胰岛素对人宫颈癌Hela细胞化疗敏感性的影响

目的探讨胰岛素能否增强人宫颈癌Hela细胞对顺铂（DDP）的化疗敏感性及其相关机制。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞株,MTr法检测5U／L胰岛素作用3、6、9、12、15、18、21h后,联合DDP（7．26mg／L）对人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率的影响。流式细胞仪检测对照组、DDP组、胰岛素组及联合组（胰岛素化疗前作用6h）的细胞周期时相变化情况。结果DDP组、胰岛素化疗前作用不同时间组与对照组相比,Hela细胞的增殖抑制率明显上升（P〈0．01）;且胰岛素于化疗前提前作用3、6、9、12、15h后加入DDP,宫颈癌Hela细胞的增殖抑制率明显高于DDP组（P〈0．01）。流式分析显示DDP组及胰岛素组的S期细胞比例较对照组高（P均〈0．01）,联合组s期细胞比例较DDP组高（P〈0．01）。结论胰岛素具有较显著的DDP化疗增敏作用,胰岛素作用时机选择是胰岛素对宫颈癌细胞化疗增敏作用的关键。     

人肝癌HepG2细胞超微弱发光的观察

目的：探讨人肝癌HepG2细胞系超微弱发光的特征。方法：用IFFM—D型流动式化学发光仪检测人肝细胞株QZG及人肝癌HepG2细胞系超微弱发光的强度以及不同浓度鲁米诺（Luminol）和双氧水（H2O2）对其超微弱发光的影响。结果：在10^-4mol／L鲁米诺及0．3％双氧水条件下，人肝癌HepG2细胞超微弱发光强度明显高于人肝细胞株QZG（P〈0．05），并随细胞浓度增高其超微弱发光强度呈线性增高，其差异显著（P〈0．05）；提高鲁米诺浓度为10^-3mol／L时，人肝癌HepG2细胞发光强度明显增加（P〈0．05）；提高双氧水浓度为3％时，其超微弱发光强度的变化无显著差异（P〉0．05）。结论：人肝癌HepG2细胞的超微弱发光强度明显高于人肝细胞株QZG,细胞浓度及鲁米诺、双氧水浓度变化能影响细胞超微弱发光强度。超微弱发光反映了肿瘤细胞的功能状态，检测肿瘤细胞超微弱发光强度可作为一项敏感的肿瘤细胞生理及代谢指标。     

塞来昔布对体外宫颈癌细胞株Hela和Siha的抑制作用

目的：探讨环氧化酶抑制剂塞来昔布对Hela和Siha细胞株细胞周期及凋亡的影响。方法：采用细胞培养技术及流式细胞术检测环氧化酶抑制剂塞来昔布对人宫颈癌细胞株（Hela和Siha）细胞周期及凋亡的影响。结果：经流式细胞术分析显示，随着塞来昔布浓度的增加，Hela和Siha细胞周期中G0／G1期细胞增多，S期细胞减少，G2-M期细胞比例无明显改变。与塞来昔布（≥25μmol／L）共同孵育72h后，与空白对照组相比PI指数减小（P〈0．05），凋亡率增高（P〈0．05）。流式分析图中可见亚二倍体凋亡峰。结论：环氧化酶抑制剂塞来昔布可抑制体外人宫颈癌细胞株Hela和Siha的增殖、促进细胞凋亡。     

