miR-26a下调TET抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭

目的探讨TET对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的作用及其调控机制。方法siRNA敲低宫颈癌HeLa细胞中TET的表达。细胞计数法、克隆形成实验、Transwell侵袭实验检测TET对宫颈癌HeLa细胞增殖、克隆形成及侵袭能力的影响。TargetScan软件预测TET与miR-26a之间的结合位点,qRT-PCR和双荧光素酶报告基因实验检测TET与miR-26之间的关系。结果TET敲低抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、克隆形成及侵袭能力。经预测miR-26a与TET1、TET2和TET3之间均存在结合位点;共转染野生型TET和miR-26a模拟物可降低荧光素酶活性;转染miR-26a抑制HeLa细胞中TET的表达。结论miR-26a通过下调TET1、TET2和TET3的表达而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭能力。     

lncRNA MNX1-AS1通过调控miR-218-5p影响非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡及迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MNX1-AS1通过调控miR-218-5p的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法qRT-PCR检测MNX1-AS1和miR-218-5p在肺癌细胞系及肺正常上皮细胞系中的表达;采用双荧光素酶报告基因实验和RNA pull down实验验证MNX1-AS1和miR-218-5p之间的靶向关系;干扰A549细胞中MNX1-AS1和miR-218-5p的表达后,MTT、流式细胞术和Transwell实验检测MNX1-AS1靶向miR-218-5p对癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果与肺正常上皮细胞系相比,肺癌细胞系中MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低(P＜0.05);荧光素酶报告基因实验显示,MNX1-AS1可与miR-218-5p结合导致荧光素酶活性显著降低(P＜0.05);RNA pull down实验证实miR-218-5p能特异性结合MNX1-AS1(P＜0.05);抑制A549细胞中MNX1-AS1的表达后,miR-218-5p水平上调,细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低,凋亡率显著升高;与MNX1-AS1抑制剂组相比,共抑制MNX1-AS1和miR-218-5p的细胞增殖、迁移、侵袭能力升高,凋亡率下降(P＜0.05)。结论MNX1-AS1可以通过靶向下调miR-218-5p的表达影响非小细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。     

长链非编码RNA DLX6-AS1通过靶基因miR-103a-3p调控宫颈癌SiHa细胞的分子机制

【摘要】 目的 探讨长链非编码RNA DLX6-AS1通过靶基因miR-103a-3p调控宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。 方法 培养正常宫颈细胞Ect1/E6E7和宫颈癌细胞株HeLa、SiHa、C33a、Caski。将SiHa随机分为对照（NC）组、si-con组、si-DLX6-AS1组、PCDNA组、PCDNA-DLX6-AS1组、miR-con组、miR-103a-3p组、si-DLX6-AS1+anti-miR-con组、si-DLX6-AS1+anti-miR-103a-3p组。RT-qPCR检测各组细胞中miR-103a-3p和 DLX6-AS1表达水平;蛋白质印迹（Western Blot）法检测蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测 DLX6-AS1和miR-103a-3p的靶向关系。 结果 与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞HeLa、SiHa、C33a、Caski中DLX6-AS1表达水平升高,miR-103a-3p表达水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。干扰DLX6-AS1表达或miR-103a-3p过表达后,细胞活性降低,细胞凋亡率升高,迁移、侵袭数量减少,CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平降低,Bax、Cleaved caspase-3表达水平升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。同时抑制miR-103a-3p和DLX6-AS1表达后,宫颈癌SiHa中MMP-2、MMP-9、CyclinD1、Bcl-2表达水平升高,Bax、Cleaved caspase-3表达水平降低,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。DLX6-AS1靶向调控miR-103a-3p的表达。 结论 干扰 DLX6-AS1表达可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-103a-3p表达有关,可能为宫颈癌的治疗提供新思路和新靶点。     

长链非编码RNAST7-AS1靶控miR-580-3p对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响研究

目的探讨长链非编码RNAST7-AS1对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及与其与miR-580-3p的调控机制。方法选取2019年6月至2021年6月绍兴市人民医院30例卵巢癌患者手术切除的上皮性卵巢癌（EOC）组织及配对的癌旁正常组织。采用荧光实时定量PCR（RT-qPCR）检测EOC及癌旁正常组织ST7-AS1表达水平;小干扰RNA（siRNA）转染技术下调卵巢癌A2780细胞株中ST7-AS1的表达水平,将细胞分为si-ST7-AS1组和si-NC组。CCK-8法检测两组细胞的增殖能力,Transwell迁移及侵袭实验检测两组细胞的迁移及侵袭能力。双荧光素酶报告试验验证ST7-AS1靶控miR-580-3p。RT-qPCR检测si-ST7-AS1组和si-NC组细胞miR-580-3p表达水平。结果与癌旁正常组织相比,EOC组织中ST7-AS1表达水平升高（P＜0.05）。si-ST7-AS1组卵巢癌细胞ST7-AS1表达水平明显低于si-NC组（P＜0.05）,即转染成功。Si-ST7-AS1组细胞的增殖、迁移及侵袭能力均较si-NC组明显减弱（均P＜0.05）。ST7-AS1靶向调控miR-580-3p,卵巢癌A2780细胞抑制ST7-AS1表达后miR-580-3p表达水平升高（P＜0.05）。结论ST7-AS1在EOC组织中表达水平较癌旁正常组织升高,其可能通过负性调控miR-580-3p促进卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为。     

