miR-193a靶向调控HOTAIR对前列腺癌细胞活力及侵袭能力的影响

目的探讨miR-193a通过靶向调控长链非编码RNA-Hox基因的反义基因间RNA(HOTAIR)对前列腺癌细胞活力及侵袭能力的影响。方法体外培养正常前列腺上皮细胞RWPE-1、前列腺癌(Pca)细胞DU145、PC3细胞株,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测三组细胞的miR-193a及HOTAIR表达量。以慢病毒为载体构建过表达miR-193a的DU145、PC3细胞株,并设立阴性对照组,采用qRT-PCR法检测转染后细胞的HOTAIR的表达水平,CCK-8法检测细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭能力。结果与正常前腺上皮细胞株相比,DU145中miR-193a的相对表达量约为42%,PC3中miR-193a相对表达量约为27%,DU145中HOTAIR表达上调约2.6倍,PC3中HOTAIR表达上调约4.2倍,差异均有统计学意义(P0.05);成功转染过表达mR-193a后,与阴性对照组比较,DU145中miR-193a表达量上q调2.4倍,PC3中miR-193a表达量上调3.1倍,DU145中HOTAIR相对表达量约为41%,PC3中HOTAIR相对表达量为30%,差异均有统计学意义(P0.05)。DU145细胞株转染miR-193a后,细胞穿膜次数为(72.31±11.54),对照组细胞穿膜次数为(116.63±26.74),差异有统计学意义(P0.05);PC3细胞株转染miR-193a后,细胞穿膜次数为(67.16±10.38),对照组细胞穿膜次数为(145.61±21.94),差异有统计学意义(P0.01)。结论 miR-193a可以抑制体外前列腺癌细胞长链非编码基因HOTAIR的表达,降低细胞活力及侵袭能力,对于前列腺癌的治疗提供了新的思路。     

沉默信息调节因子1小干扰RNA抑制前列腺癌细胞DU145的迁移

目的 观察沉默信息调节因子1（silent information regulator 1,SIRT1）小干扰RNA（siRNA）对前列腺癌DU145细胞迁移和基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9表达变化的影响.方法 体外培养DU145细胞,实验分Scramble siRNA组和SIRT1siRNA组;利用脂质体介导转染技术转染前列腺癌DU145细胞,Western blot方法检测DU145细胞中SIRT1的干涉效能;划痕实验、平板克隆实验和Transwell迁移实验研究SIRT1对其体外迁移运动能力的影响;Western blot方法检测DU145细胞中MMP2和MMP9的蛋白表达.结果 与Scramble siRNA组比较,SIRT1 siRNA组SIRT1的蛋白表达水平降低,明显抑制DU 145细胞的迁移,降低MMP2和MMP9蛋白.结论 下调SIRT1的表达可以抑制前列腺癌细胞DU145的迁移,其机制可能与改变基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9的表达相关.     

PKCzeta在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞增殖的影响

目的 检测PKCzeta在不同分级前列腺癌(PCa)组织的表达情况,并探究PKCzeta的表达对前列腺癌细胞系增殖的影响.方法 采用免疫组织化学染色法检测19例前列腺癌组织和4例正常前列腺组织的PKC-zeta表达情况,并按肿瘤分级分为3组,进行PKCzeta表达的差异性分析;应用Hilymax试剂转染PKCzeta质粒(CA-PKCzeta)过表达前列腺癌细胞PKCzeta;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot分别检测PC3和DU145细胞内PKCzeta的mRNA和蛋白水平;利用平板克隆形成试验和CCK-8试剂盒检测PC3和DU145细胞增殖能力的差异以及转染PKCzeta质粒后细胞增殖的变化.结果 PKCzeta在前列腺癌组织中的表达高于正常前列腺组织(P＜0.05),而且低分级(1级)前列腺癌PKCzeta的表达高于高分级(2～3级)前列腺癌(P＜0.05).DU145细胞的PKCzeta表达高于PC3细胞,而其增殖速度较PC3细胞低;过表达PKCzeta使前列腺癌细胞系的增殖受抑.结论PKCzeta与肿瘤分级存在负相关关系,在癌症早期可能有一定的保护作用,且过表达PKCzeta能抑制前列腺癌细胞的增殖.     

