清心解瘀方标准汤剂多指标成分含量测定及UPLC指纹图谱研究

  目的  制备18批清心解瘀方标准汤剂,对其物质基准进行研究。   方法  以标准汤剂丹酚酸B、阿魏酸、总生物碱和黄芪甲苷的含量、转移率,出膏率、含油量、指纹图谱相似度等为评价指标,建立清心解瘀方标准汤剂相关表征参数允许范围。利用中药指纹图谱相似度评价系统软件(2012版)进行指纹图谱分析,采用聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对指纹图谱共有峰进行评价。   结果  共确定了18个共有峰,共有峰相似度均大于0.90。18批样品聚为2类,结合相似度结果,分析可能与不同产地饮片配伍有关。根据OPLS-DA VIP值结合载荷图,共筛选出3个影响批间样品质量的色谱峰,依次为丹酚酸B(14号峰)、盐酸黄连碱(10号峰)和阿魏酸(7号峰)。为减小批间样品的质量差异,保证制剂质量的一致性,在后续制剂生产中应尽量选择同一道地产区药材。   结论  清心解瘀方标准汤剂制备方法稳定,多指标含量测定方法简便、快捷,指纹图谱方法稳定、相似度高,可为该方后续制剂质量控制提供参考。      

经典方玉女煎汤剂的水提工艺研究

目的:优选玉女煎汤剂的水提工艺。方法:以浸泡时间、加水量和煎煮时间为主要影响因素,以毛蕊花糖苷、芒果苷、β-蜕皮甾酮的转移率与干膏得率的综合评分为评价指标,采用正交试验优选玉女煎汤剂的水提工艺。结果:优化的水提工艺最佳条件为:加6倍量的水,浸泡时间为30 min,煎煮时间武火5 min,文火30 min。此条件下测得毛蕊花糖苷、芒果苷和β-蜕皮甾酮的转移率分别为60.35%、43.58%和58.84%,干膏得率为34.68%。结论:该提取工艺稳定可行,适用于玉女煎汤剂的制备。     

抗瘤增效方浓缩工艺研究

目的:研究抗瘤增效方中指标性成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷和盐酸小檗碱在浓缩过程中的热稳定性,制定浓缩工艺参数,并以特征图谱法进行验证。方法:建立高效液相色谱(HPLC)法检测抗瘤增效方中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和盐酸小檗碱的含量。在60～90℃范围内,考察常压和减压浓缩状态下抗瘤增效方的热稳定性规律,以确定提取液的浓缩工艺参数,并建立HPLC特征图谱对浓缩工艺进行进一步验证。结果:在60～90℃范围内,常压或减压浓缩8 h过程中,毛蕊异黄酮葡萄糖苷和盐酸小檗碱的转移率保持稳定。结合生产实践,初步确定抗瘤增效方的浓缩工艺为70℃减压浓缩。所建立的HPLC特征图谱含有10个共有峰(包含毛蕊异黄酮葡萄糖苷和盐酸小檗碱),特征图谱相似度0.93,峰面积变化率20%。结论:抗瘤增效方浓缩过程中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和盐酸小檗碱均无明显的热敏性,70℃减压浓缩的工艺条件合理、可行。     

