同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1-Parkin通路在过敏性鼻炎中的作用机制

[目的]探讨同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1(PINK1)-Parkin通路在卵清蛋白（OVA）所致过敏性鼻炎（AR）中的作用机制.[方法]选择雌性BALB/c小鼠随机分为对照组和模型组，采用OVA致敏（25μg OVA）和激发（100μg OVA）的方法建立AR小鼠模型，在激发期间观察并记录两组小鼠的打喷嚏和挠鼻次数.采用HE染色方法观察鼻黏膜上皮细胞的形态和嗜酸性粒细胞的浸润情况;采用Western blot法检测两组小鼠鼻黏膜组织中PINK1、Parkin和线粒体凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Caspase-3的表达水平.[结果]与对照组比较，模型组小鼠打喷嚏和挠鼻次数明显增多（P<0.05），鼻黏膜下炎性细胞浸润明显，鼻黏膜组织中PINK1、Parkin和促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达均显著升高，Bcl-2表达显著降低.[结论]P INK1-Parkin信号通路可能改善AR小鼠鼻黏膜组织的炎症反应，抑制炎症细胞因子的表达，对AR具有保护作用.     

心理应激诱导ROS产生在食管上皮细胞间隙增宽发生中的作用机制

目的 建立小鼠慢性束缚应激(Stress)模型,探讨心理应激诱导活性氧(ROS)介导的食管紧密连接(TJ)蛋白表达以及在细胞间隙增宽(DIS)发生中的影响。方法 20只雄性SPF级昆明小鼠随机分两组(每组10只),即慢性束缚应激(Stress)组和正常对照(Control)组。Stress组小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2h,其余时间两组小鼠在相同环境中自由饮水摄食,实验持续14天。通过HE染色在光学显微镜下观察食管上皮组织病理学改变并进行间距测量。采用免疫组化方法检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox-4)在小鼠食管中的表达,进一步通过酶联免疫吸附(ELISA)、蛋白质印迹(WB)法检测Nox-4蛋白表达量,并通过实时定量RT-PCR法检测食管组织中ROS指标(Nox-4、8-OHdG、MDA)、抗氧化蛋白(Nrf-2、HO-1)及TJ蛋白重要指标(Claudin-1、Claudin-4、Occludin、ZO-1)mRNA的表达量。结果 与Control组小鼠比较,Stress组小鼠体质量增加量低于Control组(7.95±2.45 vs 11.32±2.23),差异有统计学意义(t=3.78,P＜0.01)。两组小鼠光镜下测量的平均细胞间隙分别为Control组0.71±0.18μm、Stress组1.18±0.12μm,与Control组比较,Stress组小鼠上皮细胞间距明显增宽,差异有统计学意义(P=0.000)。免疫组化结果显示,Nox-4主要表达于食管固有层、黏膜及黏膜下层,Stress组Nox-4阳性表达显著高于Control组。Stress组小鼠食管黏膜中Nox-4 mRNA相对表达水平是Control组的2.36±0.34倍,而Stress组血清Nox-4的释放浓度是Control组的2.25±0.27倍以上,差异有统计学意义(t=-11.56,P=0.000)。ELISA实验结果显示,Stress组小鼠8-OHdG(3.95±0.25 vs 1.65±0.38)和MDA(0.95±0.01 vs 2.48±0.20)的血清表达水平显著高于Control组,差异有统计学意义(t=-23.45,P=0.000)。抗氧化蛋白的RT-PCR实验结果显示,Stress组Nrf-2,HO-1的mRNA转录水平明显低于Control组的1.82±0.35倍,差异有统计学意义(t=-8.25,P=0.000);蛋白质印迹法检测显示,Stress组小鼠食管组织中Nrf-2、HO-1蛋白表达水平显著低于Control组。食管上皮组织TJ蛋白重要指标的RT-PCR实验结果显示,Stress组TJ蛋白Claudin-1、Claudin-4、Occludin及 ZO-1的 mRNA转录水平显著降低,分别是Control组的1.67±0.28、1.54±0.22、1.85±0.35、1.74±0.42倍,差异有统计学意义(t=-8.34、-14.78、-17.63、-12.27,P=0.000)。结论 心理应激可能直接通过破坏食管氧化/抗氧化系统平衡,引起TJ蛋白的表达异常以及DIS的产生。     