抗凋亡基因Bfl-1在前列腺癌中的表达及作用

目的 检测Bcl2相关蛋白A1(Bfl-1) mRNA在前列腺癌细胞株、前列腺癌组织及良性前列腺增生组织中的表达,观测阻断Bfl-1表达对前列腺癌细胞的影响,探讨Bfl-1在前列腺癌发生发展中的作用.方法 采用RT-PCR、实时荧光定量PCR(Q-PCR)、cDNA探针原位杂交(ISH)等技术检测Bfl-1 mRNA在前列腺癌组织、细胞株和良性前列腺增生组织的表达水平;结合临床资料分析Bfl-1的表达与临床病理指标的关系;利用反义寡核苷酸干预前列腺癌细胞株,RT-PCR检测Bfl-1表达,MTT法检测细胞的存活,倒置显微镜下观察前列腺癌细胞的形态变化.结果 RT-PCR、Q-PCR结果显示Bfl-1 mRNA在激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3和DU145中高表达,在激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP中未见表达,表达差异有统计学意义(P＜0.05);原位杂交结果显示Bfl-1mRNA在前列腺癌组织中高表达,而在良性前列腺增生组织中未见表达,表达差异有统计学意义(P＜0.05);有转移、分期高的前列腺癌病例的Bfl-1 mRNA表达水平高于无转移、分期低的病例(P＜0.05);Bfl-1反义寡核苷酸转染PC-3和DU145细胞后,Bfl-1表达下调,细胞生长受到抑制(P＜0.05),细胞脱落、碎裂形成大小不一的细胞团块.结论 激素非依赖性前列腺癌细胞的生长与Bfl 1过表达有关;干预Bfl-1表达可能成为晚期前列腺癌治疗的新策略.     

干扰LINC00308促进miR-634对前列腺癌细胞增殖与凋亡的影响

【摘要】 目的 研究干扰长链非编码RNA（lncRNA）LINC00308是否通过促进微小RNA（miRNA） 634影响前列腺癌细胞的增殖与凋亡。 方法 实时荧光定量PCR（qRT PCR）检测前列腺癌组织中LINC00308的表达。利用LINC00308小干扰RNA（si LINC00308）转染前列腺癌细胞PC 3M和DU145，构建干扰LINC00308的细胞，采用qRT PCR检测LINC00308和miR 634的表达水平，流式细胞术评估细胞的周期与凋亡，蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞核相关抗原Ki67（Ki67）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Caspase3）蛋白的表达。starBase在线工具预测结合双荧光素酶报告实验分析LINC00308对miR 634的靶向调控。在PC 3M和DU145细胞中转染miR 634 mimic，利用上述方法检测miR 634在细胞增殖凋亡中的作用。 结果 前列腺癌组织中的LINC00308表达水平明显高于癌旁组织（P＜005）。干扰LINC00308显著提高PC 3M和DU145细胞的miR 634的表达水平、G0 G1期细胞比例、细胞凋亡率和Caspase3蛋白水平，明显降低S期细胞比例、Ki67蛋白水平（P＜005）。LINC00308靶向调控miR 634的表达。转染miR 634 mimic显著增加PC 3M和DU145细胞的G0 G1期细胞比例、凋亡率和Caspase3蛋白水平，明显减少S期细胞比例和Ki67蛋白水平（P＜005）。 结论 干扰LINC00308可以促进miR 634的表达，阻滞前列腺癌细胞周期，并诱导细胞凋亡。     

Polo-like激酶1在人类3种前列腺癌细胞株中的表达

目的检测Polo-like激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)在人类3种前列腺癌细胞株中的表达。方法采用RT-PCR和Western Blot方法检测人类前列腺癌细胞株LNCaP,DU145和PC3中PLK1 mRNA和蛋白的表达。结果在LNCaP,DU145和PC3中PLK1 mRNA均呈高表达,其PLK1/-actin比值分别为1.34,1.31,1.37;PLK1蛋白的表达水平有差异,Western Blot结果显示PLK1/-actin比值分别为1.17,0.83,0.76。结论mRNA水平上,PLK1在3种前列腺癌细胞中均呈高表达;蛋白水平上,PLK1的表达在不同前列腺癌细胞中存在差异。     

