NOD/SCID小鼠模型在实验血液学研究中的应用

NOD/SCID(非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷)小鼠是在SCID(重症联合免疫缺陷)小鼠的基础上与非肥胖性糖尿病小鼠(NOD/Lt)品系回交的免疫缺陷鼠.NODISCID小鼠既有先天免疫缺陷,又有T和B淋巴细胞缺乏,各种肿瘤细胞可以植入,且较少发生排斥反应及移植物抗宿主病(GVHD).所以NOD/SCID小鼠逐渐成为血液学实验研究的有用工具.本文从NOD/SCID小鼠的生物学特性、建立人类白血病模型、干细胞移植、药物研究及NOD/SCID小鼠应用中存在的不足和改良等方面综合述评.     

Prkdc和Il2rg双敲除免疫缺陷小鼠的构建和初步应用

目的：构建NOD背景免疫缺陷小鼠,作为新的人源肿瘤异种移植(patient?derived xenograft,PDX)模型。方法：利用 CRISPR/Cas9技术获得NOD背景Prkdc和Il2rg双基因敲除小鼠,通过正常繁育得到能够稳定遗传的纯合子后代(命名为NYG 小鼠),流式细胞术检测小鼠外周血免疫细胞比例,移植接种新鲜肿瘤组织,观察记录肿瘤生长状况及HE染色观察传代PDX 肿瘤形态学特点。结果：NYG小鼠外周血小鼠无成熟的T细胞、B细胞和NK细胞表达,对移植的患者肿瘤组织几乎没有排斥反应,组织病理学表型及免疫系统未见明显异常。结论：成功构建NYG小鼠免疫缺陷小鼠,为肿瘤学基础理论及应用研究提供了新的PDX动物模型。     

建立非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠人白血病模型的实验研究

目的:建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的人白血病细胞株K562,并以此移植非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠,建立白血病研究的新动物模型.方法:用含GFP的逆病毒载体将标记基因GFP转入人白血病细胞株K562.NOD/SCID小鼠经2.5Gy的γ射线照射后,从尾静脉注射0.5×106个K562-GFP细胞(n=3;第1组);或1×106个K562-GFP细胞(n=3;第2组);或生理盐水作为对照组(n=2).移植后第6周用流式细胞术和PCR检测受鼠体内白血病细胞.结果:外源性GFP基因在K562细胞中稳定表达.移植后6周FCM检测,受鼠骨髓中的人源细胞比例均数分别为12.3%(第1组)和22.6%(第2组),并且外周血和脾脏也可检测白血病细胞.结论:用GFP标记的K562细胞移植NOD/SCID小鼠,成功建立了白血病动物模型.     

SCID Beige与NOD.CB17-Prkdcscid小鼠主要免疫指标测定

目的 测定SCID Beige(简称SCID.BG)小鼠与NOD.CB 17-Prkdcscid(简称NOD.SCID)小鼠主要免疫球蛋白(Ig)、补体(C)、免疫细胞指标,分析两种免疫缺陷小鼠在免疫方面差异.方法 选择4周龄、8周龄、16周龄的SCID.BG小鼠、NOD.SCID小鼠各30只(雌雄各半),测定主要免疫球蛋白、补体指标;选择8周龄的SCID.BG小鼠、NOD.SCID小鼠各14只(雌雄各半),测定T细胞及亚群、B细胞、NK细胞免疫指标.结果 3个年龄段的SCID.BG在IgG水平上显著低于NOD.SCID,在IgA水平上显著高于NOD.SCID;4周龄、16周龄的SCID.BG在C4水平上显著高于NOD.SCID;8周龄SCID.BG小鼠与NOD.SCID小鼠在IgG水平上均显著低于其他两个周龄;T细胞亚群中,8周龄SCID.BG的CD4+CD8+百分比显著低于NOD.SCID;SCID.BG小鼠与NOD.SCID小鼠同品系同周龄在性别上各项指标均无显著差异.结论 SCID.BG与NOD.SCID抗体、补体、免疫细胞水平含量均远低于正常小鼠的水平,同属于T、B、NK重度免疫缺陷动物,两品系同周龄同性别比较各项免疫指标各有高低,在实验中可以根据不同的研究目的选择动物.     