PI3K通路在抗NMDAR脑炎小鼠紧密连接和大脑功能障碍中的作用研究

目的：通过检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）对抗N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）脑炎小鼠紧密连接蛋白Occludin、Claudin-5和神经元核心抗原（NeuN）表达的影响，探讨抗NMDAR脑炎小鼠脑损伤的分子机制。方法：采用多肽主动免疫法建立抗NMDAR脑炎小鼠模型。将小鼠随机分成对照组、模型组、模型+8 mg/kg LY294002组和模型+16 mg/kg LY294002组。各组均进行神经功能缺损评分，采用荧光素钠法测定各组血脑屏障（BBB）通透性；应用蛋白免疫印迹法（western blotting）检测蛋白Occludin、Claudin-5和NeuN的表达；采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测Occludin、Claudin-5 mRNA水平；同时通过免疫组织化学法分析NeuN在脑组织中的表达情况。结果：与对照组比较，模型组小鼠短期和长期神经功能评分下降，Occludin、Claudin-5、NeuN表达水平显著降低（P<0.05）,BBB通透性增加；PI3K抑制剂LY294002改善了抗NMDAR脑炎小鼠的神经功能，并减少了Occludin、Cl...     

探讨益气温阳方抑制变应性鼻炎小鼠鼻黏膜细胞自噬及保护ZO-1及occludin的作用

目的 观察益气温阳方(黄芪、党参、干姜、桂枝、麻黄、辛夷、五味子、地龙、甘草)对变应性鼻炎小鼠模型的治疗效果和对鼻黏膜细胞抑制自噬、保护紧密连接关键蛋白——闭锁连接蛋白1(ZO-1)及闭合蛋白(occludin)的影响。方法 将30只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为6组：空白组,模型组,益气温阳方低、中、高剂量组(7、14、28 g/kg)及西替利嗪组(1.667 mg/kg),每组5只。卵清蛋白腹腔注射加鼻部激发致敏造模,鼻部激发致敏前1 h灌胃给药,共7 d。对小鼠行为进行评分。采集小鼠鼻黏膜组织,HE染色观察鼻黏膜炎症反应,过碘酸希夫染色观察鼻黏膜杯状细胞增生情况,酶联免疫吸附测定法检测鼻腔灌洗液IgE含量,免疫组化法检测空白组、模型组、益气温阳方高剂量组鼻黏膜中ZO-1及occludin蛋白表达,蛋白质印迹法检测鼻黏膜中自噬微管相关蛋白轻链β3(LC3B)、P62及Beclin1蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠行为学总分升高(P<0.01),挠鼻、喷嚏、流涕各项评分增加。鼻黏膜上皮中断、被破坏,大量炎性细胞浸润,杯状细胞增生,黏液分泌增多,黏膜肿胀明显,鼻腔...     

慢病毒介导的Jagged1 RNA干扰通过抑制肥大细胞的迁移、浸润和脱颗粒减轻变应性鼻炎小鼠的炎症

目的 探究慢病毒介导的Jagged1 RNA干扰通过抑制肥大细胞的迁移,浸润和脱颗粒对变应性鼻炎小鼠炎症的影响。方法 32只BALB/c小鼠随机分为4组:对照组、AR组、sh-NC组和sh-Jagged1组,每组各8只。卵清蛋白(OVA)联合氢氧化铝制备变应性鼻炎小鼠。RT-PCR检测小鼠Jagged1 mRNA表达;Western blot法检测小鼠Jagged1蛋白表达;鼻部症状评分评估小鼠变应性鼻炎症状;ELISA检测小鼠组胺、类胰蛋白酶、前列腺素D2(Prostaglandin D2)和IgE含量;HE染色观察鼻黏膜病理学变化;电子显微镜观察小鼠鼻黏膜纤毛结构变化;甲苯胺蓝染色观察小鼠鼻黏膜肥大细胞浸润。结果 与对照组比较,AR组和sh-NC组小鼠的Jagged1表达、症状评分升高和IgE表达升高(P＜0.01)。与sh-NC组比较,sh-Jagged1组小鼠Jagged1表达、症状评分降低和IgE表达降低(P＜0.01)。与对照组比较,AR组和sh-NC组小鼠的鼻中隔黏膜基膜破碎,黏膜下血管出现明显扩张、充血现象,炎性细胞浸润和肥大细胞数量增加(P＜0.01),纤毛大面积减少、排列紊乱,组胺、类胰蛋白酶和PGD2水平明显升高(P＜0.01)。sh-Jagged1可改善AR小鼠鼻黏膜和纤毛损伤,抑制炎性细胞浸润、肥大细胞数量、组胺、类胰蛋白酶和PGD2水平(P＜0.01)。结论 慢病毒介导的sh-Jagged1通过抑制肥大细胞的迁移,浸润和脱颗粒减轻变应性鼻炎小鼠炎症。     

