TA1、TA2近交系小鼠SPF级标准化研究

目的：人工培育无特定病原体（SPF）TA1，TA2小鼠。方法：在无菌条件下分别对TA1和TA2小鼠各3只进行剖腹产取出仔鼠，用SPF级BALB/C母鼠代乳饲养，对仔鼠进行标准化检测。结果：分别剖出TA1和TA2仔鼠15只（成活10只）和17只（成活15只），成活率分别为66.7%和88.2。对剖腹产小鼠进行病毒，细菌，寄生虫检测达到SPF级标准。结论：人工培育成功SPF级TA1，TA2标准化小鼠。     

C57BL／KsJ杂合仔小鼠的生物净化

目的应用腹宫产方法取得C57BL／KsJ仔鼠，用SPF级ICR小鼠代乳可达到生物净化。方法对妊娠20d左右的孕鼠在临产前进行剖宫手术再用SPF级ICR小鼠代乳，净化后的C57BL／KsJ杂合仔进行繁殖扩群，对后代进行微生物、寄生虫监测。结果剖腹净化的后代微生物、寄生虫检测符合清洁级国家标准，通过遗传繁殖测试，也符合该小鼠的生产繁殖规律。结论用SPF级ICR小鼠代乳净化C57BL／KsJ小鼠可以得到生物净化的目的，繁殖保持不变。     

利用CRISPR/Cas9系统快速建立APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病小鼠模型

目的利用CRISPR/Cas9系统构建APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病（AD）小鼠模型,为开展AD的病因治疗提供载体。方法采用CRISPR/Cas9系统,选择H11作为插入位点,将有活性的sgRNA、Cas9RNA和含有目标同源重组序列的载体显微注射入C57BL/6品系野生雌性小鼠的受精卵中,鉴定得到的F0代阳性小鼠再与C57BL/6野生小鼠交配,从而获得F1代小鼠。对鉴定得到的F1代杂合子小鼠,选择来自同一只F0代小鼠基因型一致的F1代杂合子小鼠,达到性成熟后进行同胞交配,获得F2代小鼠。采用PCR方法鉴定F2代小鼠的基因型结果,采用Westernblot检测APP和PS1在F2代小鼠脑组织中的蛋白表达水平。结果27只F2代小鼠经PCR鉴定基因型,5只F2代小鼠出现约344bp和608bp的目的基因条带,表明成功构建出转入APP和PS1基因的APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠。Westernblot检测显示APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠的APP和PS1的表达水平均明显高于同窝野生型小鼠。结论利用CRISPR/Cas9系统可成功构建APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠。     

人β2m转基因小鼠的制备、筛选及鉴定

目的:制备人β2m转基因小鼠,研究HLA-B2704的表达.方法:应用显微注射将人β2m基因注入C57BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵,出生动物及其后代经PCR筛选,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定和测定整合拷贝数,利用RT-PCR检测阳性鼠中人β2m转基因的表达.结果:6只原代仔鼠及7只它们的下一代(F1)带有人β2m基因.由微注射基因后移卵出生的86只小鼠中,C57BL/6×昆明鼠杂交仔鼠35只,其中4只阳性(11.4%),昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠51只,其中2只阳性(3.9%),含有人β2m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠20只,其中7只阳性.整合的转基因均为单拷贝.Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合.阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人β2m转基因mRNA的表达.结论:在转基因动物制备中,C57BL/6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代.与人HLA-B2704基因相比,人β2m基因不易整合,其整合率与整合拷贝数均较低.得到的人β2m转基因小鼠能够将人β2m基因传给下一代并可与人HLA-B2704转基因鼠交配.     

CRISPR/Cas9介导的小鼠BRCA1/BRCA2/CDH1基因乳腺特异性修饰研究

目的应用CRISPR/Cas9系统构建BRCA1、BRCA2和CDH1三基因乳腺特异性修饰小鼠模型。方法针对小鼠BRCA1、BRCA2和CDH1基因分别设计并合成sgRNA,构建p X330-sp Cas9-U6-gRNA共表达载体,将共表达载体中CBh启动子替换为乳腺组织特异性启动子WAP。利用小鼠受精卵原核注射的方法制备转基因小鼠。结果共注射受精卵190枚,得到活性受精卵130枚,移植4只受体鼠。产下F0代仔鼠42只,鉴定出11只转基因阳性小鼠,阳性率为26.19%。F0代阳性鼠繁育后得到39只F1代仔鼠,其中9只为F1代转基因阳性鼠。结论通过构建乳腺组织特异表达Cas9载体成功制备了转基因阳性鼠。     

