蛋白聚糖与移植静脉粥样化关系的实验研究

目的观察移植静脉粥样化过程,探讨蛋白聚糖(PG)对粥样化改变的影响.方法建立兔移植静脉粥样化模型,阴离子蛋白层析柱分离移植静脉蛋白聚糖,定量分析硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)和硫酸软骨素-硫酸皮肤素蛋白聚糖(CSPG-DSPG).结果普食组术后8周CSPG-DSPG含量较正常静脉明显增加(P<0.05),术后12～20周含量接近正常,术后20周电镜下见泡沫细胞;高脂组术后8～20周CSPG-DSPG含量较正常静脉明显增加(P<0.05),术后4周见泡沫细胞形成,术后20周血管壁出现无组织结构区域.各组HSPG含量无明显差异(P>0.05),但占总PG比例下降.结论HSPG对移植静脉粥样化有一定的保护作用,CSPG-DSPG则具有促进作用.     

移植静脉粥样化与管壁蛋白聚糖关系的实验研究

观察移植静脉粥样化过程 ,蛋白聚糖 (PG)变化同移植静脉粥样化关系。方法　将移植静脉蛋白聚糖对阴离子蛋白层析柱过柱 ,分为硫酸乙酰肝素蛋白聚糖 (HSPG)、硫酸软骨素蛋白聚糖(CSPG)及硫酸皮肤素蛋白聚糖 (DSPG) ,测定含量。结果　普食组术后 8周CSPG DSPG含量较正常静脉明显增加 (P <0 .0 5 ) ,术后 12～ 2 0周含量下降 ,接近正常 (P >0 .0 5 )。移植静脉术后 2 0周可见泡沫细胞形成 ;高脂组术后 8周CSPG DSPG含量较正常静脉明显增加 ,术后 12～ 2 0周持续在高水平 (P <0 .0 5 ) ,移植静脉术后 4周有泡沫细胞形成 ,术后 2 0周血管壁出现无组织结构区域。两组HSPG含量无明显区别 (P >0 .0 5 ) ,但其在总PG比例均降低。结论　CSPG DSPG对移植静脉粥样化具有促进作用 ,HSPG具有一定的保护作用。     

可降解外套管抑制自体移植静脉内膜增生的研究

目的:研究可降解的外套管束缚自体移植静脉对减轻桥静脉内膜、中层增厚的作用,探讨其防止或延缓桥静脉再狭窄的机制。方法:建立犬自体股静脉至股动脉的端-端静脉移植模型,其中一侧桥静脉外加聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)做成的圆柱形外套管(外套管组),对侧单纯静脉移植作为对照组。超声多普勒观察在体移植血管的通畅性。术后2、4、6、8、24周再次手术取桥静脉。光镜观察移植静脉中段内膜、中层厚度,胶原、弹力纤维变化;透射电镜观察静脉壁基底膜、细胞排列、细胞增殖、凋亡,细胞骨架结构,细胞外基质(ECM)变化等;免疫组化观察静脉壁细胞增殖、凋亡及分布。结果:术后40条静脉均通畅,吻合口无狭窄。对照组术后2周见内膜、中层增厚;随时间延长,增厚更加明显。外套管组术后2周内膜、中层稍增厚;4~24周持续增厚,但各时间点均明显小于对照组(P<0.05,P<0.01);对照组术后2周见中层平滑肌、外膜弹力纤维断裂严重,而外套管组无明显断裂。新生静脉内膜由平滑肌细胞(SMCs)和大量ECM构成,中层主要为SMCs和ECM;术后2周,静脉壁细胞增殖和凋亡率都较高,主要分布在内膜和中层,外套管组明显低于对照组(P<0.01),4周以后两者显著下降,凋亡率高于增殖率(P<0.05)。结论:可降解外套管在术后早期可保持静脉结构的完整性,减轻管壁结构破     

蛋白聚糖与自体移植静脉硬化的关系

通过建立大白鼠自体颈外静脉植入腹主动脉辅以高脂饲料的动物模型，观察自体移植静脉粥样硬化形成过程，分析其内膜重建过程中内皮细胞和平滑肌细胞形态的改变及蛋白聚糖含量的变化与粥样硬化形成间的关系。探讨其发病机理，指出内膜层硫酸软骨素蛋白聚糖的蓄积是自体移植静脉粥样硬化形成的关键。     