烟曲霉菌损伤鼻上皮功能致慢性鼻窦炎的研究

目的 建立慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)的小鼠模型,并探讨紧密连接蛋白在烟曲霉菌致慢性鼻窦炎中的作用。方法 8周大BALB/c雄鼠10只腹腔致敏及鼻腔滴注烟曲霉菌提取物(鼻窦炎组),建立慢性鼻窦炎的动物模型。10只对照组小鼠腹腔注射及鼻腔滴注等量无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)。组织病理学切片检测鼻黏膜组织变化,免疫组化染色比较紧密连接蛋白在两组表达的差异。结果 与对照组小鼠比较,鼻窦炎组小鼠鼻黏膜纤毛柱状上皮结构紊乱,呈波浪状改变,杯状细胞增生,黏膜下组织肿胀,伴有炎性粒细胞浸润和腺体增殖,且鼻上皮细胞紧密连接蛋白的表达量明显低于对照组。结论 本研究通过腹腔致敏及鼻腔滴注烟曲霉菌提取物的方式建立了慢性鼻窦炎的小鼠模型,烟曲霉菌提取物可能通过破坏鼻上皮间紧密连接蛋白致小鼠鼻腔鼻窦炎症改变。     

腺苷A2A受体在慢性间歇低氧小鼠空间记忆损害中的作用

目的 探讨腺苷A2A受体(A2A receptor,A2AR)在慢性间歇低氧所致小鼠记忆损害中的作用及机制。方法 取42只清洁级健康雄性C57BL/6小鼠,随机分为空白对照组、空气模拟对照组、慢性间歇低氧模型组(模型组)、模型组+A2AR激动剂CGS21680组(A2AR激动剂组)、模型组+A2AR抑制剂SCH58261组(A2AR抑制剂组)、模型组+A2AR基因敲除组(A2AR敲除组)及模型组+DMSO溶剂对照组(溶剂对照组),每组6只。采用八臂迷宫测试各组幼鼠参考记忆错误、工作记忆错误及总错误数,尼氏染色法观察并计算海马CA1区神经元数量,膜片钳技术进行海马CA3-CA1区神经元长时程增强重要参数场兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potential, fEPSP)的测定,蛋白免疫印迹法检测海马突触融合蛋白syntaxin表达水平。结果 与对照组比较,模型组参考记忆错误、工作记忆错误及总错误次数均升高(P＜0.01),fEPSP斜率及syntaxin蛋白水平下降(P均＜0.01);与模型组比较,A2AR抑制剂组、A2AR基因敲除组参考记忆错误、工作记忆错误及总错误次数减少(P＜0.05),fEPSP斜率及syntaxin蛋白水平升高(P均＜0.05),A2AR激动剂组参考记忆错误、工作记忆错误及总错误次数增多(P＜0.01),fEPSP斜率及syntaxin蛋白水平下降(P均＜0.05)。结论 慢性间歇低氧可通过激活腺苷A2AR,导致海马CA3-CA1区神经元突触可塑性降低,造成小鼠空间记忆损害;敲除或抑制腺苷A2AR可改善海马神经元突触可塑性,减轻小鼠记忆损害。     