基于CRISPR/Cas9技术构建严重联合免疫缺陷小鼠的实验研究

目的：应用CRISPR/Cas9技术靶向敲除编码小鼠T、B细胞的Rag2基因及编码NK细胞的IL2rg基因,构建T、B细胞及NK细胞联合免疫缺陷小鼠。方法：根据Genbank报道的Rag2及IL2rg基因序列,分别针对其外显子设计25bp左右的sgRNA并进行合成, sgRNA退火后克隆入pX330载体。Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA及Cas9重组质粒体外转录为mRNA后显微注射入BALB/c小鼠受精卵细胞,受精卵细胞移植到受体动物获得子代小鼠,首建鼠（F0）与野生型小鼠交配获得F1代小鼠,突变的F1代小鼠互交后筛选F2代纯合子小鼠。通过基因测序、流式细胞术及接种人源性肿瘤细胞系方法检测子代小鼠基因型和表型。结果：成功构建了Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA重组质粒并对其进行了体外转录,mRNA显微注射并移植后获得57只F0小鼠。连续交配后,获得F2代纯合子小鼠。序列分析表明子代小鼠中IL2rg有两个基因型,分别是10bp和11bp的缺失突变;而Rag2只有一个基因型,为8bp的缺失突变。与野生型BALB/c小鼠相比,小鼠外周血中CD3、B220及NKp46阳性细胞数量明显降低。接种人乳腺癌细胞系SKBR-2HL后,肿瘤生长良好,且随着时间延长肿瘤组织逐渐增大。结论：利用CRISPR/Cas9技术可有效实现BABL/c小鼠体内Rag2、IL2rg基因突变,并导致小鼠T、B及NK细胞功能异常。     

基于CRISPR/Cas9技术构建严重联合免疫缺陷小鼠

目的 应用CRISPR/Cas9技术靶向敲除编码小鼠T、B细胞的Rag2基因及编码NK细胞的IL2rg基因,构建T、B细胞及NK细胞联合免疫缺陷小鼠。方法 根据Genbank报道的Rag2及IL2rg基因序列,分别针对其外显子设计25 bp左右的sgRNA并进行合成, sgRNA退火后克隆入pX330载体。Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA及Cas9重组质粒体外转录为mRNA后显微注射入BALB/c小鼠受精卵细胞,受精卵细胞移植到受体动物获得子代小鼠,首建鼠（F0）与野生型小鼠交配获得F1代小鼠,突变的F1代小鼠互交后筛选F2代纯合子小鼠。通过基因测序、流式细胞技术及接种人源性肿瘤细胞系方法检测子代小鼠基因型和表型。结果 成功构建了Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA重组质粒并对其进行了体外转录,mRNA显微注射并移植后获得57只F0小鼠。连续交配后,获得F2代纯合子小鼠。序列分析表明子代小鼠中IL2rg有两个基因型,分别是10 bp和11 bp的缺失突变;而Rag2只有一个基因型,为8 bp的缺失突变。与野生型BALB/c小鼠相比,小鼠外周血中CD3、B220及NKp46阳性细胞数量明显降低。接种人乳腺癌细胞系SKBR-2HL后,肿瘤生长良好,且随着时间延长肿瘤组织逐渐增大。结论 利用CRISPR/Cas9技术可有效实现BABL/c小鼠体内Rag2、IL2rg基因突变,并导致小鼠T、B及NK细胞功能异常。     

免疫缺陷小鼠肿瘤模型的建立及其肿瘤相关免疫机制的探讨

目的　观察不同免疫缺陷小鼠中的人肝癌细胞生长情况以及 T,B淋巴细胞的免疫作用 ,探讨免疫缺陷小鼠肿瘤模型制作的意义 .方法　将体外培养的人肝癌细胞接种到四种免疫缺陷小鼠 ,分别为 :B细胞缺陷的 CBA/N,T细胞缺陷的 BAL B/c- nu,T,B细胞缺陷的 SCID及免疫重建的 SCID小鼠 ,观察其生长特点 ;作鼠脾细胞毒试验 ,测定外周血 CD4 + ,CD8+ 数分数和荷瘤鼠血清 Ig含量的变化 ;作肝癌细胞凝集试验 .结果　 CBA/N和用 BAL B/c鼠外周血淋巴细胞重建的 SCID(B- PBL- SCID)鼠不成瘤 ,nude,SCID和用 CBA/N鼠外周血淋巴细胞重建的 SCID (C- PBL - SCID)小鼠全部成瘤 ;SCID鼠的瘤体比裸鼠瘤体长的更快 ,肝内接种转移率更高、转移范围更大 .接种瘤细胞的 BAL B/c和 CBA/N鼠脾细胞对癌细胞杀伤力较强 ,免疫重建的 SCID鼠脾细胞毒杀伤较小 .接种瘤细胞的鼠 CD4 +数分数都下降 ,CD8+变化不大 ,CD4 + /CD8+比值下降 .具有 B细胞的实验鼠均测得 Ig在 mg· L- 1 水平 ,并能使癌细胞产生凝集反应 .结论　 SCID鼠是建立肿瘤模型和免疫重建研究的理想小鼠 ;小鼠成瘤率与 T细胞相关 ,T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用 ;B淋巴细胞及其产生的抗体在抗肿瘤中起着不可忽视的作用     

