基于PPARγ-LXRα-ABCA1通路的中药降脂成分研究

目的利用药效团和分子对接等模拟方法,基于过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)-肝X受体α(LXRα)-三磷酸腺苷结合盒转运体Al(ABCA1)通路发现中药中具有降脂作用的潜在活性化合物。方法首先,选择PPARγ和LXRα作为研究载体,分别构建其激动剂的药效辨识模型。通过对药效团模型的验证与评价,获得PPARγ和LXRα的最优药效团模型。随后,利用最优药效团模型筛选中药化学成分数据库(TCMD),结合Lipinski五规则及化合物与药效团模型的匹配度,得到初筛化合物。最后,利用分子对接方法进一步精简筛选结果,保留对接打分值较高的化合物,并分析其关键氨基酸,分别得到PPARγ和LXRα的潜在激动剂。结果本研究构建了PPARγ激动剂的最优药效团模型,包括1个氢键受体、1个疏水基团和2个芳香基团;LXRα的最优药效团模型,包括2个氢键受体、1个疏水基团和2个芳香基团。同时利用分子对接方法构建PPARγ和LXRα的蛋白三维模型,并将其用于分子对接研究。结合药效团及Lipinski五规则的筛选结果,分别获得20个和180个初筛化合物。依据筛选标准(打分值和关键氨基酸),最终确定鹰爪木脂醇和桧双黄酮为PPARγ的潜在激动剂,栝楼酯碱和刘寄奴酰胺为LXRα的潜在激动剂。筛选得到的PPARγ和LXRα潜在激动剂可以通过分别作用于PPARγ-LXRα-ABCA1通路上的对应靶标协同发挥降脂作用。结论本研究高效、快速的筛选了TCMD中具有潜在活性的PPARγ和LXRα激动剂,用于协同上调ABCA1的表达,为高脂血症的药物研发提供先导化合物。     

计算机模拟亚甲基蓝与牙龈卟啉单胞菌部分蛋白的分子对接

目的: 使用计算机模拟的靶点预测与分子对接的方法,研究抗菌光动力疗法中光敏剂与细菌结合的靶点,并计算结合能。方法: 在Uniprot数据库和RCSB PDB数据库中获取并汇总牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的蛋白名称;在SciFinder数据库、PubChem数据库、ChemSpider数据库和Chemical Book中筛选并对比亚甲基蓝的结构图,并用ChemBioDraw软件绘制确认;在PharmMapper数据库对亚甲基蓝三维结构进行靶点预测,并用Cytoscape 软件构建可视化网络图;在 String 数据库中构建亚甲基蓝靶点与Pg蛋白交集的相互作用网络;选择FimA、Mfa4、RgpB、Kgp K1蛋白,使用AutoDock软件计算亚甲基蓝与上述蛋白的对接能量,并进行分子对接。结果: 靶点预测结果显示,268个亚甲基蓝潜在靶点和1 865个Pg的蛋白之间有19个共同的靶点,这19个靶点为:groS、radA、rplA、dps、fabH、pyrG、thyA、panC、RHO、frdA、ileS、bioA、def、ddl、TPR、murA、lepB、cobT、gyrB。分子对接结果显示,亚甲基蓝能与FimA蛋白的9个位点结合,结合能-6.26 kcal/mol;与Mfa4蛋白的4个位点和氢键形成位点GLU47结合,结合能-5.91 kcal/mol;与RgpB蛋白的氢键形成位点LYS80结合,结合能-5.14 kcal/mol;与Kgp K1蛋白的6个位点和氢键形成位点GLY1114结合,结合能-5.07 kcal/mol。结论: 计算机模拟的靶点预测与分子对接技术可以初步揭示亚甲基蓝与Pg部分蛋白发生结合、结合程度及结合位点,为将来研究光敏剂与细胞、细菌结合位点的筛选提供参考。     

