针刺对脑卒中痉挛大鼠模型大脑皮质DRD1mRNA、DRD2mRNA表达的影响

目的通过观察针刺对脑卒中痉挛状态大鼠大脑皮质多巴胺受体亚型(DRD1、DRD2)mRNA表达的影响,探讨针刺缓解脑卒中痉挛状态的作用机理。方法采用大脑中动脉线栓法制作大鼠脑卒中痉挛状态模型,常规手法针刺组(模型+常规手法针刺阳陵泉、曲池)及电针组(模型+电针阳陵泉、曲池)。以神经系统损伤症状、肌张力评分评价模型和针刺疗效,RT-PCR法观察大鼠大脑皮质DRD1mRNA、DRD2mRNA的表达。结果 (1)与模型组比较,针刺可降低大鼠神经系统损伤评分及痉挛大鼠的肌张力,比较差异有显著统计学意义(P<0.01),但常规手法针刺组与电针组比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)大脑皮质DRD1mRNA、DRD2mRNA的表达:与模型组比较,常规手法针刺组与电针组表达均明显增加,比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);常规手法针刺组与电针组比较差异无统计学意义(P>0.05);结论针刺对脑卒中痉挛性瘫痪具有较好的疗效,其作用机理可能与调节中枢神经系统大脑皮质DRD1mRNA、DRD2mRNA的表达有关;但常规手法针刺与电针差异不明显。     

PI3K/AKT通路在电针促进局灶脑缺血再灌注大鼠脑内血管再生中的作用

目的 观察电针对PI3K/AKT信号转导通路激活的影响,探讨电针促进脑内缺血区血管再生的可能机制.方法 采用线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血再灌注模型.取双侧"合谷"穴(LI 4)为电针穴位,将80只SD大鼠完全随机分为正常组(n=10)、模型组(n=30)、电针组(n=30)、电针+LY294002组(n=10).模型组和电针组分别包括再灌注1、3、7 d 3个时相点,每个时相点10只.采用免疫组化法检测各时间点大脑缺血半影区p-AKT1、AC133蛋白的表达;逆转录聚合酶链法检测AC133 mRNA的表达;免疫印迹法定量检测总AKT1、p-AKT1蛋白的表达.结果 与正常组比较,模型组和电针组大鼠脑缺血组织p-AKT1蛋白表达增加(P<0.05),AKT1蛋白表达无明显差异(P>0.05),AC133蛋白和mRNA 表达增加(P<0.05).与模型组比较,电针组p-AKT1蛋白表达于再灌注3、7 d有明显增高(P<0.05),再灌注3、7 d AC133蛋白和mRNA表达增加(P<0.05).在PI3K/AKT信号转导通路特异性阻断剂LY294002作用下,大鼠p-AKT1蛋白的表达较电针组显著减少(P<0.05),AC133蛋白表达阴性,AC133 mRNA表达减少,与正常组比较无明显差异(P>0.05).结论 电针可能加强PI3K/AKT信号转导通路的激活,促进EPCs归巢至缺血组织区,从而促进血管再生.     

甲状腺功能亢进对大鼠肝脏铁含量及铁转运相关蛋白 mRNA 表达的影响

目的：通过检测甲状腺功能亢进（甲亢）时大鼠肝脏铁含量和铁蛋白（ Fn ）、转铁蛋白受体1（TfR1）、二价金属离子转运体1（DMT1）、膜铁转运蛋白1（Fpn）mRNA的表达,探讨甲亢对大鼠肝脏铁代谢的影响。方法雌性SD大鼠54只,随机分组,每组6只,8个模型组经左旋甲状腺素钠灌胃给药建立甲亢模型,1个对照组灌服生理盐水。于第1～8周末各取1个模型组大鼠肝脏,行组织切片后经DAB增强的Perl′s铁染色检测肝脏铁含量,经RT－PCR检测大鼠肝脏Fn、TfR1、DMT1、Fpn mRNA的表达。结果模型组大鼠肝脏铁染色明显高于对照组,且随着时间的延长明显增强。对照组大鼠肝脏表达Fn H、Fn L、TfR1、DMT1和 Fpn mRNA。模型组Fn L mRNA在1～3周与对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05）,而4～8周均略低于对照组（P＜0.05）。模型组Fn H mRNA随造模时间延长逐渐升高（P＜0.05）,且各时间点表达均高于对照组。模型组TfR1 mRNA和DMT1 mRNA各时间点表达量均高于对照组（ P＜0.05）。模型组Fpn mRNA的表达量随造模时间延长逐渐降低（ P＜0.05）,且在各时间点均明显低于对照组。结论甲亢可引起大鼠肝脏铁含量增加,Fn、TfR1和DMT1 mRNA表达升高,而Fpn mRNA表达下降。肝脏铁含量升高可能与TfR1、DMT1和Fpn表达改变有关,肝脏Fn增加对升高的铁具有储存作用,防止铁超载对肝细胞的损害。     

