槲皮素减轻坐骨神经慢性缩窄性损伤大鼠的神经病理性疼痛及其相关机制

目的 探究槲皮素对坐骨神经慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)模型大鼠神经病理性疼痛的影响及其机制.方法 构建CCI大鼠模型,用不同浓度槲皮素干预,通过行为学实验检测机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL),ELISA试剂盒检测大鼠脊髓中炎性因子的表达,Western blot和qRT-PCR分别检测iNOS、COX-2和Wnt3a、β-catenin的蛋白以及mRNA的表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠MWT和TWL值明显下降(P＜0.05),脊髓TNF-α、IL-1β,疼痛相关分子iNOS、COX-2,WNT通路Wnt3a、β-catenin蛋白水平均显著上升(P＜0.05),而槲皮素使模型组大鼠MWT和TWL值显著提高,TNF-α和IL-1p,iNOS和COX-2,Wnt3a和β-catenin水平均显著下降(P＜0.05),并呈现一定的剂量依赖效应.而Wnt/β-catenin通路激活剂可阻断槲皮素对CCI大鼠的作用.结论 槲皮素可能通过抑制Wnt/β-catenin通路及其下游靶分子COX-2和iNOS的表达减轻CCI大鼠的神经病理性疼痛.     

蛇床子素对髓核致神经根炎性痛大鼠脊髓背角Wnt3a/β-catenin信号通路的影响

【目的】探讨蛇床子素对髓核致神经根炎性痛大鼠的治疗作用及机制。【方法】将54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组，每组18只。模型组和治疗组大鼠构建神经根炎性痛模型，假手术组进行假手术处理。术后2 d，治疗组大鼠经硬膜外注射50μL蛇床子素20 g·L-1，假手术组和模型组大鼠经硬膜外注射相同体积二甲基亚砜（DMSO）。术前3、1 d及术后1、3、7、10、14 d测量大鼠50%机械性撤足阈值（MWT）及热伤害性撤足潜伏期（TWL）。于术后7 d，采用定量聚合酶链反应（Q-PCR）检测术侧脊髓背角Wnt3a、β-catenin mRNA表达水平，采用Western Blot法和免疫荧光染色法分别检测术侧脊髓背角Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平，采用酶联免疫吸附分析（ELISA）检测术侧脊髓背角白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。【结果】模型组术后各时间点50%MWT及TWL较假手术组降低（P<0.05或P<0.01），术后7 d术侧脊髓背角Wnt3a、β-catenin mRNA和蛋白表达水平及IL-18、TNF-α水平均较假手术...     

Wnt/β-catenin信号通路调控人神经干细胞衰老过程的研究

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路对人神经干细胞（neural stem cells, NSCs）衰老的调控作用。方法将人胚胎干细胞分化为NSCs,经MPTP（1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶）处理后,检测细胞的衰老表型和Wnt/β-catenin相关蛋白表达变化。分别应用AR-A014418、DKK1蛋白激活、抑制Wnt/β-catenin通路后,检测Wnt/β-catenin信号通路改变对细胞衰老表型的影响。检测各实验组和对照组中促炎因子CCL3、CXCL10、CXCL11、TNF-α的表达变化。结果经MPTP处理后,NSCs显示衰老表型,表现为SA-β-gal阳性细胞明显增多,胞内ROS水平明显升高、细胞增殖活性受到抑制（P<0.01）。同时,Wnt1、β-catenin蛋白表达降低,磷酸化GSK3β表达升高。AR-A014418激活了Wnt/β-catenin通路,缓解了细胞的衰老表型;DKK1蛋白抑制了Wnt/β-catenin通路,加重了细胞的衰老表型。Wnt/β-catenin通路能调控NSCs衰老过程中促炎因子的表达。结论Wnt/β-catenin信号通路能够调控MPTP诱导的NSCs衰老过程。     