庚型肝炎病毒全基因转基因小鼠的制备与遗传

目的：利用显微注射方法产生整合庚型肝火病毒（HGV）全基因的转基因小鼠，并研究HGV基因的遗传特性。方法：将含有HGV全长基因的载体线性化后，将目的基因DNA溶于显微注射用缓冲液，依常规方法进行显微注射，得到仔鼠后用PCR及基因组DNA Southern印迹法鉴定。阳性小鼠即为建立者（founder)上鼠，将founder小鼠与正常小鼠交配得到1代小鼠，随后将F1代阳性鼠与正常小鼠交配得到F2代小鼠。结果：共得到5只founder小鼠，其中4只与正常小鼠交配，得到F1代小鼠共41只，其中29只为阳性，阳性率为71％。F2代小鼠共21只，其中16只为阳性，阳性率为76％。结论：得到了整合有HGV全长基因的转基因小鼠，并证明HGV基因可以在转基因小鼠体内稳定传递。     

APPswe/PS1dE9转基因小鼠繁殖性能及生长发育观察

目的 为建立阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9转基因小鼠生物学特性标准化资料提供实验依据.方法 APPswe/PS1dE9转基因小鼠杂合子交配繁殖,建立基因型鉴定方法,选择160窝次的1158只小鼠分别统计4胎内不同胎次、不同基因型的繁殖性能及生长发育指标.结果 ①APP/PS1片段大小为600 bp;②第2胎和第3胎的仔鼠数量及阳性数量均大于第1胎(P＜0.05),阳性率则无明显差异(P＞0.05);③第1、2胎之间的胎间隔天数较短(P＜0.05),第2、3胎的窝产仔数、离乳仔数及离乳率均高于其它两胎(P＜0.05);④第3胎和第4胎的初生窝重、泌乳力和离乳个体重较为稳定;⑤雌雄APP/PS1小鼠的最高体重分别为24.45±0.92 g和30.21±2.53 g;⑥该转基因小鼠的基因型不影响其体重(P＞0.05).结论 建立了APP/PS1小鼠的基础生物学特性资料;为科学研究提供基础数据     

使用超净工作台实施子宫摘除术净化KM小鼠的研究

目的建立SPF级湖北封闭群KM小鼠生产群.方法使用超净工作台实施子宫摘除术净化小鼠的方法,建立了SPF级湖北封闭群KM小鼠生产群,并对子一代进行了微生物及寄生虫的检测.结果使用上述方法实施手术67例,成功57例,得净化仔鼠509只,育成的460只小鼠符合SPF级标准.结论使用生物净化的方法可以保存优良实验动物品种.     

剖宫产与体外授精技术在小鼠生物净化中的应用

目的 采用剖宫取胎和体外受精对微生物级别达不到SPF级的小鼠进行生物净化.方法 对于具有正常繁殖能力的小鼠品系,通过对阴道栓的检查和触诊确定剖宫产取胎时间,采用子宫摘除手术对小鼠进行剖宫产,取出仔鼠用SPF级受体母鼠代乳,观察代乳情况及代乳仔鼠成活率;对于繁殖力较差或者丧失繁殖能力的品系,采取辅助生殖的方式,采集小鼠精子和卵子,在HTF液中受精,培养3.5 d后的胚胎移植到SPF级受体母鼠子宫内,待产仔.结果 两种方式净化的小鼠断奶后进行微生物检测,均达到SPF级.结论 对微生物级别达不到SPF级但不含垂直传播病原体的小鼠,采用两种方式可有效提高小鼠的微生物等级.     

蝇蛆卵蛋白粉对KM小鼠繁殖性能及仔鼠生长发育的影响

目的 研究含蝇蛆卵蛋白粉饲料对KM小鼠繁殖性能及其胎仔生长发育的影响.方法 记录妊娠鼠、仔鼠生理变化指标,采用修订Fox方案检测各项生长发育指标.结果 不同组别妊娠小鼠体质量增加无显著差异(P＞0.05);初生仔鼠数、窝重、平均体质量及各组间仔鼠平均体长、尾长均无显著差异(P＞0.05).不同饲料组仔鼠离乳前窝重、仔鼠离乳后体质量变化和食物利用率均无显著差异(P＞0.05);不同饲料组仔鼠躯体/生理发育指标:耳廓分离、睁眼、张耳和出毛时间无显著差异(P＞0.05),但雌性仔鼠阴道开口和雄性仔鼠睾丸下降较基础饲料组要早(P＜0.01).结论 含蝇蛆卵蛋白粉饲料能够满足SPF级KM小鼠生长发育的需要.     