经典名方易黄汤物质基准HPLC特征图谱的建立及量值传递研究

  目的  建立易黄汤物质基准的HPLC特征图谱和易黄汤中指标性成分尿囊素、没食子酸、京尼平苷酸和小檗碱的含量测定方法, 阐明这4种成分在饮片-水煎液-物质基准的量值传递规律。  方法  采用Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm), 以乙腈-0.1%乙酸水溶液为流动相, 梯度洗脱, 采用多波长切换法, 检测波长分别为205、254、280 nm, 以上述4种成分的转移率为主要评价指标, 研究从饮片-水煎液-物质基准的量值传递规律。  结果  建立了易黄汤物质基准的HPLC特征图谱, 15批物质基准冻干粉样品相似度均大于0.90, 共标定出15个共有峰, 指认出其中5个特征峰(2号峰尿囊素、4号峰没食子酸、6号峰京尼平苷酸、7号峰黄柏碱、15号峰小檗碱); 同时进行含量测定, 15批物质基准中尿囊素、没食子酸、京尼平苷酸、小檗碱的含量范围分别为0.801%~1.087%、0.047%~0.057%、0.037%~0.081%、0.250%~0.387%;15批易黄汤水煎液到物质基准的量值传递(转移率)分别为尿囊素73.09%~91.37%、没食子酸74.99%~89.32%、京尼平苷酸71.77%~94.38%、小檗碱76.54%~88.43%。  结论  建立的特征图谱和4种成分的含量测定方法能较好地控制易黄汤物质基准的质量, 量值传递结果表明物质基准冻干粉的制备工艺具有科学性和稳定性, 为经典名方易黄汤制剂的后续开发打下了基础。      

不同炮制方法对熟地黄中7种化学成分含量的影响

目的通过建立熟地黄中梓醇、益母草苷、地黄苷A、地黄苷D、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷和5-羟甲基糠醛（5-HMF）7种化学成分同时分析的方法,测定清蒸熟地黄、酒炖熟地黄、九蒸九晒熟地黄3种不同炮制品中7种化学成分的含量,探讨不同炮制方法对熟地黄中化学成分的影响。方法采用超声提取法处理熟地黄3种不同炮制品,赛默飞C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相:0.1%磷酸（A）-乙腈（B）,梯度洗脱,程序为:0~8 min,1% B;8~9 min,1%~4% B;9~25 min,4% B;25~35 min,4%~20% B;35~50 min,20% B;50~50.01 min,20%~1% B;50.01~55 min,1% B。柱温:30℃,检测波长:203 nm、332 nm,测定3种样品中7种化学成分的含量。结果生地黄中未检出5-HMF。清蒸熟地黄和酒炖熟地黄中,环烯醚萜单糖苷梓醇和益母草苷几乎全部降解;环烯醚萜双糖苷地黄苷A、地黄苷D和苯丙素苷毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量较生地黄中含量降低;可以检测到5-HMF。九蒸九晒熟地黄中环烯醚萜单糖苷梓醇和益母草苷、环烯醚萜双糖苷地黄苷A、地黄苷D和苯丙素苷毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷几乎全部降解;可以检测到5-HMF。结论不同炮制方法对熟地黄成分的影响较大,该方法可用于熟地黄不同炮制品的质量控制。     

正交实验法考察车前子水提物质量标准及不同来源品种质量比较

目的:优化车前子配方颗粒的制备工艺并考察不同来源品种的质量。方法:运用L9(34)正交实验表,以京尼平苷酸、毛蕊花糖苷含量,浸膏得率为指标,考查加水量、煎煮时间、煎煮次数三因素的组合效果;用AgilentHPLC仪[SBaqC18(5.0μm,4.6mm×250mm)色谱柱。流动相:甲醇-0.5%冰醋酸,进行梯度洗脱;检测波长:254nm]测定车前子饮片中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷含量;以及水煎提取工艺的优化及不同来源品种的比较。结果:正交实验结果中,A2B2C3组的综合评价最高,即优化的最佳水提工艺为:用10倍的水煎煮3次,每次20min。各来源的车前子中京尼平苷酸含量最高和最低分别为1.036%和0.3568%,毛蕊花糖苷含量最高和最低分别为0.7519%和0.2310%。一厂家一批次车前子含量低于药典规定,其余均符合2010版药典规定。结论:所建立测定车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷含量测定方法简便快捷、重现性好;优化的提取工艺科学、可靠。也说明目前市场上车前子饮片质量较为稳定。可为车前子的大规模水煎提取颗粒制备提供理论依据。     

水蒸气蒸馏法提取牡丹皮中丹皮总酚的工艺优选

目的 优化水蒸气蒸馏法提取牡丹皮中丹皮酚的工艺条件.方法 利用水蒸气蒸馏法提取丹皮总酚,在40℃,-0.095MPa条件下将所提取的丹皮总酚干燥至恒重,通过测定所得丹皮总酚中丹皮酚的含量计算丹皮酚收率.利用正交试验优化加水量、蒸馏液流速和提取时间.结果 最佳工艺条件为:加16倍水量,控制蒸馏液流速按每100 g饮片为5 ml/min,蒸馏5h.丹皮酚收率为2.25％.结论 该工艺简便、丹皮酚收率高、省时,可为工业生产中提取牡丹皮中丹皮酚提供实验基础.     