磷脂酶Cε1在1型糖尿病大鼠病理性神经痛中的作用初探

  目的  观察糖尿病病理性神经痛（DNP）大鼠脊髓磷脂酶Cε1（PLCE1）表达变化及RhoA抑制剂C3胞外酶对其活性影响，阐明PLCE1在DNP发生中的作用。  方法  24只8周龄、健康雄性SD大鼠随机分为4组（n = 6）:正常对照组（C组），单纯RhoA抑制剂组（E组），1型糖尿病DNP模型组（DNP组）和RhoA抑制剂干预组（EG组）；静脉注射1%链脲佐菌素（STZ 65 mg/kg）用于建立1型糖尿病DNP大鼠模型。对E组和EG组大鼠进行每天1次为期1周的RhoA抑制剂C3胞外酶（10 pg/10 μL）鞘内注射治疗；C组和DNP组在相应时间点鞘内给予同等容积的溶剂；应用葡萄糖测定仪测定空腹血糖浓度（mmol/L）；采用von Frey细丝法和冷热板测痛仪测定大鼠后爪机械刺激缩足反射阈值（MWT）和热刺激缩足反射潜伏期（TWL）作为痛阈观察指标；Western-blot检测脊髓活化RhoA蛋白（RhoA-GTP）、总RhoA蛋白和PLCE1蛋白表达，用脊髓PLCE1蛋白表达水平和RhoA-GTP/总RhoA比值分别评价PLCE1和RhoA活性。ELISA检测脊髓TNF-α和IL-6含量以评价炎症反应。  结果  单纯应用RhoA抑制剂C3胞外酶对非DNP大鼠各项检测指标无明显影响；1型糖尿病DNP大鼠脊髓组织RhoA和PLCE1活性均显著增加（P < 0.05），TNF-α和IL-6含量明显增多，差异有统计学意义（P < 0.05），TWL及MWT显著降低，差异有统计学意义（P < 0.05）； C3胞外酶治疗在显著抑制1型糖尿病DNP大鼠脊髓组织RhoA 表达（P < 0.05）的同时，伴有脊髓PLCE1活性的显著降低，差异有统计学意义（P < 0.05）、炎症因子TNF-α和IL-6生成的明显减少，差异有统计学意义（P < 0.05），并显著缓解1型糖尿病DNP大鼠的机械痛敏和热痛敏。  结论  PLCE1在1型糖尿病大鼠DNP中发挥重要作用，其活性受RhoA调控。     

坐骨神经脉冲射频对慢性坐骨神经压迫损伤模型大鼠脊髓背角胶质细胞活化水平的影响及其镇痛作用

目的：观察坐骨神经结扎处脉冲射频（PRF）对慢性坐骨神经压迫损伤（CCI）模型大鼠脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞活化水平的影响,探讨坐骨神经PRF镇痛机制与脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞活化水平的关系。方法：雄性SPF级SD大鼠40只随机分为CCI假造模PRF假治疗组（SS组）、CCI假造模PRF治疗组（SP组）、CCI造模PRF假治疗组（CS组）和CCI造模PRF治疗组（CP组）,每组10只。CCI造模成功后4 d行PRF治疗,在坐骨神经结扎处行标准PRF （120s、42℃）。于CCI造模前1d （D₀）及造模后1、3、5和7 d （D₁、D₃、D₅和D₇）测定大鼠患侧机械缩足反射阈（MWT）和热缩足反射潜伏期（TWL）。疼痛行为学测试完成后（D₇）取患侧L3~5脊髓背角,Western blotting法检测脊髓背角小胶质细胞特异性蛋白（Iba-1）和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的蛋白表达水平。结果：与SS组比较,CCI造模后不同时间点CS组大鼠患侧出现足外翻、跛行、脚趾弯曲聚拢和行走时抬足等行为学表现,MWT和TWL均明显下降（P<0.01）,脊髓背角Iba-1和GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与CS组比较,CP组大鼠（D₅和D₇） PRF后足外翻、跛行、脚趾弯曲聚拢和行走时抬足等行为学变化明显缓解,MWT和TWL值明显升高（P<0.01）,脊髓背角Iba-1蛋白表达水平明显下调（P<0.05）,GFAP蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：坐骨神经PRF能有效缓解CCI模型大鼠的神经病理性疼痛（NP）,坐骨神经PRF可抑制脊髓背角小胶质细胞活化水平,其镇痛机制可能与抑制脊髓背角小胶质细胞活化有关。     