腺苷A2a受体激动剂对脓毒症急性肾损伤中内质网应激的调节作用

目的:通过建立慢性间歇性低氧(CIH)大鼠模型，探讨CIH暴露对肝脏铁代谢的影响及可能的机制。方法:将20只SD大鼠随机分为常氧对照组(对照组)和模型组(CIH组),将模型组大鼠置于动物间歇性低氧舱内，前1.5min向舱内充入100%氮气使氧气浓度降至5%,后1.5min充入100%氧气使氧气浓度升至21%,每一循环3min, 8h/d, 35d;常氧对照组大鼠置于相同舱内，充入正常空气。HE染色观察肝脏损伤情况，比色法检测血清铁和总铁结合力(TIBC);普鲁士蓝染色观察肝脏铁含量；Western blot检测肝脏二价金属转运蛋白[DMT1(+ire)、DMT1(-ire)]、膜铁转运蛋白(FPN1)、转铁蛋白受体1(TfR1)、铁蛋白(FTL)、p-STAT3、STAT3蛋白表达；Q-PCR检测肝脏铁调素(hepcidin)、DMT1(+ire)、DMT1(-ire)、FPN1、TfR1、白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达。结果:与对照组相比，模型组大鼠肝脏细胞结构紊乱，出现脂肪空泡、细胞核萎缩；与对照组相比，模型组大鼠TfR1和DMT1(+ire)mRNA及蛋白表达显著上升(P...     

电针对胰岛素抵抗大鼠肝脏组织SIRT1/ATG7信号通路的影响

摘要：目的 观察电针对胰岛素抵抗(IR)大鼠肝脏组织SIRT1/ATG7信号通路的影响,探讨电针治疗IR的潜在机制。方法 将Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、SIRT1激活剂组和SIRT1抑制剂+电针组,每组各8只。建立IR大鼠模型,电针组选取中脘、关元、足三里及丰隆进行电针干预;SIRT1激活剂组灌胃给予白藜芦醇处理;SIRT1抑制剂+电针组腹腔注射EX527并实施与电针组相同的电针治疗。检测各组大鼠的餐后血糖(PBG)、腹腔胰岛素耐量(IPITT)及葡萄糖输注率(GIR)。采用免疫共沉淀技术检测ATG7的乙酰化水平。采用Western blot法检测大鼠肝脏组织中SIRT1、ATG7、p-GSK-3β蛋白表达量。结果 与正常组相比,模型组PBG、IPITT水平显著升高(均P<0.01),GIR显著降低(P<0.01),肝脏组织p-GSK-3β蛋白表达显著升高(P<0.01),SIRT1、ATG7蛋白表达显著降低(均P<0.01),ATG7蛋白乙酰化水平升高;与模型组相比,电针组PBG显著降低(P<0.05),电针组与SIRT1激活剂组GIR显著升高(均P<0.05),IPITT水平、肝脏组织p-GSK-3β蛋白表达显著降低(均P<0.05),SIRT1、ATG7蛋白表达显著升高(均P<0.05),ATG7蛋白乙酰化水平降低;与电针组相比,SIRT1抑制剂+电针组GIR、肝脏组织ATG7蛋白表达显著降低(均P<0.05),ATG7蛋白乙酰化水平升高。结论 电针可以通过激活肝脏SIRT1/ATG7信号通路,提高全身与肝脏胰岛素敏感性,改善IR。     

