高脂饮食喂养的apoE基因敲除小鼠外周血和主动脉CCR2mRNA表达变化

摘要:目的 探讨动脉粥样硬化模型小鼠外周血和主动脉组织中 CCR2 mRNA 表达变化趋势。方法 将 40只 apoE基因敲除小鼠分为高脂饮食组和普通饮食组,每组20只,在喂养的第4周开始进行外周血和主动脉 CCR2mRNA 测定,了解动脉粥样硬化发展过程中 CCR2mRNA 表达的变化。在第2周和第14周对小鼠进行血脂测定,并对主动脉 组织进行油红 O 染色以及免疫荧光检测验证模型建立并了解 CCR2mRNA 在组织中的表达。结果 高脂饮食喂养的 apoE基因敲除小鼠外周血 CCR2mRNA 在第4周即开始出现,在第10周达高峰并且维持较高水平,而主动脉组织中 CCR2mRNA 的表达在第8周开始逐渐增加。高脂饮食组小鼠在第14周可见血脂显著增高,油红 O 染色提示主动脉粥 样斑块形成,动脉粥样硬化模型建立成功,斑块内可见 CCR2mRNA 大量表达。结论 外周血 CCR2mRNA 的升高可 能是动脉粥样硬化相关早期单核细胞活化的一个有效预测指标。     

高脂饮食诱导APOE和LDLR基因敲除鼠AS斑块形成的分子病理学特征

目的 观察在高脂饮食务件下,载脂蛋白E(ApoE)和低度密度脂蛋白受体(LDLR)基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块形成的病理学特征与基质金属蛋白酶(MMP-2,9)和Mac-3表达水平.方法 用C57BL/6J小鼠普通饮食作对照,用ApoE基因敲除和LDLR基因敲除两种小鼠,每种分为普通饮食和高脂饮食两组,8只/组.连续喂养120d后,分离获得各组小鼠主动脉,用Masson染色,油红O染色法观察小鼠动脉粥样斑块病理形态学变化,用免疫组织化学检测AS斑块内炎症以及基质金属蛋白酶(MMP-2,9)表达水平,用免疫双荧光抗体法分析AS斑块巨噬细胞和平滑肌细胞内MMP-9表达的差异.结果 与普通饮食的基因敲除鼠比,高脂饮食的ApoE和LDLR基因敲除鼠的动脉粥样硬化斑块显著增大,炎性细胞增多,纤维帽中基质纤维成分减少,纤维帽形状变薄和大量中性脂滴沉积.其中,以ApoE基因敲除鼠的最为严重.AS斑块形成大小与Mac-3表达水平和炎症细胞增加呈正相关.斑块内MMP-9表达在巨噬细胞内占50%～70%,在平滑肌细胞内占30%.结论 高脂饮食可加重ApoE和LDLR基因敲除小鼠AS斑块形成和Mac-3表达及炎症细胞增加,MMPs水平亦相应增加,其病变呈现出不稳定性斑块特征.     

AdipoR1在ApoE基因敲除小鼠粥样斑块中的表达及其变化

目的 探讨脂联素(adiponectin)1型受体(AdipoR1)在载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成过程中的变化.方法 取野生型C57BL/6J小鼠作为对照组,ApoE基因敲除小鼠分为10周龄、20周龄和30周龄组,观察不同组别小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)及脂联素的含量及主动脉斑块面积的变化.免疫组织化学染色法对AdipoR1进行半定量及定位分析.结果 ApoE基因敲除小鼠的血清TG、TC、LDL水平与对照小鼠比较显著升高,并随小鼠周龄增加而升高;斑块面积也随小鼠周龄增加而增大.ApoE基因敲除小鼠血浆脂联素水平低于对照小鼠,免疫组织化学染色法显示AdipoRl在ApoE基因敲除小鼠血管内膜表达阳性减弱,其程度随周龄增加有减少趋势.结论 ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的形成不仅与低脂联素血症相关,而且与主动脉血管组织中AdipoR1型脂联素受体表达下调也相关.     

载脂蛋白E基因敲除及高脂饮食小鼠皮质额叶区形态学及Mortalin表达的变化

目的 观察载脂蛋白E基因敲除(ApoE KO)及高脂饮食(HF)后小鼠额叶区形态学及Mortalin蛋白表达变化,以进一步探讨ApoE异常导致阿尔茨海默病及记忆损伤的可能机制.方法 10只野生型小鼠予普通饲料喂养作为对照(C)组,10只ApoE KO小鼠予普通饲料喂养作为KO组,10只ApoE KO小鼠予高脂饲料喂养作...     