人脐血CD34~+细胞在NOD/SCID小鼠上有效重建造血系统

目的探讨人脐血CD34+造血干细胞在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(no obese diabetic/severecombined Immunodeficiency,NOD/SCID)小鼠模型上造血重建的作用。方法利用密度梯度离心法,从新鲜脐血中分离出单个核细胞,利用免疫磁珠分选法筛选CD34+造血干细胞,经尾静脉输注入经亚致死剂量照射后的NOD/SCID小鼠体内,移植后3、7、10、14 d分别用断尾法取小鼠外周血,血常规计数外周血动态变化情况;移植后4、6、8、10周,取其外周血,运用PCR法检测外周血中人特异性Alu基因的表达情况。结果免疫磁珠分选得到的CD34+细胞浓度达91.2%,照射后小鼠骨髓腔内有核细胞和巨细胞数量明显减少或消失,达到清髓目的。移植后第3天移植组小鼠外周血各系细胞均明显低于正常组(P<0.01),移植后第7天,移植组小鼠外周血象开始恢复,明显高于阴性对照组[白细胞:(3.90±0.53)×109/L vs(1.30±0.18)×109/L,血红蛋:(139.8±5.0)g/L vs(79.8±11.0)g/L,白血小板:(253.0±17.5)×109/L vs(52.0±6.9)×109/L,(P<0.01)],移植后第10天,移植组小鼠外周血象恢复到辐照前水平,与正常组无差别。移植4周后,PCR方法在小鼠外周血中可检测到人特异Alu基因序列,未移植组小鼠照射后2周内全部死亡。结论经照射后的NOD/SCID小鼠通过人脐血CD34+细胞植入可建立起人鼠嵌合模型。NOD/SCID小鼠经照射后,不破坏骨髓造血微环境及造血基质,可用于异基因细胞移植模型。人脐血CD34+细胞移植入NOD/SCID小鼠,其造血系统能有效重建。     

活化的巨噬细胞介导的胰岛异种移植排异反应与细胞因子表达上调的关系

目的:笔者以往的实验证明与猪抗原接触过并被CD4 T淋巴细胞激活的巨噬细胞能识别、排斥猪的异种移植物,但不会排斥鼠的同种移植物,这表明在这种特异性移植物免疫识别及破坏过程中移植物及巨噬细胞之间存在着信号联系.方法:在免疫过继转移之前,将胎猪的胰腺碎片移植到非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)鼠.再从移植了胎猪的胰腺碎片(FPP)并发生排斥反应的受体Balb/c鼠身上分离出巨噬细胞,将这些外源性巨噬细胞植入NOD/SCID鼠.这些外源性的巨噬细胞通过Ly5.1表面抗原或通过CSFE染色标记来追踪.在移植了FPP异种移植物以后的CCR2,CCR5及它们的趋化因子的基因表达可通过实时PCR来评估.结果:形成免疫过继后较早移植的异种移植物出现了免疫排斥,而不是建立免疫过继较长时间后再移植FFP的NOD/SCID鼠.同时,前者可检测出更高水平的趋化因子的基因表达.而且,与未激活的巨噬细胞比较,已经激活的巨噬细胞CCR2,CCR5基因的表达增强更为明显.结论:趋化因子的上调与巨噬细胞的聚集、胰岛移植物的破坏有关.     