先天性心脏病术后对妊娠结局的影响

目的探讨妊娠合并先天性心脏病手术后对妊娠结局的影响。方法回顾性分析50例妊娠合并先天性心脏病患者的临床资料。结果①妊娠合并先天性心脏病患者以房间隔缺损和室间隔缺损为主,占48．0％（24／50）。②手术组与未手术组比较,心功能Ⅲ～Ⅳ级与肺动脉高压的发生率降低（P〈0．05）;3例心力衰竭均发生在未手术组,死亡1例;手术组无早产与围产儿死亡,而未手术组早产4例（26．7％）,1例死亡。③妊娠合并先天性心脏病分娩方式以剖宫产为主（72．0％）,手术组与未手术组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论妊娠合并先天性心脏病确诊后宜尽早手术治疗,术后可降低母儿的发病率及死亡率;剖宫产终止妊娠是比较安全的分娩方式。     

剖宫产术后再次妊娠158例分娩方式临床分析

目的:探讨剖宫产术后再次妊娠者的合理分娩方式.方法:对我院2000年10月～2010年10月158例剖宫产术后再次妊娠者(观察组)的分娩方式、分娩结局及母婴并发症进行回顾性分析,其中115例再次剖宫产者作为观察组1,43例剖宫产术后阴道分娩者作为观察组2;选取周期158例宫产术后首次妊娠作为对照组,其中115例首次剖宫...     

281例剖宫产导尿后尿路感染与产程的关系

目的分析剖宫产导尿后尿路感染与产程的关系,为临床预防及治疗提供依据。方法对2002年4月至2008年12月本院剖宫产患者导尿后发生的尿路感染进行统计分析。结果剖宫产15 875例,导尿后尿路感染281例,尿路感染率为1.77%。择期剖宫产组患者（A组）尿路感染率为0.72%,临产后宫口开大3 cm之前剖宫产组（B组）为1.29%,宫口开大3 cm-8 cm剖宫产组（C组）为1.76%,宫口开大8 cm以后剖宫产组（D组）为3.18%。随着产程的进展,尿路感染发生率显著增高（P〈0.05）。结论剖宫产导尿后尿路感染的发生与产程有关,产程末期导尿后尿路感染率高。     

先天性心脏病术后对妊娠结局的影响

目的探讨妊娠合并先天性心脏病手术后对妊娠结局的影响。方法回顾性分析48例妊娠合并先天性心脏病患者的临床资料。结果 （1）妊娠合并心脏病患者以先天性心脏病居多（55.8%）,类型以房间隔缺损和室间隔缺损为主（45.8%）。（2）手术组与未手术组比较,心功能Ⅲ～Ⅳ级与肺动脉高压的发生率降低（P〈0.05）;3例心衰均发生在未手术组,死亡1例;手术组无早产与围产儿死亡,而未手术组早产4例（26.7%）,1例死亡。（3）妊娠合并先天性心脏病分娩方式以剖宫产为主（79.2%）,手术组与未手术组比较,差别无统计学意义。结论妊娠合并先天性心脏病确诊后宜尽早手术治疗,术后再妊娠可降低母儿的发病率及死亡率;剖宫产终止妊娠是比较安全的分娩方式。     

剖宫产术后子宫瘢痕妊娠的诊治进展

剖宫产术后子宫瘢痕妊娠是一种罕见的异位妊娠,近年来随着剖宫产率的增加,发病率也呈逐年增长的趋势,该病发病机制迄今尚未阐明,诊断方面尚无统一标准,误诊率高,临床治疗也尚存争议。现就其诊断与治疗的研究进展作一综述。     

