低氧对小鼠胚胎干细胞诱导分化成心肌细胞的影响

目的探讨在胚胎干细胞诱导分化过程的不同阶段进行低氧处理对分化心肌细胞的影响。方法建立胚胎干细胞向心肌细胞诱导分化的实验方法,在分化过程的不同阶段采取低氧（氧浓度为4%）处理,并设立常氧组（约为20%）作为对照,用免疫荧光鉴定分化后的心肌细胞,以流式细胞术检测低氧对分化心肌细胞的增殖、分化、凋亡的影响。结果分化细胞经免疫荧光检测显示,部分细胞呈α辅肌动蛋白阳性（红色）、心肌肌钙蛋白I阳性（绿色）;分化细胞经流式检测显示,与常氧组相比,悬滴低氧组α-actinin阳性细胞和cTnI阳性细胞的比率分别提高了12.55%（P〈0.01）和6.11%（P〈0.05）,悬浮低氧组凋亡比率与常氧组相比明显提高（P〈0.01）,悬滴低氧组处于S期的细胞比率与常氧组相比明显降低（P〈0.01）。结论在胚胎干细胞向心肌细胞的定向诱导分化过程中,采用悬滴阶段低氧处理,使心肌特异性蛋白阳性细胞比率提高,细胞凋亡率稳定,细胞增殖能力因细胞分化成熟而有所降低,为低氧处理的最佳方案。     

桔梗皂苷D对肝癌干细胞活力和细胞凋亡的干预作用及其机制研究

目的探讨桔梗皂苷D对肝癌干细胞活力和细胞凋亡的干预作用及其机制。方法 MTT法和Annexin V染色流式细胞术检测桔梗皂苷D和5-氟尿嘧啶对Hep G2肝癌干细胞细胞活力和细胞凋亡的影响;采用Western blot检测Hep G2肿瘤干细胞HAX1表达;运用JC-1染色流式细胞术、Annexin V染色流式细胞术及Western blot方法研究桔梗皂苷D联合5-氟尿嘧啶对肝癌干细胞凋亡通路的影响。结果 5μmol/L 5-氟尿嘧啶处理下Hep G2肿瘤干细胞活力抑制率为(29.1±2.4)%,显著低于常规Hep G2细胞活力抑制率(72.7±5.2)%(P0.05)。5-氟尿嘧啶联合桔梗皂苷D对Hep G2肿瘤干细胞的细胞活力抑制率为(66.7±3.4)%,凋亡诱导率为(33.9±2.1)%,显著高于5-氟尿嘧啶单独处理的细胞活力抑制率[(28.7±1.8)%,P0.05]和凋亡诱导率[(8.9±0.6)%,P0.05]。桔梗皂苷D处理后Hep G2肿瘤干细胞HAX1相对表达水平比对照组显著下降[(0.24±0.02)比(0.78±0.05),P0.05];5-氟尿嘧啶+桔梗皂苷D+HAX1质粒组Hep G2肿瘤干细胞凋亡率显著低于5-氟尿嘧啶+桔梗皂苷D组[(10.1±0.7)%比(34.8±2.2)%,P0.05];5-氟尿嘧啶+桔梗皂苷D组Hep G2肿瘤干细胞相对线粒体膜电位显著低于5-氟尿嘧啶组[(0.21±0.02)比(0.84±0.04),P0.05]。结论桔梗皂苷D可能通过下调HAX1表达抑制肝癌干细胞对5-氟尿嘧啶的抵抗性。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠骨髓间质干细胞诱导分化为心肌细胞的影响

[目的]探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在体外诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用.[方法]取大鼠股骨骨髓,采用直接贴壁法分离、培养骨髓间质干细胞;取P3代骨髓间质干细胞,分别以5-氮胞苷、5-氮胞苷联合bFGF诱导.30 d后用免疫组化法检测细胞的心肌肌钙蛋白,RT-PCR法检测心肌细胞转录因子GATA-4、结蛋白(desmin),并用倒置显微镜在镜下观察细胞的跳动情况.[结果]大鼠骨髓间质干细胞经5-氮胞苷或5-氮胞苷 bFGF诱导30 d后,均呈现心肌肌钙蛋白表达阳性和GATA-4、desmin表达阳性.镜下观察单用5-氮胞苷诱导组未见细胞跳动;联合bFGF诱导组则可见所诱导的细胞呈心肌细胞样跳动.[结论]骨髓间质干细胞在体外能被5-氮胞苷诱导分化为心肌细胞,但单用5-氮胞苷诱导比不上联用bFGF诱导的效果好.bFGF在体外有促进大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用.     