合欢属植物茎皮的化学成分与药理活性

综述了迄今研究的１５种合欢属植物中获得的三萜类、黄酮类、木脂素类及吡啶衍生物等各种化合物，总结了该属植物粗提物与部分单体的药理活性。     

隐孔菌倍半萜类成分抗肿瘤的作用机制：基于分子对接方法

目的 应用分子对接技术及分子动力学模拟，探讨隐孔菌中倍半萜类成分抗肿瘤作用对应靶基因及可能的作用机制。方 法 基于该类成分化学结构，利用在线反向找靶网站Pharm Mapper、SEA、Target Hunter及相关文献研究对可能的抗肿瘤靶标进行初步预测。运用Discovery Studio 4.0（Libdock功能）和Maestro12.3将隐孔菌中倍半萜分子与潜在可能靶标进行分子对接，根据打分情况，推测可能结合靶标；通过2D相互作用图对倍半萜分子与靶标相互作用情况进行分析；结合实验测得活性数据，推测不同倍半萜骨架对于活性的影响因素；选取体外细胞毒活性最好的化合物4结合的最佳构象与靶标形成复合物，与纯靶标蛋白序列一起进行分子动力学模拟，分析均方根偏差（RMSD）值和均方根浮动（RMSF）值，探讨化合物与靶标结合的稳定性。结果 隐孔菌类倍半萜类化合物与Akt（蛋白激酶B）前端蛋白序列（1UNQ）结合最优。2D相互作用图显示氢键和静电力是两者产生相互作用的最主要方式。通过分析不同倍半萜骨架分子的结合最优3D构象，认为分子骨架的微小改变产生了位阻效应，引起各分子活性差异。通过对化合物4的最佳构象与1UNQ形成复合物进行10 ns 的动力学模拟，其RMSD 值小于靶标纯蛋白序列的RMSD值，表明化合物4与1UNQ结合稳定。结合文献报道的1UNQ活性位点，推测隐孔菌中倍半萜类分子抗肿瘤的作用机制是该类分子能够引起Lys-14位乙酰化，导致Akt无法与下游PIP3结合，从而影响肿瘤细胞的增殖。结论 隐孔菌中倍半萜类化合物潜在作用靶点为蛋白激酶B前端蛋白序列1UNQ，通过对靶标Lys-14位乙酰化的方式影响肿瘤细胞的增殖，该研究为隐孔菌中倍半萜类成分作用机制的研究和进一步开发利用提供了科学依据。     

基于网络药理学和分子对接技术研究柴胡-黄芩药对治疗鼻窦炎的作用机制

目的基于网络药理学和分子对接技术研究柴胡-黄芩药对治疗鼻窦炎的作用机制。方法通过TCMSP数据库筛选出柴胡-黄芩药对中的化学成分及其对应靶点,将Uni Prot数据库筛选的相关药物靶点和Genecards数据库筛选的鼻窦炎疾病靶点相交集;运用STRING平台构建靶蛋白相互作用(PPI)网络;采用Metascape平台对靶点进行GO富集分析,并借助DAVID数据库对靶点进行KEGG富集分析。利用Cytoscape 3.8.0软件构建成分-靶点-通路网络图,最后使用Autodock软件对关键靶点及化合物进行分子对接,选择最佳的结合靶点。结果筛选出相关化合物39个,成分靶点与疾病靶点相交得出92个靶标。其主要活性成分为槲皮素、山奈酚、汉黄芩素、黄芩素、刺槐素、β-谷甾醇这六种。其核心基因为TP53,AKT1,MAPK1,PIK3CG,PTGS2,HSP90AA1等六个。在分子对接中,其主要活性成分与关键靶点对接结果能量均低于-5 kJ/mol。结论通过网络药理学和分子对接系统研究了柴胡-黄芩药对治疗鼻窦炎的潜在有效成分和作用机制,为今后进行深入机制研究提供了依据。     

丁香属植物的化学成分和药理作用研究进展

木樨科（（ｏｌｅａｃｅａｅ）丁香属（ｓｙｒｉｎｇａ）植物资源丰富,全世界约１９种,中国盛产１５种并且分布广泛。民间对丁香属的药用价值早有认识,其中 ６种该属植物的化学成分和药理活性的研究有文献报道,为了进一步开发丁香属植物资源,本文就其化学成分和药理作用的研究现状作一简单综述。１ 化学成分１.１苯丙素酚类 丁香属植物中含有多种以甙形势存在的苯丙素酚类化合物,这些化合物分别属于香豆素类、木脂素类、苯丙醇类和苯丙酸类,木脂素类成分主要属于简单木脂素类、含７－０－９’四氢呋喃环的单环氧木脂素类和双环氧木脂…     