Wnt3a/β-catenin信号通路诱导人关节软骨间充质祖细胞增殖能力和向软骨分化的能力

目的研究Wnt3a/β-catenin信号通路对人关节软骨间充质祖细胞(mesenchymal progenitor cells,MPCs)老化的影响。方法 RT-PCR和Western blot检测正常人(对照组)和原发性骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者(OA组)MPCs中Wnt3a/β-catenin的表达。Western blot检测β-catenin在Wnt3a/β-catenin信号激活与阻断后细胞中的积累,MTT检测细胞的增殖情况,RT-PCR检测细胞向软骨细胞诱导后的分化情况。结果 OA组MPCs中Wnt3a和β-catenin蛋白表达明显高于对照组;在Wnt3a/β-catenin信号通路激活的对照组MPCs中β-catenin积累增加,阻断后β-catenin积累降低;Wnt3a/β-catenin信号通路激活的对照组MPCs增殖能力降低,阻断后增殖能力提高;Wnt3a/β-catenin信号通路激活的对照组MPCs向软骨细胞诱导分化后较对照组MPCs中Ⅱ型胶原、aggrecan、SOX9表达降低(P<0.01);Wnt3a/β-catenin信号通路激活的同时加入阻断剂,Ⅱ型胶原、aggrecan、SOX9表达有明显恢复(P<0.05);Wnt3a/β-catenin信号通路阻断组细胞与对照组MPCs组相比没有差异。结论 Wnt3a/β-catenin信号通路激活促进了MPCs老化,Wnt3a/β-catenin信号通路阻断能够抑制MPCs老化,Wnt3a/β-catenin在OA中可能发挥了重要作用。     

基于Wnt通路下调微小RNA-130a对颅脑损伤模型大鼠神经功能的修复作用

目的 探究基于Wnt通路下调微小RNA(miRNA)-130a对颅脑损伤模型大鼠神经功能的修复作用.方法 将30只SD健康雄性大鼠,随机分为正常组(10只)和干预组(20只),正常组不给予处理,对干预组大鼠采用Feeney自由落体硬膜外撞击法建立颅脑损伤大鼠模型,共有19只大鼠建模成功.将建模成功的大鼠随机分为模型组(9只)和下调miRNA-130a组(10只).下调miRNA-130a组大鼠每日给予经尾静脉注射单唾液酸四己糖神经节甘酯钠注射液,正常组、模型组大鼠每日给予腹腔注射同等剂量的生理盐水.3组大鼠均连续注射7 d.干预7 d后,比较3组大鼠海马组织Wnt3a、β-联蛋白(β-catenin)的mRNA及miRNA-130a相对表达水平;比较3组大鼠的血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平.结果 与正常组相比,模型组、下调miRNA-130a组海马组织Wnt3a mRNA、β-catenin mRNA相对表达水平、血清丙二醛、IL-6、TNF-α、MCP-1、NSE水平均升高,血清SOD、BDNF、NGF水平降低(均P<0.05);与模型组相比,下调miRNA-130 a组海马组织Wnt3 a mRNA、β-catenin mRNA及miRNA-130 a相对表达水平、血清丙二醛、IL-6、TNF-α、MCP-1、NSE水平均降低,血清SOD、BDNF、NGF水平升高(均P<0.05).结论 基于Wnt通路下调miRNA-130 a表达水平对颅脑损伤模型大鼠进行干预,能够降低炎症反应和氧化应激水平,减轻脑组织损伤,促进神经功能修复.     

