PD153035对人多发性骨髓瘤细胞XG-1的诱导凋亡作用及机制

目的研究表皮生长因子受体(EGFR)在多发性骨髓瘤细胞增殖与生存中的作用及机制.方法采用EGFR抑制剂PD153035对多发性骨髓瘤细胞XG-1上的EGFR进行阻断.采用3H掺入法、MTT法和Annexin V染色检测细胞的增殖与凋亡情况,同时采用Western blot方法分析PD153035对STAT3磷酸化的影响.结果 PD153035可以使XG-1细胞增殖能力下降,并诱导XG-1细胞凋亡.而且PD153035还可以阻断HB-EGF诱导的STAT3的磷酸化,但对IL-6诱导的STAT3的磷酸化无阻断作用.结论 PD153035可以通过特异性阻断STAT3分子磷酸化,切断EGFR活化的转导通路,导致骨髓瘤细胞的增殖能力下降,并诱导其凋亡.     

JAK2-STAT3途径介导凝血酶诱导的小胶质细胞iNOS的激活致多巴胺能神经元变性

目的 探讨JAK2-STAT3途径与凝血酶诱导多巴胺能神经元变性作用的关系.方法 20 U/ml凝血酶或AG490(10 μmol/L)预处理 凝血酶(20 U/ml)处理原代培养的小胶质细胞或中脑腹侧混合培养体系,用Western blot检测小胶质细胞P-JAK1、P-JAK2、JAK2、STAT3、P-STAT3的表达;免疫荧光观察多巴胺能神经元的变性;Western blot、RT-PCR及激光共聚焦观察iNOS的表达.结果 凝血酶处理小胶质细胞2 h后诱导JAK2、STAT3的磷酸化,2 h和4 h分别增加小胶质细胞iNOS的转录和表达,并且24 h诱导中脑培养体系多巴胺能神经元变性.而AG490预处理显著地减少对应凝血酶处理组小胶质细胞JAK2和STAT3的磷酸化,抑制iNOS的表达,并且缓解多巴胺能神经元的变性.结论 JAK2-STAT3途径介导凝血酶诱导的小胶质细胞iNOS的激活,导致多巴胺能神经元变性.     

桦木酸通过调控JAK2/STAT3信号通路对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制

探讨桦木酸（BA）通过介导Janus激酶2（JAK2）/信号转导与转录激活因子（STAT3）信号通路对多发性骨髓瘤（MM）细胞增殖和凋亡的影响及其机制。     

Pim激酶在多发性骨髓瘤中的作用及相关的药物治疗进展

Pan proviral integrations of Moloney virus (Pim)激酶属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族,由Pim1、Pim2、Pim3三个成员组成。Pim激酶主要负责调节细胞周期、产生抗凋亡活性以及发挥通过JAK/STAT途径介导的受体酪氨酸激酶的作用。在许多恶性血液瘤以及实体瘤中均发现Pim激酶表达水平的上调,其中也包括多发性骨髓瘤。到目前为止,多发性骨髓瘤仍是一种无法治愈的浆细胞恶性肿瘤,迫切需要新的治疗策略来提高患者的生存率。而在Pim家族成员中,Pim2蛋白在多发性骨髓瘤中表达水平最高,有望成为一个新的治疗靶点。骨髓微环境能够促进Pim2的上调,从而介导骨髓瘤细胞的增殖与存活。同时,Pim2对于多发性骨髓瘤中常见的骨质破坏也起着重要作用。此外,在骨髓基质中,Pim激酶还能够促进恶性细胞的转运、低氧骨髓微环境中致癌信号的传导以及产生治疗抵抗。在本文中,我们主要讨论了Pim激酶在癌症中尤其是多发性骨髓瘤中的作用,以及以此为靶点的相关药物治疗进展。     

TF-1细胞增殖特性与信号蛋白JAK2/STAT3表达研究

目的 探索JAK／STAT途径活化与细胞增殖和凋亡之间的关系。方法 通过表达内源性GM-CSF、受体的TF-1细胞，观察细胞增殖与凋亡；建立免疫沉淀和Western blot印迹方法，检测经GM-CSF100 ng／ml瞬时诱导的TF-1细胞信号蛋白JAK2和STAT3酪氨酸磷酸化情况。结果 经过GM-CSF刺激，细胞不但免于凋亡，TF-1细胞还呈现剂量与时间信赖性的增殖反应。当耗竭细胞因子6～12h后，倒置显微镜下TF-1细胞呈现折光性改变，细胞开始凋亡，呈现凋亡特征性形态改变和出现DNA梯形条带，而加入0．1ng／ml的GM-CSF，TF-1细胞即开始进入增殖状态，提示GM-CSF对细胞具有凋亡保护作用。经过100ng／ml GM-CSF的瞬时诱导，在分子量130kd区域见到JAK2蛋白条带，显示GM-CSF可诱导TF-1细胞磷酸化JAK2表达；而在分子量90kd区域未见到STAT3蛋白条带，显示无磷酸化STAT3表达；而未经GM-CSF诱导的TF-1细胞，既无磷酸化JAK2也无磷酸化STAT3表达。结论 GM-CSF、为TF-1细胞增殖诱导和凋亡保护所必需；GM-CSF诱导的TF-1细胞生物学效应涉及到胞浆信号分子JAK2磷酸化而非STAT3磷酸化。     

