胰岛素抵抗大鼠血管AGEs水平及其损伤机制和吡格列酮的保护作用

目的  探讨胰岛素抵抗大鼠血管AGEs水平及其损伤机制和吡格列酮的保护作用。方法  选6~8 周龄Wistar大鼠随机分为对照组（NC组,n=10）、胰岛素抵抗组(IR组,n=13)和吡格列酮组(PIO组,n=13)。后两组建立胰岛素抵抗模型,模型成功后PIO组给予吡格列酮［10mg/(kg·d)］干预,12周后采用免疫荧光技术检测血管壁AGEs表达;应用RT-PCR法检测RAGE 、NADPH氧化酶 p47phox mRNA 的表达;免疫组织化学技术检测RAGE、磷酸化NF-Кb蛋白的表达。结果  与IR组比较,PIO组AGEs的表达减弱,而两组明显高于NC组;IR组和PIO组RAGE、NADPH氧化酶P47phox mRNA表达较NC组明显升高(P< 0.01),而PIO组上述指标表达较IR组减弱（P<0.05）;PIO组RAGE、磷酸化NF-Кb蛋白表达较IR组减弱（P<0.05）,但两组均明显强于NC组（P<0.01）。结论  胰岛素抵抗大鼠血管AGEs及RAGE表达增多,继而促进氧化应激及炎症反应导致血管损伤;吡格列酮能通过减少AGEs、RAGE生成而抑制氧化应激及炎症反应,改善血管损伤。     

胰岛素抵抗大鼠脑组织APP代谢及其相关酶的表达及吡格列酮的干预效果

目的观察胰岛素抵抗（IR）大鼠脑组织β 淀粉样蛋白（Aβ）、淀粉样前体蛋白（APP）及其代谢相关酶的表达及吡格列酮(PIO)的干预效果。方法从45只Wistar大鼠中随机选取10只作为对照组（NC组）,35只给予10%果糖水诱发胰岛素抵抗,4周后根据胰岛素抵抗指数（IRI）,将制作成功的胰岛素抵抗模型26只大鼠随机分为IR组、PIO组。PIO组灌服吡格列酮（10?mg·kg-1·d-1）12周,IR组和NC组给予相同体积的生理盐水。免疫组化法观察大鼠海马Aβ42的表达;免疫印迹法检测大鼠脑APP、β 分泌酶( BACE1)、γ 分泌酶（PS1）的变化。结果IR组和PIO组大鼠海马Aβ42的表达明显高于NC组,与IR组相比,PIO组表达明显减低（P<0.01）;与NC组相比,IR组和PIO组大鼠脑组织APP、BACE1及PS1的表达增高,PIO组表达较IR组减少(P<0.05)。 结论胰岛素抵抗大鼠脑组织通过上调BACE1、PS1活性,使Aβ42生成增加;吡格列酮能抑制BACE1、PS1的表达,减少Aβ42生成。     

吡格列酮对胰岛素抵抗骨骼肌细胞PTEN表达及细胞凋亡的影响

目的 观察吡格列酮对胰岛素抵抗骨骼肌细胞第10号染色体缺失及与张力蛋白同源的磷酸酶(PTEN)及其磷酸化、蛋白激酶B(Akt)磷酸化蛋白表达、细胞凋亡的影响.方法 传代培养大鼠骨骼肌细胞,棕榈酸作用制备胰岛素抵抗模型.分以下3组:正常细胞组、胰岛素抵抗组、胰岛素抵抗+吡格列酮组.3组细胞各经胰岛素刺激15 min.Western blotting检测各组PTEN、PTEN磷酸化及Akt磷酸化的表达.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.结果 胰岛素抵抗组大鼠骨骼肌细胞PTEN及PTEN磷酸化蛋白表达较正常细胞组增加,差异有统计学意义(P＜0.01);胰岛素抵抗组Akt磷酸化蛋白表达较正常细胞组下降,差异有统计学意义(P＜0.01);胰岛素抵抗+吡格列酮组PTEN、PTEN磷酸化及Akt磷酸化蛋白表达较胰岛素抵抗组均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01).胰岛素抵抗组与正常细胞组比较凋亡细胞明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01);胰岛素抵抗+吡格列酮组与胰岛素抵抗组比较凋亡细胞明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 胰岛素抵抗时PTEN及其磷酸化表达增加,影响细胞凋亡.吡格列酮通过增加PTEN基因的表达,进一步增加骨骼肌细胞凋亡.     

吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉PPARγ-NF-kB的影响

目的观察吡格列酮对高脂血症大鼠主动壁过氧化物酶增殖体激活受体（PPAR）γ及核因子（NF）-kB表达的影响。方法清洁级SD大鼠26只,随机分为正常饮食组（对照组,9只）和高脂饮食组（17只）;高脂饮食组喂以高脂饮食12周后检测空腹血脂,造模成功后,分为模型组（8只）和吡格列酮组（9只）;后者给予吡格列酮溶液（0.6mg/ml）连续灌胃4周,对照组和模型组给予等量蒸馏水灌胃4周。用药4周后检测各组血脂、主动脉病理、主动脉一氧化氮、一氧化氮合成酶水平,并通过免疫组织化学法检测PPARγ和NF-kB表达。结果高脂饲料喂养12周后造模成功。给药4周后,吡格列酮组TG、TC明显下降;与对照组比较,模型组主动脉NO、cNOS显著下降（P〈0.01）,吡格列酮可显著提高主动脉NO、cNOS（P〈0.01）;与模型组比较,吡格列酮组PPARγ表达明显升高（P〈0.01）,NF-kB表达明显下降（P〈0.01）。结论吡格列酮具有降低血清TG、TC的作用,升高主动脉NO、cNOS水平;吡格列酮能提高主动脉PPARγ表达,抑制NF-kB表达。     

吡格列酮对胰岛素抵抗大鼠海马神经元β-淀粉样肽及其相关蛋白的影响研究

目的:观察胰岛素抵抗大鼠海马神经元β-淀粉样肽(β-amyloid,Aβ)生成与其相关蛋白的表达及吡格列酮的干预效果。方法:48只6～8周龄的Wistar大鼠随机分为正常对照组(Control组)、吡格列酮对照组(Pioglitazone,PIO组)、胰岛素抵抗组(Insulin resistance,IR组)、吡格列酮-胰岛素抵抗干预组(Insulin resistance+pioglitazone,IR-PIO组),IR组和IR-PIO组饮用10%果糖水4周建立胰岛素抵抗模型,造模成功后,Pioglitazone组及IR-PIO组给予吡格列酮10 mg/(kg.d)灌胃,同时,IR组和NC组给于相同体积的生理盐水,共12周;免疫组织化学检测大鼠脑皮层Aβ42的蛋白表达;Western blotting检测大鼠脑皮质区APP、β分泌酶1(β-secretase,BACE1)、早老素(Presenilin,PS-1)、脑啡肽酶(Neprilysin,NEP)及胰岛素降解酶(Insulin-degrading enzyme,IDE)的表达。结果:免疫组织化学检测显示IR组和IR-PIO组大鼠脑皮质Aβ42的蛋白表达明显高于NC组及NC-PIO组(P<0.01),而IR-PIO组Aβ42的蛋白表达低于IR组(P<0.05);Western blotting检测IR组和IR-PIO组大鼠脑皮质APP、BACE1、PS-1的蛋白表达明显高于NC组及NC-PIO组(P<0.01),与IR组相比,IR-PIO组以上各指标表达明显减低(P<0.01);各组间NEP表达差异无统计学意义(P>0.05);NC组及NC-PIO组IED的表达明显增强,与NC组相比,IR组IED的蛋白表达明显减弱(P<0.01),而IR-PIO组蛋白的表达明显强于IR组。结论:胰岛素抵抗大鼠脑皮质可能通过上调BACE1,PS-1活性,促进Aβ42生成增加,同时抑制IED的活性减少了Aβ42的降解;吡格列酮能抑制BACE1,PS-1的表达,增强IED的活性,减少Aβ42生成及促进分解增加。     