南蛇藤素对ApoE基因敲除小鼠主动脉壁MIF及MMP-9表达的影响

目的观察南蛇藤素对ApoE基因敲除小鼠在动脉粥样硬化斑块形成的早期阶段主动脉壁中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠12只,按随机数字表法分为南蛇藤素干预组和对照组,每组6只,均给予高脂饮食饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别予以2mg.kg-1.d-1南蛇藤素和相当剂量的溶剂二甲基亚砜(DMSO)腹腔注射,每日1次,连续用药4周;小鼠处死后行主动脉连续石蜡切片,HE染色观察组织形态学改变,测定ApoE基因敲除小鼠主动脉根部粥样斑块面积,同时采用免疫组化方法观察主动脉壁MIF和MMP-9蛋白表达的强度。结果图像分析测量结果显示对照组形成了早期斑块;南蛇藤素干预组斑块面积较对照组明显减小(P<0.01),斑块面积/动脉壁横切面积也明显降低(P<0.01);南蛇藤素干预组与对照组比较,MIF、MMP-9的表达均明显降低(P<0.01)。结论南蛇藤素可能通过下调ApoE基因敲除小鼠主动脉壁MIF、MMP-9表达,发...     

α-硫辛酸对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响

目的：探讨α-硫辛酸（α-LA）对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性及血脂的影响.方法：将30只ApoE基因敲除小鼠随机分为模型组、α-硫辛酸、辛伐他汀组,高脂饮食16周后,分别给与生理盐水、α-硫辛酸、辛伐他汀灌胃,另取10只G57BL/6J小鼠正常饮食后给与生理盐水灌胃作为正常对照组.8周后处死小鼠,酶法检测血清血脂,氧化型低密度脂蛋白,HE染色观察主动脉粥样硬化斑块病理形态结构,图像分析法测定主动脉粥样硬化斑块面积及与管腔面积比值,胶原Mas-son染色检测斑块部位胶原含量及占斑块面积比值.结果：与高脂模型组比较,α-LA组TG,LDL,ox-LDL均明显降低,HDL明显升高（P＜0.01）,TC降低（P＜0.05）.与高脂模型组比较,α-LA动脉粥样硬化斑块面积及与管腔面积比值缩小（P＜0.05）.胶原含量及占斑块面积比值增加.结论：α-LA有稳定ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑决的作用,其作用与降脂,抗脂质过氧化有关.     

金属硫蛋白和瑞舒伐他汀对小鼠动脉粥样硬化和SM22α表达的影响

目的 探讨金属硫蛋白（MT）和HMG-CoA还原酶抑制剂瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化以及血管平滑肌22α蛋白（SM22α）表达的影响.方法 30只6周龄雄性ApoE基因缺陷小鼠随机分为高脂模型组、瑞舒伐他汀组、金属硫蛋白组,高脂饮食喂养13周;10只背景品系雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照组,正常饮食喂养13周.13周后,摘眼球取血测定血浆总胆固醇（TCH）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）的水平,处死小鼠后取主动脉,剪取主动脉弓部位5 mm长主动脉用10％甲醛固定,石蜡包埋,切片,HE染色及SM22α免疫组织化学染色;其余标本-80℃保存,取100 mg主动脉组织两份,分别提取总蛋白和RNA,并做WesternBlot和RT-PCR检测,观察主动脉血管壁形态学变化,定性和定量分析主动脉组织SM22α表达强度变化.结果 与高脂模型组比较,瑞舒伐他汀组血清中TCH、TG、LDL-C水平显著降低（P＜0.05）;金属硫蛋白组与高脂高脂模型组比较,TCH、TG、LDL-C水平无统计学差异（P＞0.05）;和正常对照组相比,高脂模型组主动脉粥样硬化病变程度明显加重,免疫组织化学、Western Blot和RT-PCR方法分析主动脉SM22α蛋白和mRNA的表达均明显减少;金属硫蛋白和瑞舒伐他汀组主动脉粥样硬化病变程度减轻,SM22α蛋白和mRNA的表达均增加.结论 金属硫蛋白对血脂无明显影响,瑞舒伐他汀降低血脂作用明显;ApoE基因缺陷小鼠主动脉组织动脉粥样硬化明显且SM22α表达减少,金属硫蛋白和瑞舒伐他汀可减轻主动脉粥样硬化病变程度并可增加主动脉SM22α的表达.     