C-sis对缺氧导致心肌细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨C-sis对缺氧诱导心肌细胞凋亡的作用。方法 制备原代小鼠心肌细胞;将心肌细胞分为空白组、缺氧组、缺氧及空载质粒转染组和缺氧及pcDNA3.1/C-sis转染组;将空载质粒及pcDNA3.1/C-sis分别转染缺氧及空载质粒转染组和缺氧及pcDNA3.1/C-sis转染组心肌细胞;对缺氧组、缺氧及空载质粒转染组和缺氧及pcDNA3.1/C-sis转染组心肌细胞进行缺氧处理;倒置显微镜观察各组心肌细胞的搏动频率、异常搏动次数;全自动生化分析仪测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白、C-sis蛋白表达水平。结果 与空白组相比,缺氧组心肌细胞搏动频率明显变慢[(99±5)次·min-1比(159±21)次·min-1,P<0.01],异常搏动次数明显增多[(16.9±1.4)次·min-1比(2.4±0.7)次·min-1,P<0.01],细胞培养液中LDH含量明显升高[(88.27±13.14)U·L-1比(23.54±5.81)U·L-1,P<0.01],细胞存活率降低[(57.54±4.84)%比(100.00±0.00)%,P<0.01],凋亡率升高[(39.26±4.05)%比(1.77±0.87)%,P<0.01],Caspase3和Bax蛋白表达明显升高[Caspase3:(2.27±0.94)比(0.22±0.11),P<0.01;Bax:(1.79±0.77)比(0.87±0.27),P<0.05],Bcl-2蛋白表达明显下降[(0.12±0.06)比(0.84±0.24),P<0.01]。而pcDNA3.1/C-sis质粒转染后C-sis表达明显升高,并抑制上述缺氧所致心肌细胞发生的一系列变化(P<0.01或P<0.05)。结论 C-sis能够抑制缺氧所致的心肌细胞凋亡。     

川芎含药血清诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究

目的:探讨川芎含药血清诱导小鼠胚胎干细胞(ES)分化为心肌细胞的特征,建立简便、高效的定向诱导ES细胞向心肌细胞分化的体系。方法:观察川芎含药血清作用下ES细胞活性,诱导第3天起可见自发性、有节律跳动的类胚体出现,第5天达到高峰,约有70%的拟胚体产生跳动。用RT-PCR法在跳动的拟胚体中检测心肌细胞特异性标志物β-MHC的表达。结果:川芎含药血清培养下的细胞β-MHC的表达水平和分化率均明显升高,与大鼠血清组和胎牛血清组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:川芎含药血清可明显提高体外诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化的效率。     

葛根素对小鼠胚胎干细胞源心肌细胞超微结构的影响

目的:探讨葛根素对小鼠胚胎干细胞源心肌细胞肌节及线粒体结构发育的影响。方法:采用悬滴-悬浮-贴壁三步法诱导转基因D3系小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化,在分化过程中持续使用葛根素(100μmol/L)处理;在分化的中期(第16天)和晚期(第20天)将拟胚体的跳动区域切下后制成超薄切片,应用电镜观察其超微结构,并测量肌节的长度。结果:⑴在分化第16天和第20天,葛根素组心肌细胞肌原纤维发育较对照组成熟;⑵分化第16天,葛根素组心肌细胞肌节长度为(1.67±0.02)μm,(n=9),明显长于对照组(1.44±0.15)μm,(n=4,P<0.05)。分化第20天,葛根素组心肌细胞肌节长度(1.88±0.04)μm,(n=6),高于对照组(1.78±0.04)μm,(n=5);⑶与对照组相比,葛根素组心肌细胞线粒体体积较大,嵴较密集。结论:葛根素能促进小鼠胚胎干细胞源心肌细胞肌节结构成熟和线粒体的发育。     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡

目的:观察血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用及其作用受体.方法:体外培养的Wistar乳鼠心肌细胞,以AⅡ10-11～10-5 mol*L-1孵育24 h,采用流式细胞术及TUNEL方法检测凋亡细胞;然后加入AⅡⅠ型受体阻断剂氯沙坦与AⅡ共同孵育,观察其对AⅡ诱导的心肌细胞凋亡的影响.结果: AⅡ 10-11 mol*L-1组凋亡细胞数量与对照组差异无显著性[(14.63±3.18)% vs (10.55±2.67)%, P>0.05]; AⅡ10-9 mol*L-1组凋亡心肌细胞数量显著高于对照组[(22.18±3.59)% vs (10.55±2.67)%, P<0.01]; AⅡ浓度为10-9 mol*L-1、10-7 mol*L-1和10-5 mol*L-1三组间,凋亡细胞数量差异无显著性[(22.18±3.59)%, (19.07±3.27)%, (25.06±5.64)%,P>0.05].氯沙坦抑制AⅡ诱导的心肌细胞凋亡[(12.87±4.31)% vs(19.07±3.27)%,P<0.05].TUNEL染色支持以上结果.结论:血管紧张素Ⅱ可以诱导乳鼠心肌细胞凋亡,其作用可能通过AⅡⅠ型受体介导.     