NOD/SCID小鼠主要脏器重量、血生理生化指标和免疫细胞的测定

目的测定NOD/SCID小鼠的主要脏器重量、血生理生化指标和免疫细胞比例。方法选取5周龄和10周龄的NOD/SCID小鼠,测定主要脏器重量和血液生理生化指标;选取6周龄的NOD/SCID小鼠,利用流式细胞仪检测其T细胞及其亚群(T细胞-CD3+、T细胞亚群-CD4+T细胞、CD8+T细胞)、B细胞(CD19+或B220+)、NK细胞(NK1.1+)和粒细胞(CD11b+)。结果同性别NOD/SCID小鼠,不同周龄的双肾、肝脏、心脏和肺脏重量,血生理指标RBC、HGB、HCT、MCV、MCH和RDW,血生化指标TP、ALB、ALP、CHO和TBIL具有显著差异;同周龄的雌雄相比,血生理指标HCT,血生化指标GLOB、A/G、CHO、TG、TBIL和UN有显著差异。NOD/SCID小鼠无T细胞(0.37±0.26)%、CD4+T细胞(0.35±0.13)%、CD8+T细胞(0.47±0.10)%、CD19+B细胞(0.13±0.05)%、B220+B细胞(1.20±0.44)%),有低水平NK细胞(6.90±0.82)%,粒细胞比例为(47.88±15.54)%。结论 NOD/SCID小鼠表现为为T、B、NK细胞联合免疫功能缺陷,周龄和性别对其脏器重量、血生理生化指标有一定影响。本研究的NOD/SCID小鼠品系的生理生化指标与国外生产的相同品系基本一致。     

食管鳞癌患者来源移植瘤模型：B-NDG®小鼠与BALB/c裸鼠的比较

目的 探讨不同品系的小鼠对于食管鳞癌患者来源的异种移植瘤（ESCC PDX）成瘤率的影响,为ESCC的临床个体化治疗建立更优势的临床前动物模型。方法 收集22例ESCC患者手术切除的肿瘤组织,分别利用B-NDG®（NSG）鼠和BALB/c裸鼠来建立ESCC PDX模型。通过观察移植瘤成瘤情况,测量移植瘤体积,绘制生长曲线图,计算成瘤率和成瘤时间,HE染色、免疫组化及基因组测序等实验,比较移植瘤组织与原患者肿瘤组织的一致性。结果 22例标本的PDX模型移植结束,发现NSG小鼠ESCC肿瘤发生率（50%,11/22）高于BALB/c裸鼠（18.18%,4/22）（P=0.027）。NSG小鼠的平均肿瘤成瘤时间为75.95 d短于BALB/c小鼠的91.67 d,差异具有统计学意义（P<0.001）。在NSG小鼠和BALB/c小鼠异种移植模型中,肿瘤均能保持病人ESCC肿瘤组织的形态学特征。基因分析结果显示,与BALB/c裸鼠相比,NSG小鼠肿瘤与亲代患者肿瘤样本间的基因相似度更高（P<0.0001）。结论 成功构建了NSG小鼠和BALB/c裸鼠ESCC皮下移植瘤模型,并发现NSG小鼠对于模型成功的建立更具有优势。     

NOD/SCID雌性小鼠动情周期的观察

目的：观察NOD/SCID小鼠动情周期及卵巢切除术后阴道涂片的变化。方法：连续观察9天NOD/SCID鼠,每日进行两次阴道涂片,计算动情周期时间及发生率。卵巢切除后,阴道涂片并观察阴道涂片变化。结果：NOD/SCID小鼠动情周期为4-6天。有规律动情的小鼠占80%。阴道口状态与动情周期无明显相关。卵巢切除术后,阴道涂片呈动情后期或动情间期改变。结论：采用阴道脱落细胞涂片法可判断NOD/SCID雌性小鼠的动情周期及特点,NOD/SCID雌性小鼠卵巢切除手术有效。     

人免疫重建NOD/SCID小鼠模型的建立

目的探讨NOD/SCID（nonobese diabetic/severe combined immunodeficien）t小鼠人免疫重建模型的建立方法和免疫特性.方法 16只NOD/SCID小鼠随机分成实验组和对照组,每组8只.Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,通过腹腔注射移植给实验组小鼠,空白对照组小鼠每只腹腔注射无菌PBS,第4、8和12周时,流式细胞术检测小鼠外周血中人的CD3＋T、CD19＋B淋巴细胞,ELISA法测定小鼠血清中人IgG含量,免疫组织化学染色检测小鼠脾脏和肝脏中人CD3＋T、CD19＋B淋巴细胞浸润情况.结果移植PBMC 4周后,实验组NOD/SCID小鼠外周血中人CD3＋T、CD19＋B的细胞分别为85.6%、76.7%,并且在小鼠脾脏组织中也可以检测到人CD3 T、CD19 B淋巴细胞.移植4、8及12周后小鼠血清中人IgG含量分别达到（863±12.5）μg/mL、（1217±16.7）μg/mL、（958±13.1）μg/mL.结论用人外周血PBMC经腹腔注射可以成功建立人免疫重建NOD/SCID小鼠模型,方法简便可靠.     