Regulation of inflammatory response in monocytes by PPARγ agonist

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ( PPARγ)激动剂对单核细胞炎症反应的影响.方法 体外培养THP-1人单核细胞,将细胞分为对照组、实验组、吡格列酮组和GW9662组.对照组仅加入细胞培养液;实验组用胰腺炎相关性腹水(PAAF)刺激细胞;吡格列酮组在PAAF作用前加入终浓度为20μmol/L的PPARγ激动剂吡格列酮进行干预;GW9662组:在吡格列酮干预前30 min,先行加入PPARγ拮抗剂GW9662,最后加入PAAF.分组处理6h后收集各组细胞,采用Real-Time PCR技术检测促炎症细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)mRNA的表达;分别采用RT-PCR和Western blotting法检测PPARγ mRNA和蛋白的表达.结果 PAAF刺激后,与对照组比较,实验组、吡格列酮组和GW9662组细胞TNF-α和IL-6 mRNA的相对表达量明显升高,PPARγ mRNA的相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);与实验组比较,吡格列酮组TNF-α和IL-6 mRNA的相对表达量明显降低,PPARγ mRNA的相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与吡格列酮组比较,GW9662组TNF-α和IL-6 mRNA的相对表达量均明显升高,PPARγ mRNA的相对表达量明显降低,差异也有统计学意义(P＜0.05).Western blotting检测结果显示:各组PPARγ的蛋白表达与mRNA表达的变化趋势相似,但吡格列酮组与对照组、GW9662组与吡格列酮组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 PPARγ激动剂可通过上调PPARγ表达,减少PPAF刺激所致的促炎症细胞因子的产生,从而抑制单核细胞的炎症反应.     

吡格列酮对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的治疗研究

目的探讨吡格列酮对多囊卵巢综合征（PCOS）患者全身及子宫内膜局部胰岛素抵抗的治疗效果。方法实验组为伴有胰岛素抵抗的PCOS25例,诱发排卵组为实验组中服用毗格列酮3个月后监测有排卵者8例,对照组1为同期输卵管性不孕者15例,对照组2为同期PCOS自发排卵者8例。实验组给予吡格列酮15mg bid口服3个月,观察血清胰岛素的变化。诱发排卵组、对照组1及对照组2均于排卵后第7天采集子宫内膜,应用免疫组化方法测定胰岛素受体（IR）的表达。结果实验组服药后空腹、2h血清胰岛素及胰岛素稳态模型指数（HOMA～IR）较服药前明显降低;诱发排卵组与对照组1相比内膜间质和腺体的IR表达无显著性差异;诱发排卵组与对照组2相比腺体上IR表达明显增高,内膜间质的IR表达没有差异。结论吡格列酮可以改善PCOS患者全身及子宫内膜局部的胰岛素抵抗。     

PPAR-α/γ激动剂对代谢综合征大鼠模型心室重构中MMP-9表达和TGF-β/Smads通路的影响

目的探讨PPAR-α／γ动剂对代谢综合征（Metabolic syndrome,MS）大鼠模型心室重构中MMP-9表达和TGF-βSmads通路的影响及意义。方法60％果糖饮食喂养雄性sD大鼠构建MS大鼠模型并随机分组：模型对照组（MC组,n=10）、非诺贝特组（FEN组,n=11）、吡恪列酮组（PIO组,n=10）、非诺贝特±匹格列酮组（FEN＋PIO组,n=11）,正常对照组mc组,n=6）。NC组大鼠用普通标准饲料喂养,FEN组和PIO组大鼠分别加用非诺贝特30mg／（kg·d）及吡格列酮3mg／（kg·d）灌胃;FEN＋PIO组大鼠加非诺贝特30mg／（kg·d）和吡格列酮3mg／（kg·d）灌胃,干预4周后RT-PCR方法检测PPAR-edymRNA水平,免疫组化方法检测MMP-9和TGF-β1蛋白表达。结果MC组PPAR-α／γmRNA的结果均低于NC组,差异具有统计学意义（P〈0．05）。FEN组PPAR—ccmRNA（0．59±0．03）和PPAR-ymRNA（0．61±0．03）均高于MC组,低于NC组,差异具有统计学意义（P〈0．05）;PIO组PPAR-α（0．57±0．04）和PPAR-TmRNA（0．54±0．02）均低于NC组,且低于MC组,具有统计学意义（P〈0．05）;FEN±PIO组PPAR-amRNA（0．63±0．02）和PPAR-ymRNA（0．67±0．03）均高于MC组,差异具有统计学意义（P〈0．05）;MMP-9和TGF-β1在各组大鼠心肌均有表达。与NC组大鼠比较,MC组、FEN组、PIO组和FEN±PIO组大鼠心肌表达MMP-9和TGF-β1／Smads蛋白明显增强,差异具有统计学意义（P〈0．05）;与MC组比较,FEN组、PIO组、FEN±PIO组大鼠心肌表达MMP-9和TGF-β1／Smads蛋白均减弱,差异具有统计学意义（P〈0．05）;FEN±PIO组大鼠心肌表达MMP-9OD值（0．43±0．04）低于FEN组和PIO组,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论FEN和PIO均上调了PPAR-α／γmRNA表达、使TGF-β1和MMP-9蛋白明显下降,对心室重构改善有明显的意义,其可能通过TGF-β／smads通路发挥作用。     