不同基原大黄指纹图谱、多成分定量结合多元统计分析的质量评价研究

  目的   建立3种基原大黄(掌叶大黄、药用大黄、唐古特大黄)指纹图谱和多成分含量测定方法。   方法   采用UPLC法同时测定51批大黄指纹图谱及14个化学成分含量,并通过指纹图谱相似度分析、聚类分析、主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)对不同基原大黄药材进行全面质量评价。   结果   建立了3种基原大黄的指纹图谱,确定了18个共有峰,并指认了14个化学成分;相似度评价结果显示,3种基原大黄相似度存在一定差异,但部分药用大黄与掌叶大黄相似度较高,聚类分析与相似度评价结果一致。通过PCA提取了4个主成分,累积方差贡献率达85.823%;PLS-DA可用于大黄的基原识别,并筛选出6个差异性成分。   结论  建立的方法简便、可靠,为不同基原大黄药材的质量控制和鉴别提供可靠的分析方法。      

正交试验比较金银花中绿原酸、异绿原酸A的提取工艺

目的优化金银花的提取工艺,建立高效液相色谱法（HPLC）快捷检测绿原酸和异绿原酸A的方法。方法以HPLC同时测定绿原酸、异绿原酸A的含量为指标,通过比较醇浓度、回流时间、超声功率、超声时间4因素对提取工艺的影响,优化超声波辅助醇法提取金银花的工艺。结果以绿原酸、异绿原酸A的综合评分为指标,最佳提取工艺是60%乙醇超声（功率500 W）45 min,再回流提取1 h。结论建立了准确灵敏的检测方法,优化的提取工艺经济、高效,能为生产提供理论依据。     

HPLC法测定羌药关节炎散中丹皮酚的含量

目的：采用HPLC法测定羌药关节炎散中丹皮酚的含量。方法：色谱柱为Ultimate XB-C18色谱柱（4.6×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液（40∶60,v/v）,流速为1 mL·min^-1,检测波长为274 nm,柱温为30℃。结果：丹皮酚在4.106-5.60μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系,关节炎散中丹皮酚平均含量为3.96 mg·g^-1。结论：实验所建立的HPLC方法可用于关节炎散中丹皮酚的含量测定。     

经典名方温经汤基准样品HPLC-Q-TOF/MS分析与指纹图谱研究

  目的  采用HPLC-Q-TOF/MS技术对温经汤基准样品化学成分进行表征, 同时建立经典名方温经汤基准样品指纹图谱, 并对其共有峰进行指认与归属。  方法  采用Agilent 5 TC-C₁₈(2)柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱, 以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱, 通过PeakView软件辅助解析, 快速鉴别出温经汤基准样品中化学成分, 并通过HPLC-UV及HPLC-ELSD法建立温经汤基准样品指纹图谱。  结果  温经汤基准样品中共分析鉴别出122个化合物, 并进行相关药味归属。建立的温经汤基准样品HPLC-UV指纹图谱有19个共有峰, 通过对照品比对, 指认出没食子酸、芍药苷、甘草酸、甘草苷、桂皮醛、丹皮酚、阿魏酸、藁本内酯、β-蜕皮甾酮9个色谱峰; HPLC-ELSD指纹图谱有8个共有峰, 通过对照品比对, 指认出人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re和人参皂苷Rb₁。建立的HPLC-UV、HPLC-ELSD两张指纹图谱能够归属全方所有药味。  结论  通过UV、ELSD建立的指纹图谱方法灵敏度高, 稳定性和准确性良好, 全面反映了温经汤基准样品的整体特征, 为温经汤基准样品质量标准的建立提供了可靠的依据。      