5-脂氧合酶通路在ApoE基因敲除小鼠动脉硬化中的意义

目的:探析5-脂氧合酶通路在ApoE基因敲除小鼠动脉硬化中的意义,为临床同类治疗提供靶向.方法:通过60只ApoE缺陷型小鼠设为观察组,60只同鼠龄的C57BL/6型小鼠作为对照组,对观察组小鼠进行促进动脉粥样硬化形成的西方饮食(Westerndiet,含21%脂肪和0.15%胆固醇),对照组小鼠进行常规喂食,15周后,比较2组小鼠5-脂氧合酶基因的表达水平以及主动脉根部血管斑块的面积.结果:(1)15周后,观察组小鼠血浆中5-脂氧合酶的mRNA表达量0.61±0.05,高于对照组0.18±0.03明显升高(P＜0.05);(2)15周后,观察组小鼠血浆中5-脂氧合酶的mRNA表达量0.60±0.04,高于对照组0.19±0.02明显升高(P＜0.05).结论:5-脂氧合酶通路参与动脉粥样硬化病理过程,是控制动脉硬化的靶点.     

慢性铁超载对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变的影响

目的:观察慢性铁超载对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变的影响.方法:24只ApoE基因敲除小鼠随机分为ApoE基因敲除组(腹腔注射0.1 mL生理盐水,连续4周)和铁荆组(腹腔注射10 mg右旋糖苷铁,连续4周),检测血清铁、总铁结合力、肝匀浆丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,铁染色观察肝脏、心脏铁沉积改变,分析主动脉窦粥样硬化斑块面积.结果:铁荆组血清铁浓度升高377.86%,转铁饱和度升高121.98%,肝脏铁浓度升高2 548.15%,与ApoE基因敲除组比较差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,ApoE基因敲除组肝脏中MDA含量升高了32.51%,SOD活性下降了17.2%,差异均有统计学意义(P＜0.05).与ApoE基因敲除组比较,铁荆组肝脏MDA含量升高了411.15%,SOD活性下降了46.84%,差异均有统计学意义(P＜0.01).与ApoE基因敲除组比较,铁剂组小鼠肝脏、心脏可见明显铁沉积,主动脉窦动脉粥样斑块面积明显增大.结论:铁超载可促进ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变的形成,其机制可能与增强机体氧化应激、促进脂质过氧化有关.     

SHP-2抑制剂PHPS1对动脉粥样硬化斑块作用及其机制的研究

目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2抑制剂PHPS1对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块易损性的作用及其机理,为研究动脉粥样硬化提供新思路.方法 16只8周龄ApoE-/-小鼠随机分为对照组和PHPS 1组,给予西方膳食饲料16周,构建易损AS模型.取主动脉根部经福尔马林固定后制成切片,行Movat、天狼星红等染色法...     

罗格列酮对apoE基因敲除小鼠血清NOS/NO的影响

目的探讨罗格列酮对apoE基因敲除小鼠血清NOS/NO的影响.方法 20只8周龄apoE基因敲除小鼠分为动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型组和罗格列酮干预组,另取10只8周龄野生型C57/BL小鼠作为正常对照组,3组均饲喂普通饮食,罗格列酮组给予10 mg·kg-1·d-1罗格列酮,12周后获取静脉血和主动脉标本.用硝酸还原酶法测定NO及NOS.用全自动生化分析仪测定血脂水平.HE染色后镜下观察主动脉病变.结果 AS模型组主动脉形成明显的动脉粥样硬化斑块,罗格列酮干预组病变较AS组轻;AS组血浆NO、NOS含量均显著低于正常对照组(P<0.05),罗格列酮干预组NO、NOS含量均显著高于模型组.结论罗格列酮具有抗AS作用,且其抗AS作用可能与其逆转受损的内皮细胞功能有关.     

黄连温胆汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的:探讨黄连温胆汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响及机制。方法:10周龄ApoE基因敲除小鼠24只,随机分为3组,分别为空白组、模型组和黄连温胆汤组,每组各8只。除空白组外给予小鼠高脂饲料6周形成动脉粥样硬化模型。造模后黄连温胆汤组给予黄连温胆汤水煎液灌胃8周,模型组给予生理盐水灌胃8周。灌胃结束后取材,测定血清血脂和TNF-α水平;心脏剥离后进行主动脉根部切片HE染色、甲苯胺蓝染色和免疫组化,测主动脉斑块面积、蛋白聚糖沉积面积,统计斑块、蛋白聚糖沉积校正面积和蛋白聚糖/斑块校正面积,以及主动脉壁及斑块TNF-α蛋白表达量。结果:与模型组比较,黄连温胆汤组小鼠血脂水平下调,血清TNF-α水平和主动脉壁及斑块TNF-α蛋白表达水平明显下调,斑块绝对面积和校正面积显著缩小,蛋白聚糖沉积绝对面积减小,蛋白聚糖沉积面积/斑块校正面积有上调趋势,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:黄连温胆汤具有降低血脂水平、减小主动脉斑块面积和抑制动脉粥样硬化病程进展的功效,其机制可能与降低炎性因子TNF-α水平和调节蛋白聚糖代谢相关。     