艾灸对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 观察艾灸三阴交、关元穴对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)中Wnt/β-catenin信号通路的影响,探索艾灸影响骨代谢的内在机制。方法 将60只6月龄SD大鼠随机分为正常组（20只）和去卵巢组（40只）,采用去卵巢法复制大鼠骨质疏松症模型,将去卵巢组再随机分为模型组、雌二醇组和艾灸组,每组10只。采用MTT法检测大鼠BMMSCs活性,酶联免疫吸附法检测大鼠BMMSCs中骨钙素（bone glaprotein,BGP）含量,实时荧光定量PCR法测定Wnt3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（low density lipoprotein receptor associated protein-5,LRP-5）、LRP-6、Dkk1、β-连环蛋白（β-catenin）和T细胞因子（T-cell factor, TCF）mRNA相对表达水平,Western blot法测定Wnt3a、Dkk1、β-catenin、TCF蛋白的表达水平。结果 在体外培养第12、16天时,艾灸可显著提高骨质疏松症大鼠降低的BMMSCs活性。艾灸可显著升高骨质疏松症大鼠BMMSCs中降低的BGP含量,显著上调BMMSCs中降低的LRP-5、LRP-6 mRNA的表达水平,显著上调降低的Wnt3a、β-catenin和TCF mRNA及其蛋白的表达水平,显著下调升高的Dkk1 mRNA及其蛋白的表达水平,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 艾灸三阴交、关元穴增加去卵巢大鼠BMMSCs活性,提高BGP含量,其机制与干预Wnt/β-catenin信号通路有关。     

异丙酚对谷氨酸体外激活脊髓背角星形胶质细胞及相关炎性细胞因子的影响

目的观察不同浓度异丙酚对谷氨酸体外激活大鼠脊髓背角星形胶质细胞及促炎性细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）和抗炎性细胞因子IL-10变化的影响。方法取新生2~3d Wistar大鼠T11~L6脊髓背角星形胶质细胞原代纯化培养3周。将细胞随机分为7组：正常对照组（C组）加入Hanks液;乳剂对照组（L组）加入乳剂0.2ml/L;谷氨酸组（G组）加入谷氨酸至终浓度100μmol/L;异丙酚组（P组）加入异丙酚至终浓度250μmol/L;GP1、GP2、GP3组先加入谷氨酸至终浓度100μmol/L,10min后分别加入异丙酚至终浓度5、25、250μmol/L。加药后培养24h取各组培养孔上清液检测IL-1β、TNF-αI、L-6和IL-10含量,用神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）标记星形胶质细胞（免疫细胞化学法）,多媒体彩色病理图像分析系统检测阳性细胞面密度（AD）和平均光密度（AOD）。结果与C组比较,G组和GP1组细胞被激活增生肥大,AD和AOD均升高（P〈0.01）,其上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α含量上升（P〈0.01）,G组IL-10浓度无明显变化（P〉0.05）,GP1组IL-10浓度升高（分别与C组和G组比较P〈0.05）。与G组比较,GP2组和GP3组细胞激活被抑制,AD、AODI、L-1βI、L-6和TNF-α含量均低（其中GP2组P〈0.05,GP3组P〈0.01）,而IL-10含量均上调（P〈0.01）。结论异丙酚可抑制谷氨酸对体外培养的大鼠脊髓背角星形胶质细胞的激活作用,同时抑制星形胶质细胞分泌IL-1βI、L-6和TNF-α,增强IL-10的合成释放,其作用程度与剂量有关。     

基于cGMP信号通路探讨地佐辛对神经病理性疼痛的镇痛作用

目的：探讨地佐辛对神经病理性疼痛的镇痛作用机制以及对cGMP信号通路活性的影响。方法：选取70只SD大鼠纳入研究，除空白对照组（Sham组，n=10）外，剩余SD大鼠均结扎左侧第5腰神经制备神经病理性疼痛模型（NPP）；分别给予NPP组大鼠腹腔注射低、中、高剂量地佐辛溶液，构建Sham组（n=10）、NPP组（n=10）、L-地佐辛组（n=10）、M-地佐辛组（n=10）、H-地佐辛组（n=10）分组。术后两周分别统计各组大鼠机械痛阈值（MWT）、热缩足反射潜伏期（TWL）、脊髓组织内炎性因子[（白介素（IL）-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)]、cGMP信号通路关键蛋白c GMP、PKG表达差异性；选取中等浓度地佐辛干预剂量，设置Sham组（n=10）、NPP组（n=10）、NPP+地佐辛组（n=10）、NPP+Avanafil组（NPP模型+cGMP信号通路激活剂，n=10）、NPP+地佐辛+Avanafil组（NPP+地佐辛+cGMP信号通路激活剂，n=10），分别统计各组大鼠MWT、TWL、脊髓组织内炎性因子（IL-6、IL-1...     