升麻中酚酸类成分提取工艺优选

目的：研究升麻中酚酸类成分的最佳提取条件。方法：采用水回流提取的方法,以咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸为指标,选择正交实验优化提取工艺条件。结果：水回流提取的最佳工艺为14倍量的水回流提取2次,每次3h,升麻中的咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸含量分别为11．05、21．40、151．44mg／100g,不同基原和批号的升麻中咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸含量差异明显。结论：升麻中酚酸类成分的提取工艺简单、稳定、可行。     

RP-HPLC同时测定丹栀逍遥片中阿魏酸和丹皮酚含量

目的建立同时测量丹栀逍遥片中阿魏酸和丹皮酚含量的方法。方法采用Alltima-C18色谱柱(5μm,4.6×150mm);流动相采用甲醇-0.5%磷酸溶液梯度洗脱;流速1.0 ml/min;检测波长为274nm;柱温:25℃。结果阿魏酸在2.78～27.8μg/ml的范围内与峰面积的线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为98.83%,RSD=2.5%(n= 6),丹皮酚在10.96～109.6μg/ml的范围内与峰面积的线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为99.6%,RSD=0.6% (n=6)。结论用RP-HPLC同时测定丹栀逍遥片中阿魏酸和丹皮酚含量,方法准确、简便,重现性好。     

经典名方温胆汤水煎液HPLC指纹图谱与多成分含量测定研究

目的  建立经典名方温胆汤水煎液HPLC指纹图谱结合多成分含量测定的方法, 为其质量控制提供参考。方法  按照古籍中记载的煎煮方法制备温胆汤水煎液, 采用色谱柱Waters X-Bridge C₁₈(4.6 mm×250 mm, 5 μm), 以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱, 体积流量为1 mL·min-1, 检测波长为310 nm。建立温胆汤HPLC指纹图谱, 对其特征峰进行归属, 并对其中11种成分进行定量分析。结果  建立温胆汤水煎液指纹图谱, 共标定25个共有峰, 并通过对照品指认了其中的11个成分, 各批次样品的相似度均大于0.95。结论  建立温胆汤水煎液指纹图谱, 并进行多成分同时测定, 方法简便、准确、重现性好, 适用于温胆汤的质量控制, 可为经典名方等质量评价办法的制定提出一定参考。      

川芎配方颗粒的制备及量值传递研究

[目的] 研究川芎配方颗粒的制备工艺及量值传递过程,确定川芎饮片、标准汤剂、配方颗粒的相关性,保证配方颗粒与标准汤剂的等效性。[方法] 制备18批川芎标准汤剂,测定出膏率。建立特征图谱,标定特征峰,对特征峰进行归属。测定原料饮片和标准汤剂中阿魏酸的含量,计算转移率。以标准汤剂所得的质量指标为依据,进行制备工艺研究,制备川芎配方颗粒。以出膏率、阿魏酸含量及转移率、特征峰传递数量为指标,进行川芎配方颗粒量值传递研究。[结果] 通过对18批川芎饮片的标准汤剂进行研究,最终确定出膏率范围为26%~37%。特征图谱共标定8个特征峰,对其中3个成分进行指认,分别为阿魏酸、洋川芎内酯A和藁本内酯。阿魏酸含量范围为0.28%~0.52%,平均转移率为37.7%。[结论] 川芎饮片、标准汤剂及配方颗粒中的阿魏酸转移稳定,均呈现8个特征峰,说明川芎饮片中化学成分基本全部转移至配方颗粒,川芎配方颗粒与标准汤剂基本等效。     