MMP-9在ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块的表达及高脂饮食影响

目的研究基质金属蛋白酶9(MMP-9)在载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除C57BL/6J小鼠[ApoE(-/-)]主动脉粥样硬化斑块中的表达及高脂饮食对其影响,分析其与动脉粥样硬化不稳定斑块的关系。方法16只30周龄ApE(-/-)小鼠,随机分成高脂饮食组[Ch-ApoE(-/-)]和普通饮食组[ApoE(-/-)],8只正常C57BL/6J小鼠为对照组予高脂饮食,喂养4个月后分离主动脉。HE、Masson三色法染色观察小鼠主动脉粥样斑块,免疫组织化学分析斑块内MMP-9及巨噬细胞的表达。结果两组ApoE(-/-)均有明显的动脉粥样硬化,为不稳定斑块,斑块内巨噬细胞表达过量,且MMP-9表达增强。Ch-ApoE(-/-)组动脉硬化及MMP-9表达强于ApoE(-/-)组,两者有统计学意义。结论动脉粥样硬化不稳定斑块与MMP-9的表达密切相关,高脂饮食可加重不稳定斑块。     

搜风祛痰中药对动脉粥样硬化ApoE基因敲除小鼠血脂及IL-1β的影响

目的:探讨搜风祛痰中药治疗动脉粥样硬化的可能作用机制.方法:选取6周大ApoE基因敲除小鼠高脂饮食喂养13周建立动脉粥样硬化不稳定斑块模型,并随机分为模型组、阿托伐他汀组以及搜风祛痰低、中、高剂量组;另取6周大C57BL/6J小鼠设为空白对照组.空白对照组及模型组均给予0.9％生理盐水灌胃,搜风祛痰中药低、中、高剂量组...     

高脂饮食ApoE基因敲除小鼠不同部位动脉粥样硬化斑块的分析比较

目的比较高脂喂养的apoE基因敲除小鼠主动脉窦部和头臂动脉粥样硬化斑块的病理组织学状况。方法选取6周龄雄性纯合子aopE基因敲除小鼠30只，均予以西方饮食喂养，分别在30周龄、42周龄、54周龄、66周龄、78周龄时，随机各取6只，取主动脉窦和头臂动脉做病理检测。酶法检测血脂情况，冰冻切片光镜下观察主动脉窦部和无名动脉粥样硬化斑块病理情况，von kossa染色观察斑块钙化情况。结果高脂喂养可使apoE基因敲除小鼠迅速形成广泛且典型的动脉粥样硬化斑块，随时间进展，斑块体积逐渐增加，钙化逐渐加重；头臂动脉斑块出现较主动脉窦早且更加明显，斑块内包埋纤维帽，在主动脉窦斑块未见，但斑块钙化以主动脉窦部斑块最显著。结论高脂喂养apoE基因敲除小鼠是较为理想的动脉粥样硬化动物模型，头臂动脉是观察斑块不稳定的较为理想的窗口，而研究比较稳定斑块钙化，主动脉窦部更为理想。     

两种LXR激动剂对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化影响的对照研究

目的研究我校自行研制的LXR激动剂(MHEC)和进口LXR激动剂(T-0901317)在抑制动脉粥样硬化病变形成方面的作用及主要机制.方法以高脂饲养ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠为动脉粥样硬化模型,分为无药对照组、MHEC干预组和T-0901317干预组(10 mg·kg-1·d-1),每组6只,灌胃6周.检测血脂、分析主动脉壁中动脉粥样硬化病变的面积、用免疫组化SP法检测主动脉壁中ABCA1蛋白的表达.结果T-0901317组血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),MHEC组仅HDL-C显著高于对照组(P＜0.01);药物干预组的动脉粥样硬化病变面积均显著降低(P＜0.01),同时动脉壁中ABCA1的表达显著增强(P＜0.01).结论MHEC与T-0901317相比,有更好的血脂改善效果,二者均能显著抑制高脂饲养ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变的形成.这可能与它们能促进动脉壁中ABCA1蛋白的表达,增强胆固醇逆转运有关.     