小檗碱对颈动脉粥样硬化家兔NF-κB的影响

目的:探讨小檗碱预防颈动脉粥样硬化形成的作用机制。方法:将24只雄性新西兰大白兔随机分成3组:正常组、颈动脉粥样硬化组(模型组)、小檗碱预防组(小檗碱组)。正常组给予正常饮食,模型组行高脂饲料喂养加颈动脉内膜空气干燥术建立颈动脉粥样硬化模型,小檗碱组在给予模型组相同处理的同时灌服小檗碱。术后4周麻醉处死,取颈动脉组织行HE染色、NF-κBP65免疫组织化学染色、RT-PCR法测NF-κBP65mRNA表达水平。结果:模型组血管病变以泡沫细胞为主,有动脉粥样斑块形成;小檗碱组血管主要显示内膜明显增厚,有少量泡沫细胞;小檗碱组NF-κBP65阳性细胞数密度高于正常组(P<0.05),明显低于模型组(P<0.05);RT-PCR半定量分析发现,小檗碱组NF-κBP65/β-actin扩增带吸光度值比值高于正常组(P<0.05),而明显低于模型组(P<0.05)。结论:小檗碱可能通过抑制NF-κB活性,降低组织中NF-κB含量,预防颈动脉粥样硬化形成。     

人脐带干细胞外周静脉移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效

目的:探讨人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)移植治疗失代偿期肝硬化的临床效果。方法:20例肝硬化失代偿期患者,采用人脐带血干细胞移植治疗,移植术后3 d,7 d,14 d、4周,8周,12周观察血清转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、凝血酶原时间(PT)和白蛋白(ALB)水平变化,同时观察临床症状的改善情况。结果:术后3,7 d,各项肝功能指标无显著性差异(P>0.05),术后14 d、4周,除外ALT有所改善(P<0.05),其余指标无明显改善,8周各项肝功能指标均有改善(P<0.05)。12周有显著的改善(P<0.01),腹水减轻75.0%(15/20),乏力好转占80%(16/20)。食欲改善者占65%(13/20),移植术中和术后未见明显不良反应。结论:HUCMSCs体外培养诱导、扩充后外周静脉移植是治疗失代偿期肝硬化一种安全有效的方法,可以显著改善失代偿期肝硬化患者肝功能及临床症状。     

人造血管外支架抑制高胆固醇血症兔移植静脉远期粥样硬化

目的:研究人造血管外支架在高胆固醇血症内环境下对移植静脉的远期粥样硬化的抑制作用及其可能机制.方法:15只新西兰大白兔,建立高胆固醇血症模型后将双侧颈静脉端-端吻合于同侧颈总动脉上,随机分配一侧移植静脉加用静脉外支架(实验组),另一侧不加外支架(对照组).术后12周行超声检查了解血流动力学情况后取下移植静脉,测量其内中膜厚度、面积及脂质沉积情况;免疫组化法检测VCAM-1阳性细胞分布情况,扫描电镜检查了解内皮细胞重塑情况.结果:超声检测提示支架组静脉血流为层流,对照组为涡流;支架组内中膜厚度及面积较对照组显著降低(P＜0.01);泡沫细胞明显减少,脂质沉积减轻,未见粥样硬化斑块;支架组内中膜层内VCAM-1阳性细胞率较对照组明显减低,差异显著(P＜0.01);扫描电镜提示支架组内皮细胞排列整齐、紧密,大小一致,对照组内皮细胞排列紊乱,间隙大,大小不一致.结论:人造血管外支架可改善静脉血流动力学,促进内皮细胞良性重塑,减轻脂质沉积及中膜平滑肌细胞增殖,减少泡沫细胞生成,最终抑制高胆固醇血症内环境下移植静脉远期粥样硬化.     