地佐辛对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及对Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路的影响

目的探讨地佐辛对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及对Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法将90只Sprauge Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组,每组15只。模型组、普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠结扎左侧第5腰神经制备神经病理性疼痛模型,假手术组大鼠不结扎第5腰神经。术后第4天开始,普瑞巴林组大鼠腹腔注射普瑞巴林18 mg·kg~(-1)·d~(-1),地佐辛低、中、高剂量组大鼠分别注射地佐辛6、12、24 mg·kg~(-1)·d~(-1),模型组及假手术组大鼠注射等剂量氯化钠溶液;注射量均为1 m L·kg~(-1),连续给药7 d。分别于术前及术后第4、11天测定各组大鼠机械痛阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL);术后第11天处死各组大鼠并取脊髓组织,采用酶联免疫吸附试验法检测脊髓组织中白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot法检测脊髓组织中TLR4、NF-κB蛋白相对表达量。结果各组大鼠术前MWT、TWL比较差异无统计学意义(F=0.261、0.662,P>0.05)。术后第4、11天,模型组、普巴瑞林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠MWT、TWL显著低于术前(P<0.05),模型组、普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠的MWT、TWL显著低于假手术组(P<0.05)。术后第4天,模型组、普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠MWT、TWL比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后第11天,模型组大鼠MWT显著低于术后第4天,普巴瑞林组及地佐辛中、高剂量组大鼠MWT、TWL显著高于术后第4天(P<0.05)。术后第11天,普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠MWT、TWL显著高于模型组(P<0.05),普瑞巴林组及地佐辛中、高剂量组大鼠MWT、TWL显著高于地佐辛低剂量组(P<0.05),普瑞巴林组及地佐辛高剂量组大鼠MWT、TWL显著高于地佐辛中剂量组(P<0.05),地佐辛高剂量组大鼠MWT、TWL与普瑞巴林组比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠脊髓组织中IL-6、MCP-1、TNF-α水平和TLR4蛋白、NF-κB蛋白相对表达量均显著高于假手术组(P<0.05),普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠脊髓组织中IL-6、MCP-1、TNF-α水平和TLR4蛋白、NF-κB蛋白相对表达量显著低于模型组(P<0.05),普瑞巴林组及地佐辛中、高剂量组大鼠脊髓组织中IL-6、MCP-1、TNF-α水平和TLR4蛋白、NF-κB蛋白相对表达量显著低于地佐辛低剂量组(P<0.05),普瑞巴林组及地佐辛高剂量组大鼠脊髓组织中IL-6、MCP-1、TNF-α水平和TLR4蛋白、NF-κB蛋白相对表达量显著低于地佐辛中剂量组(P<0.05),地佐辛高剂量组与普瑞巴林组大鼠脊髓组织中IL-6、MCP-1、TNF-α水平及TLR4蛋白、NF-κB蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论地佐辛可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路的激活而减轻脊髓炎症反应,提高神经病理性疼痛大鼠MWT,延长TWL,发挥镇痛作用。     

Fractalkine 通过激活 Wnt/β-catenin 信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化