小鼠免疫力对接种人类肝癌细胞系9724生长的影响

目的 探讨不同免疫力小鼠的免疫细胞对人类肝癌细胞系9724生长的影响及异种特异性细胞毒杀伤能力。方法 将培养后的人类肝癌细胞系接种到不同免疫力小鼠（免疫正常的BALB／c,B缺陷的CBA／N,T缺陷的BALB/c nude及T,B缺陷的C.B－17 SICD小鼠）右后臀皮下,观察其生长;取实验和相应的正常鼠脾细胞进行细胞毒杀伤试验。结果 BALB/c和CAB／N小鼠不成瘤;BALB/c nude和C.B－17 SCID小鼠100％成瘤;SCID免疫重建组用BALB/c外周淋巴细胞重建SCID（BALB/c－PBL－SCID）的不成瘤,用CAB／N外周淋巴细胞重建的SCID（CBA／N－PBL－SCID）成瘤,接种过瘤的BALB/c和CBA／N小鼠脾细胞对癌细胞有较强的细胞毒杀作用,对照组和nude,SCID小鼠无杀伤作用;SCID免疫重建有较小的杀伤作用。结论 T细胞在异种瘤移植排斥中起主要的免疫杀伤作用,这种排斥是异种特异笥的;肿瘤免疫需要综合性免疫作用。     

miR⁃16/15a-/-小鼠NK细胞功能及其对结肠癌移植瘤敏感度分析

目的：观察miR?16是否通过调节NKG2D表达而影响自然杀伤（natural killer,NK）细胞的生物学功能及其抗肿瘤活性。方法：miR?16/15a-/-小鼠和对照小鼠经皮下注射MC38细胞制备结肠癌移植瘤模型,观察两组小鼠皮下实体瘤生长情况;比较普通小鼠生理或荷瘤状态下NK1.1+NKG2D+细胞和NK1.1+NKG2D?细胞内miR?16的表达;分析生理及荷瘤状态下miR?16/15a-/-小鼠NK细胞NKG2D表达、γ干扰素（interferon?γ,IFN?γ）分泌及细胞毒性作用。结果：与同品系小鼠比较,miR?16/15a-/-小鼠中MC38结肠癌移植瘤的生长受到显著抑制,生理状态小鼠NK1.1+NKG2D+细胞miR?16的表达明显低于NK1.1+NKG2D?细胞,而在荷瘤小鼠来源的两组细胞中无明显差异;与野生型小鼠相比,生理及荷瘤状态下的miR?16/15a-/-小鼠NK1.1+NKG2D+细胞的比例及NK细胞活性无明显变化。结论：miR?16/15a敲除抑制MC38结肠癌移植瘤生长,而miR?16/15a敲除小鼠体内NK细胞的比例及功能及荷瘤状态下NK细胞活性并无明显变化,提示miR?16/15a缺失并非通过NK细胞抑制MC38结肠癌移植瘤生长。     

严重联合免疫缺陷小鼠在肿瘤与免疫研究中的应用

1983年Bosma等首次报道了小鼠的严重联合免疫缺陷(severe cornbined immLino-deficient,SCID)突变,SCID／SCID纯合子小鼠的特征是细胞免疫和体液免疫的联合缺陷。它可以接受人类肿瘤的异种移植,较20世纪60年代出现的无胸腺裸鼠更为理想。肿瘤是死亡率仅次于心血管疾病的人类健康第二大杀手。通过数十年的研究,人们掌握了大量肿瘤体外实验资料,但都不足以说明人类肿瘤在体内转移和侵袭的复杂机理。SCID小鼠的出现为人类研究肿瘤的生长、转移和免疫治疗提供了较好的动物模型。而将SCID基因导入其它特征的小鼠品系,则为更好的利用该基因进行研究提供了极为广阔的应用前景。     