内源性NO在人宫颈癌Hela细胞株合成对顺铂敏感性的影响

目的通过细胞因子γ-干扰素（INF-γ）诱导内源性一氧化氮（Nitric Oxide,NO）的产生,探讨其对人宫颈癌Hela细胞株顺铂（DDP）敏感性的影响。方法用NO测试盒检测一定浓度的INF-γ处理人宫颈癌Hela细胞在不同时间NO的产生量及一定作用时间下不同浓度的INF-γ处理Hela细胞NO的产生量;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测经一定浓度及一定时间INF-γ处理后的人宫颈癌Hela细胞在不同浓度顺铂作用后的生存率;分别加入一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase,NOS）的抑制剂NG-甲基-L-精氨酸（L-NMMA）及NO的合成原料L-精氨酸（L-arginine,L-Arg）再次以MTT法检测Hela细胞生存率的变化。结果体外培养的Hela细胞在经INF-γ作用后第8小时NO生成量达高峰,随后呈下降趋势,而不加INF-γ的空白对照组,Hela细胞NO的生成量无明显变化（P〈0.05）;Hela细胞NO的生成量与INF-γ的浓度之间有一定的依赖性。采取MTT法检测：经1nMINF-γ作用8 h的实验组Hela细胞与不加INF-γ的对照组相比,低浓度DDP作用时前者Hela细胞生存率显著下降（P〈0.05）,但随DDP浓度升高后两组的生存率无显著差异;经1nMINF-γ处理8 h的Hela细胞加入L-NMMA组Hela细胞在DDP作用后的生存率显著提高（P〈0.05）,而加入L-Arg组结果则与之相反。结论人宫颈癌Hela细胞在一定剂量、一定时间INF-γ的作用下,能够诱导iNOS产生内源性NO,且NO产生的量与INF-γ存在时间、剂量依赖关系;经INF-γ诱导产生的内源性NO可提高人宫颈癌Hela细胞株对DDP的敏感性。     

薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响

目的研究薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响。方法培养人宫颈癌细胞株Hela,不同浓度的薯蓣皂苷元干预24、48、72h,采用MTF、EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,WesternBlot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1。结果薯蓣皂苷元在20μmol／L浓度时抑制Hela细胞活力（P〈0．01）,呈现量效和时效特征;薯蓣皂苷元作用后EdU阳性细胞明显减少,薯蓣皂苷元引起G0／G1期细胞阻滞,减少S期细胞,降低Cyclin D1蛋白表达,而对Cyclin B1蛋白表达没有明显影响。结论薯蓣皂苷元通过阻滞细胞G0／G1期来抑制人宫颈癌Hela细胞株的增殖。     

顺铂作用于宫颈癌HeLa细胞致细胞周期调节因子变化及对细胞周期的阻滞作用

目的：探讨细胞周期调节因子atm,chk2,p53基因在顺铂（DDP）诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用．方法：MTY法检测梯度浓度DDP对HeLa细胞的生长抑制率,RT—PCR法和WesternBlot法检测DDP作用前后HeLa细胞atm,chk2及p53mRNA和蛋白的表达．流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化．结果：DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制作用具有浓度和时间依赖性．DDP作用HeLa细胞后atm,chk2,p53mRNA和蛋白的表达均增强,细胞凋亡增加,细胞周期阻滞于G2／M期（P〈0．05）．结论：atm,chk2,p53基因与细胞凋亡及G2／M期阻滞有关．干预atm,chk2,筇3基因通路有望成为宫颈癌化疗增敏的新策略．     

Ｔｏｌｌ 样受体９ 在宫颈癌细胞中的表达及抗凋亡作用

目的：研究宫颈癌Hela细胞中Toll样受体9（TLR9）的表达情况及TLR9对宫颈癌Hela细胞抗凋亡能力的影响,寻求宫颈癌免疫治疗的新途径。方法体外培养宫颈癌Hela细胞株,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Hela细胞中TLR9 mRNA的表达情况;四甲基偶氮唑盐（MTT）检测不同浓度人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对Hela细胞生长抑制情况;流式细胞术（FCM）检测CpG-ODN预刺激对Hela细胞抗TRAIL诱导凋亡能力的影响。结果①TLR9 mRNA在Hela细胞中表达,应用CpG-ODN刺激24 h后,TLR9 mRNA的表达增加,与PBS对照组比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。②MTT比色法检测显示, TRAIL蛋白可抑制Hela细胞生长,随着TRAIL蛋白浓度增加,抑制率增加。并且计算半抑制浓度IC50（223．092±3．850）ng／mL。③流式细胞术检测显示,TLR9特异性激动剂CpG-ODN刺激Hela细胞后,TRAIL诱导细胞凋亡率为（15．32±2．46）％,与无CpG-ODN预刺激组[（43．49±2．04）％]相比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论 TLR9特异性激动剂CpG-ODN能够增强Hela细胞抵抗TRAIL诱导的细胞凋亡能力,提示TLR9在肿瘤的恶性进程中发挥作用,为宫颈癌的免疫治疗提供新的思路。     