嗜铬粒蛋白A衍生多肽CHR抑制LPS诱导的永生化脑微血管内皮细胞高通透性

目的 探讨嗜铬粒蛋白A衍生多肽CHR (chromofungin)对LPS所诱导的永生化人脑微血管内皮细胞高通透性的影响.方法 分别用LPS、CHR、CGA4-16作用于人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC),用CCK8法检测不同浓度LPS刺激HBMEC细胞活力变化;EVOM法及Transwell小室法检测内皮细胞相对通透性;Western blot及RT-PCR法检测紧密连接蛋白(ZO-1和Claudin-5)的表达情况.结果 与空白组相比,随着LPS浓度增加,HBMEC细胞的活性受到显著抑制(P＜0.05).随着LPS作用时间延长,其细胞内紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5的表达逐渐下调,6h后蛋白表达量降到最低(P＜0.05),12 h和24 h后其蛋白表达与6h相比无明显差异.LPS作用下HBMEC单层细胞电阻值明显降低(t=-18.214,P＜0.001),细胞通透性显著升高(t=6.083,P =0.004),ZO-1、Claudin-5的蛋白和mRNA表达明显下调(P＜0.05),而CHR可显著改善上述变化.结论 嗜铬粒蛋白A衍生多肽CHR能通过上调紧密连接相关蛋白的表达从而改善LPS所致的脑微血管内皮细胞高通透性.     

慢病毒介导PDIA3过表达对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障的影响及其机制

目的 探讨蛋白质二硫键异构酶A3(PDIA3)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的保护作用及其可能机制.方法 将60只C57BL/6小鼠随机分成正常对照组(Control组)、模型组(Model组)、空载慢病毒组(Lv-NC组)和PDIA3过表达慢病毒组(Lv-PDIA3组),每组15只.采用连续7d自由饮用3％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液建立UC小鼠模型,造模成功后开始注射慢病毒干预.慢病毒干预7d后结束实验,对各组小鼠进行疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察结肠组织病理学变化,ELISA法检测血清中炎症因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及肠黏膜屏障通透性标志物D-乳酸(D-Lac)、二胺氧化酶(DAO)含量,qRT-PCR检测结肠组织中PDIA3 mRNA水平,Western blot检测结肠组织中PDIA3、ZO-1、Occludin、Claudin-1、IκBα、p-NF-κB p65 (Ser536)、NF-κB p65蛋白表达水平.结果 与Control组比较,Model组小鼠结肠组织受损严重,DAI评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、D-Lac、DAO含量以及结肠组织中IκBα和p-NF-κB p65 (Ser536)蛋白表达水平均升高,而ZO-1、Occludin和Claudin-1等蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.01);与Model组比较,Lv-PDIA3组小鼠结肠组织受损程度减轻,DAI评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、D-Lac、DAO含量以及结肠组织中IκBα和p-NF-κB p65(Ser536)蛋白表达水平降低,同时ZO-1、Occludin和Claudin-1蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P＜0.01),而Lv-NC组差异无统计学意义.结论 过表达PDIA3能明显改善UC小鼠肠黏膜屏障功能,其机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活有关.     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠Aβ及Aβ寡聚体表达的影响

目的运用免疫组织化学方法和蛋白质印迹(Western-blot)方法观察淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠治疗前后β淀粉样蛋白42(Aβ42)、β淀粉样蛋白40(Aβ40)和可溶性Aβ寡聚体(ADDLs)的变化,判断姜黄素(curcumin)对Aβ级联反应的影响。方法将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组(罗格列酮组)及姜黄素大、中、小剂量组。灌胃3个月后,以免疫组织化学方法和Western blot方法检测Aβ42、Aβ40和ADDLs蛋白表达量的变化。结果免疫组织化学检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞均较正常组增加,Aβ40和Aβ42相比,阳性细胞计数增加以Aβ42更加明显,各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞明显降低。Western blot检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达比正常对照组明显增加(P<0.01);与模型组小鼠相比,虽然各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达均减少,罗格列酮组和姜黄素中剂量组小鼠海马Aβ40和Aβ42的蛋白表达显著减低(P<0.01);罗格列酮组小鼠海马ADDLs的蛋白表达减低显著(P<0.01),姜黄素大、中剂量组小鼠海马ADDLs的蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论姜黄素给药3个月能显著减少APP/PS1双转基因小鼠脑内海马CA1区Aβ40、Aβ42和ADDLs的表达,对Aβ42减低更为明显。其潜在的神经保护机制是否通过下调Aβ42和ADDLs的产生,增强Aβ42和ADDLs的降解影响Aβ级联反应,有待进一步研究。     