电针对脑缺血再灌注大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响

目的  观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的改善程度及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响。方法  根据随机数字表法,将72只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组24只。采用Longa线栓法建立改良的急性局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,并在缺血1 h后进行再灌注。参照改良的Zea Longa 8级神经功能缺损评分法对3组大鼠脑神经功能损伤程度进行评估。电针组于造模成功后5 min和16 h进行电针干预。于再灌注后24 h取材。TTC染色法观察各组大鼠脑梗死体积;HE染色法观察大鼠脑组织病理学变化;Western blot检测大鼠右侧纹状体脑组织中LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达,qPCR检测Beclin1 mRNA表达。结果  对照组无行为学改变,模型组神经功能缺损评分显著高于对照组(P < 0.05);与模型组比较,电针组神经功能缺损评分明显低于模型组(P < 0.05)。电针组脑梗死体积较模型组明显减少(P < 0.05)。与模型组比较,电针组LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达明显增加(P < 0.05),Beclin1 mRNA的表达亦明显增加(P < 0.05)。结论  电针治疗可能通过促进自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1的表达,调控自噬的发生,减小大鼠脑梗死体积,改善神经功能缺损,实现对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护效应。      

眶内电针法与眶内针刺法对大鼠动眼神经损伤后眼外肌功能及动眼神经的作用

目的:探讨眶内电针法与眶内针刺法对动眼神经损伤模型大鼠眼外肌功能的影响及对动眼神经损伤的作用。方法:随机选取SD大鼠暴露动眼神经,制备动眼神经损伤模型,选取模型制备成功SD大鼠21只,随机分为模型组、眶内电针刺组(A组)、眶内针刺组(B组),每组各7只。另选取仅暴露动眼神经SD大鼠7只为假手术组,选取未进行任何手术处理的SD大鼠7只为空白组。空白组、假手术组、模型组不予治疗,A、B组均行对应的治疗方案,于治疗结束次日检测瞳孔直径、睑裂大小、眼外肌张力、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测动眼神经中半乳糖凝集素-1(Galectin-1) mRNA表达。结果:假手术组瞳孔直径大于空白组、睑裂及眼外肌张力小于空白组,差异均无统计学意义(P>0.05),模型组瞳孔直径大于空白组、睑裂大小及眼外肌肌肉张力小于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。A组瞳孔直径大于假手术组,睑裂小于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05),B组瞳孔直径大于假手术组、睑裂及眼外肌张力小于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05)。A组瞳孔直径小于模型组、睑裂及眼外肌张力大于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05),B组睑裂及眼外肌张力大于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。假手术组Galectin-1 mRNA相对表达量与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05),模型组Galectin-1 mRNA相对表达量低于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);A组与B组Galectin-1 mRNA相对表达量低于假手术组高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:眶内电针法与眶内针刺法均可改善动眼神经损伤模型大鼠的眼外肌功能,并具有修复动眼神经损伤作用。     

推拿疗法对骨骼肌纤维化大鼠MMP-1和TIMP-1表达的影响

[目的]观察推拿疗法对大鼠急性腓肠肌钝挫伤后纤维修复的影响,探讨其可能的作用机制。[方法]将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、推拿治疗组(n=10),运用自制砸伤装置复制经典骨骼肌钝挫伤模型。治疗组进行推拿治疗,每次干预10 min,每日1次,连续实施25 d。通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠腓肠肌纤维化程度;qPCR和蛋白印迹检测大鼠腓肠肌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白的表达情况。[结果]HE染色镜下发现对照组大鼠骨骼肌纤维排列整齐,形态结构完整;模型组大鼠骨骼肌纤维排列紊乱,甚至断裂,肌成纤维细胞增多,细胞外基质ECM)增多且胶原纤维明显沉积;治疗组大鼠骨骼肌纤维排列较整齐、间距小,且大小均一,胶原纤维生成减少,仅有少量ECM生成,损伤基本恢复。qPCR和蛋白印迹结果显示模型组大鼠损伤腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白表达量及MMP-1/TIMP-1比值明显降低(P<0.01),而TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平明显升高;给予推拿治疗后可明显提高损伤大鼠腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白水平及MMP-1/TIMP-1的比值(P<0.01,P<0.05),且降低TIMP-1的转录水平(P<0.01,P<0.05)。[结论]推拿治疗可有效减轻骨骼肌钝挫伤后纤维化程度,其作用可能与上调MMP-1/TIMP-1比值有关。     