索拉非尼对肾癌786-O细胞株体外培养的增殖抑制作用

目的探讨索拉非尼对体外培养的肾癌786-O细胞株细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法体外培养人肾癌786-O细胞株,给予不同浓度（10．0、50、25、1．0、0．5μmol／L）的索拉非尼混合处理,采用MTT法检测细胞增殖的变化,并采用流式细胞仪检测索拉非尼对786-O细胞凋亡和细胞周期变化的作用。结果经索拉非尼处理后,镜下可见786—O细胞株细胞结构消失,各孔内可见大量紫黑色针状结晶物,但随着药物浓度的升高,针状结晶物逐渐减少。与对照组比较,10．0、5．0和2．5μmol／L组吸光度值均显著下降（均P〈0．01）、细胞抑制率均显著升高（均P〈001）,100和5．0umol／L组细胞存活率均显著下降（均P〈0．01）。与对照组比较,5．0、2．5、1．0μmol／L组G0／G1期细胞所占比例均显著升高（均P〈0．01）、S期细胞所占比例均显著下降（均P〈0．01）;而GJM期细胞所占比例仅5．0μmol／L组显著升高（P〈0．01）。结论索拉非尼可以抑制人肾癌786-O细胞株的增殖,诱导肾癌细胞凋亡。     

小白菊内酯对人乳腺癌细胞株增殖敏感性的影响

目的：观察小白菊内酯（PN）单独及联合顺铂（DDP）对人乳腺癌细胞株BT549生长的影响,并探讨其作用机制。方法：体外培养人乳腺癌BT549细胞株,分别加入不同浓度的PN、DDP及PN＋DDP至细胞中,作用48h后,分别采用CCK8细胞增殖实验检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期。结果：随着PN工作液浓度的升高,BT549细胞48h的细胞存活率逐渐降低。同样,随着DDP工作浓度的升高,BT549细胞48h的细胞存活率也逐渐下降。并且相应浓度的PN和DDP联合作用于BT549细胞48h的存活率降低更加明显,且差异具有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞仪测细胞周期实验发现,这两种药物主要通过阻滞细胞周期G1／S期的转化。结论：PN单用及联合DDP作用均可抑制BT549细胞的增殖,且呈浓度-剂量依赖性,两药联合应用对细胞增殖的抑制作用更加明显,表明这两种药物具有协同作用。     

La（C7H5O3）2·（C9H6NO）抑制Hela细胞生长作用机制研究

目的：观察La（C7H5O3）2·（C9H6NO）对体外培养的Hela细胞的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法：应用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V—FITC染色法检测细胞凋亡率。结果：不同浓度的La（C7H5O3）2·（C9H6NO）处理Hela细胞24～96h后,细胞增殖受到显著抑制,并呈浓度及时间依赖性;0．5、1．0、5．0、10．0μmol／L La（C7H5O3）2·（C9H6NO）处理72h后,Hela细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著减少（P〈0．01）;各浓度组细胞凋亡率均显著增加（P〈0．01）。结论：La（C7H5O3）2·（C9H6NO）对Hela细胞具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

