大肠杆菌抗血清的制备及其应用

<正> 在免疫学实验中,血清学试验是最基础、最常用的,所以我们将它列为各专业学生实验的重点,如凝集反应、沉淀反应、补体结合试验、肥达反应等。由于这些实验都要用到抗血清,而抗血清本地难以买到,价格也昂贵,为了节约经费,使用方便,近年来,我们尝试了自制抗血清,取得了良好的效果。     

实验教学用伤寒杆菌诊断血清的制备

伤寒杆菌(S.typhi)是引起人类伤寒的病原体,对人类的生存和健康威胁极大,定量检测患者血清中伤寒杆菌特异性抗体的肥达氏反应(Widal's test)因此而被列为微生物学实验课的必修内容.近年来,由于抗生素的早期应用,临床随机采集的患者血清标本抗体含量很低,实验中很难出现典型的抗原凝集现象.为了保证实验教学的质量,我们采用纯化伤寒杆菌"H”抗原和"O”抗原免疫家兔,制备了伤寒杆菌的异种抗血清,以此抗血清加入检测标本,以确保实验中的典型实验结果.现将有关血清制备方法报告如下.     

关于抗结晶鸡蛋清蛋白的抗体的均一性的研究

抗体和抗原可以起特异的免疫反应;反应产物,如免疫沉淀物,只含有抗原以及与抗原相结合的特异抗体。所以从免疫沉淀物中提出抗体应该此从全抗血清中提出抗体容易;从免疫沉淀物中提出的抗体也应该比从全抗血清中提出者纯净。根据这种原理,Felton 氏(1932)(1)用磷酸鳃沉淀肺炎球菌多醣与肺炎球菌特异抗体相结合的免疫沉淀物中的多醣,从而获得抗     

细粒棘球蚴抗血清的制备及特性鉴定

为制备用于细粒棘球蚴重组抗原目的基因免疫学筛选的抗血清,并且进行特性鉴定,用抗原免疫法获得抗血清,并用Westen-blot法和ELISA法对其特性进行鉴定。结果,经Westen-blot法鉴定,制备出的抗血清能识别分子量为32、36、42、58、67kDa以及88kDa以上的细粒棘球蚴天然抗原成分,而对照组血清则不能识别相应的蛋白。ELISA法测定血清抗体效价均达到1×10-4。制备的抗血清具有良好的特异性和较高的抗体效价。     

抗人载脂蛋白E多抗的制备与纯化

利用纯化的人载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）作为抗原，常规免疫纯系大耳白家兔，获得高效价、高特异性的抗血清，抗体滴度经ＥＬＩＳＡ法检测达１：１２８００倍稀释度，抗体特异性检验证明抗体只与ａｐｏＥ反应。抗血清经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ亲和层析纯化，分离为碱性洗脱峰Ⅰ和酸性洗脱峰Ⅱ，峰Ⅱ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测在分子量为２７ｋｄ和５４ｋｄ处呈现两条带，分别相当于抗体的重链和轻链的分子量，证明峰Ⅱ为纯化的抗体，这就为建立测定人血清ａｐｏＥ浓度的免疫学方法奠定了基础。     

TORCH四联抗原的交叉反应分析

目的 分析TORCH四联抗原的交叉反应性。方法 应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中TORCH特异性IgM抗体；应用酶联免疫印渍（ELIB）对TORCH四联之间的抗原交叉反应性进行分析。结果 检测受检血清144份，其中2种以上病原交叉阳性率为7.6%(11/144)。ELIB试验显示分别用TORCH四种抗原免疫的抗血清与四种抗原反应时，除与对应的抗原有较强的反应区带外，与其它三种抗原也有不同条数的显色反应条带。结论ＴＯＲＣＨ四联之间存在较为严重的交叉反应性，在临床诊断中主尖引起重视。     

人基质金属蛋白酶—1融合蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备与初步应用

目的：获得兔抗人基质金属蛋白酶-1(MMP-1)多克隆抗体，并将其初步应用于临床检测。方法：将人MMP-1融合蛋白经亲和层析法纯化，并将其作为抗原免疫家兔，获得兔抗血清，经饱和硫酸铵纯化，获得初步纯化的兔抗人MMP-1多克隆抗体。用双抗夹心间接酶联免疫吸附实验(ELISA)测定正常对照、慢性肝病、肝硬化患者血清MMP-1的OD值。结果：获得初步纯化的兔抗人MMP-1特异性多克隆抗体，该抗体能与人MMP-1起反应。结论：制备的MMP-1多克隆抗体可初步用于临床检测。     