miR-221在前列腺癌细胞中的表达及对增殖的影响

目的研究前列腺癌细胞中miR-221的表达情况及其对癌细胞增殖的影响。方法运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-221在前列腺正常细胞株与前列腺癌细胞株中表达的差异情况,利用细胞转染构建miR-221过表达LNCa P和DU145细胞株,再通过CCK8细胞增殖实验检测细胞增殖情况的变化。结果 qRT-PCR检测细胞株发现miR-221在PC3、LNCa P和DU145三种前列腺癌细胞株中表达量均比前列腺正常细胞株Pr EC低(F=254.197,P<0.001),其中两两比较差异也均有统计学意义。细胞转染技术构建的miR-221过表达LNCa P和DU145细胞株,经qRT-PCR结果显示,miR-221在LNCa P和DU145细胞株中的表达水平明显升高(LNCa P,倍数变化=2.24,t=3.46,P<0.01;Du145,倍数变化=2.24,t=4.29,P<0.01)。细胞增殖实验结果显示,过表达了miR-221的LNCa P(P<0.001)和DU145(P<0.001)细胞生长速度慢于对照组。结论实验证明miR-221表达过度能减慢前列腺癌细胞的增殖,miR-221有可能成为前列腺肿瘤治疗的生物学标志物。     

DNA甲基化酶抑制剂对前列腺癌中XAF1 mRNA表达的影响

目的 探讨前列腺癌中XAF1mRNA表达及DNA甲基化抑制剂对其表达的影响.方法 培养前列腺癌细胞株LNCaP、DU145和PC3及肾癌细胞株A498,提取正常人外周血单核细胞(PBMC)、A498和PBMC用作阳性对照.搜集临床10例前列腺癌及邻近前列腺组织作对照.RT-PCR法检测各细胞株和正常人外周血单核细胞中XAF1 mRNA表达,甲基化特异性PCR法检测甲基化酶抑制剂(5'-aza)处理前后前列腺癌细胞株LNCaP、DU145中XAF1 mRNA表达.结果 LNCaP和DU145中XAF1 mRNA的表达水平低于肾癌细胞株A498,PC3中XAF1 mRNA不表达.8例患者中有6例XAF1 mRNA在癌组织中的表达低于邻近前列腺组织.使用5'-aza处理后的LNCaP和DU145中XAF1 mRNA均以全长形式表达.结论 XAF1mRNA在LNCaP和DU14中均为低表达,在PC3不表达.DNA 5'-aza可诱导前列腺癌细胞株中XAF1 mRNA的全长表达.     

过表达miR-140-5p促进前列腺癌细胞凋亡抑制其增殖

［摘要］ 目的研究miR-140-5p在前列腺癌细胞中的表达情况,探讨 miR-140-5p在前列腺癌细胞中的生物学功能。 方法RT-qPCR方法检测前列腺癌细胞株PC3细胞及DU145细胞中miR-140-5p表达;PC3细胞中转染miR-140-5p模拟物或抑制物,CCK-8及AnnexinV/PI双染流式细胞学检测细胞活力及细胞凋亡。TCGA数据库分析高表达miR-140-5p与前列腺癌患者总生存率的关系。 结果miR-140-5p在DU145及PC3细胞中的表达明显低于RWPE-1细胞,miR-140-5p在PC3细胞中的表达明显低于DU145细胞（P＜0.05）。转染miR-140-5p模拟物的 PC3细胞中miR-140-5p相对表达量明显高于阴性对照组（P＜0.05）。miR-140-5p的模拟物转染PC3细胞48 h,过表达组细胞增殖率低于阴性对照组,凋亡率高于阴性对照组（P＜0.05）。转染miR-140-5p抑制物的PC3细胞中miR-140-5p相对表达量明显低于阴性对照组（P＜0.05）。敲低miR-140-5p表达组细胞增殖率明显高于阴性对照组,凋亡率明显低于阴性对照组（P＜0.05）。低表达miR-140-5p组患者总生存率低于高表达miR-140-5p组患者（P＜0.05）。 结论miR-140-5p在前列腺癌细胞株低表达,低表达miR-140-5p前列腺癌患者预后不良;过表达miR-140-5p可促进前列腺癌细胞凋亡,抑制其增殖。