顺铂诱导survivin表达改变与宫颈癌细胞化疗敏感性的关系

目的探讨survivin基因在顺铂(DDP)诱导的宫颈癌细胞凋亡中的作用.方法用宫颈癌Hela细胞株进行培养传代,MTT试验检测DDP不同药物浓度对宫颈癌细胞生长的抑制作用.分别在加药前、加药后24、48、72 h和96 h采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)检测survivin mRNA和蛋白的表达.同时利用流式细胞术定量检测细胞周期和细胞凋亡.结果 DDP对宫颈癌细胞生长均有明显的抑制作用,并有浓度和时间的依赖性.随浓度增加,宫颈癌细胞凋亡率表现先上升,后下降;随时间延长,在高浓度DDP组凋亡率明显增加,在低浓度DDP组凋亡率增加不明显.0.1 mg/L和1 mg/L DDP处理宫颈癌细胞,survivin mRNA和蛋白表达随作用时间的延长而增加.结论小剂量顺铂处理宫颈癌细胞,survivin mRNA和蛋白表达随作用时间的延长而增加,这可能是宫颈癌细胞对化疗药物产生耐药性的重要因素之一.     

以Celecoxib为基础的联合方案对宫颈癌细胞抑制作用的研究

目的:探讨环氧化酶-2(cox-2)抑制剂Celecoxib与化疗药顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞的作用及机制。方法:用免疫细胞化学SP法检测Hela细胞cox-2蛋白表达后,将Celecoxib、DDP单独或联合处理Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:Celecoxib可下调Hela细胞cox-2蛋白表达,抑制其增殖作用呈浓度和时间依赖性。在一定浓度范围内DDP也抑制Hela细胞生长,作用呈量效关系。Celecoxib与DDP联合应用后抗增殖作用较单一用药显著增强(P<0.05),DDP浓度≥1 mg/L时两者有协同或相加作用。Celecoxib及DDP均可有效诱导Hela细胞凋亡,联用凋亡率明显增加并出现G0-G1期细胞阻滞。结论:Celecoxib与DDP联用可通过抑制增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞对Hela细胞有协同抗肿瘤效应,提示两者联合可能在宫颈癌临床治疗上具有潜在价值。     

细胞因子与抗肿瘤药物体外协同抑制肝癌、宫颈癌细胞的敏感性实验

目的：探讨3种细胞因子单一、协同以及与化疗药物顺铂（DDP）的联合作用杀伤肝癌SMMC-7221细胞、宫颈癌Hela细胞株的影响。方法：应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT比色法）、检测与化疗药物DDP单独或联合应用组及药物作用的12h与24h的光密度值（OD）,计算杀伤率,以台盼蓝拒染计算杀伤率对照。结果：单独应用3种细胞因子时,IFN—a、TNF—a对肝癌细胞、宫颈癌Hela细胞毒作用,IL-2对肝癌细胞、宫颈癌Hela细胞则细胞毒作用不明显。IFN—a、IL-2、TNF—a可以增强DDP的抑瘤作用,与DDP单独作用具有显著性差异（P〈0．01）。IFN-a、IL-2、TNF-a联合作用具有协同作用,均与单一应用具有显著性差异（P〈0．01）。细胞因子均可以增强顺铂（DDP）的抑瘤作用并与其作用的先后及时间具有依赖关系。结论：MTT比色法为临床肿瘤化疗的药物敏感性检测提供了简便、快速的方法。不同类型的肿瘤有着不同的药敏谱。干扰素-a（IFN—a）、肿瘤坏死因子（TNF—a）、白细胞介素-2（IL-2）与DDP联合具有协同作用,为肝癌、宫颈癌病人化疗提供了理想的参考方案。     

VEGF-C对宫颈癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨VEGF-C对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT比色法,检测不同浓度的VEGF-C对宫颈癌Hela细胞增殖的结果:及采用流式细胞仪检测VEGF-C联合顺铂(DDP)对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。结果:随着VEGF-C的浓度的逐渐升高,由50ng/ml、100ng/ml、150ng/ml、升至200ng/ml,Hela细胞的增殖率逐渐增加;不同浓度的VEGF-C预处理Hela细胞48h后,细胞的凋亡率依次下降。结论:VEGF-C能促进宫颈癌Hela细胞的增殖,抑制DDP诱导宫颈癌细胞Hela的凋亡。     