抗坏血酸诱导体外培养小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞

目的探讨采用抗坏血酸诱导体外培养小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cell,mESC）分化为心肌细胞的可行性。方法未分化ES细胞在滋养层上长至汇合,胰酶消化成单个细胞经旋转生物反应器（RCCS）制备拟胚体（em-bryoid bodies,EBs）,EBs贴壁后用抗坏血酸诱导分化为心肌细胞。通过光镜观察跳动的心肌细胞,采用免疫组织化学、激光共聚焦显微镜（CLSM）和RT—PCR的方法鉴定心肌细胞。结果抗坏血酸能有效地诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化,诱导效率为90％;分化的心肌细胞自发而有节律地收缩,心肌肌钙蛋白T（cTnT）、α-辅肌动蛋白（α—actinin）、肌动蛋白（actin）表达阳性。此外,分化的心肌细胞还表达调控心肌发育的基因α—MHC、β—MHC。结论抗坏血酸能有效地诱导体外培养小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞。     

川芎含药血清诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究

目的:探讨川芎含药血清诱导小鼠胚胎干细胞(ES)分化为心肌细胞的特征,建立简便、高效的定向诱导ES细胞向心肌细胞分化的体系。方法:观察川芎含药血清作用下ES细胞活性,诱导第3天起可见自发性、有节律跳动的类胚体出现,第5天达到高峰,约有70%的拟胚体产生跳动。用RT-PCR法在跳动的拟胚体中检测心肌细胞特异性标志物β-MHC的表达。结果:川芎含药血清培养下的细胞β-MHC的表达水平和分化率均明显升高,与大鼠血清组和胎牛血清组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:川芎含药血清可明显提高体外诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化的效率。     

Nesprin-1对小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的影响

目的探讨nesprin-1在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的作用。方法采用悬滴-悬浮-贴壁三步法,5-氮杂胞苷(5-aza)与丹参共同诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞,用Western blot与免疫荧光技术检测nesprin-1蛋白表达水平和在分化成熟过程中的改变。同时利用RNA干扰(RNAi)技术抑制nesprin-1蛋白的表达:Ⅰ组(RNA干扰目的序列AAAGCCAAGCACGCAACTA),Ⅱ组(RNA干扰目的序列GGGAACCAACAGTGAGATT),Ⅲ组(RNA干扰目的序列ACCAGGACATTGCGTACTA),对照组(使用无意义的ShRNA干扰序列),观察对胚胎干细胞分化的影响。结果 Nesprin-1各亚型在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的表达水平有所变化。RNAi后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和对照组心肌细胞分化率分别为(17.78±1.92)%、(36.67±3.34)%、(44.42±5.08)%和(77.78±1.92)%,各干扰组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),且各干扰组分化后心肌组织分化成熟的蛋白标志肌球蛋白(myosin)的表达量减少。结论 Nesprin-1在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中发挥重要作用,不同分子大小的nesprin-1亚型在此分化过程中可能有着不同的功能。     

比较捣法、提插法与雀啄法三种针刺手法异同

针刺手法是影响针灸疗效的重要因素。针刺手法具有较强的实践操作性,现代医家对古籍中针刺手法的记载更有着不同的理解和发挥,故产生了种类多样的针刺手法。捣法、提插法与雀啄法均是以上下进退为主要操作形式的针刺手法,三者操作形式类似,但是,由于针刺幅度和频率不同,在临床治疗中产生的效果亦各不相同。捣法以大幅度的重捣轻提为主要操作特点,体现刺激量大、针感强的特征;提插法以幅度均匀的上提下插为主要操作特点,刺激量与针感因人因病等各异;雀啄法以进针原处的小幅度高频率的提插动作为主要操作特点,侧重于下插,刺激量与针感略小。临床应用中,可以根据病情的需要,运用不同刺激方式,对穴位发挥不同作用,从而提高临床疗效。     

提壶揭盖法认知

“提壶揭盖法”乃朱丹溪用催吐法治疗癃闭而首创。喻肺及膀胱为“滴水之器,上窍通而下窍之水出焉。”古今医者论及者多异。笔者认为,轻宣升阳、调畅“上焦”,凡具有开启“上焦”壅塞之气机。而“下焦”自开的的方法,如开宣肺气;益气升阳;斡旋中焦,开启气机均可归属其列,在临床上用此法治疗气机不畅、上下不通的病症。举验案一例,阐释其法。     