风毛菊中木脂素苷结构确定和碳化学位移的取代位移效应规律

目的 研究风毛菊Saussurea japonica植物的化学成分，以及羟化和苷化位移效应规律。方法 利用普通硅胶柱层析和反相硅胶HPLC分离，纯化，并经超导核磁共振（NMR）和质谱（MS）等波谱技术确定其结构；通过与已报道类似物（Ⅰ，Ⅱ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅶ，X）碳谱数值比较，得到了双环氧木脂素类化合物C-1位被羟基取代的远程位移效应规律，以及双环氧木脂素和单环氧木脂素苷类化合物，其结构被确定为：（ ）-1-hydroxypinoresinol-4″-β-D-glu-copyranoside(Ⅵ），( )-lariciresinol-4-β-D-glucopyranoside(Ⅷ）和（ ）-l-lariciresinol-4′-β-D-glucopyranoside(ⅠX）；双环氧木脂素类的化合物C-1位被羟基取代的远程位移效应[△δ=δc1′（未取代）-δcl′（羟基取代）=-4.2]。双环氧木脂素和单环氧木脂素类酚羟基苷化位移效应规律为对位碳低场位移约△δ=3.0。结论 木脂素苷Ⅵ，Ⅷ和IX为首次从该属植物中药物；位移效应规律为以后两类天然木脂素结构的确定。尤其糖的连接位置的指定，提供了一定的判断依据。     

SHP-2抑制剂药效团模型的构建与应用

目的:构建并应用蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2抑制剂药效团模型。方法:应用Discovery Studio 3.5软件包中的基于分子共同特征Hip Hop和基于配体-受体晶体复合物CPB两种算法构建出SHP-2抑制剂药效团模型,应用Receiver-operating curve(ROC)分析方法对产生的药效团模型进行验证并对ZINC数据库进行筛选,最后应用Schrodinger Suite 2009中的Qikprop模块预测这些化合物的吸收、分布、代谢、排泄的性质,并与已报道的部分化合物作比较。结果:应用Hip Hop和CPB两种算法分别构建了识别活性与非活性分子能力最强的药效团模型,并且通过这两个模型筛选出了35个具有潜在SHP-2抑制活性的化合物,通过ADME预测得出设计出的化合物具有较好的ADME性质。结论:该两种药效团模型可以用于后续SHP-2小分子药物的筛选和优化,且采用两种药效团联合筛选的方法为计算机辅助药物设计提供了一个新的思路。     

珠子草细胞悬浮培养液中的木脂素类成分

大戟科植物珠子草Phyllanthus niruri L．为印度尼西亚的药用植物，广泛分布于中美洲、南美洲及亚洲的热带和亚热带地区，在传统医药中用于治疗黄疸、哮喘、肝炎和疟疾。已知珠子草的地上部分含有生物碱类、黄酮类、酚类、香豆素类、鞣质、萜类和木脂素等多种化学成分，其中对木脂素类研究最多，迄今已发现17种不同的木脂素，有些具有细胞毒等生物活性。作者为研究珠子草中木脂素类的产生和生物合成情况，制备了珠子草各部位（包括愈伤组织、地上部分、根、种子）的细胞悬浮培养液，并用GC—MS比较了它们木脂素类化合物的概况。结果显示，不同部位的细胞悬浮培养液中木脂素类化合物的数量和种类存在显著差异。另外，从细胞悬浮培养液中分离出2个木脂素类化合物荜澄茄素二甲醚（cubebin dimethyl ether，1）和urinatetralin（2），其中化合物2为首次从珠子草中分得，化合物1为新的木脂素。     

基于数据挖掘的全国名中医范永升教授治疗结缔组织病相关间质性肺病用药规律探析

[目的]基于中医传承辅助平台,探讨范永升教授治疗结缔组织病相关间质性肺病(connective tissue disease-related interstitial lung disease,CTDILD)的用药规律。[方法]采用数据挖掘方法,分析范永升教授治疗CTD-ILD的药物频次规律及组方规律等,提炼范永升教授治疗CTD-ILD的用药经验。[结果]范永升教授治疗合并间质性肺病的结缔组织病包括系统性红斑狼疮、干燥综合征、硬皮病、皮肌炎、混合性结缔组织病等,临证多以化湿、通络、清热、宣肺、益气阴等为基本治法。本研究总结分析了治疗CTD-ILD的201首方剂,共应用中药166味。其中,应用温药、寒药、甘味药和苦味药较多。使用频次在100以上的中药有5味,分别是茯苓、白术、桔梗、白芍、甘草。常用组合有白术和茯苓,白芍和茯苓,白术和白芍,白术、茯苓和白芍,黄芪、白术和茯苓等。两味中药组合支持度大于50%,置信度大于80%有3对,分别是桂枝与黄芪、桂枝与白芍、桂枝与茯苓。三味中药组合支持度大于50%,置信度大于80%且位于前3位的分别是白术、桂枝对茯苓;桂枝、茯苓对黄芪;桂枝、茯苓对白术。[结论]范永升教授治疗CTD-ILD临床经验丰富,常甘温与苦寒药物并用,同时注重调肺、顾护脾胃,兼以理气。     