局部应用肝细胞生长因子对静脉移植物内膜增生的影响

目的:探讨局部应用肝细胞生长因子静脉移植物内膜增生的影响。方法:取犬一侧颈外静脉,对半剪成两段后分别吻合在双侧股动脉上,其中一侧静脉移植物在移植前用肝细胞生长因子处理(实验组),另一侧为单纯的静脉移植(对照组)。术后2周、4周分别切除移植静脉,计算机图像分析系统测量和计算内膜厚度、内膜面积,进行扫描电镜检查,用免疫组织化学方法检测静脉移植物平滑肌细胞增殖细胞核抗(PCNA)的表达。结果:实验组静脉移植物术后2周、4周内膜厚度和内膜截面积明显低于对照组(P<0.01)。实验组静脉移植物术后2周、4周的PCNA指数也明显低于对照组(P<0.01;P<0.05)。扫描电镜检查显示实验组静脉移植物内皮层破坏程度轻于对照组。结论:局部应用肝细胞生长因子能抑制静脉移植物内膜的增生。     

抑癌扶正平衡Ⅱ号方对乳腺癌小鼠移植瘤生长转移的实验研究

[目的]观察抑癌扶正平衡Ⅱ号方对乳腺癌小鼠移植瘤生长及肺转移的抑制作用,并探索其抗肿瘤效应与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的相关性。[方法]建立4T1乳腺癌小鼠模型,随机分为空白组、模型组、低分子肝素组、抑癌扶正平衡Ⅱ号方高、中、低剂量组,连续给药14 d后处死取材。测定移植瘤瘤质量和计数肺转移结节个数,并计算瘤质量抑制率及肺转移抑制率。ELISA法检测各组小鼠移植瘤、转移瘤、血清中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）的表达。[结果]中药各组瘤质量、肺转移结节数随中药剂量增高而下降（P<0.05）;高剂量中药组瘤质量抑制率及肺转移抑制率均优于低分子肝素组（P<0.05）。中药各组移植瘤、转移瘤、血清中HSPG的表达随中药剂量增高而上升（P<0.05）;高剂量中药组移植瘤、转移瘤、血清中HSPG的表达高于低分子肝素组（P<0.05）。[结论]抑癌扶正平衡Ⅱ号方可显著抑制乳腺癌小鼠移植瘤的增殖和肺转移,其作用机制可能与增高硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的表达有关。     

自体骨髓单个核细胞移植促进移植静脉桥血管再内皮化及抑制内膜增生

目的:探讨自体骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNCs)移植对自体静脉移植后静脉桥血管再内皮化及内膜增生的作用.方法:抽取成年兔骨髓分离制备BMMNCs,并用DAPI进行体外标记.将成年新西兰大白兔23只随机分为细胞移植组(n=13)和对照组(n=10)2组.取左颈外静脉4～5 cm,上下倒置后移植至颈总动脉,在建模后第3天将100 μl DAPI标记的BMMNCs液(6×108个细胞)经耳缘静脉注入细胞移植组动物体内,对照组注入等量的PBS液.细胞移植4周后处死动物,计算机图像分析系统测量并计算静脉移植段血管内皮的完整性及内膜厚度.结果:移植静脉血管内皮有DAPI标记的细胞;细胞移植后,细胞移植组移植血管内皮细胞覆盖程度明显高于对照组(P＜0.05),内膜厚度明显低于对照组(P＜0.05).结论:自体BMMNCs的移植可以促进移植静脉桥血管的再内皮化及抑制内膜的过度增生.     

Immuohistochemical study on smooth muscle cell proliferation,phenotypic modulation,and extracellular matrix accumulation in venous arterial grafts in rabbits

Objective: To study the kinetics and distribution of smooth muscle cell (SMC) proliferation, phe-notypic modulation, and various extracellular matrix (ECM) components accumulation during vein graft remodeling. Methods: Normal vein and vein graft in carotid arteries were examined on d 4, d 7, d 14, d 60 and d180 after bypass grafting with immunohistochemical markers of cellular proliferation (proliferating cell nuclear antigen, PCNA), cytoskeletal protein production (a-actin SMC), myosin heavy chain (MHO iso-forms, ECM proteins, and histochemistry (hematoxylin eosin and Elastica-van Gieson stain). Results: Normal veins demonstrated an extremely low level of cellular proliferation and expressed as adult phenotype SM-Cs in media. After bypass grafting, medial SMCs in the graft appeared to be damaged and began to proliferate on d 4, and subsequently migrated and formed the neointima on d 7. Thereafter, the neointima thickened throughout the 180-day period of the experiment, although the neointimal SMC prolif     