miR-103及其靶基因Cav1.2在低氧预适应提升小鼠学习记忆中的表达

目的:探究miR-103和Cav1.2在低氧预适应改善学习记忆能力中的表达变化，阐明miR-103调控Cav1.2在低氧预适应内源性神经保护中的作用机制。方法:使用ICR雄性小鼠作为实验对象，构建正常组(Control)、低氧组(Hypoxia)、低氧预适应组(HPC),通过Morris水迷宫分别评估各组小鼠的学习记忆能力；通过Real-time PCR和Western bolt技术检测小鼠海马组织中miR-103和Cav1.2的表达变化，通过双荧光素酶报告基因检测miR-103和Cav1.2之间的调控关系。结果:小鼠随着低氧次数的增加，低氧耐受时间显著增强。与Control组相比，HPC组小鼠的潜伏期时间明显降低(P<0.05),目标象限时间的百分比增加(P<0.05),平台穿越次数明显增加(P<0.05)。与Control组相比，HPC组小鼠海马组织中miR-103在第1 d表达下调(P<0.000 1)。miR-103-3p通过与Cav1.2的3’UTR结合从而靶向Cav1.2。与Control组相比，HPC组小鼠海马组织中Cav1.2蛋白在第2 d表达升...     

右美托咪定对脓毒症小鼠脑损伤的保护作用

目的评价右美托咪定对脓毒症小鼠脑损伤的影响,并初步探讨其可能机制。方法雄性ICR(institute of cancer research)小鼠180只,6-8周龄,重20-25 g,采用随机数字表法分为4组:假手术组(S组)、假手术组+右美托咪定组(S+D组)脓毒症组(CLP组)、脓毒症+右美托咪定组(CLP+D组)。S+D组和CLP+D组于术后0,3,6 h腹腔注射右美托咪定20μg/kg。于CLP或假手术后6,12,24 h时,取脑组织采用伊文氏蓝染色和检测脑组织含水量来观察各组小鼠血脑屏障的破坏情况,并检测脑组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)的水平。于CLP或假手术后24 h时,取脑组织,采用Western blot法检测各组小鼠脑组织紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5表达的改变,并行HE染色观察脑组织病理学改变。结果 S组和S+D组各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。与S组比较,CLP组于CLP后6,12和24 h时EB含量和脑组织含水量升高,脑组织中TNF-α和HMGB1的水平升高(P<0.05);于CLP后24 h时,脑组织紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5表达下调(P<0.05),海马CA1区神经元排列紊乱、胞质深染,核固缩,结构不清晰。与CLP组相比,CLP+D组于CLP后6,12,24 h EB含量和脑组织含水量降低,脑组织中TNF-α和HMGB1的水平降低(P<0.05);于CLP后24 h时,脑组织紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5表达上调(P<0.05),海马CA1区神经元排列尚规整,受损神经元减少。结论右美托咪定可通过减轻脓毒症小鼠血脑屏障的破坏来改善脑损伤,其机制与抑制炎症反应有关。     

阿替普酶对急性脑梗死大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达的影响

目的：探讨阿替普酶对急性脑梗死大鼠溶栓后血管内皮细胞中闭合蛋白1（Claudin-1）和闭合蛋白5（Claudin-5）表达的影响及保护作用机制,为阿替普酶的临床应用提供依据。方法：建立大鼠急性大脑中动脉栓塞模型。54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和阿替普酶溶栓组,每组18只。透射电子显微镜下观察大鼠脑内皮细胞超微结构,荧光免疫组织化学法和Western blotting法检测大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白的表达水平。结果：透射电子显微镜检测,模型组大鼠缺血区域脑体积明显增大,内皮细胞肿胀,部分皮质与周围脑组织界限明显,基膜厚薄均匀,紧密连接结构非常松散、出现断裂和消失;阿替普酶溶栓组大鼠脑梗死区域毛细血管内皮细胞肿胀明显减轻,基膜厚薄不均匀改善,脑毛细血管内皮细胞、内皮细胞之间大部分紧密连接结构断裂情况消失,无紧密连接结构消失。荧光免疫组织化学检测,与模型组比较,阿替普酶溶栓组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白的表达有明显改善。Western blotting检测,与假手术组比较,模型组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平明显减少（P<0.01）;与模型组比较,不同时间点阿替普酶溶栓组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平均升高（P<0.01）。结论：阿替普酶对急性脑梗死大鼠大脑内皮细胞的结构有改善作用,其作用机制可能与阿替普酶能降低大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平有关。     

