Survivin在子宫内膜异位症组织中的表达及其意义

目的：探讨凋亡抑制基因Survivin与子宫内膜异位症（EM）发病的关系。方法：收集EM患者的卵巢子宫内膜异位病灶组织33份，在位内膜组织32份及非子宫内膜异位症患者的子宫内膜26份，分别测定Survivin蛋白的表达情况。结果：Survivin的表达在位内膜组高于正常对照组和异位内膜组（P〈0．05）。异位内膜组高于正常对照组（P〈0．05）。结论：Survivin在EM的发生中可能起着较为重要的作用。     

E-钙黏蛋白基因启动子区甲基化在卵巢子宫内膜异位症中作用的研究

目的　探讨E-钙黏蛋白基因（CDH1）启动子区甲基化状态及其在卵巢子宫内膜异位症中的作用。方法　选择2011年10月—2013年8月河北医科大学第四医院诊治的50例经手术确诊的卵巢子宫内膜异位症患者和50例由于宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ级行子宫切除或子宫探查的对照妇女为研究对象,采用甲基化特异性聚合酶链式反应检测卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜（在位内膜组）、异位内膜（异位内膜组）和对照妇女子宫内膜组织（对照子宫内膜组）CDH1启动子区甲基化状态;采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和流式细胞术检测CDH1启动子区甲基化阳性组织（甲基化阳性组）和甲基化阴性组织（甲基化阴性组）CDH1 mRNA、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平。结果　在位内膜组CDH1启动子区甲基化阳性率为26.0%（13/50）、异位内膜组CDH1启动子区甲基化阳性率为32.0%（16/50）、对照子宫内膜组为8.0%（4/50）,在位内膜组和异位内膜组CDH1启动子区甲基化阳性率明显高于对照子宫内膜组（P=0.017、0.003）。甲基化阳性组CDH1 mRNA、E-cadherin表达水平〔（0.4±0.2）、（129.0±17.5）〕明显低于甲基化阴性组〔（0.6±0.1）、（158.0±51.0）〕（P=0.023、0.035）。结论　卵巢子宫内膜异位症患者的在位、异位内膜组织存在着CDH1启动子区异常甲基化,甲基化阳性、阴性组织中CDH1 mRNA和E-cadherin表达水平有明显差异。提示CDH1启动子区的异常甲基化可能与卵巢子宫内膜异位症的发生相关。     

胃癌患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态及其与蛋白表达的关系

目的：探讨胃癌组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白的表达与胃癌生物学行为的关系,并分析hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化与其蛋白表达的相关性。方法：采用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）技术和免疫组织化学SP法检测45例患者胃癌组织、正常胃组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况及蛋白的表达。结果：hMLH1基因启动子区CpG岛在胃癌及正常组织中的甲基化阳性率分别为33.3%和0（P〈0.05）;hMLH1蛋白在胃癌及正常组织中的阳性率分别为57.8%和95.2%（P〈0.05）;hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白的表达与胃癌的临床病理参数无关（P〉0.05）;hMLH1基因启动子甲基化与hMLH1蛋白表达呈明显的负相关（P〈0.05）。结论：hMLH1基因启动子区CpG岛的异常甲基化是引起蛋白表达缺失的主要原因,hMLH1蛋白表达缺失与胃癌的发生有关。     

谷胱甘肽硫转移酶mu1基因启动子区异常甲基化与卵巢子宫内膜异位症的关系研究

背景　许多证据表明与正常内膜相比,子宫内膜异位症（EMT）患者的在位内膜和异位内膜中存在许多差异甲基化基因,可能在疾病发生中发挥着重要作用。目的　探讨谷胱甘肽硫转移酶mu1（GSTM1）基因启动子区异常甲基化与EMT的关系。方法　选取2013年9月-2015年12月于河北医科大学第四医院妇科行腹腔镜手术治疗并经病理检查证实为卵巢EMT的患者65例,另选取同期在该院因宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ级行全子宫切除术的患者（对照者）53例,术中无菌采集卵巢EMT患者的在位内膜和异位内膜以及对照者的子宫内膜（对照内膜）。采用焦磷酸测序和实时定量荧光聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测内膜组织GSTM1基因启动子区片段一（包含-116、-111、-104、-98 CpG位点）、片段二（包含-40、-23、-16 CpG位点）平均甲基化水平和mRNA表达水平,并分析二者之间的相关性。结果　在位内膜和异位内膜片段一平均甲基化水平低于对照内膜（H=2.588,P=0.046;H=6.496,P<0.001）,异位内膜片段一平均甲基化水平低于在位内膜（H=4.213,P<0.001）。异位内膜片段二平均甲基化水平低于在位内膜和对照内膜（H=7.693,P<0.001;H=8.257,P<0.001）,在位内膜与对照内膜片段二平均甲基化水平比较,差异无统计学意义（H=0.682,P=0.504）。在位内膜和异位内膜mRNA表达水平高于对照内膜（H=6.994,P=0.011;H=3.414,P<0.001）,异位内膜mRNA表达水平高于在位内膜（H=3.846,P<0.001）。GSTM1 mRNA表达水平与其启动子区片段一、片段二平均甲基化水平均呈负相关（rs=-0.61,P<0.001;rs=-0.52,P<0.001）。结论　卵巢EMT患者的在位内膜和异位内膜呈现GSTM1基因启动子区异常低甲基化和mRNA高表达,提示GSTM1启动子区异常甲基化可能在卵巢EMT的发生和发展中起重要作用。     