酶联免疫吸附试验中的假性结果分析

酶联免疫吸附试验（ELISA试验）是医学检验的免疫学检验方法之一，已经广泛应用到对病原微牛物的免疫学检查试验中。用ELISA法检测乙肝病毒感染者的血清标志物（两对半）是目前最常用的实验至检验方法。和任何实验室检查方法一样，ELISA存在少量的假性结果（假阳性、假阴性），对临床诊断和治疗会有一定的影响。由于ELISA反应所测对象可以是抗原也可以是抗体，业色反应对结果的阴性和阳性也有两种不同的判断，所以这里以显色为阳性的模式为例归纳其影响因素如下。     

免疫PCR实验技术条件的探讨

ELISA是免疫学检测经典实验技术,多年来已广泛用于检测各种疾病,其检测抗原/抗体的灵敏度可达pg级。但对于早期、轻症患者及产生抗体滴度较低的疾病,其检测阳性率仍不能令人满意。1992年Sano等创立了免疫PCR方法^[1],此方法将ELISA反应的灵敏度至少提高了10³倍,可检测到0.5fg的小鼠ApoE抗原。然而我们在应用中发现,由于免疫PCR反应需在0.5mL小离心管中进行,而离心管的包被效果远逊于ELISA反应板(酶标板),制约了免疫PCR灵敏度优势的发挥。为克服这一难题,我们分别观察了硅化、紫外线照射、戊二醛浸泡以及增大抗原质量浓度4种处理方法对包被效果的影响。     

卵白素—生物素(VH)—辣根过氧化酶复合物法(免疫细胞化学染色法)

免疫细胞化学是将免疫学的基本原理和技术应用到组织学和病理学领域，使组织或细胞内能够做为抗原性的物质与其相特异的抗体之间发生抗原一抗体反应，由于抗体分子本身在光学显微镜下是看不见的，放必须在抗体（单克隆抗体）免疫球蛋白分子上附加以做为标记的分子，借助这些标记物的存在的位置和数量来观察和分析抗原组织或细胞内的定位，分布和含量，我们用的是酶标记抗体与组织或细胞内特异抗原结合追踪抗原分布，借助底物与酶反应生成的有色沉淀显示抗原所在。该法灵敏度高特异性强特点。1实验步骤1．1制片（用未稍血或骨髓）；1．2加鼠…     

免疫学快速检验技术的应用与进展

免疫学检验是依据免疫学原理，尤其是抗原与抗体反应原理，利用各种敏感的标记、示踪技术，超微量地、特异地分析检测各种生理的和病理的免疫学指标，包括体液的（抗体、细胞因子等）和细胞的（各种效应细胞），进行疾病的诊断、疗效的评估和预后判断的一组医学检验项目。因此，免疫学检验是构筑基础免疫学与临床免疫学之间的桥梁，是临床医生借以研究疾病的技术手段。但是由于免疫反应的特殊性及复杂性使许多试验技术操作繁杂、耗时，难以适应临床诊断、治疗的需要。近年来随着生物和生命科学的迅猛发展，操作的自动化以及新技术新材料的应用，为免疫学快速检验技术的发展带来了新的契机，极大地促进了免疫技术的发展与更新。现就免疫学检验中的快速检测技术应用与进展作一简要综述。     

基于医学免疫学的新课程——《损伤与反应》的课程设计与教学实践

《损伤与反应》课是在医学免疫学的基础上,以免疫学内容为主线,辅以相关的病理及病理生理学内容,并紧密结合临床的一门新课程。通过这门课程的教学,使学生在掌握医学免疫学的基础知识的同时,也了解了临床相关疾病及其发生的病理和病理生理机制,以提高学生的学习兴趣、增强学生独立思考问题、解决问题的能力,为免疫学这一基础学科的教学拓展新的视角。     

福氏佐剂的替代物和抗体生产

以抗原免疫动物获得抗血清是制备抗体的经典方法.为了提高免疫效果,在免疫的时候,常辅以佐剂以改变抗原的物理状态而延长其在体内的滞留时间,使抗原缓慢释放,同时非特异性的促进局部吞噬细胞反应来增强动物的免疫效果.佐剂的类型较多,目前常用的还是福氏佐剂(Freund's Adjuvant,FA).它是一种对大多数抗原都有效的佐剂,但由于它的一些副作用限制了它在实验动物上的使用.因此,福氏佐剂只能在确实需要的情况下(如使用的抗原为小分子可溶性抗原或半抗原)和强佐剂活性时使用.     

