ASC和p16基因启动子甲基化与非小细胞肺癌发生发展的关系

目的 探讨ASC和p16基因启动子甲基化与非小细胞肺癌发生发展的关系.方法 应用甲基化特异性PCR（MSP）检测非小细胞肺癌中ASC和p16基因启动子的甲基化发生率.结果 48例非小细胞肺癌中ASC和p16基因启动子甲基化的发生率分别为47.9%和37.5%,显著高于癌旁正常组织（P＜0.001）;重度吸烟患者的肿瘤组织中ASC和p16基因启动子甲基化的发生率明显增高（P＜0.05）;ASC基因启动子甲基化在较小的肿瘤组织中的有较高的发生率（P＜0.05）.而且,重度吸烟患者的正常肺组织中亦可检测到ASC基因启动子的甲基化.结论 ASC和p16基因启动子的甲基化在非小细胞肺癌中有较高的发生率.ASC基因启动子的频繁甲基化可能与吸烟引起的非小细胞肺癌有关,并且ASC基因甲基化有可能是非小细胞肺癌发展过程中的一个早期事件。     

非小细胞肺癌患者肿瘤和癌旁组织p14ARF的甲基化状态检测及临床意义

目的：探讨非小细胞肺癌中的 p14ARF基因启动子甲基化状态及其在非小细胞肺癌癌变中的作用。方法收集非小细胞肺癌及配对的癌旁组织各107例,采用改良巢式 MSP（methylation specific PCR, MSP）检测肺癌患者肿瘤标本以及配对的癌旁组织中 p14ARF基因外显子 CpG岛的启动子甲基化情况。结果p14ARF甲基化在107例肺癌中肿瘤组织中表达率为33.6%;而在配对的癌旁组织中表达率为12.1%;两组之间差异具有统计学意义（P＆lt;0.05）,并且两者相关性极差。结论肺癌的癌组织及配对的癌旁组织中p14ARF启动子甲基化存在明显差异,结合其他辅助检查可提高肺癌诊断的阳性预测值。     

p16基因甲基化在非小细胞肺癌的表达研究

目的：探讨p16基因甲基化在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法：应用甲基化特异性PCR法（MS-PCR）检测45例非小细胞肺癌组织,21例肺良性疾病组织中p16基因甲基化的表达情况。结果：肺良性疾病中p16基因甲基化阳性率为14．3％,低于癌组织中的57．8％,差异有统计学意义（P=0．001）;p16基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性（P〈0．05）。结论：p16基因甲基化的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。     

INK4/ARF基因座甲基化协同调控与非小细胞肺癌的关系

目的 分析INK4/ARF基因座甲基化状态与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性及探讨基因座内各编码基因甲基化协同调控的可能性。 方法 临床收集81例非小细胞肺癌患者手术切除的配对癌灶及癌旁石蜡组织标本;采用甲基化特异性PCR（MSP）对石蜡组织标本DNA进行p16INK4a、p15INK4b及p14ARF基因甲基化检测并与临床病理特征进行相关性分析。结果 癌灶组织中的p16 INK4a基因甲基化在鳞状细胞癌中的分布明显高于腺癌（P<0.01）,并与肿瘤大小密切相关（P<0.05）。癌灶组织中p16INK4a与p15INK4b基因甲基化状态密切相关（P<0.05）;结论 INK4/ARF基因座启动子区甲基化与非小细胞肺癌发生、发展相关;p16INK4a与p15INK4b基因甲基化状态的关联提示INK4/ARF基因座可能存在表观协同调控方式。     

外周血血浆中p16基因异常甲基化对非小细胞肺癌患者的检测意义

目的 了解非小细胞肺癌患者外周血血浆中p16基因异常甲基化发生情况及其在非小细胞肺癌临床辅助诊断中的应用价值.方法 选取72例肺部手术患者的血浆和组织标本,其中49例为非小细胞肺癌,23例为良性肺部疾病,采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSPCR）方法 检测了p16基因启动子的异常甲基化情况.结果 在非小细胞肺癌患者的血浆和肿瘤组织中,p16基因甲基化检出率分别为55.1%和63.3%;非小细胞肺癌患者血清、肿瘤组织中p16基因的甲基化异常事件与肿瘤分期、分型无明显相关性.在23例良性肺部疾病,其血浆和手术切除标本均未检测出p16基因启动子的异常甲基化存在.结论 检测非小细胞肺癌患者血浆中p16基因异常甲基化情况有可能成为有价值的非小细胞肺癌临床辅助诊断手段.     