垂体肿瘤转化基因和血管内皮细胞因子在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的：检测PTTG及VEGF在子宫内膜异位症中异位内膜、在位内膜及对照组正常内膜的表达,并探讨其相关性。方法：选取52例子宫内膜异位症患者的异位内膜、44例在位内膜,27例正常子宫内膜组织为对照组。用逆转录聚合酶链式反应（ RT－PCR）及免疫组化（ SP ）方法测 PTTG、VEGF在三组中的表达情况。结果：P TTG mRNA在子宫内膜异位症中异位内膜组表达高于在位内膜组,在位内膜组表达高于正常子宫内膜组织（ P＜0．01,P＜0．01）。 PTTG蛋白表达在异位内膜组、在位内膜组、正常内膜组的阳性率分别为：90％、79％、22％,异位内膜组和在位内膜组表达均高于正常子宫内膜组织（ P＜0．01,P＜0．01）。 VEGF蛋白表达在异位内膜组、在位内膜组、正常内膜组的阳性率分别为：90％、84％、59％,异位内膜组和在位内膜组表达高于正常子宫内膜组织（ P＜0．01, P＜0．01）。等级相关分析PTTG表达与VEGF表达呈正相关关系。结论：子宫内膜异位症中异位内膜组、在位内膜组均有PTTG mRNA及PTTG蛋白表达;且异位内膜组表达均显著高于在位内膜组及正常组;异位内膜组和在位内膜组中VEGF表达高于正常子宫内膜组织;PTTG高度表达可上调VEGF高表达,PTTG与VEGF呈正相关表达,提示子宫内膜活性增强、侵袭力增高,可促进血管形成。     

血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的作用

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜异位症（EM）中的作用。方法：应用RT—PCR方法检测33例子宫内膜异位症患者的33份卵巢子宫内膜异位囊肿及32份在位子宫内膜组织中VEGFmRNA的表达情况，并进行阳性率及半定量的比较。以26例非子宫内膜异位症患者的26份子宫内膜组织作为对照。结果：EM组卵巢子宫内膜异位囊肿VEGFmRNA表达与在位子宫内膜比较，水平较低（P〈0．05），但高于对照组（P〈0．05）；在位子宫内膜与对照组比较VEGFmRNA表达水平较高（P〈0．01）；在不同月经周期中，在位内膜组和对照组分泌期VEGFmRNA表达水平均高于增生期（P〈0．01），在位内膜组分泌期和增生期的VEGFmRNA表达水平均分别高于对照组（P〈0．01）。结论：EM患者的异位子宫内膜中VEGFmRNA的表达，可能与其血管化程度有关；VEGF对EM的发生发展具有重要意义。     

子宫内膜异位症组织中Survivin蛋白表达与凋亡的关系

目的研究子宫内膜异位症(EM)患者在位、异位内膜组织以及正常子宫内膜中的Survivin蛋白表达和细胞凋亡状况,探讨它们在子宫内膜异位症发生中的作用及临床意义。方法39例子宫内膜异位患者的39份异位子宫内膜及21份在位内膜为研究组;26例非子宫内膜异位症患者的子宫内膜为对照组。Survivin蛋白表达用免疫组化法检测;细胞凋亡用TUNEL法检测。结果EM组在位及异位内膜增生期Survivin蛋白表达水平分别明显高于同期正常子宫内膜水平(P<0.05)。EM组在位及异位内膜分泌期Survivin蛋白表达水平分别明显高于同期正常子宫内膜水平(P<0.05)。EM组在位及异位内膜增生期凋亡指数(AI)分别明显低于同期正常子宫内膜(P<0.05)。EM组在位及异位内膜分泌期AI分别明显低于同期正常子宫内膜(P<0.05)。EM组在位及异位内膜Survivin蛋白表达水平均与AI负相关(P<0.05)。结论子宫内膜异位症患者子宫内膜组织细胞凋亡水平下降。凋亡水平的下降导致经期脱落的子宫内膜细胞异位生存和种植的能力增强。子宫内膜异位症患者Survivin蛋白表达上调是导致其凋亡水平下降的机制之一。     

