目的探讨大鼠不同平面脊髓损伤(SCI)后神经源性膀胱尿动力学变化及P2Y4的表达意义。方法健康成年SD大鼠50只,雌雄不限,体重180-220g,随机分对照组、骶髓损伤组、骶上脊髓损伤组。建立神经源性膀胱大鼠模型。28d后,进行尿动力学检测。尿动力检测完毕后,取标本用免疫组化法检测P2Y4表达情况。结果逼尿肌漏尿点压力在骶上脊髓损伤组较对照组、骶髄损伤组升高明显;逼尿肌漏尿点压在骶髄损伤组较对照组明显下降。P2Y4在骶上脊髓损伤组的表达较对照组、骶髓损伤组升高明显;P2Y4在骶髓损伤组表达较对照组明显降低。结论大鼠骶上脊髓损伤后,逼尿肌表现为反射亢进,大鼠骶髓损伤后逼尿肌表现为反射减弱。膀胱逼尿肌中P2Y4表达增高可能是引起逼尿肌反射亢进机制之一。     

慢性压迫性颈髓损伤体感诱发电位变化与神经丝磷酸化异常的病理机制

 【目的】 观察慢性压迫性颈脊髓损伤神经元和轴突中神经丝高度磷酸化和异常积聚的特征,探讨其介导体感诱发电位（SEP)变化的神经病理机制。【方法】 将20只SD大鼠随机分为实验组（n=15）和对照组（n=5）,实验组采用聚氨酯胶片建立脊髓背侧慢性压迫模型;BBB评分法和SEP评估造模前、后6个月脊髓功能变化;Luxol Fast Blue（LFB）染色观察脱髓鞘变性、免疫组织化学法观察磷酸化（SMI-31）和非磷酸化（SMI-32）神经丝在脊髓灰质前角神经元、轴突中的表达,并探讨其与SEP变化的关系。【结果】 造模6个月后大鼠BBB评分均下降（p<0.001）、SEP潜伏期延长（p<0.05）、波幅下降（p<0.001）;LFB染色强度显著降低（p<0.001）;脊髓灰质前角SMI-32阳性神经元计数明显增多、染色强度增强,两组差异具有统计学意义（p<0.05）;脊髓白质SMI-31染色强度升高（p<0.05）。【结论】 神经丝在脊髓前角神经元的过度表达与高度磷酸化以及在轴突中异常聚积是导致轴突变性、神经元损伤和体感诱发电位异常的神经病理机制之一。     

An experimental study of artificial murine bladder reflex arc established by abdominal reflex

Background  The neurogenic bladder dysfunction caused by spinal cord injury is difficult to treat clinically. The aim of this research was to establish an artificial bladder reflex arc in rats through abdominal reflex pathway above the level of spinal cord injury, reinnervate the neurogenic bladder and restore bladder micturition. 

Methods  The outcome was achieved by intradural microanastomosis of the right T13 ventral root to S2 ventral root with autogenous nerve grafting, leaving the right T13 dorsal root intact. Long-term function of the reflex arc was assessed from nerve electrophysiological data and intravesical pressure tests during 8 months postoperation. Horseradish peroxidase (HRP) tracing was performed to observe the effectiveness of the artificial reflex. 

Results  Single stimulus (3 mA, 0.3 ms pulses, 20 Hz, 5-second duration) on the right T13 dorsal root resulted in evoked action potentials, raised intravesical pressures and bladder smooth muscle, compound action potential recorded from the right vesical plexus before and after the spinal cord transaction injury between L5 and S4 segmental in 12 Sprague-Dawley rats. There were HRP labelled cells in T13 ventral horn on the experimental side and in the intermediolateral nucleus on both sides of the L6–S4 segments after HRP injection. There was no HRP labelled cell in T13 ventral horn on the control side. 

Conclusion  Using the surviving somatic reflex above the level of spinal cord injury to reconstruct the bladder autonomous reflex arc by intradural microanastomosis of ventral root with a segment of autologous nerve grafting is practical in rats and may have clinical applications for humans.

     

电针治疗不完全性脊髓损伤神经源性膀胱23例

目的观察电针治疗不完全性脊髓损伤神经源性膀胱的疗效。方法将43例脊髓损伤性神经源性膀胱患者按照入院顺序随机分为治疗组(23例)和对照组(20例),对照组患者给予膀胱训练4周,治疗组患者加用电针治疗。治疗前后观察两组24h排尿次数、每次尿量、每周尿失禁次数、膀胱容量和残余尿量的变化。结果治疗后两组患者的24h排尿次数、每周尿失禁次数、残余尿量均较治疗前显著下降(P0.01),膀胱容量和每次尿量显著增加(P0.01);治疗组在降低膀胱残余尿量和升高膀胱容量方面显著优于对照组(P0.01)。结论电针结合膀胱训练可明显改善脊髓损伤性神经源性膀胱患者的膀胱功能。     