乙酰肝素酶在腹主动脉瘤发病中的作用

目的 了解乙酰肝素酶在腹主动脉瘤（AAA）发病中的作用,探讨AAA新的发病机制。方法 选取20例人体肾下AAA、5例正常腹主动脉（NA）及5例原发性肝细胞癌（HCC）组织标本,采用Northern杂交、免疫组织化学及计算机图像分析技术,检测乙酰肝素酶及其底物硫酸乙酰肝素酶蛋白多糖（HSPG）的表达以及微血管增生水平。结果 AAA组织乙酰肝素酶水平明显高于NA（P＜0．01）,而相当于HCC（P＞0．05）;HSPG表达则与之相反,与乙酰肝素酶水平及微血管密度均呈显著负相关。乙酰肝素酶与HSPG在腹主动脉（瘤）均以内外膜分布为主。结论 乙酰肝素酶在基质水平参与腹主动脉结构损伤与重构,促进AAA形成。     

阿霉素肾病大鼠肾组织乙酰肝素酶表达改变及其对蛋白尿的影响

目的观察阿霉素肾病大鼠肾组织乙酰肝素酶(HPA)、硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板源性生长因子(PDGF)的表达变化。方法清洁级健康雄性SD大鼠随机分为对照组(NC组)和阿霉素肾病组(AN组),分别观察0、7、14、21、28天的24h尿蛋白定量,0、14、21、28天血清白蛋白、尿素、肌酐、甘油三酯和胆固醇水平以及肾小球HPA、HSPG、bFGF、PDGF表达的改变。结果 AN组造模后14、21及28天24h尿蛋白定量较同时间点NC组及同组前一时间点明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);同时AN组在造模后各观察时间点HPA与PDGF表达显著增多,且随观察时间延长增加,与NC组相比差异有统计学意义(P<0.05);AN组在造模后各观察时间点HSPG表达较NC组显著减少,且随观察时间延长降低,差异有统计学意义(P<0.05);bFGF在NC组及AN组各观察时间点表达均未见明显变化(P>0.05);HPA表达与HSPG表达呈负相关(r=-0.757,P<0.05),与PDGF表达及蛋白尿呈正相关(r=0.899,P<0.05;r=0.868,P<0.05)。结论 HPA表达增加导致HSPG水解增多,同时释放出PDGF等因子,肾小球基膜的物理屏障和电荷屏障受损,促进蛋白尿的发生发展。     

葛根素对糖尿病大鼠主动脉硫酸乙酰肝素蛋白多糖影响的实验研究

目的 观察葛根素对糖尿病大鼠主动脉HSPG的影响。方法 利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导建立1型糖尿病大鼠模型，将实验用SD大鼠随机分正常对照组、糖尿病组、葛根素治疗组。治疗16周，观察治疗期间及治疗后大鼠的一般状况、血糖（BS）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、糖化血红蛋白（HbA1c）、糖化低密度脂蛋白（G-LDL），分离主动脉，HE染色及免疫组织化学检测主动脉内膜HSPG表达。结果 造模2组大鼠均出现血脂异常及主动脉病理形态改变。葛根素能改善基本状况，葛根素能降低糖尿病大鼠的三酰甘油（P〈0．05）、胆固醇（P〈0．05）、低密度脂蛋白（P〈0．05）、糖化血红蛋白（P〈0．05）、糖化低密度脂蛋白（P〈0．05），升高高密度脂蛋白（P〈0．05）；葛根素增强主动脉硫酸肝素蛋白（P〈0．05）作用。结论 葛根素可以通过增强硫酸肝素蛋白对糖尿病主动脉具有保护作用。     

硫酸乙酰肝素蛋白多糖基因多态性与草酸钙结石易感性的关系

目的 探讨硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)基因多态性与中国汉族人群草酸钙肾结石易感性的关系.方法 以病例对照研究方法,提取143例草酸钙肾结石患者及157例健康对照者外周血标本基因组DNA,应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,检测并分析HPSG基因rs3767140位点单核甘酸多态性与草酸钙肾结石的关系.结果 HPSG基因等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,结石组GG+GT、TT基因型分布频率分别为69.23%、30.77%,健康对照组分别为79.62%、20.38%(P<0.05),TT基因型个体患结石的风险是其它基因型的1.736倍(95%CI=1.026～2.938),结石组与对照组等位基因G、T分布频率分别为:45.10%、55.90%和54.14%、45.86%(P<0.05),未发现HPSG基因多态性与草酸钙结石的复发相关.结论 HPSG基因多态性与草酸钙尿路结石有相关关系,TT基因型可作为草酸钙结石危险因素的标志.     