PPARγ激动剂对单核细胞炎症反应的调控作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对单核细胞炎症反应的影响。方法体外培养THP-1人单核细胞,将细胞分为对照组、实验组、吡格列酮组和GW9662组。对照组仅加入细胞培养液;实验组用胰腺炎相关性腹水(PAAF)刺激细胞;吡格列酮组在PAAF作用前加入终浓度为20μmol/L的PPARγ激动剂吡格列酮进行干预;GW9662组:在吡格列酮干预前30 min,先行加入PPARγ拮抗剂GW9662,最后加入PAAF。分组处理6 h后收集各组细胞,采用Real-Time PCR技术检测促炎症细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)mRNA的表达;分别采用RT-PCR和Western blotting法检测PPARγmRNA和蛋白的表达。结果 PAAF刺激后,与对照组比较,实验组、吡格列酮组和GW9662组细胞TNF-α和IL-6 mRNA的相对表达量明显升高,PPARγmRNA的相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);与实验组比较,吡格列酮组TNF-α和IL-6 mRNA的相对表达量明显降低,PPARγmRNA的相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(P0.05);与吡格列酮组比较,GW9662组TNF-α和IL-6 mRNA的相对表达量均明显升高,PPARγmRNA的相对表达量明显降低,差异也有统计学意义(P0.05)。Western blotting检测结果显示:各组PPARγ的蛋白表达与mRNA表达的变化趋势相似,但吡格列酮组与对照组、GW9662组与吡格列酮组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论 PPARγ激动剂可通过上调PPARγ表达,减少PPAF刺激所致的促炎症细胞因子的产生,从而抑制单核细胞的炎症反应。     

吡格列酮对无胰岛素抵抗的高血压病患者左室肥厚及脑钠肽的影响

目的:探讨吡格列酮对无胰岛素抵抗(IR)的高血压病患者左室肥厚(LVH)及脑钠肽(BNP)的影响.方法:入选无IR的高血压病伴LVH患者60例,随机分成吡格列酮组与常规治疗组.常规治疗组给予依那普利治疗,吡格列酮组给予依那普利和吡格列酮治疗6个月.比较两组治疗前后左心室重量指数(LVMI)、血清BNP水平的变化.结果:吡格列酮组与常规治疗组治疗前后比较,LVMI、血清BNP均下降(P＜0.05),两组治疗后比较,吡格列酮组LVMI、血清BNP下降明显(P＜0.05).结论:吡格列酮能逆转高血压病LVH,并降低血清BNP浓度.     

吡格列酮对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗和胰岛功能的影响

目的:建立2型糖尿病（T2DM）的大鼠模型,观察吡格列酮（PIO）对胰岛素抵抗和胰岛功能的影响。方法:SD雄性大鼠40只,随机分为对照组（10只）和高脂组（30只）。高脂组建立2型糖尿病大鼠模型,得到T2DM大鼠24只。将成模的24只T2DM大鼠随机分为糖尿病组（DM组）和PIO组,每组12只。监测DM组、PIO组和对照组大鼠体质量、空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、超敏C反应蛋白以及血脂,计算胰岛素抵抗指数、胰岛β细胞功能指数（HOMA-β）以及胰岛素敏感指数。结果:DM组、PIO组大鼠的体质量、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、超敏C反应蛋白、胰岛素抵抗指数均高于对照组（P<0.05~P<0.01）,高密度脂蛋白胆固醇、胰岛素敏感指数和HOMA-β则均低于对照组（P<0.05~P<0.01）;PIO组的HOMA-β高于DM组（P<0.05）。结论:PIO发挥治疗T2DM大鼠糖尿病的作用可能与减轻T2DM大鼠的胰岛素抵抗和改善胰岛功能有关。     