基于Nrf2通路研究通腑养髓方调控Wilson病模型TX小鼠神经细胞铁死亡的机制

目的 基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2- related factor,Nrf2)信号通路观察通腑养髓方对Wilson病(Wilsons disease, WD)模型TX小鼠神经细胞铁死亡的干预效应,并探讨通腑养髓方对WD神经细胞损伤的保护机制。方法 以DL小鼠为正常对照,将TX小鼠随机分为模型组和通腑养髓方组,通腑养髓方组以通腑养髓方中药灌胃治疗30 d,模型组和对照组小鼠以生理盐水灌胃,末次灌胃后取各组小鼠脑组织。采用电感耦合等离子体质谱法检测小鼠脑组织铜、铁微量元素含量,免疫荧光染色技术检测小鼠脑组织转铁蛋白受体（transferrin receptor, TfR）表达水平,比色法检测小鼠脑组织超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活性和丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量,透射电子显微镜观察小鼠脑组织细胞线粒体形态变化,Fluoro-Jade B（FJB）染色观察小鼠神经细胞损伤程度,Western blot法检测小鼠脑组织铁死亡及Nrf2信号通路相关蛋白［Nrf2,铁蛋白重链（ferritin heavy chain,FTH1）、血红素加氧酶1（heme oxygenase 1,HO1）、醌氧化还原酶1（NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1）］表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组小鼠脑内铜、铁含量,TfR表达水平,MDA含量显著升高（P<0.05）,SOD活性显著下降（P＜0.05）;与模型组比较,通腑养髓方组小鼠脑内铁含量,TfR表达水平,MDA含量显著降低（P＜0.05）,SOD活性显著升高（P＜0.05）。模型组小鼠脑组织线粒体膜皱缩,嵴数量减少或消失,空泡产生;通腑养髓方组小鼠脑组织线粒体结构损伤程度明显减轻。与正常对照组比较,模型组小鼠神经细胞损伤程度显著增加（P<0.05）;与模型组比较,通腑养髓方组神经细胞损伤程度显著减少（P<0.05）。模型组小鼠脑内谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4,GPX4）表达水平较正常对照组显著降低（P< 0.05）,通腑养髓方组脑内GPX4表达水平较模型组显著升高（P<0.05）。模型组小鼠脑内Nrf2、FTH1、HO1、NQO1表达水平较正常对照组显著降低（P<0.05）,通腑养髓方组脑内Nrf2、FTH1、HO1、NQO1表达水平较模型组显著增加（P<0.05）。结论 通腑养髓方通过上调TX小鼠神经细胞GPX4等铁死亡相关蛋白及Nrf2、FTH1、HO1、NQO1等Nrf2通路相关蛋白的表达水平,减轻铜蓄积所致的氧化应激,抑制神经细胞铁死亡,从而起到保护神经细胞的作用。     