目的 研究Fractalkine（CX3CL1,FKN）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞免疫应答的作用机制。方法 体外培养RAW264.7细胞,使用慢病毒技术构建过表达FKN的稳定细胞珠。细胞分为8组：（1）空白对照组;（2）LPS组,细胞给予脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（3）ICG-001组,细胞给与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（4）过表达FKN组;（5）ICG-001+LPS组,细胞给与ICG-001（10 μmol/mL预处理36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（6）过表达FKN+LPS组,过表达 FKN细胞给与脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（7）过表达FKN+ICG-001组,过表达FKN细胞给予ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（8）过表达 FKN+ICG-001+LPS 组,过表达 FKN 细胞给与 ICG-001（10 μmol/mL 预处理 36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;应用 CCK-8细胞增殖实验检测ICG-001作用于巨噬细胞中的安全浓度;应用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测巨噬细胞上清液中M1型极化因子TNF-α和IL-6的含量;应用蛋白质免疫印记（WB）实验检测巨噬细胞中FKN、Wnt/β-catenin通路关键因子Wnt-4和β-catenin、M1型极化因子iNOS、TNF-α和IL-6的蛋白表达水平;应用免疫荧光（IF）实验检测巨噬细胞中M1型极化因子IL-6蛋白的定位。结果 过表达FKN的RAW264.7细胞中FKN的蛋白水平较空白对照组明显升高（P<0.01）。CCK-8实验显示ICG-001作用于RAW264.7细胞48 h的IC50为10 μmol/mL。与LPS组相比,ICG-001+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均升高（P<0.05）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著降低（P<0.01）;EXFKN+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均显著降低（P<0.01）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著升高（P<0.01）。与LPS组相比,ICG-001+LPS组中IL-6在细胞质中的定位增强,而EXFKN+LPS组中IL-6在细胞质中的定位受到抑制。结论 过表达FKN通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化。     

老鹳草素对骨质疏松大鼠BMSCWnt3a表达的影响

［摘要］目的　研究老鹳草素对骨质疏松（OP）大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）信号分子Wnt3a表达的影响．方法　摘除大鼠双侧卵巢,复制骨质疏松症模型,分离、培养BMSC．将源于假手术大鼠第3代BMSCs常规培养作为正常对照组,将骨质疏松模型大鼠的BMSCs分别设以下组别:模型对照组、1 μmol/L的辛伐他汀阳性对照组、0.01、0.1、1、10、100 μmol/L的老鹳草素组．分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白的表达．结果　与正常对照组比较,OP模型对照组Wnt3a蛋白及其mRNA的表达明显降低,且有统计学意义（P＜0.01）;与模型组比较,1 μmol /L辛伐他汀、0.1、1、10、100 μmol/L的老鹳草素明显升高Wnt3a蛋白及其mRNA的表达,且均有统计学意义,而0.01 μmol/L老鹳草素对Wnt3a表达无明显影响．结论　老鹳草素可能通过增加BMSC中Wnt/β-catenin信号通路的信号蛋白Wnt3a的表达,进一步激活Wnt/β-catenin信号通路,这有利于BMSC的成骨分化及骨形成．     

奥拉西坦通过Wnt/β-catenin减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究

目的研究奥拉西坦对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤的影响及分子机制。方法 2017年5月—2018年12月在上海市第六人民医院南院中心实验室进行实验,选择成年雄性SD大鼠并随机分为假手术组(n=10)、I/R组(n=10)、奥拉西坦组(n=10),后2组采用线栓法建立脑I/R模型,奥拉西坦组给予奥拉西坦200 mg/kg腹腔注射,连续7 d。比较3组间神经功能缺损评分、血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)及星形胶质原蛋白(S100B)含量、脑组织中细胞凋亡率及凋亡基因、Wnt/β-catenin通路基因表达的差异。结果 I/R组大鼠的神经功能缺损评分、血清NSE及S100B含量、脑组织的细胞凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(CytC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的表达水平均明显高于假手术组,脑组织中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Wnt1、Wnt3、β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平均明显低于假手术组(P<0.05或0.01);奥拉西坦组大鼠的神经功能缺损评分、血清NSE及S100B含量、脑组织的细胞凋亡率及Bax、CytC、Caspase-3、GSK-3β的表达水平均明显低于I/R组,脑组织中Bcl-2、Wnt1、Wnt3、β-catenin的表达水平均明显高于I/R组(P<0.05或0.01)。结论奥拉西坦能够减轻大鼠脑I/R损伤的程度,且该作用与Wnt/β-catenin通路的激活有关。     