罗格列酮对apoE基因敲除小鼠血浆高敏C反应蛋白水平的影响

目的探讨罗格列酮对apoE基因敲除小鼠血浆炎症因子水平的影响。方法20只8周龄apoE基因敲除小鼠随机分为动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型组和罗格列酮干预组,另取10只8周龄野生型C57/BL小鼠作为正常对照组。3组均饲喂普通饮食,罗格列酮组给予10mg.kg-1.d-1,12周后获取静脉血和主动脉标本。分别用胶乳凝聚法、微量快速测定法及XO法测定高敏C反应蛋白(hs-CRP)、丙二醛(MDA)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活性。HE染色后镜下观察主动脉病变。结果AS模型组主动脉形成明显的动脉粥样硬化斑块,罗格列酮干预组病变较AS组轻;AS组血浆MDA、hs-CRP含量均显著高于正常对照组,罗格列酮干预组MDA、hs-CRP含量均显著低于模型组。模型组血浆SOD含量活性明显低于正常对照组,而罗格列酮干预组活性显著高于模型组。结论罗格列酮具有抗AS作用,且其抗AS作用可能与其抗炎症相关。针对炎症有望控制AS的发生发展。     

高脂饮食加重压力超负荷诱发的小鼠心肌肥厚

目的探讨高脂饮食能否加重压力超负荷诱发的ApoE基因敲除小鼠心肌肥厚。方法通过升主动脉缩窄(TAC)构建ApoE基因敲除小鼠压力超负荷心肌肥厚模型。将18只ApoE基因敲除小鼠随机分为假手术组、TAC组和高脂饮食+TAC组,每组6只。模型建立成功2周后,对小鼠心脏进行超声及病理形态学检查,同时测量左心室压力、心脏重量/体重比值、心肌细胞表面积以及相关肥厚基因和蛋白。结果与假手术组比较,TAC组的心肌肥厚各项指标(左心室室壁厚度、心脏重量/体重、心肌细胞表面积、胚胎基因表达)明显升高(P值均<0.05)。高脂饮食+TAC组心肌肥厚的各项指标均显著高于TAC组(P值均<0.05)。TAC组血管紧张素Ⅱ受体(AT1R)水平显著高于假手术组(P<0.05),而高脂饮食+TAC组又显著高于TAC组(P<0.05)。结论高脂饮食加重压力超负荷诱发的小鼠心肌肥厚可能与AT1R有关。     

低氧诱导因子-1α和VHL对小鼠软骨内成骨过程的调控机制

目的 研究低氧诱导因子1α (HIF-1α)和von Hippel-Lindau (VHL)在成骨细胞水平对小鼠软骨内成骨过程的调控机制.方法 以HIF-1α或VHL基因条件性敲除小鼠为实验对象,分别于4、8、12周龄时,采用组织化学染色观察、显微CT扫描、骨小梁面积测量、钙元素含量检测、四环素荧光双标记观察、Real-time PCR及Western blotting等方法,观察和比较基因敲除小鼠与野生型小鼠(对照组)软骨内成骨过程的差异.结果 与野生型对照小鼠比较,HIF-1α基因敲除组小鼠在软骨内成骨过程中血管内皮生长因子(VEGF)表达减少,新骨形成速度减慢,钙元素含量和骨小梁面积减少(P<0.05);而VHL基因敲除组小鼠在软骨内成骨过程中VEGF表达增加,新骨形成速度加快,钙元素含量和骨小梁面积增加(P<0.001).结论 在小鼠软骨内化骨过程中,VHL/HIF-1α信号通路对VEGF表达具有调控作用,通过调节血管形成,最终影响骨量形成.     

低氧诱导因子-1α和VHL对小鼠软骨内成骨过程的调控机制

目的 研究低氧诱导因子1α (HIF-1α)和von Hippel-Lindau (VHL)在成骨细胞水平对小鼠软骨内成骨过程的调控机制.方法 以HIF-1α或VHL基因条件性敲除小鼠为实验对象,分别于4、8、12周龄时,采用组织化学染色观察、显微CT扫描、骨小梁面积测量、钙元素含量检测、四环素荧光双标记观察、Real-time PCR及Western blotting等方法,观察和比较基因敲除小鼠与野生型小鼠(对照组)软骨内成骨过程的差异.结果 与野生型对照小鼠比较,HIF-1α基因敲除组小鼠在软骨内成骨过程中血管内皮生长因子(VEGF)表达减少,新骨形成速度减慢,钙元素含量和骨小梁面积减少(P<0.05);而VHL基因敲除组小鼠在软骨内成骨过程中VEGF表达增加,新骨形成速度加快,钙元素含量和骨小梁面积增加(P<0.001).结论 在小鼠软骨内化骨过程中,VHL/HIF-1α信号通路对VEGF表达具有调控作用,通过调节血管形成,最终影响骨量形成.