电针“环跳、委中”对大鼠坐骨神经损伤修复作用研究

目的:比较电针环跳穴、委中穴对大鼠坐骨神经损伤的修复作用差异。方法:将健康清洁级SD大鼠按照随机数字表法随机分为假手术组、模型组、委中组、环跳组,每组各8只。钳夹法制备急性坐骨神经损伤模型。委中组、环跳组在模型制备成功后分别电针委中穴、环跳穴,每日1次,每次20 min,连续干预14 d。电针治疗前后均检测坐骨神经功能指数(SFI)与神经传导速度(MNCV),苏木精-伊红(HE)染色法观察坐骨神经病理变化,透射电镜法观察钳夹处坐骨神经超微结构,免疫组化法检测脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达。结果:与假手术组相比,造模各组SFI、MNCV值均明显降低(P0.01);与模型组相比,委中组、环跳组SFI、MNCV值均明显升高(P0.01);且与委中组相比,环跳组SFI、MNCV值升高更明显(P0.05、P0.01)。与假手术组相比,模型组髓鞘厚度明显降低(P0.01);与模型组相比,环跳组和委中组髓鞘厚度明显增加(P0.01)。与假手术组相比,模型组BDNF蛋白阳性表达上调(P0.01);与模型组相比,环跳组、委中组均可增加BDNF蛋白的上调(P0.01);且环跳组比委中组上调幅度增加更明显(P0.01)。结论:电针委中穴、环跳穴均可提高坐骨神经损伤大鼠运动功能及神经传导速度,促进受损神经结构修复,且电针环跳穴提升幅度更大,这可能是电针环跳穴疗效优于委中穴的作用机制之一。     

电针对肥胖大鼠骨骼肌AMPK/ACC/CPT-1信号通路的影响

目的 观察电针对肥胖大鼠骨骼肌腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响,探讨电针治疗肥胖的机制。方法 30只刚断乳（3周龄）的SPF级SD雄性大鼠,随机挑选6只普通饲料喂养并设为正常组,另24只高脂饲料喂养造模12周,将造模成功的12只随机分为模型组和电针组。测定各组大鼠体质量、脂肪质量、血脂等相关指标,qPCR检测各组大鼠骨骼肌中AMPKα1、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)的mRNA表达变化, Western blot 法检测骨骼肌AMPK、ACC磷酸化水平和CPT-1蛋白水平。结果 与正常组比较,模型组体质量显著升高（P<0.01）,显示肥胖大鼠造模成功。与模型组相比,电针组大鼠的体质量、内脏脂肪质量和血脂均显著降低（P<0.05~0.01）;骨骼肌AMPKα1、ACC、CPT-1 mRNA的表达量显著上升（P<0.05~0.01）。电针使AMPK磷酸化水平显著提高（P<0.01）,激活AMPK的活性;ACC磷酸化水平显著提高,抑制ACC活性;同时提高CPT-1蛋白水平。结论 电针可以降低肥胖大鼠的体质量并改善其脂肪代谢的紊乱,其机制可能通过调节骨骼肌组织AMPK/ACC/CPT-1信号通路实现的。      

电针刺激对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮质ROCK1与ROCK2表达的影响

目的 观察电针刺激对局灶性脑梗死大鼠神经功能及梗死灶周围皮质ROCK1和ROCK2表达的影响,初步探讨其对大脑缺血组织的保护机制。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针穴位组,每组10只。用改良Longa法制作大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,在大鼠麻醉苏醒后90 min对电针穴位组大鼠进行电针刺激,每天1次,连续14 d。分别在术后1、3、7、14 d时对各组大鼠进行改良神经功能缺损评分（mNSS）。术后14 d时,用免疫组化和蛋白质印迹法检测缺血侧大脑皮质中ROCK1、ROCK2蛋白的表达情况。结果 正常组和假手术组未出现神经功能缺损表现。术后7、14 d,电针穴位组mNSS评分较模型组下降（P<0.05）。免疫组化和免疫印迹结果显示,模型组ROCK1和ROCK2蛋白表达上调,电针穴位组ROCK1和ROCK2蛋白表达较模型组减少（P<0.05）。结论 电针刺激促进局灶性脑梗死后大鼠神经功能恢复,可能与其下调ROCK1和ROCK2蛋白表达有关。     

DMT1在人胎盘绒毛膜癌细胞中表达的实验研究

目的进一步确定二价金属离子转运体1（DMT1）在人胎盘绒毛膜癌细胞（BeWo）中的表达定位,以及缺铁状态下mRNA的表达变化。方法采用免疫细胞化学技术观察DMT1在BeWo细胞中的表达定位,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测DMT1在BeWo细胞缺铁状态下mRNA的表达变化。结果DMT1在BeWo细胞中呈阳性表达,其弥漫性表达定位于细胞质和细胞膜上;DMT1+IRE mRNA 和DMT1-IRE mRNA 的相对表达量随缺铁干预浓度和时间的增加而上调。DMT1+IRE mRNA 的相对表达量高于DMT1-IRE mRNA。结论DMT1 大量表达在BeWo 细胞质和细胞膜上,且表达受机体不同铁水平的调节,说明其在胎盘铁转运过程中发挥重要作用,为进一步探讨胎盘铁转运分子机制提供实验基础。     