肺癌组织p16基因启动子区高甲基化情况分析

目的:了解不同临床病理情况下肺癌组织中p16基因启动子区高甲基化的情况。方法:采用甲基化特异的PCR(MSP)法,根据5-甲基胞嘧啶与胞嘧啶修饰后的不同,设计甲基化与非甲基化等位基因特异的引物,通过PCR扩增检测手术后53例不同临床病理类型肺癌组织中p16基因启动子区高甲基化情况。结果:肿瘤组织标本中p16基因启动子区甲基化比例为占71.7%(38/53),其中鳞状细胞癌占80.0%(20/25),腺癌占66.7%(10/15),小细胞肺癌占61.5%(8/13)。长期吸烟史与鳞状细胞癌p16基因启动子区高甲基化比例增高有关(P<0.001),与小细胞肺癌(P=0.293)、腺癌的(P=1.000)p16基因启动子区高甲基化关系不密切。肿瘤T分期与鳞状细胞癌p16基因启动子区高甲基化比例增高有关(χ2=8.719,P=0.013)。结论:肺癌瘤组织标本中p16基因启动子区高甲基化是比较常见的现象;肿瘤组织基因启动子区高甲基化发生率随TNM分期的提高有升高趋势;基因启动子区甲基化状态与吸烟有关,有长期吸烟史的肺癌病人p16基因启动子区甲基化率增高。肺鳞状细胞癌中随T分期增高p16基因启动子区高甲基化比例增高。     

p16基因甲基化在非小细胞肺癌发病中的研究

目的研究p16基因甲基化在非小细胞肺癌（NSCLC）发病过程中的作用及其影响因素,为探索肺癌发病机制提供依据。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测47例NSCLC患者肺癌组织和47例对应癌旁组织中DNA的p16基因甲基化状况,同时收集吸烟等环境暴露资料。结果肺癌组织中p16基因甲基化率44．7％,高于癌旁组织的17％（P〈0．01）,p16基因甲基化好发于鳞癌（P〈0．05）,在鳞癌中肺癌组织p16基因甲基化率明显高于癌旁组织,差异有显著性（P〈0．01）,且p16甲基化和吸烟在鳞癌中高度相关（P〈0．01）。结论p16基因甲基化可能参与鳞癌的形成,且与吸烟高度相关。     

诱导痰RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化在肺癌诊断中的价值

目的：探讨诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区异常甲基化及其联合检测在肺癌诊断中的价值。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）技术,检测82例肺癌患者诱导痰和对应肿瘤组织以及25例肺部良性病变组织中RASSF1A,p16和DAPK3种基因启动子区甲基化改变,并分析三者与临床病理资料的关系。结果：肺癌病理组织中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化检出率分别为63.4%,59.8%和58.5%,对应的诱导痰三者甲基化检出率分别为54.9%,48.8%和51.2%;肺部良性病变组织中甲基化检出率均为零,两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。RASSF1A基因甲基化检出率在中高分化和无淋巴结转移的肺癌中明显低于低分化和未分化及有淋巴结转移者（P〈0.05）,与年龄、性别、吸烟指数、临床分期及病理类型无关,而p16和DAPK基因甲基化检出率与上述因素均无明显相关性（P〉0.05）;联合检测3种基因甲基化的检出率为73.2%。结论：联合检测诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区高甲基化有可能作为诊断肺癌及评估预后的简便有效的指标,并能提高检出率。     

p16与非小细胞肺癌临床病理的关系及5-Aza-CdR对肺癌A549细胞中p16表达的影响

目的 探讨抑癌基因p16在非小细胞肺癌（non-small cell lungcancer,NSCLC）组织中的表达与临床病理参数间的联系,进一步研究DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR）在人肺癌A549细胞中对p16 表达的影响。方法 采用免疫组化SP法检测76例NSCLC组织及其癌旁正常组织中p16 蛋白的表达情况,并分析不同病理参数癌组织中p16蛋白表达的差异;采用MSP法检测不同浓度（0~16 μmol/L）5-Aza-CdR处理后的A549细胞中P16基因启动子区DNA的甲基化状态,并采用Western blot 法检测5-Aza-CdR对A549细胞中p16 表达的影响。结果 76例NSCLC组织中,32例（42.11%）p16 蛋白表达阳性,低于癌旁正常组织（59例,77.63%）中阳性表达（P<0.05）;不同病理组织分级、肿瘤分化程度、临床TNM分期及有无淋巴结转移的NSCLC组织中p16 的阳性表达率差异有统计学意义（P<0.05）;在A549细胞中p16蛋白表达和非甲基化产物均呈低表达状态,5-Aza-CdR作用后,p16蛋白和其非甲基化产物表达均上调,且随着5-Aza-CdR浓度的升高呈增多趋势。结论 p16 在鳞癌、低分化、有淋巴结转移及Ⅲ~Ⅳ期NSCLC组织中低表达,提示其失活可能与NSCLC的进一步进展有关,5-Aza-CdR可诱导A549细胞中p16蛋白和非甲基化产物表达增加。     