马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞JAK-STAT信号通路的影响

目的观察马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞JAK—STAT通路的影响。方法马钱子碱和／或JAK—STAT途径特异性抑制剂AG490培养多发性骨髓瘤U266细胞,MTT法检测马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞株增殖的影响,计算IC50值,用于实验。RT—PCR法检测马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞stat3、star5mRNA表达的影响。结果（1）马钱子碱对多发性骨髓瘤细胞增殖的抑制率呈剂量和时间依赖性。（2）马钱子碱AG490均可下调stat3、stat5mRNA表达水平（P〈0．05）,而马钱子碱作用强于AG490组,并呈时间依赖性。马钱子碱＋AG490组作用强于马钱子碱、AG490单独作用组,呈时间依赖性。结论马钱子碱能下调stat3、stat5mRNA表达水平,抑制细胞JAK—STAT信号转导通路,从而抑制多发性骨髓瘤U266细胞增殖。     

IL-13及其变异体在呼吸道平滑肌细胞内对STAT6信号转导途径的影响

大多数学者认为IL-13主要是在细胞外通过与细胞膜上的IL-13Rα1受体、IL-13Rα2受体结合.IL-13与IL-13Rα1结合后,促使IL-13Rα1与IL-4Rα形成二聚体,从而激活JAK,随后一系列的信号途径被激活,包括胰岛素受体酶作用物(IRS-1,和IRS-2)、信号转导与转录(STAT)家族.STAT-6的SH2位点与IL-4R链酪氨酸磷酸化的残基结合,旦结合,STAT-6被JAK.磷酸化,而从此受体上释出来,与其他磷酸化的STAT-6分子形成二聚体,转运至核中,诱导基因转录激活,从而发生一系列信号转导,促使嗜酸细胞聚集,钙离子通道被激活,支气管平滑肌增生、再构杯状细胞增生,粘粹分泌增加等.因此IL-13及其受体在哮喘的发生和发展中起着重要作用.     

Mcl- 1 mediates cytokine deprivation induced apoptosis of human myeloma cell line XG- 7

Objective To investigate apoptosis in XG- 7, a human myeloma cell line, induced by IL- 6 d eprivation and the function of three anti- apoptotic Bcl- 2 proteins (Bcl- 2, Bc l- xL, Mcl- 1) in the apoptotic process.Methods Apoptosis in XG- 7 myeloma cells induced by IL- 6 withdrawal was determined by f low cytometry with propidium iodide (PI) nuclear staining. Expressions of thre e Bcl- 2 proteins in XG- 7 cells were monitored by immunoblotting assay.Results In the absence of IL- 6 for a certain time, a significant percentage of apoptiot ic XG- 7 cells can be observed, as well as down- regulated expression of one of the three anti- apoptotic proteins (Mcl- 1) in XG- 7 cells.IL- 6 re- stimulat ion in XG- 7 cells following cytokine removal up- regulated the expression of Mc l- 1 and inhibited cell apoptosis.Conclusion Mcl- 1,instead of Bcl- 2 and Bcl- xL, plays an important role in IL- 6 depriva tion induced apoptosis in XG- 7 human myeloma cells.      

转B7-1基因的人多发性骨髓瘤细胞XG-7在激发杀肿瘤细胞CTL中的作用

为调查B7－1分子在人多发性骨髓瘤细胞的表达是否可诱导出具有抗肿瘤作用的CD8 的CTL，我们用含B7－1基因逆转录病毒载体PTG5192的包装细胞293E的培养上清，感染人多发性骨髓瘤细胞系XG－7（不表达B7－1分子），用新霉素G418选择并经流式细胞仪筛选，获得了稳定高表达B7－1分子的XG－7细胞（命名为XG－7－B7细胞）。在体外增殖实验中，XG－7－B7细胞显示出比母系细胞XG-7对外周血淋巴细胞（PBL）具有更大的刺激活性。表型分析证实XG-7-B7细胞所刺激的PBL是一群T细胞，其表型特征为CD3，CD8阳性，CD25、CD28也高表达，而CD4和CD16几乎不表达。这群细胞可在体外长期培养扩增，并可用作效应细胞。细胞毒实验结果表明：CD8 T细胞可杀死XG－7－B7细胞、母系细胞XG－7和其它肿瘤细胞如K562与Daudi细胞。结果提示，这群肿瘤持异的CD8 CTL细胞对肿瘤的过继免疫治疗具有潜在的应用价值。     