大鼠心脏二价金属转运体1表达量的不同发育期变化及其调节

目的：研究二价金属转运体1(divalent metal transporterl，DMTl)在大鼠心脏中的表达及其受膳食铁调节的情况。方法：采用RT—PCR和Western blot技术，观察DMTl在雄性Sprague—Dawley大鼠心脏中的表达。结果：两种亚型的DMTl mRNA(non—IRE形式和IRE形式)在不同年龄(7、21、63和196d)的大鼠心脏中均有表达，随着大鼠年龄的增加，DMTl mRNA的表达量增加，并又其表达量与心脏中的铁合量呈正相关。出生21d的大鼠用高铁或低铁饲料喂养6周后，分别造成心脏铁超载和铁缺乏模型。高铁组、低铁组与对照组相比，心脏DMTl mRNA的表达量没有明显变化；Western blot分析结果显示，DMTl蛋白(non—IRE形式和IRE形式)在铁缺乏的心脏中合量分别增加21％和40％(P＜0．01)，在铁超载的心脏中其合量降低26％～28％(P＜0．01)。结论：DMTl在心脏中的表达受膳食铁和心脏铁合量的调节，其调节方式与转铁蛋白受体不同，是一种转录后调节。     

督脉电针刺激对脊髓全横断小鼠大脑皮质运动区BDNF表达的影响

目的研究督脉电针刺激对脊髓全横断(spinal cord transection,SCT)小鼠大脑皮质运动区脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的影响。方法将绿色荧光蛋白转基因小鼠在T9、T10间行SCT,随机分为电针(EA)组、对照组,每组9只小鼠。EA组于术后第1d开始电针刺激至第13d结束,对照组仅做SCT。术后28d时,取小鼠大脑皮质运动区脑组织,用免疫组化、原位杂交、逆转录-聚合酶链式反应、酶联免疫吸附试验检测皮质运动区BDNF的表达变化。结果 BDNF蛋白和mRNA阳性产物主要表达于皮质运动区神经元。EA组、对照组皮质运动区BDNF蛋白表达分别为(1973.41±194.71)pg/mg、(1615.22±137.21)pg/mg,差异有统计学意义(P<0.05);而BDNFmRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论脊髓损伤后督脉电针刺激能够有效增加小鼠大脑皮质运动区BDNF蛋白表达,这有助于揭示电针刺激促进脊髓损伤修复的机制。     

电针对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力及LC3Ⅱ、P62表达水平的影响

目的 研究电针对APP/PS1双转基因小鼠自噬相关蛋白LC3Ⅱ及受体蛋白P62相关的作用机制.方法 将7月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、电针治疗组,以同窝转基因阴性小鼠为正常对照组.电针治疗组予电针涌泉、百会,15 min/次,隔日1次,治疗6周,利用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力以及用Western blot法检测小鼠海马区域LC3Ⅱ及P62蛋白的表达.结果 水迷宫结果显示,模型组与正常对照组比较,逃避潜伏时增加(P<0.01);WB结果显示,与对照组相比,模型组LC3Ⅱ表达增强,P62表达减弱(P<0.05);与模型组相比,针刺组LC3Ⅱ表达减弱,P62表达增强(P<0.05).结论 APP/PS1转基因鼠存在神经元自噬途径功能亢进,电针可能通过抑制自噬水平,从而改善学习记忆功能.     