Ezrin蛋白在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的 研究细胞骨架相关蛋白ezrin在子宫内膜异位症（endometriosis,EM）患者中的表达情况,探讨ezrin蛋白在EM发生、发展中的作用.方法 选择卵巢EM患者异位内膜标本60例作为异位内膜组,其在位内膜标本30例作为在位内膜组;正常子宫内膜20例作为正常内膜组,应用免疫组化EnvisionTM二步法检测ezrin蛋白在卵巢EM异位内膜、在位内膜和正常内膜的表达情况.结果 在位内膜组ezrin表达值高于正常内膜组,异位内膜组ezrin表达高于在位内膜组,在位内膜组及异位内膜重度组ezrin表达水平高于轻度组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 ezrin蛋白可能在EM的发病机制中起着重要作用,ezrin蛋白的表达水平和EM的临床分期密切相关,提示ezrin可能在EM的发生、发展中起重要作用.     

缩宫素受体与子宫内膜异位症疼痛的相关性研究

目的探讨缩宫素受体（OTR,oxytocin receptor）在子宫内膜异位症（EM,Endo metriosis）患者的异位子宫内膜及在位内膜组织中的表达情况及与痛经的关系。方法应用免疫组织化学法（SP法）检测研究组,其中包括40例子宫内膜异位症（EM）患者的卵巢子宫内膜异位病灶及其中10例患者的在位子宫内膜,和对照组30例非子宫内膜异位症（EM）患者的正常子宫内膜中OTR的表达,比较不同组织中缩宫素受体（OTR）的阳性表达率和表达强度的差异,以及与痛经的关系。结果缩宫素受体（OTR）在子宫内膜异位症（EM）组表达高于对照组,在子宫内膜异位症（EM）组痛经者的表达高于非痛经者,在子宫内膜异位症（EM）重度痛经者的表达高于轻度及中度痛经者。结论子宫内膜异位症（EM）患者缩宫素受体（OTR）的高表达可能参与了子宫内膜异位症发病机制,而且可能与子宫内膜异位症的痛经有关,对缩宫素受体（OTR）的深入研究将为子宫内膜异位症痛经的治疗提供新的方向。     

IGF—I及IGFBP-3与卵巢子宫内膜异位症相关关系的研究

目的：观察胰岛素样生长因子-I（IGF—I）及胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）在卵巢子宫内膜异位症患者原位及异位内膜的表达,探讨卵巢子宫内膜异位症的发生及侵袭机制。方法：取40例卵巢子宫内膜异位症患者异位内膜和25例异位症患者在位内膜标本作为病例组,另取20例正常妇女子宫内膜作为对照组．采用免疫组织化学方法检测IGF—I、IGFBP-3的分布及表达。结果：正常内膜及卵巢子宫内膜异位症的在位和异位内膜组织中均有IGF—I、IGFBP-3的表达,IGF—I在异位组和在位组子宫内膜腺上皮的表达显著高于正常组（P〈0．05）;IGFBP-3在正常组子宫内膜腺上皮的表达强于异位组和在位组（P〈0．05）。结论：IGF—I、IGFBP-3对卵巢子宫内膜异位症的异位内膜生长与维持起着一定作用。     

叶酸在预防胎源性子宫内膜异位症易感基因HOXA10异常甲基化中的作用

目的通过检测和比较子宫内膜异位症（EMS）孕妇有无补充叶酸其女性胎儿脐血EMS易感基因HOXA10启动区CpG岛
甲基化状态,探讨叶酸优化宫内环境的作用。方法收集标本2010年1月~2012年12月21例患有EMS孕妇服用和15例未服用
叶酸的女性胎儿脐血标本,利用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）及亚硫酸氢盐修饰后测序（BSP）检测和比较各组HOXA10
的甲基化率。结果补充叶酸组女性胎儿EMS易感基因HOXA10甲基化率显著降低,两组差异有统计学意义（P<0.05）。结论
提示叶酸在预防胎源性EMS易感基因HOXA10异常甲基化中可能起一定作用。
     

