实时荧光定量PCR法检测淋病奈瑟菌感染的效果

①目的 应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术准确定量检测临床标本中淋病奈瑟菌基因，同时与金标准—细菌培养法比较其灵敏度和特异度，为临床淋病的诊疗提供依据。②方法 采集l73例病人临床标本，以PE5700全自动PCR扩增分析仪和淋病奈瑟菌实时荧光定量PCR检测试剂盒进行核酸检测。同时，用含PolyViteX的巧克力板对淋病奈瑟菌进行分离，用ATB Expression自动细菌鉴定仪及配套的APINH进行鉴定。③结果 173份临床标本中，荧光定量PCR法示47例淋病奈瑟菌阳性，阳性率为27．2％；细菌培养法示41例淋病奈瑟菌阳性，阳性率为23．7％。与细菌培养法相比，荧光定量PCR法的灵敏度为100％，特异度为95．5％，两者的符合率为96．5％。④结论 荧光定量PCR技术具有简便、快捷、灵敏度高、特异度高、定量准确等优点，在临床检测淋病奈瑟菌中具有良好的应用前景。     

淋病奈瑟菌的细菌培养与PCR方法检测的结果对比

目的:比较细菌培养法与聚合酶链反应(PCR)检测方法对淋病奈瑟菌的检测效果。方法:对60例疑似淋病患者生殖道分泌物同时进行细菌培养、PCR检测,并对其结果进行比较分析。结果:采用细菌培养法检测60例样本中26例为淋病奈瑟菌阳性,阳性检出率为43.3%;采用PCR方法检测60例样本中45例为淋病奈瑟菌阳性,阳性检出率为75.0%。两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:对于淋病奈瑟菌采用PCR检测方法具有高效率、高特异性、低误诊率、低漏诊率,是临床上检测淋病奈瑟菌的好方法。     

女性宫颈淋病奈瑟菌三种检测方法的比较

目的比较三种女性宫颈淋病奈瑟菌检测方法。方法采用涂片法、淋病奈瑟菌培养法和荧光定量PCR法对210例临床分泌物标本进行同时检测。结果涂片法阳性率为43%,培养法阳性率为39%,PCR法阳性率为48%。结论三种方法比较,PCR法可作为女性宫颈淋病奈瑟菌首选的检测方法。     

四种方法检测淋病奈瑟氏菌实验室应用效果评价

目的:比较四种方法检测淋病奈瑟氏菌的实验室应用效果评价。方法:对临床106例诊断为淋病的分泌物分别采用四种方法同时检测比较。结果:革兰染色镜检阳性19例,阳性率17.9%。PCR检测法阳性92例,阳性率86.8%。细菌培养阳性41例,阳性率38.68%。试纸法阳性58例,阳性率54.7%。结论:对于慢性淋病,PCR检测法阳性率明显高于其他三种方法,且结果特异性强,灵敏度高,可作为慢性淋病检测的首选方法。而尿液淋球菌快速检测法和革兰染色法可作为淋病的筛查方法。     

三种检测淋病奈瑟氏菌方法结果比较

目的 比较PCR检测法、细菌培养法、直接涂片法快速检测法检测淋病奈瑟氏菌的实验室应用效果评价.方法 对临床288例诊断为淋病的分泌物分别采用PCR检测法、细菌培养法、直接涂片法快速检测法检测,对三种方法的阳性检测结果进行比较分析.结果 PCR检测法的阳性率最高为79.86%.尿液淋球菌快速检测法的阳性率为45.83%,细菌培养法的阳性率为62.84%,直接涂片法的阳性率最低为43.40%.PCR检测法阳性检出率显著高于其它两种检测方法,相比较均有显著性差异(P<0.05).结论 PCR检测法特异性强,灵敏度高,可作为慢性淋病检测的首选方法.     