葛根素通过AMPK-mTOR通路激活自噬改善大鼠激素性股骨头坏死的研究

目的 探讨葛根素通过自噬信号通路对激素性股骨头坏死早期血管内皮细胞自噬的干预作用。方法 48只雄性SD大鼠随机分成4组（每组12只）。对照组：单纯肌肉注射生理盐水，2ml/只/次，共3次，间隔24h；模型组：肌肉注射甲基强的松龙，20mg/kg共3次，间隔24h。葛根素干预组：同模型组方法造模，在最后一次臀肌注射完甲基强的松龙后给予葛根素（100mg/kg?d)腹腔注射。雷帕霉素干预组：同模型组方法造模，在最后一次臀肌注射完甲基强的松龙后同时给予雷帕霉素（1.2mg/kg?d，自噬特异性激动剂)腹腔注射。造模后二周、四周后处死实验动物，取出双侧后肢的股骨头及主要供血血管。HE染色光镜下观察股骨头坏死情况；利用免疫组化法和RT-PCR方法检测Beclin1、LC3、P62、AMPK,mTOR和ULK1的mRNA与蛋白的表达；采用ELISA法检测血管内皮损伤标记物6-keto-PGF1a的表达。结果 与对照组比较，模型组大鼠骨细胞坏死加重，血管内皮细胞6-keto-PGF1a的表达增加（P<0.05），血管内皮细胞中自噬相关蛋白AMPK、ULK1、Beclin1、LC3表达降低（P<0.05）、mTOR、P62表达增高（P<0.05）；与模型组比较，葛根素干预组大鼠的骨坏死程度明显改善，6-keto-PGF1a的表达降低（P<0.05），自噬相关蛋白AMPK、ULK1、Beclin1、LC3表达增高（P<0.05）、mTOR、P62表达降低（P<0.05）。结论 葛根素可能通过AMPK-mTOR-Ulk1 信号通路激活血管内皮细胞的自噬，从而减轻激素所造成的股骨头坏死。     

电针对控制性超排卵小鼠子宫内膜磷酸化胰岛素样生长因子-1受体表达及其信号转导通路的调控

目的观察电针对控制性超排卵(COH)小鼠子宫内膜胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)表达及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)、磷酯酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)信号转导通路的影响,探讨电针改善胚胎着床的作用机制。方法将昆明纯种性成熟雌性小鼠随机分成自然周期组、COH组、电针组、电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组、电针+PD-98059组(其中BMS-536924、LY-294002、PD-98059为IGF-1R、PI3K、MAPK阻断剂的名称),每组20只,每组又分为供体鼠和受体鼠。采用控制性超促排卵长方案制备动物模型,并于注射绒毛膜促性腺素(HCG)日取关元、中极、三阴交行电针治疗,1次/d,至取材停止针刺。取供体鼠受精卵体外培养后移植至同组同日见阴栓的受体鼠子宫内,观察临床妊娠率和胚胎着床位点数,用Western blot法检测子宫内膜IGF-1R、磷酸化胰岛素样生长因子-1受体(p-IGF-1R)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)的表达。结果 COH组妊娠率、平均着床位点数和子宫内膜IGF-1R、p-IGF-1R、p-Akt、p-ERK1/2的表达均较自然周期组低(P0.05或0.01),电针组、电针+LY-294002组、电针+PD-98059组各项指标均较COH组显著性增加(P0.05或0.01),但电针+BMS-536924组妊娠率、平均着床位点数未见明显改善,且p-IGF-1R表达显著性低于自然周期组(P0.01)。电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组、电针+PD-98059组相比较,电针+PD-98059组p-Akt蛋白和电针+LY-294002组p-ERK1/2蛋白表达较高,其差异具有统计学意义(P0.01)。结论电针改善COH小鼠胚胎着床可能与上调p-IGF-1R表达及PI3K/Akt、MAPK/ERK1/2信号转导通路有关。     

Effect of Electroacupuncture on TRPM7 mRNA Expression after Cerebral Ischemia／reperfusion in Rats via TrkA Pathway

TRPM7 ion channel protein is a member ofthe transient receptor potential (TRP) cation chan-nel superfamily .It is an unusual bifunctional pro-tein that contains anα-kinase domain fused to aCa2 +-permeable cation channel . Aarts and col-leagues provide evidence that TRPM7 initiatesCa2 +overload. TRPM7 may play a key role in an-oxic neuronal death[1]. Electroacupuncture (EA)has been shown to be an effective treat ment onstroke . The detailed mechanisms mediating thebeneficial effects of…