5-Aza-CdR体外诱导人肺癌细胞株p16基因去甲基化

目的观察人肺癌细胞株H719p16基因启动子区甲基化状态,并探讨去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导H719细胞株高甲基化失活的pl6基因重新表达的可能性。方法MSP法检测体外培养的人肺癌细胞株p16基因启动子区甲基化状态,并应用不同浓度的5-Aza-CdR处理人肺癌细胞株H719,MSP法检测用药后细胞中p16基因的甲基化状态,并用RT-PCR方法及Western Blot方法检测用药前后细胞中p16基因mRNA和蛋白水平变化。结果p16基因在人肺癌细胞株H719中启动子区呈甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后,p16基因启动子区呈去甲基化状态,并且其mRNA及蛋白恢复表达。结论启动子区异常甲基化是人肺癌细胞株p16基因失活的可能原因,5-Aza-CdR能逆转p16基因甲基化状态。     

肺癌病人痰细胞中p16基因高甲基化分析

目的　分析肺癌病人痰标本中p16基因启动子区域异常高甲基化的改变情况 ,评价该指标作为肺癌辅助诊断分子标记物的价值。方法　运用半巢式甲基化特异性PCR技术 ,检测 94例原发性肺癌病人痰标本和部分对应肿瘤组织 ,以及 10例慢性炎病例痰标本中p16基因启动子区域的甲基化改变。结果　 74%的肺癌病人痰标本中检测到了p16基因异常高甲基化 ,与传统细胞学相比 ( 4 6.8%) ,痰标本中p16基因异常高甲基化对肿瘤的检出率灵敏度更高 (P <0 .0 1) ;痰细胞中p16甲基化检测和细胞学相结合 ,对肿瘤的检出率可达 86.17%( 81 94)。如果痰标本中p16基因启动子区域发生高甲基化 ,其对应的肿瘤组织中p16基因亦为高甲基化。 10例慢性炎病人痰标本中仅 3例检测出p16基因甲基化。结论　痰标本中p16基因甲基化是临床肺癌辅助诊断的有效分子生物标记物之一。     

巢式甲基化特异性PCR检测p16基因的研究

目的检测p16基因启动子区异常甲基化发生情况,探讨p16基因异常甲基化作为结直肠癌临床辅助诊断分子生物学标志物的可能性.方法应用巢式甲基化特异性PCR技术(Nested-MSP)及甲基化特异性PCR(MSP),检测了结直肠癌患者肿瘤组织中p16基因的异常甲基化情况;比较MSP及Nested-MSP两方法的灵敏度.结果应用MSP方法,Dukes A、B期病人和Dukes C、D期病人p16启动子区甲基化率分别为23.8%和59.4%;应用巢式-MSP方法,甲基化率上升至52.4%和84.4%.结论巢式-MSP的灵敏度明显高于普通的MSP技术,分析患者DNA的p16基因异常甲基化有可能成为辅助结直肠癌诊断的有效方法之一.     

大肠癌p16抑癌基因甲基化及与Dukes分期的关系

目的 检测大肠癌患者p16基因启动子CpG区甲基化的改变,探讨其与大肠癌发生、发展和临床资料的关系。方法 采用甲基化特异PCR技术（MSP法）研究58例大肠癌标本p16基因甲基化改变,分析临床病理资料。结果 25例标本（43．1％）呈p16 CpG区甲基化阳性;Dukes C、D期病人p16 CpG区甲基化发生率（75％）明显高于Dukes A、B期病人（13．3％）。结论 p16启动子区甲基化导致p16抑癌基因失活参与了大肠癌的发生和发展;p16甲基化可以作为估计大肠癌病人预后的一个指标。     