HOXA 10在子宫内膜异位症不孕患者血清中的表达及意义

目的:研究HOXA10在子宫内膜异位症(EMs)导致不孕患者血清中含量。方法:以Elisa方法检测HOXA10在EMs患者及正常人血清中的含量。结果:HOXA10水平在正常人血清中较Ems导致不孕患者血清中含量高。结论:HOXA10在EMs导致不孕患者血清中的含量显著低于正常生育女性,可能是EMs引起不孕的重要因素之一。     

miR-135b对子宫内膜癌HOXA10基因表达的调控作用

目的 探讨miR-135b对子宫内膜癌中HOXA10基因表达的调控作用.方法 RT-PCR方法检测28例子宫内膜癌组织及相应癌旁组织中miR-135b及HOXA10的表达;用miR-135b模拟物及抑制物转染RL-952子宫内膜癌细胞株,RT-PCR检测转染效果并检测FOXO1 mRNA的变化,划痕实验检测转染后对细胞迁移的影响,流式细胞技术检测转染对细胞增殖的影响,Western blot检测HOXA10蛋白的变化.结果 miR-135b在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达升高(P<0.05),HOXA10则降低(P<0.05),经miR-135b模拟物转染后,子宫内膜癌细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平下降(P<0.05);经miR-135b抑制物转染后,子宫内膜癌细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平升高(P<0.05);miR-135b能促进子宫内膜癌细胞的增殖(P<0.05).结论 miR-135b 在子宫内膜癌发生发展中有一定作用,子宫内膜中HOXA10的异常表达受miR-135b的调控.     

滋肾育胎丸对促排卵小鼠不同着床期子宫内膜HOXA10及下游基因EMX2表达的调控作用

【目的】探讨滋肾育胎丸对促排卵小鼠不同着床期子宫内膜同源框异型基因A10(HOXA10)及下游基因空通气孔同源框2(EMX2)表达的调控机制。【方法】将75只雌性动情间期昆明小鼠随机分为5组,即正常组、模型1组、模型2组、治疗1组、治疗2组,每组15只。模型1组给予促排卵短方案;模型2组给予促排卵长方案。治疗1组在模型1组方案基础上给予滋肾育胎丸(剂量为0.4 g/mL)治疗;治疗2组在模型2组方案基础上给予滋肾育胎丸(剂量为0.4 g/mL)治疗。正常组给予等剂量生理盐水灌胃和腹腔注射。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)、免疫蛋白印迹(Western blot)法分别检测各组小鼠子宫HOXA10及EMX2 mRNA和蛋白的表达。【结果】与正常组比较,模型1组和模型2组HOXA10 mRNA和蛋白表达水平均下降(P0.01),EMX2 mRNA和蛋白表达水平均升高(P0.01)。分别与对应的模型1组和模型2组比较,治疗1组和治疗2组HOXA10 mRNA和蛋白水平表达均显著上调(P0.01),EMX2 mRNA和蛋白水平表达均显著下降(P0.01)。【结论】滋肾育胎丸可能通过上调HOXA10表达及抑制其下游基因EMX2的表达来改善小鼠子宫内膜容受性。     

激素替代-冻融胚胎移植周期子宫内膜的最佳容受时间研究

摘要：目的  探讨激素替代-冻融胚胎移植（HRT-FET）周期子宫内膜的最佳容受时间。方法  根据子宫内膜暴露于黄体酮天数的不同（3、4、5、6和7 d）,将52例行HRT-FET的患者依次定义为P3组、P4组、P5组、P6组及P7组,分别观察各组胞饮突形态及覆盖面积,并检测整合素αvβ3、同源框基因A10（HOXA10）及LIF 3种蛋白的相对表达量。结果  多数患者在黄体酮补充6 d时,其子宫内膜胞饮突发育程度与αvβ3、HOXA10及LIF 3种蛋白表达水平一致性达到最高。结论  将胞饮突发育程度检测作为冻融胚胎移植时间评估的参考依据是可行,于黄体酮补充3 d时对胚胎进行移植,可能是实现子宫内膜与胚胎同步化的理想选择。

     