实时荧光定量PCR法在淋病奈瑟菌感染检测中的应用效果分析

目的:探讨实时荧光定量PCR法在淋病奈瑟菌感染检测中的应用效果。方法:选取淋病奈瑟菌感染检测患者298例为研究对象,分别采用培养检测法及实时荧光定量PCR法从检测线性范围、检测重复性、检测灵敏度、检测特异性及检测试剂稳定性等方面进行比较。结果:经两组方法比较,在检测线性范围、检测重复性、检测灵敏度、检测特异性及检测试剂稳定性等方面,PCR检测法显示了一定的优势,但也存在一定的漏检率。结论:临床上应充分应用各种检测方法的优势,使之相互补充,以提升淋病奈瑟菌的检出率。     

产色头孢菌素法检测淋病奈瑟菌β-内酰胺酶的临床应用评价

目的评价产色头孢菌素法检测淋病奈瑟菌β-内酰胺酶的临床应用效果。方法采用产色头孢菌素法常规检测淋病奈瑟菌临床分离株的β-内酰胺酶;同时采用纸片酸度定量法将保存的上述淋病奈瑟菌菌株进行β-内酰胺酶检测,与产色头孢菌素法检测结果不一致者采用PCR方法检测淋病奈瑟菌的13．内酰胺酶基因,以两种方法结果一致者为真结果,对产色头孢菌素法检测的结果进行评价。结果检测74株淋病奈瑟菌分离株,产色头孢菌素法阳性28株,阳性率37．8％;纸片酸度定量法阳性25株,阳性率33．8％;两种方法结果一致者69株,一致率93．2％,5株结果不一致菌株中,其中1株纸片酸度法阳性,产色头孢菌素法为阴性,但β-内酰胺酶基因阳性,4株产色头孢菌素法为阳性,纸片酸度法和β-内酰胺酶基因均为阴性,74株淋病奈瑟菌的β-内酰胺酶基因阳性25例,产色头孢菌素法敏感性96％,特异性91．8％。结论产色头孢菌素法操作简便,敏感性高,适合临床筛查淋病奈瑟菌的13一内酰胺酶。     

两种检测淋病奈瑟菌方法的比较

目的:比较两种检测淋病奈瑟菌(NG)的方法。方法:采用荧光定量PCR检测法和NG培养法。对155例临床分泌物标本同时进行检测。结果:荧光定量PCR检测阳性率15.5%,培养方法阳性率4.5%.。两者比较PCR方法阳性率显著高于培养法(P<0.05)。结论:对NG的检测,荧光定量PCR检测法更适合,并且可有效减少假阴性。     

淋病奈瑟菌快速检测方法的研究

目的:探讨淋病奈瑟菌快速检测方法的准确性。方法:对门诊200例疑似淋病奈瑟菌(简称淋球菌)感染者进行检查,分别用淋球菌快速检测法、直接涂片法与细菌培养法进行检测,对灵敏度、特异性进行比较。结果:淋球菌快速检测法符合细菌培养法明显高于直接涂片法。结论:采用淋病奈瑟菌快速检测对淋病的早期诊断与治疗十分重要。     

荧光定量聚合酶链反应检测淋病奈瑟菌

目的　评价荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)技术检测淋病奈瑟菌的临床应用。方法　采用FQ -PCR技术检测疑似淋病患者泌尿生殖道标本 80例 ,并同时进行淋病奈瑟菌培养 ,对两种方法的检测结果进行比较分析。结果　测试 80例标本 ,FQ -PCR法 30例为阳性 ,DNA拷贝数从 3× 10 5/ml至 6× 10 10 /ml不等 ,阳性率为 37.5 %(30 / 80 ) ;培养法 2 4例阳性 ,阳性率 30 .0 % (2 4/ 80 ) ;FQ -PCR较培养法差异有显著性 (P <0 .0 0 5 )。结论　FQ -PCR技术可定量检测标本中的DNA拷贝数 ,较培养法简单、敏感、准确 ,对于淋病的早期确诊 ,治疗期间疗效的判断具有重要价值     

实时核酸恒温扩增技术在奈瑟菌感染检测中的应用

目的探讨实时核酸恒温扩增技术(SAT法)在淋病奈瑟菌感染检测中的应用价值。方法取153例疑似淋病奈瑟菌感染的女性患者宫颈分泌物标本采用直接涂片法、分离培养法及SAT法进行淋病奈瑟菌检测,同时对对应的153份尿液标本也进行SAT法的淋病奈瑟菌检测,对结果进行比较分析。结果淋病奈瑟菌检测中直接涂片法阳性率为31.4%,分离培养法阳性率为47.7%,SAT法阳性率为51.6%,SAT法与分离培养法检测淋病奈瑟菌阳性率差异无统计学差异(P>0.05),而直接涂片法淋病奈瑟菌阳性率较低,与分离培养法比较,差异有统计学意义(P<0.01);以分离培养法作为金标准,SAT法的检测敏感性为95.9%(70/73),特异性为88.8%(71/80);采用SAT法对153例患者的拭子标本和尿液标本进行检测,两者检测结果的符合率为100%。结论 SAT法检测女性宫颈分泌物拭子标本和尿液标本中的淋病奈瑟菌敏感性高、特异性强,能有效提高检出率;以尿液代替拭子标本,采样方便。     