p38/MAPK信号通路在高渗透压破坏角膜上皮屏障功能中的作用

目的 探讨高渗透压对角膜上皮屏障功能的影响及p38/MAPK信号通路在此过程中潜在的作用.方法 体外培养人永生化角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells,HCEC),用不同浓度渗透压[302(正常渗透压)、350、500 mOsm/L]作用于HCEC细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖活性;免疫荧光检测细胞紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-1的表达和分布;p38/MAPK阻断剂预处理HCEC细胞前后,Western blot分别检测紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1和p38/MAPK信号通路表达及其磷酸化水平;跨膜电阻仪检测上皮细胞跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)的变化.结果 高渗透压对HCEC细胞增殖活性没有影响;免疫荧光染色可见正常渗透压组ZO-1、Claudin-1沿着细胞膜呈线性分布,而350、500 mOsm/L高渗透压组ZO-1、Claudin-1荧光信号均减弱,且细胞间紧密连接结构破坏(P＜0.05);在高渗透压下,HCEC细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1表达量明显下降(P＜0.05),p38/MAPK磷酸化水平增加(P＜0.05),上皮细胞跨膜电阻(TEER)降低(P＜0.05),而p38/MAPK阻断剂SB203580可抑制高渗透压引起的上述反应(P＜0.05).结论 高渗透压可以使人角膜上皮细胞屏障功能破坏,其机制为通过激活p38/MAPK信号通路导致紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1表达下降.     

抑癌基因Claudin-7的研究进展

Claudin-7是紧密连接蛋白家族的重要成员之一,具有维持细胞极性和屏障功能的紧密连接功能,同时也存在着非紧密连接功能。Claudin-7表达下降或缺失与炎症发生、肿瘤的发生和转移有密切关系。多种因素(细胞因子、生长因子以及启动子区域甲基化等)可调节Claudin-7的表达水平。Claudin-7基因全部剔除和条件性Claudin-7基因剔除小鼠模型的构建为研究其促进肿瘤发生、发展的机制提供了新的线索。而Claudin-7的表达下调或缺失与多种恶性肿瘤有关,进一步证实了Claudin-7作为抑癌基因的可靠性。     

Claudin-1胞外片段Cldn-153～80的作用在乳腺癌转移机制中的研究

目的 观察Claudin-1在乳腺癌组织中的表达与临床病理特征的关系,探讨Claudin-1的胞外区Cldn-153～80片段在乳腺癌转移中的作用机制.方法 (1)应用免疫组织化学技术检测108例乳腺癌标本中Claudin-1的表达情况,并分析其与乳腺癌淋巴结转移、TNM分期和分子分型间的关系;(2)在乳腺癌细胞株中掺入Cldn-153～80片段,应用Western blot技术检测紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-2的表达.结果 (1)以是否淋巴结转移、临床分期、分子分型等病理特征为依据分组中,Claudin-1的表达强度在淋巴结转移组(x2=6.279,P=0.012)、TNM分期Ⅲ、Ⅳ期(x2=7.419,P=0.024)及分子分型为Her-2过表达型(x2=10.830,P=0.013)组中显著降低,差异有统计学意义;(2)Cldn-153～80片段的掺入可导致乳腺癌细胞中紧密连接蛋白Clau-din-1及Claudin-2的表达下降,在转移性高的乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,这种抑制作用更为显著.结论 紧密连接蛋白Claudin-1的表达降低与乳腺癌的进展和转移密切相关,而Cldn-153～80片段通过调控紧密连接蛋白的表达在乳腺癌细胞侵袭、转移过程中发挥重要作用.     