教学用双扩免疫血清的制备

沉淀反应是一种经典的抗原抗体反应,也是高等医学院校学生免疫学试验的重要内容之一,它是指可溶性抗原及其相应抗体在一定条件下出现肉眼可见的沉淀物的现象.免疫学实验课中常做的有单向琼脂扩散法、双向琼脂扩散法(双扩)、对流免疫电泳等.     

兔抗鸡红细胞抗体制备改进直接凝集试验

依照贯例,在血清学应用试验中,常规地介绍直接凝集试验时,一般采用细菌凝集反应。该试验在免疫学应用实验课教学中,帮助学生弄懂抗原抗体特异性结合,出现肉眼目见反应起到了积极作用。但在我们多年的教学中,也深感有时相应抗原(细菌悬液)和抗体不易买到,或因效价降低直观效果不理想等影响了试验的开设。为了解决上     

时间分辨荧光免疫法检测乙肝E抗体阳性及PCR定量阴性的意义

乙肝病毒（Hepatits B virus，HBV）感染是我国最常见的感染性疾病之一，而应用免疫技术测定HBV特异性抗原抗体是HBV感染诊断的主要手段。由于免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平HBV感染得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义。     

免疫学检验感染性疾病甲肝、乙肝的临床研究

免疫学检验是依据免疫学原理,检测超微量,具有特异性的各种生理和病理的免疫学指标,在临床疾病诊断、检测及预后评估均具有重要的临床意义.近年来随着免疫技术革新与发展,新的敏感性标记物、示踪物等出现,对检测超微量、特异性及敏感的抗原与抗体提供了新的方法.尤其是目前利用抗原与抗体反应原理检测感染性疾病甲型肝炎肝和乙型肝炎中得到广泛应用.     

第六讲 免疫学应用

免疫学在疾病的诊断、防治等方面应用非常广泛。第一节免疫学诊断一、体液免疫测定法 (一) 血清学反应特异性抗原和抗体在体外结合,由于抗原的物理性状及参加物质(电解质、补体等)的不同,可出现凝集、沉淀、补体结合等各种肉眼可见现象。因抗体存在于血清等体液中,试验时一般都要应用     

人基质金属蛋白酶-1融合蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备与初步应用

目的 :获得兔抗人基质金属蛋白酶 1 (MMP 1 )多克隆抗体 ,并将其初步应用于临床检测。方法 :将人MMP 1融合蛋白经亲和层析法纯化 ,并将其作为抗原免疫家兔 ,获得兔抗血清 ,经饱和硫酸铵纯化 ,获得初步纯化的兔抗人MMP 1多克隆抗体。用双抗夹心间接酶联免疫吸附实验 (ELISA)测定正常对照、慢性肝病、肝硬化患者血清MMP 1的OD值。结果 :获得初步纯化的兔抗人MMP 1特异性多克隆抗体 ,该抗体能与人MMP 1起反应。结论:制备的MMP 1多克隆抗体可初步用于临床检测     

单克隆抗体与传染病

自从首次发现传染免疫以来,免疫学与传染病就有了密切地联系。一个学科的进步必定导致另一学科的发展,抗体在微生物分类及许多传染病流行中已发挥主导作用。晚近,免疫学出现了巨大进展,肯定会对疾病诊断和治疗产生更大地影响。目前已经发现制取无限量同质抗体并使其具有广泛应用价值的新技术。多克隆抗体反应虽然人们不得不承认多克隆抗体的价值,但免疫学家用它制取理想血清试剂常在不同环节上遇到困难。首先,免疫反应相当难以预料,很难判断一个新抗原是否会引出强抗体反应,即使过去作为一种有效抗原来应用,但产生抗体质和量常随动物个体差异