荧光PCR快速检测从业人员肠道致病菌结果分析

目的了解荧光PCR快速检测从业人员肠道致病菌效果。方法采集从业人员肛拭子样本用实时荧光PCR法检测沙门氏菌和志贺氏菌,检出的疑似阳性样本按国标法进行培养鉴定,分析荧光PCR检测方法的阳性检出率。结果采用实时荧光PCR方法共检测从业人员77 476人次,其中沙门氏菌阳性71例,阳性率0.916‰,志贺氏菌阳性62例,阳性率0.80‰。肠道致病菌合计阳性133例,阳性率1.717‰。结论荧光PCR快速检测方法用于从业人员体检,具有沙门氏菌、志贺氏菌的阳性检出率高、省时的效果。     

细菌培养法与聚合酶链反应检测方法对淋病奈瑟菌的检测效果对比

目的：探析淋病奈瑟菌采用聚合酶链反应检测与细菌培养法的临床效果对比。方法：选取124例疑似淋病的患者,按照检测方式的不同分为观察组和对照组,每组62例。观察组患者实施聚合酶链反应检测,对照组患者实施细菌培养法检测,观察2组患者的阳性检测结果并进行对比分析。结果：2种检测方法细菌培养法与聚合酶链反应相比较,观察组聚合酶链反应的阳性检出率19.4%,显著高于对照组细菌培养法的6.5%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：淋病奈瑟菌采用聚合酶链反应检测,降低了临床漏诊率,具有灵敏度高、特异性强的优点,效果显著,是临床检测淋病奈瑟菌的好方法,值得推广。     

16S rRNA在检测肺炎克雷伯菌引起血流感染中的应用

目的初步建立一种对肺炎克雷伯菌引起血流感染的快速检测方法。方法应用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）,从血培养阳性瓶中提取细菌基因组DNA,以特异性引物扩增16S rRNA靶片段,同期进行细菌培养鉴定的对照。结果检测142份已知肺炎克雷伯阳性标本,65份非肺炎克雷伯阴性对照,52份双盲样本显示敏感性为100%（146/146）特异性为100%（113/113）,整个实验可在2h内完成。结论较传统的培养鉴定法而言,以16SrRNA作为实时荧光定量靶基因可快速检测肺炎克雷伯菌,具有很好的研究价值与应用前景。     

荧光定量PCR技术检测女性淋病的临床价值

目的：探讨荧光定量PCR技术检测女性淋病的临床价值。方法：用荧光定量PCR（FQ-PCR）方法,检测疑似淋病女性患者泌尿生殖道标本117例,并与常规的细菌培养进行比较。结果：FQ-PCR阳性检出率为48.7%（57/117）,细菌培养阳性率为36.7%（43/117）。结论：凡细菌培养阳性者FQ-PCR均阳性,表明FQ-PCR操作更简便、快速,并能准确定量。对于淋病的诊断、病情的发展和愈后监测、疗效评价、指导用药均具有很高的临床实用价值。     

荧光PCR法在围生期孕妇B族链球菌筛查中的应用及CAMP试验阴性B族链球菌分子特征分析

目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)在围生期孕妇B族链球菌(GBS)筛查中的应用价值及CAMP试验阴性GBS的鉴定分析。方法收集产科门诊孕35~37周孕妇阴道/直肠拭子1 143例,将拭子放入GBS增菌肉汤管增菌,分别用GBS显色平板和荧光PCR法检测GBS。16SrDNA分子鉴定技术对CAMP试验阴性GBS进行种属鉴定,并采用PCR技术检测其cfb基因。结果显色平板检出146份阳性样本,阳性率为12.77%,荧光PCR法检出191份阳性样本,阳性率为16.71%,2种方法的阳性率差异有统计学意义(P<0.01);荧光PCR法与显色平板培养法相比,敏感性为93.15%、特异性为94.48%、符合率为94.31%。146株GBS中有10株为CAMP试验阴性,检出率为6.85%,均为cfb基因缺失株。结论荧光PCR法可有效提高围生期孕妇GBS筛查的阳性率;该地区CAMP试验阴性GBS检出率较高,CAMP试验不宜作为GBS的鉴别试验,因存在缺失cfb基因GBS,GBS分子检测试剂不应选择该段基因设计引物。     