Wnt/β-catenin信号通路对正畸牙根吸收后修复作用的研究

目的：初步探讨Wnt/β-catenin信号通路对移动性牙根吸收修复的作用。方法：①通过施加过大正畸力建立炎症性牙根吸收大鼠模型,将大鼠随机分为3组,每组10只：牙周膜局部注射氯化锂激活Wnt/β-catenin信号通路组（LiCl组）,牙周膜局部注射Dickkopf相关蛋白1抑制Wnt/β-catenin信号通路组（DKK1组）和对照组,并通过Micro-CT扫描对比各组牙根表面陷窝体积变化。②完成扫描后,3组分别随机处死大鼠,并采用免疫组化法分别检测各组大鼠牙周组织中Wnt/β-catenin信号通路的支架蛋白Axin2、胞内β-连锁蛋白β-catenin、重组人骨形态发生蛋白（recombinant human bone morphogenetic protein 2,BMP-2）、牙骨质附着蛋白（cementum-derived attachment protein,CAP）和骨唾液酸蛋白（bone sialoprotein,BSP）的表达量。结果：①在修复0 d时,牙根表面陷窝体积的修复量差异无统计学意义（P＞0.05）。2周后LiCl组和对照组的牙根修复体积分数增加明显,仅DKK1组的相应指标出现了减少,3组数据指标变化明显,差异具有统计学意义（P＜0.05）。②免疫组化结果显示：在修复0 d时,3组各项检测因子表达量无明显差异;修复3 d时,3组中BMP-2、BSP和CAP的变化量均差异明显（P＜0.05）,LiCl组和DKK1组的β-catenin出现明显差别（P＜0.05）;修复第7天后,LiCl组各项检测因子均明显高于DKK1组和对照组（P＜0.05）。结论：Wnt/β-catenin信号通路通过调节成骨相关因子Axin2、β-catenin、BMP-2、BSP和CAP的表达,能加快牙根表面吸收陷窝的恢复,加快大鼠移动性牙根吸收后的修复过程。     

刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠Wnt3a/β-catenin 表达的影响 *

目的??研究刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠 Wnt 通路相关蛋白 Wnt3a、Wnt1 诱导的信号通 路蛋白 1（WISP1）和 β- 连环蛋白（β-catenin）的调控作用。方法??采用盐酸博莱霉素皮下注射法复制系 统性硬皮病小鼠模型后,给予受试药乳膏冶疗 8 周。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠皮肤组织 Wnt3a 和 WISP1 的浓度,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测小鼠皮肤组织 β-catenin?mRNA 的表达, 免疫组织化学法检测小鼠皮肤组织 β-catenin 蛋白表达。结果??刺山柑总生物碱 450 mg/kg 可降低 Wnt3a 的 浓度; 450 mg/kg和900 mg/kg可降低β-catenin?mRNA和蛋白表达 （ P <0.05） , 对WISP1浓度无影响 （ P >0.05） 。 结论??刺山柑总生物碱可抑制系统性硬皮病小鼠皮肤组织 Wnt3a 和 β-catenin 的异常表达,对系统性硬皮病 Wnt/β-catenin 通路的过度激活有一定抑制作用。     

HSV-1对星形胶质细胞炎性细胞因子表达的影响

目的：探讨单纯疱疹病毒1型（HSV-1）对星形胶质细胞内胞核转录因子kappa B（NF-κB）转录活性及炎性细胞因子肿瘤坏死因子α（ TNF-α）和白细胞介素10（ IL-10）表达的影响。方法 HSV-1感染星形胶质细胞,通过ELISA,Western blot等方法检测星形胶质细胞NF-κB,TNF-α,IL-10的表达;同时研究NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸（ PDTC）对TNF-α,IL-10表达的影响。结果星形胶质细胞被HSV-1感染后,胞核内NF-κB蛋白表达明显增强,星形胶质细胞分泌的TNF-α,IL-10均上调,与对照组比较差异有显著性（P＜0．05）。PDTC可抑制NF-κB活化,导致核内NF-κB蛋白表达下调,使得细胞分泌TNF-α,IL-10降低,与HSV-1组比较差异显著（ P＜0．05）。结论被HSV-1感染的星形胶质细胞通过活化NF-κB,从而上调TNF-α,IL-10的表达。     

