现场DNA物证证据的提取、保存及检验应用进展

目的为了给刑事案件诉讼提供准确可靠的证据,在办理凶杀、强奸等多种刑事案件时,经常需要对各种来源于人体的生物检材进行个人同一认定检验。方法利用法医DNA技术对现场提取的血液(斑)、精液(斑)、唾液(斑)、人体组织、骨骼等检材进行检验,为案件侦破提供科学依据或线索;利用DNA数据库技术更大的发挥法医DNA技术在许多案件侦破中的应用,还可以利用法医DNA技术对灾难性事件(案件)中确定死亡人数、对受害者的身源进行鉴别。结果结论利用DNA物证可以为案件侦查和诉讼提供更多证据     

SLE患者血清DNA、DNase与抗DNA抗体的测定及相互关系

目的 了解ＳＬＥ患者血清ＤＮＡ、ＤＮａｓｅ及抗ＤＮＡ体的水平以及三者间的相互关系，探讨其有ＳＬＥ发生发展中的作用及临床意义．方法 荧光分光光度法测定抗ＤＮＡ。单相酶扩散法测定ＤＮａｓｅ，金标免疫斑点法测定抗ＤＮＡ抗体。结果 ＳＬＥ患者血清ＤＮＡ、抗ＤＮＡ抗体水平高于正常人，而ＤＮａｓｅ水平低于正常人；活动期患者ＤＮＡ、抗ＤＮＡ抗体水平高于缓解期患者，而ＤＮａｓｅ水平低于缓解期患者；伴肾损害患者的Ｄ     

急性白血病细胞DNA指数,DNA倍体及S期百分率临床意义的研究

综合研究不同病期急性白血病外周血白血病细胞ＤＮＡ及细胞周期的变化,探讨其与临床的关系,指导临床诊断及治疗。方法：应用流式细胞术研究４６例ＡＬ ＤＮＡ指数、ＤＮＡ倍体及Ｓ期百分率的分布。结果：ＡＬ完全缓解组ＤＮＡ指数、ＤＮＡ非整们 率、ＳＰ均明显低于难治／复发组,ＡＬ初治ＣＲ组ＤＮＡ指数ＤＮＡ非整倍体率均氏于初治非ＣＲ组。结论：初诊时呈现ＤＮＡ整倍体及低ＤＮＡ指数的急性白血病患埏人肯较好的治疗效果。     

DNA损伤修复基因甲基化与肿瘤关系的研究进展

机体细胞内DNA会受到多种因素的影响,导致其化学结构或编码特性的改变,如电离辐射、化学物质、异常代谢产物等都会导致DNA损伤,这种损伤若不能及时得到修复,就会影响机体正常活动,进而诱发一系列遗传疾病的产生。正常机体具有完善的DNA损伤修复机制,修复由各种原因导致的DNA损伤,其主要机制有两种：一种是损伤恢复（ reversal of damage）,即损伤直接被移除,使碱基恢复为原来状态;另一种是切除修复（ excision re-pair）,是指切除损伤 DNA 后,再合成一段新的DNA来替代损伤DNA,切除修复包括核苷酸切除修复（ nucleotide excision repair,NER）、碱基切除修复（ base excision repair,BER）、同源重组修复（ ho-mo logous recombination,HR）和错配修复（ mismatch repair,MMR）等多条途径,它们共同构成维持遗传信息稳定的保护机制,以保证遗传物质的稳定性［1］。     

真核生物DNA复制的特点

生物体内DNA双链的复制大多是以半保留方式进行的，这是共性。但不同生物体内DNA分子的存在形式各不相同(有大、有小、有线性分子、有环状分子)，功能状态也不一样(有的保守、有的极为活跃)。因而，反映在复制方式上也有区别，这是个性。绝大多数的复制是以复制叉的形式进行的。本筒达真核生物DNA复制的几个特点。     

包裹质粒DNA及线状DNA脂质体的制备

本实验制备组成分别为DOPE/Chol/OA(4:4:3)的酸敏脂质体及DOPC/Chol/OA(4:4:3)脂质体,用于包裹质粒pSV_2-neo、pUC18-ras、pSV-neo-ras及大分子线状DNA,包裹率可达50％.被脂质体包裹的DNA不被DNase降解,提示DNA分子被脂质体包裹在微球体内部.电泳检测表明,被包裹的DNA分子没有断裂.所得到的脂质体较稳定,4℃放置5～6月,脂质体内仍保留部分DNA分子.制备酸敏脂质体时,pH为8.0时脂质体较稳定,pH<6.5～7时则不稳定.     

DNA损伤和修复在肝癌中的研究进展

人体细胞中DNA损伤后会引起细胞一系列反应,主要包括损伤信号的传导、损伤与修复、诱导细胞死亡等.肝癌的发生正是由于这些诱因同时作用于损伤修复系统的某个环节,使DNA损伤不能修复或不能正确修复,从而使肝细胞发生恶性转化,最后导致肝癌的发生.因此,损伤DNA的累积则成为肝癌发生的重要分子机制,对其深入研究将会为肝癌的治疗奠定基础.该文通过查阅相关文献,综述近年来DNA损伤和修复在肝癌中的研究进展.     