人肝癌细胞在不同免疫缺陷小鼠中的生长特点

为探讨人类肝癌细胞9724在不同免疫缺陷小鼠的生长特点,将体外培养人类肝癌细胞9724接咱不同免疫力小鼠（B细胞缺陷的CBA/N,T细胞缺陷的BALB/c-nu,T、B细胞缺陷的SICD小鼠及免疫重建的SCID小鼠,免疫正常的BALB/c小鼠作为对照组）皮下、肝内、腹腔,观察其生长特性。结果是BALB/c小鼠和用BALB/c小鼠外周淋巴细胞免疫重建的SCID（B-PBL-SCID)小鼠不成瘤;CBA/N小鼠随种数量和途径不同而有不同的表现;裸小鼠、SCID小鼠和用CBA/N小鼠外周淋巴细胞重建的SCID（C-PBL-SCID）小鼠100%成瘤。提示SCID小鼠是建立肝癌模型的最佳小鼠,也是进行肿瘤免疫研究的最佳模型动物;T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用。     

急性淋巴细胞白血病CD34+CD38-细胞在NOD/SCID小鼠体内的自我更新与增殖能力

目的探索急性淋巴细胞白血病(ALL)患者CD34⁺CD38-细胞移植到NOD/SCID小鼠体内建立白血病的可行性、自我更新与增殖潜能。方法分选并鉴定ALL患者骨髓CD34⁺CD38-细胞及对照CD34-CD38⁺细胞后,经尾静脉分别注射10⁴个细胞于亚致死剂量射线照射的NOD/SCID小鼠体内,连续监测小鼠状态以及外周血血象改变,对濒死或死亡小鼠进行骨髓检查、肝脾病理学检查。结果接种从ALL患者分选的CD34⁺CD38-细胞到NOD/SCID小鼠体内后4周,小鼠外周血白细胞上升,到8周左右达高峰,约15×10⁹～20×10⁹/L,原始及幼稚淋巴细胞明显增多。骨髓象显示以原始及幼稚淋巴细胞增生为主,约为40%,且肝脾组织也有白细胞浸润,明显高于接种了对照组CD34-CD38⁺细胞的NOD/SCID小鼠。结论ALL患者CD34⁺CD38-细胞可以成功移植NOD/SCID小鼠,在小鼠体内增殖形成白血病,说明该群细胞具有自我更新和增殖的潜能,可作为探索白血病起始细胞研究的重要载体。     

Bcl-2参与SCID小鼠体内齐墩果酸诱导HL-60细胞凋亡的调控作用

目的:观察齐墩果酸(OA)对白细胞移植模型小鼠脾脏浸润白血病细胞凋亡数量和Bcl-2蛋白表达的影响,探讨OA对白血病模型鼠的治疗作用机制.方法:取浓度为2×107mL-1体外培养的人早幼粒系白血病HL-60细胞0.5 mL,腹腔注射重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠,构建SCID小鼠的HL-60细胞移植瘤模型;模型成功后...     

人胚胎干细胞体外定向诱导分化胰腺前体细胞及胰岛细胞移植治疗NOD/SCID糖尿病小鼠

目的 探讨人胚胎干细胞（human embryonic stem cells,hESCs）体外定向诱导分化胰腺前体细胞及胰岛细胞移植治疗非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷（non-obese diabetic/severe combined immunodeficient,NOD/SCID）小鼠的可行性.方法 体外分4阶段诱导hESCs定向分化为胰岛细胞：①诱导分化形成定型内胚层;②诱导胰腺细胞定向分化;③扩增胰腺前体细胞;④促进胰岛细胞成熟.观察诱导各阶段细胞形态变化、免疫荧光鉴定胰十二指肠同源异型盒基因（PDX-1）、胰高糖素（glucagon）、胰岛素（insulin）、C肽（C-peptide）、葡萄糖转运子2（Glut-2）的表达.3阶段及4阶段分化形成的细胞分别植入链脲菌素（streptozotocin,STZ）诱导形成的NOD/SCID糖尿病小鼠一侧附睾脂肪垫内,观察血糖变化.结果 hESCs诱导4阶段细胞表达胰高血糖素、胰岛素、Glut-2;共表达PDX-1和C肽;流式鉴定诱导4阶段胰岛素阳性细胞为17.1％;体外检测有葡萄糖刺激的胰岛素释放反应;3阶段及4阶段分化形成的细胞分别植入NOD/SCID 糖尿病小鼠体内可逆转其高血糖至少12周.结论 体外定向诱导hESCs分化形成的胰腺前体细胞及胰岛细胞分别植入NOD/SCID小鼠可逆转其高血糖.