电极法与酶法CO_2测定的相关性

目的 :探讨电极法与酶法 CO2 测定的相关性。方法 :采用 CO2 电极法与酶法对一般标本和溶血、黄疸、乳糜标本进行测定及统计。结果 :批内 CV为 :电极法 1.91%～ 2 .87% ,酶法 3.2 3%～ 4 .2 8% ;批间 CV为 :电极法 2 .13%～ 3.0 2 % ,酶法 4 .0 1%～ 5 .6 3%。二种方法线性范围均最少可达 4 8.3mmol/ L。平均回收率 :电极法 10 0 .5 7% ,酶法 10 0 .78%。相关性 :r=0 .998,且两者差异无显著意义 (P>0 .0 5 )。结论 :电极法与酶法测定 CO2 结果准确 ,相关性好 ,干扰因素少     

酶法和碱性苦味酸法测定肌酐的方法学分析

目的 :分析酶法测定肌酐的可靠性。方法 :通过对酶法和碱性苦味酸法测定肌酐的方法学比较 ,得出回归方程、相关系数。结果 :酶法具有线性范围宽 ,重复性好和抗干扰能力强的特性。结论 :酶法是当前实验室测定肌酐的可靠方法 ,对临床诊疗提供有力依据     

直接法与Friedwald公式法测定低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的差异

目的：探讨直接法与Friedwald公式法测定低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的差异。方法对该院2015年6-12月门诊方便收集的720份血标本进行血脂检测,包括总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。根据TG的水平不同,对比分析直接法与Friedwald公式法测定的LDL-C结果,并对血脂水平风险进行评估。结果TG<4.52 mmol/L时,直接法与Friedwald公式法对LDL-C的测定结果差异无统计学意义(P>0.05);TG>4.52 mmol/L时,两种方法对LDL-C的测定结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论Friedwald公式法测定低密度脂蛋白胆固醇适用于TG<4.52 mmol/L的人群,但对于高血脂患者应采用直接法测定LDL-C含量,才能为临床提供可靠的检验数据。     

撞击法和自然沉降法监测室内空气细菌总数捕获效果的研究

目的探讨自然沉降法和撞击法监测室内细菌总数的捕获效果。方法使用自然沉降法（平皿暴露10min）和撞击法（FA-1型撞击式空气微生物采样器）对课室、实验室、办公室同步采样；同时用撞击法以28．3L／min分别进行1min、10min、15min空气采样结果的监测。结果撞击法和自然沉降法测得空气细菌总数间存在显著的正的线性相关关系；与自然沉降法比较。撞击法捕获空气细菌的效率更高（F方法=147．825。P=0．000）：撞击法采样15min时所采空气细菌总数下降（F=17．171，P〈0．001）。结论撞击法的灵敏度更高。能客观地反映出不同清洁程度场所的室内细菌含量的差异；撞击法采样时间较长时。捕获空气细菌效率下降。     

化学法与免疫胶体金法检测粪潜血的比较

目的探讨粪潜血二种检测方法的优劣和应用。方法用邻联甲苯胺和便隐血胶体金检测试纸分别检测200例粪标本进行对照实验并分析。结果二者一致性符合率为90%。结论化学法灵敏度、特异性较胶体金法低,受饮食影响因素大,胶体金法有假阴性,故建议二者结合判断。     

单次呼吸法和内呼吸法测定老年人肺弥散功能比较

目的 :比较内呼吸法和单次呼吸法在测定老年人肺弥散功能的差异和临床应用价值 .方法 :先后采用两种方法对同一病人测定肺弥散功能 ,共测定 2 4 2例老年人 .结果 :2 0 1例同时完成了两种测定方法 ,所测四种指标之间均无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,两种方法所测DLCO %之间存在显著正相关关系 (r =0 72 93,P <0 0 1) . 4 1例用单次呼吸法测定未能得到测定结果的患者改用内呼吸法后有 39例得到了满意的结果 .结论 :单次呼吸法和内呼吸法均是测定肺弥散功能的好方法 .内呼吸法的检出率在老年人群明显高于单次呼吸法     

输卵管结扎术抽芯近端包埋法与普氏改良法的效果观察

目的:探讨输卵管结扎术抽芯近端包埋法与普氏改良法的临床效果。方法:将我院行输卵管结扎术的育龄期妇女540例随机分为对照组270例和观察组270例,对照组行常规抽芯近端包埋输卵管结扎术,观察组行普氏改良输卵管结扎术,比较2组的临床效果。结果:观察组手术时间、并发症发生率明显少于对照组,差异有统计学意义(p<0.05),而术后妊娠和异位妊娠的发生率,观察组高于对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:输卵管结扎术是一种安全有效的节育手术,普氏改良法的术后妊娠及异位妊娠发生率需引起重视。     

心阻抗非线性法与染料稀释法测定心输出量的对照研究

用心阻抗非线性法与染料稀释法进行对照研究,同时测定40例患者心输出量。结果表明:两种方法心输出量测定值具有极显著的相关性,相关系数为0.92(P<0.01)。心阻抗非线性法优于Kubicek法,使心输出量的测定值准确性得到提高,适宜临床推广应用。