小白菊内酯对多发性骨髓瘤细胞的生长抑制及其凋亡诱导作用

目的探讨小白菊内酯(parthenohde,VTL)对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的体外作用及其机制。方法培养人MM细胞系PRMI8266,在不同浓度的PTL作用不同时间后,以四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)及台盼蓝拒染检测细胞增殖及活性,用AO／EB染色荧光显微镜及Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,应用膜联蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(PI)染色流式细胞仪检测细胞凋亡率,酶底物法测定细胞半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性。结果(1)1- 10μmol／L的PTL对MM细胞生长曲线和活性有明显抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,5μmol／L作用48 h,可达到接近50％的活性抑制;(2)5μmol／L PTL作用48 h后可见到细胞出现明显形态学改变,细胞形态变小、胞质减少、胞体胞核固缩、出现凋亡小体;(3)2μmol／L、5μmol／L、10μmol／L的PTL作用48 h后MM细胞的凋亡率分别为17．1％±2．6％、33．6％±3．8％、40．9％±3．1％,与对照组5．6％±1．2％相比,差异有显著统计学意义(均P<0．01);(4)PTL作用48 h后,MM细胞caspase-3活性明显增强,且呈浓度依赖性(P<0．01)。结论。PTL能明显抑制MM细胞体外生长及活性,其作用机制为增强caspase-3活性而诱导MM细胞凋亡;PTL作为新的MM细胞凋亡诱导剂,其作用靶点及体内效应值得深入研究。     

凝血酶对人肝癌细胞株HepG_2增殖影响及诱导凋亡作用研究

目的 观察凝血酶对人肝癌细胞株HepG_2增殖的影响及其诱导凋亡的作用.方法 体外培养人肝癌细胞HepG_2,MTT法观测不同浓度凝血酶在不同时间点对肝癌细胞增殖的影响,TUENL法检测其诱导凋亡作用.结果 高浓度凝血酶对肝癌细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05),当浓度大于100 U/ml作用时间在48 h后,其抑制率最高可达到(39.08±2.32)%,且不随浓度的提高和时间的延长而增加;高浓度凝血酶能够诱导肝癌细胞凋亡,当浓度大于100 U/ml且作用时间大于48 h后,各组凋亡指数无显著性差异(P>0.05).结论 高浓度凝血酶能够明显抑制体外生长的人肝癌细胞株HepG_2并诱导肝癌细胞凋亡,且存在一定时间(48 h内)及浓度(<100 U/m1)依赖性.     

葫芦素E抑制多发性骨髓瘤细胞增殖及与阿霉素的协同效应?

目的：研究葫芦素 E 对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响,并观察葫芦素 E 与阿霉素的协同效应。方法采用 CCK-8测定葫芦素 E 对4种多发性骨髓瘤细胞 MM1.S、MM1.R、U266和 RPMI8226的半数生长抑制率(GI50),并通过 CalcuSyn 协同效应分析软件,计算药物合用指数(CI),评价葫芦素 E 与阿霉素协同抗多发性骨髓瘤作用;流式细胞术检测葫芦素 E 对 MM1.S、MM1.R 的细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡的影响;Western blot 检测凋亡相关蛋白 Caspase-3和 PARP 的变化,以及葫芦素 E 对 IL-10刺激的 RPMI8226细胞STAT3蛋白磷酸化的抑制作用。结果葫芦素 E 对4种多发性骨髓瘤细胞的 GI50均在(12.3~161.7)nM 范围内;葫芦素 E 导致多发性骨髓瘤细胞的 SubG1期细胞比例、凋亡细胞比例和线粒体膜电位下降细胞比例均明显增加,并出现凋亡相关的活化蛋白如 Cleaved Caspase-3和 Cleaved-PARP。葫芦素 E 能有效抑制 IL-10诱导的RPMI8226细胞 STAT3磷酸化,并能与阿霉素协同抗多发性骨髓瘤。结论葫芦素 E 通过抑制 STAT3蛋白磷酸化,诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡,并能协同阿霉素抗多发性骨髓瘤。     

反义凝血酶受体ODNs对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :为研究凝血酶受体在血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,探讨反义凝血酶受体ODNs对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响 .方法 :通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,以3 H -TdR掺入率作为评价反义凝血酶受体ODNs抑制血管平滑肌细胞增殖的指标 ,用反转录聚合酶链反应检测反义凝血酶受体ODNs 抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体mRNA的表达 ,用Western -Blot检测反义凝血酶受体ODNs抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体蛋白质的表达 .结果 :反义凝血酶受体ODNs明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 (与对照组相比 ,P <0 0 5 ) ,明显抑制血管平滑肌细胞的凝血酶受体mRNA和蛋白的表达 .结论 :反义凝血酶受体ODNs明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 ,其抑制血管平滑肌细胞的增殖是通过抑制凝血酶受体基因的表达 ,特别是通过抑制DNA、mRNA和蛋白的表达来完成 .     