Caesarean section for the dead baby--an unhappy reality

Caesarean section for the dead baby is sometimes still needed to prevent maternal complications. The objective of the study is to critically analyse the characteristics of the mother and indications for the operation in women who delivered stillbirths following caesarean section. The study period covered a 2 years span from January, 2003 to December, 2004. During this time 121 mothers (study group) underwent caesarean section for the dead baby representing 1.41% of all caesarean section operations done in the hospital. The study group was compared to the overall caesaren section done during the two years in relation to parity (parous 77.7% versus 45.7%), type of caesarean section (emergency 83.5% versus 69.8%) and timing of caesarean section within 12 hours of admission (74.4% versus 50.2%). Common indications in the study group included antepartum haemorrhage (31.4%), malpresentation (19.0%), postcaesarean pregnancies (16.5%), obstructed labour (15.7%), foetal distress (9.9%), second twin (4.1%) and eclampsia (3.3%). In some indications like obstructed labour and malpresentation, abdominal deliveries could be reduced by more destructive operations. The maternal reasons for resorting to caesarean section to save maternal lives are understandable. But caesaren section done for foetal distress was a disturbing revealation.     

小鼠2细胞期胚胎移植方法的探讨

目的以近交系C57BL/6J小鼠作为供体胚小鼠，封闭群ICR小鼠及昆明鼠作为假孕体，对2细胞期的胚胎移植方法和假孕鼠品系进行对比探讨。方法经超数排卵的C57BL/6J雌鼠于正常雄鼠交配，取受精卵，培养到2细胞期，进行输卵管伞移植和输卵管壁移植，妊娠产仔。结果从KM为假孕鼠，对2细胞期胚胎进行的输卵管壁移植的妊娠数量最多18只，90%的妊娠率，产仔数最多188只，产仔率达34.8%。结论输卵管壁移植的技术简单易行具有较高的妊娠率及产仔率。     

Induction of Silencing Effect of Swedish Mutant Amyloid Precursor Protein by RNA interference

RNA interference (RNAi), as a novel technique of si- lencing genes, brings thrilling breakthrough in Alzheimer disease (AD) research. As a precursor of abnormally elevated Aβ, mutated APP is selectively inactivated by siRNA while wild type APP protein remains unaffected. Therefore, siRNA brings hope to gene therapy of familial AD (FAD) and further study of AD etiology. In order to observe the siRNA triggered silencing effect of APP, we constructed a green fluorescence protein (G…     

焦虑和抑郁对分娩方式的影响和分析

目的研究产妇精神状态（焦虑和抑郁）与分娩方式的关系，探讨焦虑和抑郁发生的社会相关因素，经上述研究为产前、产时实施心理护理提供依据。方法对392例健康产妇以焦虑自评量表和抑郁自评量表评定精神状态。所有产妇以产科常规、家属陪伴进行分娩而不进行干预，观察其分娩方式；按分娩方式分为顺产组、产钳助产组和剖宫产组。采用SPSS软件进行统计学分析，方差分析和q检验、卡方检验及卡方趋势检验。结果392例产妇中存在心理障碍的占57．40％，其中焦虑发生率为19．89％，抑郁发生率为21．56％，焦虑并抑郁发生率为14．03％。剖宫产组、产钳助产组的焦虑评分及抑郁评分明显高于正常产组，而且焦虑和抑郁的发生随年龄增大、学历增高而增加。结论焦虑和抑郁状态是增加手术助产率的一个显著因素，焦虑和抑郁的发生与年龄、文化程度等社会因素相关。     

剖宫产术后高危妊娠药物流产临床分析

目的：探讨剖宫产术后高危妊娠药物流产现状,及产后避孕的有效方法。方法回顾性分析2012年1月至2013年12月北京妇产医院150例住院行药物流产＋B超下清宫术的剖宫产术后患者的临床资料。结果米非司酮配合卡前列甲酯流产成功率为98.0%,流产中平均出血量为（36.5±10.3）ml,平均住院时间为（4.3±1.2）d,无明显并发症发生。不同剖宫产次数患者文化程度及避孕情况的差异无统计学意义（P〉0.05）;但不同剖宫产次数患者本次妊娠距离末次剖宫产时间的差异有统计学意义（P〈0.01）,1次剖宫产术后患者发生再次妊娠时间明显短于≥2次剖宫产术后患者。不同剖宫产次数患者再次妊娠流产时间的差异无统计学意义（P〉0.05）;但不同剖宫产次数患者再次妊娠流产中出血量的差异有统计学意义（P〈0.05）,≥2次剖宫产术后再次妊娠患者流产中出血量明显增加。结论米非司酮配合卡前列甲酯结合B超下清宫术是终止剖宫产术后高危妊娠的有效方法;呼吁医疗机构大力宣传剖宫产术后避孕知识,落实科学有效的避孕方法。