泡沫硬化剂联合大隐静脉高位结扎治疗大隐静脉曲张

目的 探讨泡沫硬化剂联合大隐静脉高位结扎治疗下肢静脉曲张的安全性、有效性,以及预后情况.方法 采用单组前瞻性研究对186例采取泡沫硬化剂联合大隐静脉高位结扎术治疗原发性大隐静脉瓣膜功能不全引起的下肢静脉曲张及相关并发症,对手术时间、手术切口、住院时间、手术并发症、术后静脉曲张消失情况、复发情况、溃疡、皮炎、色素沉着、水肿的好转情况等结果等进行分析.结果 186例患者手术均顺利完成,每条肢体治疗时间为6～15min.手术切口1～3个.术后6h均下地行走,术后住院3～5d（平均4.2d）.术后1周内无严重并发症出现.结论 泡沫硬化剂联合大隐静脉高位结扎治疗大隐静脉曲张安全有效,创伤小,手术时间短,美容效果好,术后恢复快,住院时间短,值得临床推广应用.     

胰岛素抵抗动脉粥样硬化小型猪模型的研究

目的观察高脂诱导对藏猪糖脂代谢和粥样斑块形成的影响,探讨藏猪胰岛素抵抗动脉粥样硬化模型的病症特点。方法取4~5月龄藏猪随机分为正常对照组4只饲喂普通饲料、AS模型组共8只饲喂高脂饲料,连续造模24周。检测造模前、造模后4、8、12、16、20、24周的空腹血糖、果糖胺、血脂、血清胰岛素含量测定和糖耐量试验,并计算动脉硬化指数(AI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(HOMA-IS)。造模后24周,测定麻醉状态下动脉血压和左心室功能指标,并取主动脉进行大体观察和HE染色及油红"O"染色。结果与正常对照组比,AS模型组从第16周开始空腹血糖显著升高(P0.05,P0.01),果糖胺从第4周起即发生显著升高(P0.01)血脂水平亦在造模第4~24周时升高显著(P0.01),AS模型组藏猪在第4~24周期间AI显著上升(P0.05,P0.01),造模第16~24周HOMA-IR亦显著升高(P0.05,P0.01),HOMA-IS则显著降低(P0.05)。第24周时,AS模型组MBP和SBP显著升高(P0.05,P0.01),LVEDP、+dp/dt max、-dp/dt max较正常组均发生显著性改变(P0.05,P0.01),病理学观察显示模型组出现明显的脂质沉积和粥样硬化形成。结论藏猪高脂饲料诱导后能形成明显的动脉粥样硬化,并伴有高血压、高血脂、糖耐量异常等胰岛素抵抗症状,是研究的胰岛素抵抗动脉粥样硬化的理想的实验动物。     

当归抗高脂致家兔主动脉粥样硬化效果观察

目的：通过观察当归影响实验性高脂致家兔主动脉粥样硬化的效果，探讨当归抗动脉粥样硬化作用的机制。方法：取健康家兔随机分正常对照组(普通饲料喂养)；高脂组(高脂饲料喂养)和当归治疗组(高脂饲料加当归注射液)。喂养10周末处死动物，检测主动脉AS斑块面积，透射电镜观察主动脉超微结构的变化，并速将主动脉条置入不同乙酰胆碱(Ach)浓度中，用Griess反应法检浏一氧化氮(NO)含量。结果：当归可显减小粥样班块面积，抑制动脉壁泡沫细胞形成，并增加主动脉NO的生成含量。结论：当归可桔抗高指导致的动脉粥样硬化的形成，这种作用可能与它保护内皮细胞、减少泡沫细胞形成、影响NO生成有关。