Rho激酶在乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤细胞凋亡中的作用

摘要：目的观察Rho激酶在培养乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤细胞凋亡中的作用，及Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔（fasudil,F）对缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响。方法原代培养出生1～2d的SD乳鼠心肌细胞，并行肌钙蛋白抗体免疫荧光染色鉴定，建立缺血再灌注损伤（I/R）模型。实验分3组：① 正常对照组；② I/R组;③ I/R+F组：建立I/R模型前20min 加入法舒地尔，使其终浓度分别为10μmol/L（F1组）、30μmol/L（F2组）、50μmol/L（F3组）。Western blot分别检测缺血2h,再灌注3h肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1（myosin phosphatase target subunit 1，MYPT1）磷酸化水平，作为Rho激酶功能活化的标志。应用流式细胞仪Annexin-V/PI双色法检测再灌注3、6h时点心肌细胞的凋亡率。结果再灌注3h后MYPT1的磷酸化水平明显增加，I/R组为正常对照组的 5.7倍(P＜0.01)，F1、F2、F3组法舒地尔干预后较I/R组分别减少24.6%、40.1%、60.1%（P＜0.05）；法舒地尔组再灌注3、6h心肌细胞的凋亡率较I/R组同时间点显著下降，随给药浓度的增加，细胞凋亡率呈下降趋势。结论Rho激酶在缺血再灌注心肌细胞中有促凋亡作用，法舒地尔可减少缺血再灌注心肌细胞凋亡的发生，从而发挥良好的心肌保护作用。     

莲子心新碱对肠系膜血管平滑肌收缩的抑制作用及分子机制

目的?研究莲子心新碱（Neo）对小鼠肠系膜血管及血管平滑肌细胞（VSMCs）收缩的抑制作用；并通过观察其对肌球蛋白轻链（MLC₂₀）磷酸化和RhoA相关蛋白激酶（ROCK1）表达的影响，初步探讨引起该抑制的作用机制。方法?采用离体微血管张力测定仪观察高钾溶液（KCl）对经Neo预处理后肠系膜血管收缩的影响，并通过Urea/glycerol-PAGE法检测其MLC₂₀磷酸化水平的变化。同时，利用成像分析技术考察高钾溶液对经Neo预处理后VSMCs收缩的影响，并通过细胞免疫荧光法测定VSMCs中ROCK1蛋白的表达水平。结果?经Neo预处理后的肠系膜血管能明显抑制高钾溶液引起的收缩，其IC₅₀值为6.019?μmol/L；且可阻断高钾溶液产生MLC₂₀磷酸化。另外，与模型组（KCl）VSMCs的长度（40.94±1.94）μm相比，药物组（Neo+KCl）VSMCs的长度（44.95±5.15）μm显著延长（P＜0.01），其ROCK1蛋白的表达也明显下降。结论?Neo对肠系膜血管平滑肌收缩具有明显的抑制作用，其作用机制可能与阻断平滑肌MLC₂₀磷酸化和下调其ROCK1蛋白表达有关。      

3种樟属植物茎皮非极性成分的GC-MS分析

目的：首次对缅甸产樟属两种植物Cinnamomum multiflorum,C.bejolghota（钝叶桂）茎皮中的非极性成分进行定性及定量研究,并与中药肉桂（C.cassis）进行比较。方法：使用GC/MS法,对这3种植物的乙醚提取物进行定性、定量分析,根据IR及MS图谱对所含化合物进行鉴别,根据峰面积计算化合物的相对含量。结果：在鉴定的62个化合物中,C.multiflorum的主要成分为单萜及其衍生物（53.18%）,其中桂皮醛的含量（29.57%）甚至高于肉桂（22.36%）。C.bejolghota的主要成分为倍半萜及其衍生物（58.18%）,其中丁香酚含量为三者最高。结论：首次明确了C.multiflorum与C.bejolghota的挥发性、半挥发性成分的化学组成,提示C.multiflorum、C.bejolghota可作为肉桂的代用品。本研究结果同时还为该属植物的化学分类提供了参考。     