肺癌RASSF1A基因甲基化与cyclin D1的表达

目的探讨肺癌中RASSFIA基因甲基化与cyclinD1表达对肺癌诊断的意义及RASSF1A基因甲基化与cyclinD1表达两者之间有无相关性。方法甲基化特异性PCR检测33例肺癌及10例癌旁组织中RASSFIA基因启动子区甲基化情况;用免疫组织化学S-P法检测cyclinD1在上述组织中的表达情况。分析两者分别与患者年龄、性别、组织分型的关系及与肿瘤分化间的相关性,同时对RASSFIA基因甲基化与cyclinD1表达间的关系进行分析。结果33例肺癌中有18例（54．5％）显示RASSFIA基因已被甲基化,16例（48．5％）肺癌组织显示为cyclinD1表达阳性;而10例癌旁组织RASSFIA基因未甲基化且cyclinD1免疫组化染色显示为阴性。RASSFIA基因甲基化与年龄、性别、组织分型、分化及cyclinD1表达均无关;而cyclinDl表达与肿瘤的分化具有相关性（r=0．418,P〈0．05）,但与年龄、性别、组织分型无关（P〉0．05）。结论RASSFlA基因甲基化与cyclinD1表达在肺癌的发生中具有重要作用,且cyclinD1表达与肿瘤分化有关,检测cyclinD1表达有助于对肺癌恶性程度作出判断。     

肺癌组织、支气管肺泡灌洗液及痰标本中p16基因甲基化特异性PCR检测

目的：探讨肺癌组织、支气管灌洗液及痰标本中p16基因甲基化特异性PCR检测的临床应用价值。方法：选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本，其中32例为肺癌，24例为良性肺部疾病。标本经一般处理，PCR扩增后，产物经电泳EB染色，紫外灯下观察。结果：32例肺癌组织标本中，14例(43．8％)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化，其中9例(64．3％)在相应的BALF中检出甲基化存在，5例(35．8％)在相应的痰标本中也检出甲基化存在。24例良性肺部疾病，其中肺囊肿10例，肺结核14例，无论在手术切除标本还是BALF和痰标本中均未检出p16基因甲基化存在。结论：MSP技术对肺癌患者BALF及痰标本中p16基因的异常甲基化检测具有高度特异性，是一项很有潜力的肺癌早期诊断新技术。     

非小细胞肺癌组织中RASSF_(1A)和p16基因启动子甲基化研究

目的:研究肺癌新型侯选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)和p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的甲基化情况,揭示两基因表达失活的机制,为NSCLC的基因诊断和治疗寻找新途径。方法:用甲基化特异性PCR(MSP)方法对96例NSCLC患者癌组织及相应的远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因启动子甲基化状态进行检测。结果:(1)96例NSCLC组织RASSF1A甲基化率48.96%,p16基因34.38%,96例远癌正常肺组织均未发现此两基因甲基化。(2)RASSF1A甲基化率鳞癌组(64.29%)高于腺癌组(37.04%,P<0.05);p16基因甲基化率50岁以上组(44.93%)高于50岁以下组(7.41%,P<0.05),鳞癌(61.90%)高于腺癌(12.96%,P<0.05),有淋巴结转移组(46.67%)高于无淋巴结转移组(13.89%,P<0.05)。(3)RASSF1A与p16基因启动子CPG岛甲基化呈正相关(r=0.256,P<0.05)。结论:RASSF1A和p16在NSCLC尤其是鳞癌中频繁甲基化,可能是两基因表达失活的主要原因。     

CDP抑制乳腺癌细胞T47D生长及逆转p16基因甲基化的研究

目的　研究 CDP(一种中药成分 )抑制乳腺癌 T4 7D细胞株生长的机制。方法　不同浓度的 5 -氮杂胞苷 (5 - azacytidine,5 - aza- CR)或 CDP与 T4 7D细胞培养数天 ,细胞增殖试验 (MTT法 )检测对 T4 7D细胞生长的影响 ;流式细胞术检测凋亡峰和细胞周期改变 ;甲基化特异性 PCR(MSP)检测用药前后 p16基因甲基化、非甲基化状态及程度的改变。结果　 5 - aza- CR和 CDP均对细胞生长呈浓度和时间依赖性抑制作用 (P<0 .0 5 ) ;在试验药物浓度 5 - aza- CR2 μm ol/ L,CDP5 0 μm ol/ L 的作用下 ,对细胞生长周期有影响 :G0 / G1 期细胞数由 6 5 .1%增加到71.3%和 84 .3% ,S期细胞数由 19.4 %减少到 14 .3%和 7.2 % ;药物作用细胞 6 d后对 p16基因有完全去甲基化作用。结论　 CDP可以逆转 p16基因高甲基化 ,并可能因此抑制肿瘤细胞生长。