DNA甲基化研究及其检测方法的新进展

DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶(DN-MT)的催化下,在胞嘧啶的第五位碳原子上加一甲基基团,使之变成5-甲基胞嘧啶(5-mC)的化学修饰过程。修饰过程中,DNA的甲基化并不改变基因的碱基序列,而是通过影响基因的表达以改变其功能。近年大量研究证实,DNA甲基化的变异(全基因组的低甲基化     

DNA修复及其在肿瘤发生中的作用

生物体基因组不断受到各种内外因素的威胁仍能保持遗传信息的稳定传递,与机体不同类型的DNA修复功能密切相关。但是,当DNA修复功能异常不能及时有效地对受损的DNA进行修复时,基因组的稳定性就会受到挑战,从而导致染色体结构发生变化等一系列事件的发生,最终导致肿瘤的发生或者进展。因此,对DNA修复功能的机制进行深入研究有助于治疗、延缓肿瘤进展。     

一种快速简便的卡介苗基因组DNA提纯方法

一种快速简便的卡介苗基因组ＤＮＡ提纯方法同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室，武汉４３００３０梁驹卿，周火明，张大军，李东，皇甫永穆关键词卡介苗；基因组ＤＮＡ；ＤＮＡ提纯中图法分类号Ｒ３９２－３３．Ｑ３４３．１卡介苗（ＢＣＧ）除广泛用于预...     

从血液中提取DNA方法探讨

目的:研究从血液中提取DNA的方法以应用。方法:静脉抽取血样,分别抗凝或不加抗凝处理后,提取DNA,通过电泳和PCR进行检测。结果:凝血和抗凝血的DNA产量和纯度分别是(40.2±8.86)mgDNA/L血液和(1.87±0.11)mgDNA/L,(39.1±10.2)mgDNA/L血液和(1.92±0.12)mgDNA/L。所有样本的DNA分子量都很高,从两者的DNA样本中能很容易地扩增出t-PA基因的第8内含子区Alu等位基因二态性,因此所提取的DNA是完整可靠的。结论:该方法能快速、简单、有效、无毒地从新鲜血液和凝血中提取DNA,适合于临床检测和分子生物学研究。     

DNA甲基化的分析与状态检测

DNA甲基化是指由甲基转移酶介导，以S-腺苷-L广甲硫氨酸为甲基供体，在胞嘧啶5位碳原子上加入一甲基基团，使之变成5甲基胞嘧啶的化学反应。DNA甲基化是最常见的复制后调节方式之一，在基因表达调控、发育调节、基因组印迹等方面发挥重要作用^[1]，与某些肿瘤和遗传病的发生密切相关^[2]。DNA甲基化的分析检测将成为相关肿瘤和遗传病的分子诊断手段。近年来，DNA甲基化检测技术有了很大的发展和完善。在此，按DNA甲基化检测的目的对DNA甲基化分析检测的技术方法的原理和特点作简要综述。     

高温变性对双链DNA分子的损害

高温变性是实验室常用的方法 ,如用煮沸法提取质粒ＤＮＡ ,用煮沸法变性ＤＮＡ检测样品或ＤＮＡ双链探针 ,以及在ＰＣＲ中使用 94℃变性模板等[1～ 3] 。这给我们留下一个强烈印象 :即核苷酸链是耐高温以至可以接受煮沸处理的。基于这一事实 ,最近我们使用煮沸法来灭菌欲无菌保存的ＤＮＡ样品 ,结果意外发现 10 0℃加温处理可以不同程度地损害ＤＮＡ分子 ,引起了我们对高温变性处理双链ＤＮＡ分子的高度重视 ,特设计实验观察高温对ＤＮＡ损害的程度以及高温对不同来源ＤＮＡ的损害是否有差异。现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　实验材料…     

单细胞凝胶电泳技术操作方法的改进

目的 为处理大批量样品,对单细胞凝胶电泳技术中的一些操作步骤进行了简化,并对操作中易出现的问题进行了总结。方法 应用在１张载玻片上滴注２种不同的靶细胞等方法以提高制片速度。结果 通过观察对照组和丙烯腈染毒组,发现后者ＤＮＡ受到了明显的损伤。结论 改进的方法并不影响实验结果的正确性,且适用于现场人群的大量调查。     

用Chelex法制备AP-PCR细菌DNA模板

近年来 ,DNA分析技术已被广泛应用于口腔细菌学的研究。当前研究细菌基因分型的方法较多 ,包括质粒 DNA图谱、染色体 DNA指纹、核型分析法等 ,但这些传统方法都有一共同缺陷 ,即技术复杂 ,费时费力 [1 ] 。因此随着近年来随机引物聚合酶链反应 (AP- PCR)技术的不断完善 ,由于其对口腔同种细菌不同克隆型的分辨力好 ,而操作又较其他经典方法简便、快捷 ,已被广泛应用于口腔细菌的研究中 [2 ] 。目前 AP- PCR DNA模板的制备大多仍采用传统的DNA提取方法 ,即通过蛋白酶 K消化菌细胞 ,酚、氯仿抽提而获取 DNA。这种方法操作复杂 ,费…