苦参碱对多发性骨髓瘤细胞的体外作用机制研究

目的:阐明苦参碱对多发性骨髓瘤(MM)细胞的作用和内在机理。方法:MTT法检测苦参碱对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和多发性骨髓瘤原代细胞增殖的影响;根据中效原理分析苦参碱联合亚砷酸对RPMI8226细胞株的联合作用;应用DAPI染色检测细胞凋亡。结果:M1TT比色法检测结果显示,苦参碱对RPMI8226细胞及MM原代细胞均有生长抑制作用,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。体外联合亚砷酸作用RPMI8226细胞抑制率>50%时联合指数(CI)<1。DAPI荧光染色,荧光显微镜下观察苦参碱以终浓度2.0g/L作用于RPMI8226细胞12h后可见明显的凋亡小体出现。结论:苦参碱对RPMI8226细胞和MM原代细胞均有生长抑制作用,体外联合亚砷酸作用MM细胞株RPMI8226细胞,抑制率>50%时呈协同作用。苦参碱通过诱导细胞凋亡抑制RPMI8226细胞的增殖。     

Arsenic trioxide induces multiple myeloma cell apoptosis viadisruption of mitochondrial transmembrane potentials and activation of caspase-3

Objective　To investigate the response of multiple myeloma (MM) cells to arsenic trioxide (As2O3 ) and their possible mechanisms. Methods　Two MM-derived cell lines RPMI8226 and U266 cells were used as in vitro models. Cell apoptosis was assessed by morphology, flow cytometry, and DNA gel electrophoresis. Mitochondrial transmembrane potentials (△Ψm) were evaluated by measuring cellular Rhodamine 123 staining intensity. Protein expression was analyzed using Western blot. Results　Zero point one to 0.5μmol/L As2O3 inhibited cell proliferation and 2.0?μmol/L As2O3 induced cell apoptosis, while 1.0μmol/L As2O3 inhibited proliferation with a weak degree of apoptosis induction in RPMI8226 and U266 cell lines. As2O3-induced apoptosis was accompanied by mitochondrial transmembrane potentials (△Ψm) collapse and caspase-3 activation in the presence of intact membrane. Glutathione depleter buthionine sulfoximine enhanced, while disulfide bond-reducing agent dithiothreitol partially antagonized As2O3 -induced △Ψm collapse and apoptosis in MM cells. All-trans retinoic acid (ATRA) could also induce apoptosis in RPMI8226 cells, but it did not show any cooperative effects with As2O3. Conclusion　As2O3 exerts apoptosis-inducing and growth-inhibiting effects on MM cells, and mitochondrium is a pivotal and common target of As2O3 for apoptosis induction.     

氧化砷通过线粒体跨膜电位下降与激活Caspase-3诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的　探讨氧化砷 (As2 O3)是否诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡与其可能机制。方法　以两株多发性骨髓瘤细胞系RPMI82 2 6和U2 66为体外模型。以细胞形态学观察、流式细胞仪检测亚G1期细胞含量以及DNA凝胶电泳判定细胞凋亡。通过检测胞内Rhodamine12 3染色强度来判定线粒体跨膜电位。通过Western印迹分析蛋白表达。结果　 0 1- 0 5μmol LAs2 O3抑制RPMI82 2 6与U2 66细胞系生长 ,2 0 μmol LAs2 O3 诱导两株细胞凋亡 ,而 1 0μmol LAs2 O3抑制细胞生长同时也诱导部分细胞凋亡。As2 O3诱导的细胞凋亡伴随线粒体跨膜电位下降与细胞凋亡 ,而二巯基苏糖醇 (二巯基还原剂 )则部分抑制以上效应。虽然全反式维甲酸 (ATRA)诱导RPMI82 2 6细胞凋亡 ,但是它与As2 O3无协同效应。结论　不同深度As2 O3可抑制多发性骨髓瘤细胞生长与诱导细胞凋亡。线粒体是As2 O3 诱导细胞凋亡的重要且共同的“靶子”。