炎性环境下DHA对直肠癌细胞增殖和克隆形成的影响

目的 研究二十二碳六烯酸（DHA）在炎性环境下对直肠癌细胞增殖和Lgr5表达的影响,探讨其对直肠癌细胞的双重作用。方法 MTT和克隆形成实验检测DHA对直肠腺癌细胞SW480和SW620细胞增殖和克隆形成能力的影响。Real-time qPCR和Western blot检测TNF-α和DHA作用前后Lgr5和Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果 DHA可有效抑制直肠癌细胞增殖和克隆形成能力。TNF-α可以显著激活NF-κB信号通路,DHA作用于直肠癌细胞后,可降低p65的磷酸化水平（P<0.05）,并降低抗Lgr5及Wnt/β-catenin相关蛋白CyclinD1表达水平（P<0.05）。结论 DHA抑制直肠癌细胞增殖和去分化为干细胞,同时可能抑制炎性信号通路对Lgr5⁺阳性直肠癌细胞的补充作用。     

不同结扎材料对慢性压迫性损伤模型胶质细胞活化的影响

目的 探究不同结扎材料对慢性压迫性损伤（CCI）模型行为学表现、脊髓胶质活化及相关炎症因子表达的影响。方法 44只SD大鼠随机分为对照组（n=15）、丝线CCI组（n=15）和铬线CCI组（n=14）,术后3、7、11、15 d检测大鼠损伤侧机械缩足反射阈值（MWT）及热缩足反射阈值（TWL）。并采用特殊染色、Western blot法及RT-PCR法检测大鼠损伤部位病理改变、胶质细胞及炎性细胞因子的表达。结果 术后3~15 d,丝线组与铬线组的MWT和TWL水平较对照组显著降低（P<0.05）,术后3 d铬线组的TWL较丝线组出现显著降低（P<0.05）。坐骨神经染色结果显示丝线组与铬线组均出现了神经干损伤及脱髓鞘改变。Western blot法及RT-PCR法检测结果提示丝线组与铬线组大鼠小胶质细胞标记物（CD11b）及胶质纤维状酸性蛋白（GFAP）,以及IL-1β 及TNF-α mRNA表达水平接近,并显著高于对照组（P<0.05）,而铬线组IL-6 mRNA表达高于丝线组（P<0.05）。结论 丝线和铬线制备的CCI模型均产生了胶质细胞激活作用,其中铬线组的炎症反应更加强烈。     

缺氧诱导因子-1α上调Cx43表达造成星形胶质细胞损伤的作用机制研究

目的研究在糖氧剥夺（OGD）条件下,缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）上调缝隙连接蛋白（Cx43）表达造成星形胶质细胞损伤的作用机制。方法采用HIF-1α过表达质粒转染星形胶质细胞HA细胞株构建过表达细胞株,HIF-1α小干扰RNA（siRNA-HIF-1α）转染构建低表达细胞株。同时设置对照组（Con）,在OGD条件下培养细胞。采用RT-qPCR和Westernblot法检测过表达/沉默后HIF-1α和Cx43mRNA和蛋白水平。CCK-8法检测细胞活力,Annexin-FITC/PI染色后流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒检测谷氨酸水平,ELISA法检测培养基中炎症因子NO、TNF-α、IL-6水平,Westernblot法检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因相关启动子（Bad）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、细胞色素C（Cyt-C）的表达水平。结果HIF-1α过表达后,OGD条件下,HIF-1α-lent组细胞凋亡率显著高于Con组,细胞中HIF-1α、Cx43mRNA和蛋白表达水平显著增高,培养基中谷氨酸、NO、TNF-α、IL-6表达水平也显著高于Con组,细胞凋亡相关蛋白Bad、Caspase-3、Cyt-C表达水平均上调,Bcl-2表达水平下调。而HIF-1α沉默后,OGD条件下,siRNA-HIF-1α组细胞凋亡率显著低于Con组,细胞中HIF-1α、Cx43mRNA和蛋白水平显著降低,培养基中谷氨酸、NO、TNF-α、IL-6表达水平也显著低于Con组,细胞中凋亡相关蛋白Bad、Caspase-3、Cyt-C表达水平均下调,Bcl-2表达水平上调。结论HIF-1α可以通过调控Cx43的表达,调控缺血缺氧下星形胶质细胞的损伤,这是HIF-1α在缺血性脑病发生、发展中的作用机制之一。