抑制热休克蛋白70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂化疗的敏感性

目的 探讨抑制宫颈癌Hela229细胞内热休克蛋白(HSP)70表达对顺铂(DDP)化疗敏感性的影响.方法 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)及集落克隆法测定各因素对Hela229细胞的抑制作用;溴化丙啶(PI)单染法及DAPI检测细胞的凋亡率;JC-1染色法测定线粒体膜电位(△Ψm)的变化;Western blotting测定相关蛋白的表达;建立裸鼠动物模型测定各因素体内的抑瘤作用.结果 宫颈癌细胞较正常宫颈细胞高表达HSP70;当HSP70抑制剂与顺铂合用,细胞的存活率较单用顺铂显著下降(P<0.01);PI与DAPI染色实验表明HSP70抑制剂能增加顺铂诱导的细胞凋亡率;JC-1染色结果显示,HSP70抑制剂处理后顺铂组细胞线粒体膜电位发生了明显的降低.Western blotting实验结果显示HSP70蛋白表达抑制剂与顺铂合用较单用顺铂显著增加促凋亡蛋Bax/caspase-3表达及caspase-3活化;明显降低抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达.裸鼠移植肿瘤模型结果表明HSP70抑制剂与顺铂合用能增强顺铂对模型小鼠肿瘤的抑制作用(P<0.01).结论 抑制HSP70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂的敏感性,机制可能是通过抑制HSP70,进而调节凋亡相关蛋白的表达,促进宫颈癌细胞凋亡.HSP70有望成为宫颈癌基因治疗的一个新靶点.     

维生素C联合顺铂与单药顺铂对Hela细胞生长状况影响的比较

目的 探讨维生素C(VC)和顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞株的体外抑制作用.方法 将VC、DDP单独或联合应用于Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,并于用药后应用激光共聚焦显微镜观察细胞形态学变化.结果 不同浓度的顺铂对细胞生长均有抑制作用,随药物浓度的增加,抑制作用加强.VC和DDP联合应用后...     

丹参酮Ⅱ A联合顺铂对Hela细胞生长及p53蛋白表达水平的影响

目的:研究丹参酮Ⅱ A联合顺铂在体外对宫颈癌Hela细胞生长的影响及细胞中p53蛋白表达水平的变化。方法:采用MTT法测定丹参酮Ⅱ A联合顺铂对Hela细胞增殖的影响;HE染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡情况;Western Blot测定p53蛋白水平的表达。结果:丹参酮ⅡA联合顺铂用药组比同等剂量的两药单用组及对照组对Hela细胞的增殖抑制率高(P<0.05);对照组细胞未见凋亡,而两药单用组及联合组均可见细胞凋亡;药物处理组均可检测到细胞亚G1峰,两药联合组细胞亚G1峰与单药组差异显著;在只含溶媒组、丹参酮Ⅱ A组、顺铂组及丹参酮Ⅱ A联合顺铂组中p53蛋白水平表达逐步升高。结论:丹参酮Ⅱ A联合顺铂比两药单用能显著抑制Hela细胞的生长;二者通过增加p53蛋白的表达,促进细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA联合顺铂对Hela细胞的凋亡作用

目的研究丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)联合顺铂(DDP)在体外对宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及凋亡蛋白Bax与Bcl-2表达水平的变化。方法采用苏木素-伊红染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡情况;Western Blot测定Bax与Bcl-2蛋白在Hela细胞中的表达水平。结果对照组细胞未见凋亡,而两药单用组及联合组均可见凋亡细胞;除对照组外其他各组均可检测到细胞亚二倍体凋亡峰,Tan ⅡA+DDP组凋亡率高于两药单用组凋亡率,差别均有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白在各组中均有表达,但表达水平变化不明显(P>0.05);Bax蛋白在对照组中几乎不表达,而在各药物处理组中均有表达,且两药联合组中表达水平高于两药单用组,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论Tan ⅡA与DDP二者联合可以增加Hela细胞凋亡率,其中通过增加Bax蛋白的表达,使Bax/Bcl-2比值升高,可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。