PCR法指导细菌培养法在一起流行性脑膜炎疫情中的运用效果

目的在突发性流行性脑膜炎疫情中,使用咽拭子样本直接进行荧光定量PCR检测来指导细菌纯培养,以达到快速检测、提高检出率的目的,分析方法、对比数据,讨论此次联用方法在处突工作中的运用效果。方法采集乌鲁木齐市流行性脑膜炎疫情密切接触人群的咽拭子标本,对咽拭子样本和平皿培养物同时进行检测,利用咽拭子PCR结果引导细菌纯培养。结果两种检测方式相辅联用,最终检出率较单一细菌培养法提高4.1%。结论联用荧光定量PCR法为细菌培养、获取目标纯菌做范围指引,效果显著,有效提高了脑膜炎奈瑟氏菌的检出率和实验室检测能力,在疫情快速处突方面值得应用。     

RTFQ—PCR法和胶体金免疫层析法快速检测霍乱弧菌

目的寻求简便、可靠的快速检测霍乱孤菌的方法,以提高霍乱实验室确诊的时效性。方法采用实时荧光定量PCR法和胶体金免疫层析法对珠海市外环境水体、水产品264份标本进行霍乱孤菌快速检测,并与国标方法进行比较。结果264份标本中按国标方法培养和标准诊断血清检测霍乱孤菌12株,阳性率为4．55％;实时荧光定量PCR法检测阳性8份,一致性为0．9924、灵敏度为100％、特异度为99．22％;胶体金免疫层析法检测阳性10份,一致性为0．9848、灵敏度为80．00％、特异度为99．21％。结论两法操作快速,结果准确,一致性好,特异性强、敏感性高,适用于筛查。胶体金免疫层析法稍逊于实时荧光定量PCR法。但两法均不能鉴定菌型,也出现漏检,所以作为疾病的诊断,应以培养法为标准。     

淋病奈瑟菌PCR检测的临床应用研究

为评价淋病奈瑟菌ＰＣＲ检测的临床效果,建立了对标准淋病奈瑟菌的ＤＮＡＰＣＲ检测技术。结果显示,ＮＧ ＰＣＲ技术的灵敏度约为３个菌的基因组拷贝。对８种菌株进行ＮＧ ＰＣＲ,只有标准淋病奈瑟菌显示阳性,其余７株非淋球菌菌株均阴性,说明有很好的特异性。对４９例淋病患者同时进行涂片镜检法、细菌培养法和ＰＣＲ法检测的比较,其阳性检出率分别为７６．６％、５２．２％和９５．９％。提示ＮＧ ＰＣＲ方法比涂片和培养法更为敏感,且特异性强,在淋病的诊断,特别是早期诊断中有重要参考价值。     

实时荧光定量PCR技术在食源性细菌检测中的应用效果评价

【目的】探讨应用实时荧光定量PCR技术在食源性细菌检测中应用效果。【方法】分别应用细菌培养法,PCR检测法,实时荧光定量PCR方法对987例群体食源性食物中毒腹泻患者和疑似患者的粪便或呕吐物2084份样品进行食源性病原体检测。【结果】检测2084个感染性腹泻标本,细菌培养法阳性检出率45.2%,普通PCR检测法阳性检出率63.4%;采用实时荧光PCR技术阳性检出率90.1%。实时荧光定量PCR检测法阳性检出率显著高于细菌培养检测法和普通PCR检测法,相比较均有显著性差异（P〈0.05）。【结论】实时定量荧光定量PCR技术准确、快速、简便、特异性强,在食源性细菌检测中,能为突发食源性食物中毒事件提供更早的控制措施并争取时间。