清肺口服液黄酮类成分改善RSV感染小鼠肺上皮屏障损伤的机制研究

  目的  探讨清肺口服液黄酮类成分(Fla)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠肺上皮屏障损伤的保护机制。  方法  将BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,Fla低、高剂量组(30、60 mg·kg-1·d-1),阳性药利巴韦林组(46 mg·kg-1·d-1)。建立RSV感染的小鼠模型, 持续给药4 d后, HE染色观察肺组织病理学变化; ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量; 以BALF蛋白含量和BALF/血清荧光比评估肺上皮通透性; Western blot检测肺组织紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、p-p38 MAPK、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)的蛋白表达。  结果  与模型组相比, Fla高、低剂量组小鼠肺组织病理损伤减轻(P < 0.05, P < 0.01), BALF中IL-1β、TNF-α含量下降(P < 0.05, P < 0.01), BALF蛋白含量和BALF/血清荧光比降低(P < 0.05, P < 0.01), 肺组织中Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达升高(P < 0.05, P < 0.01), p-p38 MAPK/p38 MAPK、TLR4、MyD88蛋白表达下降(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  Fla可能通过抑制TLR4/MyD88/p38 MAPK通路, 促进紧密连接蛋白表达, 减轻肺部炎症, 从而改善RSV导致的肺上皮屏障损伤。      

结直肠癌组织Claudin-1、Claudin-4表达及相关性研究

目的探讨紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-4和Caspase-3在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化SP法,检测60例结直肠癌和20例正常结直肠粘膜组织中紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-4和Caspase-3的表达水平。结果 Claudin-1、Claudin-4在结直肠癌组中阳性表达率分别为76.6%、85.0%,显著高于正常组的20.0%、30.0%（P〈0.01）;而Caspase-3在结直肠癌组中表达阳性率为21.7%,显著低于正常组的60.0%;有淋巴结转移组Claudin-1、Claudin-4的表达阳性率分别为50.0%、55.0%,明显高于无淋巴结转移组26.6%、30.0%（P〈0.05）;Caspase-3在有、无淋巴结转移组阳性率分别为10.0%、15.5%（P〉0.05）;TNM分期一、二组间Claudin-1、Claudin-4和Caspase-3蛋白表达阳性率差异有统计学意义（P〈0.05）,而其它组间阳性表达率差异无统计学意义。结论 Claudin-1、Claudin-4的高表达在结直肠癌的发生发展过程中可能起着促进作用,其表达与淋巴结转移、TNM分期有关,Caspase-3可作为结直肠癌预后标志物。     

玉屏风散对变应性鼻炎小鼠肥大细胞成熟及活化的影响

目的研究玉屏风散对变应性鼻炎（AR）小鼠肥大细胞成熟及活化的影响。方法30只雄性BALB/c近交系小鼠按随机数字表法分为正常对照组、AR模型组和玉屏风散组,每组10只。AR模型组及玉屏风散组通过卵清蛋白（OVA）联合Al(OH)3腹腔注射及OVA滴鼻激发鼻黏膜法建立AR模型,玉屏风散组于激发前1天开始用玉屏风散水煎剂灌胃（25g/Kg?d）治疗,连续8天,正常对照组和AR模型组则用等量生理盐水灌胃。鼻部症状评估小鼠AR症状;酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血浆组胺和白介素-13（IL-13）水平;甲苯胺蓝染色检测鼻黏膜肥大细胞浸润;免疫组织化学染色检测鼻黏膜类胰蛋白酶的表达;流式细胞仪检测骨髓细胞中表面标志物CD117、FcεRI的表达。结果与AR模型组相比,玉屏风散组小鼠的挠鼻、喷嚏及流清涕评分和鼻部症状总评分显著降低[(1.40±0.70)分比(2.60±0.52)分,(1.60±0.70)分比(2.80±0.42)分,(1.50±0.71)分比(2.50±0.53)分,(4.50±1.51)分比(7.90±1.20)分,P均<0.05];血浆中组胺和IL-13的水平显著降低[(6.58±0.83)ng/ml比(12.58±1.16)ng/ml,(46.27±6.17)pg/ml比(63.38±5.02)pg/ml,P均<0.05];鼻黏膜组织中每高倍镜下肥大细胞数量及类胰蛋白酶表达水平显著降低[(12.33±4.50)个比(20.67±8.33)个,(0.23±0.08)比(0.35±0.17), P均<0.05];骨髓细胞中CD117和FcεRI双阳性细胞比例显著降低[(4.95±0.81)%比(8.83±0.92)%,P<0.05]。结论玉屏风散不仅能抑制肥大细胞的分化、成熟,亦能降低其脱颗粒及炎性因子分泌水平,从而减轻AR模型小鼠的鼻部症状。