Wnt4、Wnt7a在不同程度脊髓损伤小鼠中的差异表达

【目的】观察非经典Wnt信号通路相关基因、平面细胞极性（PCP）相关基因在不同程度脊髓损伤（SCI）后的表达变化。【方法】采用LISA脊髓撞击器构建小鼠脊髓损伤模型,实验分为SCI0.65组（损伤深度为0.65mm）、SCI0.45组（损伤深度为0.45mm）和Sham组（假手术）;通过BMS评分和CatWalk9.0步态分析系统测试小鼠术后运动功能;应用VonFrey纤毛和冷热板检测小鼠术后神经病理性疼痛;利用Real-time PCR法检测小鼠脊髓损伤节段和腰4腰5（L4-5）节段非经典Wnt信号通路相关基因和PCP相关基因的表达变化。【结果】①在损伤后第7、10、25、42天,SCI0.65组BMS评分明显低于SCI0.45组（P<0.05）;CatWalk9.0步态分析结果表明SCI后损伤组小鼠四肢协调率低于Sham组（P<0.01）。②脊髓损伤后第28天损伤组小鼠均出现机械性痛觉超敏并且持续至42d,且损伤程度越重,机械性痛阈值越低（P<0.001）;脊髓损伤后小鼠冷热痛异常,但是与损伤程度无关。③脊髓损伤造模后42d,SCI0.45组和Sham组小鼠脊髓组织中Wnt4与Wnt7a表达无显著变化,SCI0.65组Wnt4表达上调、Wnt7a表达下调（P<0.05）。【结论】①小鼠SCI后产生神经病理性疼痛。不同程度的脊髓损伤对机械痛表现出不同的敏感性。②Wnt4和Wnt7a的表达变化提示它们可能在脊髓损伤后运动神经回路的可塑性中起重要作用。     

神经干细胞移植联合腹腔注射促红细胞生成素对横断性脊髓损伤大鼠神经轴突的修复作用

目的: 探讨神经干细胞(NSCs)与促红细胞生成素(EPO)共同作用于横断性脊髓损伤大鼠后对损伤区轴突的修复作用,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。方法: 40只雌性成年Wistar大鼠,建立T10全横断大鼠脊髓损伤模型后,随机分为对照组、NSCs组、EPO组和联合治疗组,每组10只。术后8周采用BDA皮质脊髓束顺行追踪法和荧光金(FG)皮质脊髓束逆行追踪法评估损伤区脊髓神经轴突再生情况,同时分期采用实验性脊髓损伤运动功能BBB评分法评价大鼠后肢功能恢复情况。结果: BDA 免疫荧光染色和FG免疫荧光染色,联合治疗组可见大量被BDA-cy3红色荧光标记的再生轴突,其中部分再生轴突穿越损伤区到达远端;NSCs组仅见少量轴突再生,无神经轴突通过脊髓损伤区;EPO组偶见散在的神经纤维再生;对照组无明显的轴突再生。联合治疗组大脑皮质中可见少量被FG标记的椎体细胞及轴突发出金黄色荧光,其余3组大脑皮质中无FG标记细胞。大鼠后肢功能BBB评分,在术后1周及1周以后各时段,联合治疗组大鼠BBB评分均高于其他各组(P<0.05)。结论: 脊髓损伤后移植NSCs联合腹腔注射EPO可有效促进脊髓损伤区神经轴突的再生以及脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复。     

扩散加权成像(DWI)在脊髓损伤中的应用价值

目的 回顾分析脊髓损伤的磁共振扩散加权像(DWI)影像特点,探讨DWI在脊髓损伤中的价值.方法 52例脊枉外伤或椎管狭窄合并脊髓损伤患者,其中急性外伤31例,陈旧性外伤8例,椎间盘突出继发颈椎椎管狭窄13例.所有患者行常规T1WI、T2WI、STIR及DWI成像.结果 31例急性脊髓挫裂伤,DWI检出32灶呈高信号,3灶呈等信号未检出,常规T2WI、STIR检出25灶呈高信号.21例陈旧性挫裂伤与脊髓型颈椎病继发慢性损伤,T2WI与STIR检出23灶呈高信号,DWI检出12灶呈低信号.结论 DWI在急性脊髓损伤中的诊断中明显优于常规MRI序列,同时能有效对脊髓急性损伤与陈旧性或慢性损伤进行鉴别,其应作为脊髓损伤的常规检查序列.     

Morphologic Relationship between the Pontine Micturition Center and the Sympathetic Center in the Spinal Cord of the Rat

To study whether the sympathetic nerves coordinate with the parasympathetic nerves during micturition in the rat. We used antegrade neural tracing with biotinylated dextran amine (BDA) injected into the pontine micturition center (PMC) to label the terminals in the L6-S1 cord，Preganglionic parasympathetic neurons (PPNs) in the L6-S1 segment were labelled by retrograde transport of Fluorogold (FG) from the major pelvic ganglion (MPG). We detected retrograde neurons in L6-S1 using retrograde transport of horseradish peroxidase (HRP) from the intermediolateral cell column (IML) of the L1-L2 segment where sympathetic preganglionic neurons (SPNs) are located, lmmunohistochemical methods showed that PPNs were identified to he choline acetyltransferase-immunoreactive (ChAT-IR). HRP-labelled neurons were not ChAT-IR and located dorsal to PPNs. BDA labelled terminals were located mainly in the bilateral IML of L6-S1, some of which had synaptic contact with the HRP-labelled neurons. In addition, there were some wheat germ agglutinin-horseradish peroxidase (WGA-HRP) labelled terminals in the ipsilateral IML of the L1-L2 segment after WGA-HRP was microinjected into SPN. We conclude that PMC may control the preganglionic neurons of sympathetic nerves through the interneurons located dorsal to PPNs.