合并上消化道症状对功能性便秘患者焦虑、抑郁及生活质量的影响

  目的   探讨合并上消化道症状(GI)对功能性便秘(FC)患者焦虑、抑郁及生活质量(HRQoL)的影响。   方法   根据罗马Ⅳ标准纳入2016年10月—2019年10月于南京医科大学第一附属医院胃肠动力中心就诊的156例FC患者,分别采用胃肠道症状评分量表(GSRS)、ZUNG焦虑、抑郁自评量表(SAS/SDS)和简明健康调查问卷(SF-36)评估患者上消化道症状、焦虑、抑郁及健康相关生活质量。   结果   156例FC患者中有95例(60.90%)合并上消化道症状。其中,单纯合并反酸/烧心11例(7.05%),单纯合并上腹胀23例(14.74%),单纯合并嗳气11例(7.05%),同时合并反酸/烧心与上腹胀7例(4.49%),同时合并嗳气与上腹胀32例(20.51%),同时合并嗳气与反酸/烧心11例(7.05%)。与无上消化道症状组相比,合并上消化道症状组SAS、SDS评分显著增高(均P < 0.05),生理功能、生理职能、一般健康、情感职能、精神健康评分显著降低(均P < 0.05)。而在合并上消化道症状的FC患者中,同时合并嗳气与上腹胀组SAS、SDS评分最高,生理职能、社会功能、情感职能评分最低。多元线性回归分析显示,同时合并嗳气与上腹胀及SAS评分高是SF-36总评分的负性预测因子(均P＜0.05)。   结论   反酸/烧心、上腹胀及嗳气是FC患者最常见的上消化道症状,合并上消化道症状加重FC患者焦虑、抑郁,降低健康相关生活质量。      

黄连素与戊间甲酚对粪肠球菌的体外协同抗菌效果研究

  目的  研究黄连素与戊间甲酚联合使用对粪肠球菌的抗菌作用。  方法  采用微量肉汤稀释法和活菌菌落形成单位（CFU）分别测定黄连素和戊间甲酚对粪肠球菌的最小抑菌浓度（MIC）;悬液定量杀菌试验和死活菌染色检测黄连素和戊间甲酚对浮游和生物膜状态粪肠球菌的杀灭效果;扫描电子显微镜观察黄连素和戊间甲酚对粪肠球菌成熟生物膜结构的影响;CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒和乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒测定黄连素和戊间甲酚对人口腔黏膜上皮角质细胞（HOK）的毒性。  结果  黄连素的MIC为512 μg/mL,戊间甲酚的MIC为0.023 3%;悬液定量杀菌试验表明,512 μg/mL黄连素或0.002 33%戊间甲酚单独使用时对浮游状态粪肠球菌杀灭效果较弱,但二者联合使用时表现出协同抗菌作用;死活菌染色和扫描电子显微镜结果表明二者联合使用时对生物膜状态粪肠球菌杀灭效果较弱,但可影响生物膜结构;512 μg/mL黄连素和0.002 33%戊间甲酚单用（或联用）处理HOK细胞时,其存活率远大于损伤率,细胞毒性较低。  结论  黄连素与戊间甲酚对粪肠球菌具有协同抗菌作用,且生物安全性较好。     

儿童传染性单核细胞增多症临床及实验室检查特点分析

  目的  分析儿童传染性单核细胞增多症(IM)的临床特点、实验室检查指标等,以提高临床医生对此病的认识。   方法  采用回顾性分析方法,收集2019年5月—2020年4月中国科学技术大学附属第一医院儿科住院的114例传染性单核细胞增多症患儿的临床资料,总结并分析其临床特点。   结果  114例患儿中男66例、女48例,男女之比为1.375∶ 1;年龄≤3岁39例、3~6岁60例、＞6岁15例;季节分布为春季34例、夏季27例、秋季36例、冬季17例;症状表现为发热107例、咽峡炎107例、颈部淋巴结肿大93例、肝脏肿大41例、脾脏肿大65例、眼睑浮肿56例、皮疹23例;实验室检查特点:白细胞总数在(10~20)×109/L居多;淋巴细胞比例在50%~70%居多;异型淋巴细胞阳性率为68.42%;肝功能损害59例;衣壳抗原IgM抗体阳性率最高;全血EB病毒核酸(EBV-DNA)检测阳性率为92.86%。   结论  儿童IM多发于男性且以3~6岁常见,春秋季节发病率高,临床症状表现多样,衣壳抗原IgM抗体检测联合全血EBV-DNA检测可提高检测阳性率,减少临床漏诊及误诊。