地屈孕酮对多囊卵巢综合征促排妊娠大鼠早期妊娠结局的影响

目的：观察地屈孕酮对多囊卵巢综合征（PCOS）、经枸橼酸氯米芬（CC）促排卵妊娠大鼠早期妊娠结局及种植窗期子宫内膜同源框基因A10（HOXA10）、EMX2及整合素ανβ3的影响。方法：20只正常雌鼠自80日龄起予生理盐水灌胃后与雄鼠合笼,将妊娠大鼠作为正常妊娠组（A组）。70只雌鼠予以脱氢表雄酮制作PCOS模型,自大鼠80日龄起予CC灌胃后与雄鼠合笼,选取其中24只妊娠大鼠随机分为PCOS妊娠组（B组）、PCOS妊娠＋地屈孕酮组（C组）。于妊娠第5天各组随机选取6只大鼠断头处死,留取子宫和子宫内膜标本,以半定量RT-PCR、Western blot检测各组大鼠子宫内膜HOXA10、EMX2及整合素ανβ3的表达;妊娠第8天将剩余大鼠断头处死,留取双侧子宫计算胚泡数量。结果：大鼠胚泡的着床率A组〉C组〉B组;3组平均胚泡着床数比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。子宫内膜HOXA10、整合素ανβ3的mRNA及蛋白表达A、C组明显高于B组,差异有统计学意义（P〈0.001）;而EMX2的mRNA及蛋白表达A组明显低于B、C组,差异有统计学意义（P〈0.01）,B、C组间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：PCOS大鼠经促排卵治疗后种植窗期子宫内膜HOXA10、整合素ανβ3的表达下调,EMX2的表达上调,可能是早期流产的原因之一;而地屈孕酮可能通过上调子宫内膜容受因子HOXA10、整合素ανβ3的表达减少早期妊娠丢失。     

子宫内膜异位症孕激素受体B基因失活与CpG甲基化的关系

目的探讨子宫内膜异位症孕激素受体B(progesterone receptor,PRB)基因失活与CpG甲基化的关系。方法采用甲基化PCR法检测62例子宫内膜异位症患者(病例组)和33例宫颈上皮内瘤样变行子宫切除患者(对照组)在位子宫内膜孕激素受体PRA与PRB CpG的甲基化率,免疫组化法测定PRA和PRB的阴性表达率,并分析甲基化与PRA和PRB的阴性表达率的相关性。结果病例组与对照组患者在位子宫内膜PRA的甲基化率间差别无统计学意义(P>0.05),而PRB的甲基化率间差别有统计学意义(P<0.01)。病例组与对照组患者PRA的阳性表达率间差别无统计学意义(P>0.05),而PRB的阳性表达率间差别有显著性意义(P<0.01)。病例组患者PRB的甲基化与免疫组化PRB的阴性表达率相关(P<0.01)。结论CpG甲基化可能与子宫内膜异位症患者PRB基因表达缺失而致病有关。     

MMP-9和TIMP-3在内异症患者子宫内膜中的表达

目的 观察比较基质金属蛋白酶（MMPs）和基质金属蛋白酶抑制物（TIMPs）在异位、在位和正常子宫内膜中的表达,探讨其与子宫内膜异位症（内异症）的关系。方法应用免疫组化LSAB法和KS400图像分析系统,检测MMP-9和TIMP-3在26例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的异位子宫内膜和其中15例在位子宫内膜中的表达,分析阳性细胞的分布规律,以20例正常子宫内膜作为对照。结果MMP-9和TIMP-3在正常和异位子宫内膜的腺上皮细胞、基质细胞中均有不同程度的表达。异位子宫内膜组织中MMP-9呈高表达状态,TIMP-3表达减少,与正常子宫内膜和在位内膜相比有显著差异（P〈0．05）;在位子宫内膜与正常子宫内膜MMP-9和TIMP-3的表达无显著差异（P〉0．05）。结论提示异位内膜组织具有更强的侵袭力,其在子宫内膜异位症发病中起重要作用。     

MMP-1/TIMP-2在子宫内膜异位症大鼠子宫内膜上的表达

目的检测基质金属蛋白酶-1(MMP-1)/组织金属蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)在子宫内膜异位症(EMS)大鼠在位、异位病灶中的表达,探讨其在EMS子宫内膜中表达的特点、相关关系及影响。方法选取健康未孕雌性大鼠30只,从中随机抽取10只作为空白组,不做任何处理;其余30只采用移植法建EMS模型,建模后4周2次手术开腹,大体观察并组织病理学检查确定建模成功后,取在位内膜组织大鼠10只(在位组)、异位内膜组织大鼠10只(异位组),通过免疫组化法测定子宫内膜中MMP-1/TIMP-2的表达。结果异位组与空白组、在位组比较,MMP-1表达高,TIMP-2表达低,差异具有统计学意义(P<0.05);空白组、在位组MMP-1低表达,TIMP-2高表达,差异无统计学意义。结论 MMP-1/TIMP-2平衡的破坏及在EMS大鼠异位内膜组织的异常表达,可能参与了EMS的病理发生与发展。