多不饱和脂肪酸对阿尔茨海默病大鼠海马亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响

目的 探讨多不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠海马亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)表达的影响和认知退化的预防作用.方法 将健康的SD大鼠40只随机分为对照组、AD组、DHA组和EPA组,每组n=10只.皮下注射D-半乳糖及腹腔注射Alcl3联合建立动物AD模型,用Morris水迷宫实验测定大鼠的认知能力,用ABC法免疫组化染色测定大鼠海马HAP1的表达.结果 EPA和DHA明显改善AD大鼠的空间认知能力;AD大鼠海马各亚区HAP1阳性细胞数均减少;AD组和DHA组海马DG区单位面积HAP1阳性细胞数分别为(28.56±4.23)个和(43.57±6.14)个,差异具有显著性(P＜0.05).结论 AD大鼠海马中的HAP1表达减少,DHA对AD大鼠认知功能的改善可能与其抑制海马中HAP1表达的下降有关.     

骨化三醇对晚期糖基终末产物诱导的NRK52E细胞EMT的影响

目的 探讨骨化三醇对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导的肾小管上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用及可能机制.方法 先单独用骨化三醇刺激细胞,再采用AGEs处理NRK52E细胞,建立由AGEs诱导的细胞EMT模型.分为4组:对照组、模型组、低剂量骨化三醇(10nmol/L)预处理的模型组、高剂量骨化三醇(100nmol/L)预处理的模型组.利用Western blot、逆转录实时定量PCR等方法检测E-cadherin、α-SMA、AGEs特异性受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)及NF-κB的磷酸化等的表达.结果 骨化三醇单独刺激时,大鼠肾小管上皮细胞上的E-cadherin和α-SMA的表达未发生明显变化;较对照组,AGEs培养后,NRK52E细胞E-cadherin表达显著下调,α-SMA表达明显上调,AGEs特异性受体显著表达增多,NF-κB途径活化;以上变化都能够被骨化三醇所逆转(P＜0.05),抗RAGE中和抗体(AF1616)可抑制AGEs引起的E-cadherin下调和α-SMA上调,骨化三醇抑制AGEs诱导RAGE的上调能够被NF-κB磷酸化抑制剂(IMD0354)部分阻断.结论 骨化三醇通过降低RAGE的表达和阻断NF-κB的磷酸化来抑制肾小管上皮细胞上皮间质转化.     

菩人丹超微粉对STZ诱导糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用及其对NF-κB信号通路的影响

目的：探讨菩人丹超微粉（PRD）对糖尿病大鼠视网膜的保护作用及其对核因子κB （NF-κB）信号通路的影响,并阐明其作用机制。方法：40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量PRD组和高剂量PRD组。给药3个月后,测定各组大鼠血糖水平,RT-PCR法检测大鼠视网膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素2（Ang-2） mRNA表达水平,Western blotting法检测大鼠视网膜组织中晚期糖基化终末产物（AGEs）、晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、NF-κB、VEGF和Ang-2蛋白表达水平。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠血糖水平及视网膜组织中VEGF、Ang-2 mRNA表达水平和AGEs、RAGE、NF-κB、VEGF、Ang-2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,低和高剂量PRD组大鼠血糖水平及视网膜组织中VEGF、Ang-2 mRNA表达水平和AGEs、RAGE、NF-κB、VEGF、Ang-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：PRD可能通过特异性阻断AGEs/RAGE/NF-κB信号通路对糖尿病大鼠视网膜起保护作用。     

吡哆胺对糖尿病大鼠视网膜晚期糖基化终产物及其受体的影响

目的观察吡哆胺对糖尿病大鼠视网膜晚期糖基化终产物(AGEs)的含量和其受体(RAGE)表达的影响,探讨吡哆胺对糖尿病视网膜病的防治作用。方法 SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)、吡哆胺治疗组(PM组)和糖尿病氨基胍治疗对照组(AG组),建立链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠模型,每周测体质量和血糖。各组于治疗4周和12周取材,酶联免疫吸附(ELISA)法定量检测大鼠血清、视网膜中AGEs,12周时用免疫组织化学半定量检测视网膜RAGE的表达。结果 PM组、AG组与DM组比较,血糖差别无统计学意义;4周和12周时的PM组和AG组的大鼠血清和视网膜AGEs均低于DM组(P<0.05);12周时PM组和AG组视网膜RAGE表达低于DM组(P<0.01)。结论吡哆胺无明显降糖作用,但可通过减少AGEs堆积,降低RAGE表达,对糖尿病大鼠视网膜具有一定的保护作用。