TNF-α诱导的circMAN1A2促进宫颈癌细胞的迁移、侵袭和增殖

目的:探讨肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导的circMAN1A2对宫颈癌细胞恶性行为的影响。方法:RNA高通量测序检测TNF-α处理后人宫颈癌HeLa细胞中circRNA的表达差异性。RT-qPCR方法验证TNF-α对circMAN1A2的影响。RNase R耐受性实验验证circMAN1A2是否耐受RNase R消化。核质RNA分离实验研究circMAN1A2在HeLa细胞的定位;Transwell迁移侵袭实验、MTT实验、集落形成实验研究circMAN1A2对宫颈癌细胞恶性行为的影响。结果:RNA高通量测序检测到98种表达上调和63种表达下调的circRNA。TNF-α处理后circMAN1A2表达上调,其能够耐受RNase R消化,主要定位于HeLa细胞胞核中。细胞功能实验表明circMAN1A2能够促进宫颈癌细胞的迁移、侵袭和增殖。结论:TNF-α诱导的circMAN1A2促进宫颈癌细胞的迁移、侵袭和增殖。     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。     

miR-3685通过靶向CTTN抑制宫颈癌细胞的迁移、侵袭及生长

目的:微小RNA (microRNA,miRNA)通常通过与其靶基因的3′非翻译区（3′UTR）结合而调控肿瘤细胞的恶性行为,目前miR-3685对肿瘤细胞恶性行为的影响鲜有报道,本文旨在探讨miR-3685对宫颈癌细胞恶性行为及其分子机制的影响。方法:生物信息学软件预测miR-3685的靶基因,用EGFP报告系统验证。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测miR-3685和CTTN(cortactin)在人类宫颈癌细胞中的表达,用transwell迁移/侵袭实验、Western blot实验、集落形成实验、细胞周期进程实验分别检测了miR-3685和CTTN对HeLa细胞和SiHa细胞的迁移、侵袭能力、EMT进程、细胞增殖能力及细胞周期进程的影响。结果:与对照组相比,过表达miR-3685可抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的迁移、侵袭及生长,封闭miR-3685,得到相反的结果。过表达CTTN可促进宫颈癌HeLa和SiHa细胞的迁移、侵袭及生长,EGFP报告系统验证CTTN是miR-3685的直接靶基因（*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001）。结论:miR-3685通过抑制CTTN的表达而抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的迁移、侵袭及生长。     

lncRNA THAP9-AS1靶向miR-577调控结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)THAP9反义RNA1(THAP9-AS1)对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法收集苏州市立区院东区2017-2019年手术切除并经病理证实的结直肠癌组织标本30例,所有患者术前未接受过放化疗,另取距离癌组织边缘5 cm处的正常组织作为对照。将si-NC、si-THAP9-AS1、miR-NC、miR-577分别转染至SW620细胞中,分别记为si-NC组、si-THAP9-AS1组、miR-NC组、miR-577组;将siTHAP9-AS1分别与anti-miR-NC、anti-miR-577共转染至SW620细胞中,分别记为si-THAP9-AS1+anti-miR-NC组、siTHAP9-AS1+anti-miR-577组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA THAP9-AS1和miR-577表达水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA THAP9-AS1和miR-577的靶向关系。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织中THAP9-AS1表达水平显著升高,miR-577表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。抑制lncRNA THAP9-AS1表达或过表达miR-577,结直肠癌细胞SW620中细胞活性显著降低,细胞迁移、侵袭数显著降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,p21表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。lncRNA THAP9-AS1靶向调控miR-577的表达;干扰miR-577表达逆转了抑制lncRNA THAP9-AS1表达对结直肠癌SW620细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 lncRNA THAP9-AS1通过下调miR-577抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的：探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法：采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果：与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<...     

miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响

  目的  探讨miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响。  方法  将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、mimic-NC组、miR-503-5p mimic组、E2F3组、mimic+E2F3组,并通过Lipofectamine 2000将质粒分别或者联合转染进入各组HeLa细胞,运用基因预测软件预测靶基因,荧光素实验验证靶向关系,RT-PCR检测miR-503-5p和E2F3的表达,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、E-cadherin和N-cadherin的表达,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。将裸鼠分为对照组和miR-503-5p mimic组,在裸鼠右后肢腹侧皮下分别注射0.2 mL转染mimic-NC或miR-503-5p mimic的宫颈癌HeLa细胞悬液,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,测量肿瘤质量,并用免疫组化方法检测肿瘤组织中Ki67和Vimentin表达情况。  结果  宫颈癌HeLa细胞中miR-503-5p的表达量明显下调,miR-503-5p与E2F3在3′UTR区存在结合位点, miR-503-5p直接靶向作用于E2F3,过表达miR-503-5p抑制E2F3表达; miR-503-5p过表达降低细胞生长速度、Ki67和PCNA表达量,减少侵袭细胞数目,增宽划痕、降低愈合率,上调E-cadherin表达、下调N-cadherin表达（P<0.01）;miR-503-5p过表达减小移植瘤体积、减轻移植瘤重量,减少Ki67和Vimentin的阳性所占比率（P<0.01）。  结论  miR-503-5p通过靶向调控E2F3抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化。