柱前衍生法测定氨基酸含量试验中AccQ．Flour衍生试剂用量研究

目的：探索不同浓度氨基酸标准溶液的最佳衍生试剂用量。方法：通过取20μl衍生试剂所能衍生的氨基酸标准液的最高浓度样品,依次减少衍生试剂用量,根据数理统计学分析,比较各组峰面积与标准20μl所得峰面积有无显著性差异,探索各浓度范围的氨基酸标准溶液所需的最佳衍生试剂用量。结果：在浓度为0．75μmol／ml的氨基酸标准溶液中,加入17μl衍生试剂所得峰面积与标准20m相比,无显著性差异;在浓度为0．5μmol／ml的氨基酸标准溶液中,加入15斗l衍生试剂所得峰面积与标准20μl相比,无显著性差异。结论：当氨基酸浓度≤0．5μmol／ml时,衍生试剂用量为15灿l即可充分衍生;对于浓度≤0．75μmol／ml的氨基酸标准溶液,17μl衍生试剂为最佳用量。     

运用计算模拟技术揭示黄芩素抗HIV的新机制

【目的】运用计算模拟技术,在分子水平揭示黄芩素抗HIV的新机制。【方法】基于药效团和分子对接等数据库搜索方法对抗HIV中药化学成分数据库进行虚拟筛选,得到潜在的抗HIV-1活性化合物;然后,利用分子对接技术得到抑制剂与靶蛋白的最佳结合模式,并从分子水平揭示其作用机制。【结果】虚拟筛选证实黄芩素是HIV-1逆转录酶和整合酶的抑制剂,分子对接显示其作用于HIV-1逆转录酶的核糖核酸酶H区域和整合酶的疏水区域。【结论】黄芩素是一个具有二价金属离子作用机制的、针对HIV-1核糖核酸酶H和整合酶的双重抑制剂。     

从远志中分离鉴定出1种多巴胺受体活性化合物

目的从中药远志中提取脑内多巴胺(DA)受体活性化合物。方法用体外的放射配体-受体结合和高压液相法提取、分离、纯化DA受体活性化合物,用核磁共振和质谱仪确定活性化合物的结构。结果提取、分离到1种四氢非洲防己胺的活性化合物。其在体外可抑制3H-SCH23390(DA1受体亚型)和3H-螺呱隆(DA2受体亚型)与大鼠纹状体细胞膜的结合,其IC50值分别为(0.75±0.08)μmol/L和(0.92±0.10)μmol/L。这种活性化合物还能抑制3H-呱唑嗪和大鼠大脑膜α1-肾上腺素受体的结合(IC50值为46μmol/L),但是不能改变3H-QNB及3H-muscimol对膜的结合。Scatchardplot分析显示此化合物对3H-SCH23390和3H-螺呱隆与纹状体细胞膜的结合的抑制作用是通过竞争性与非竞争性混合机制而实现的。结论远志中提取到的四氢非洲防己胺是脑内多巴胺受体的活性化合物,它的抑制作用是通过竞争性与非竞争性混合机制而实现的。     

人骨髓间质干细胞向脂肪细胞诱导分化过程中端粒酶活性的变化

目的观察体外培养人骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成脂分化过程中端粒酶活性的变化规律,并探讨其可能的机制。方法通过贴壁培养法从人骨髓中分离MSCs,利用造血干细胞相关表面抗体对MSCs进行表型鉴定,利用相应诱导分化剂,诱导MSCs向成骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞分化,分析其多向分化潜能。以端粒重复序列扩增法(TRAP)检测MSCs及MSCs诱导成脂分化过程中端粒酶活性;以Western印迹法检测MSCs及MSCs诱导成脂分化过程中端粒酶反转录酶(hTERT)及端粒相关蛋白[端粒重复序列结合因子1(TRF1)、端锚聚合酶1(Tankyrase 1)]的表达水平。结果 TRAP法检测传代培养的MSCs端粒酶呈阴性表达,而MSCs诱导成脂分化过程中,端粒酶活性明显升高,以第7天最高(P<0.05),其后呈下降趋势;Western印迹法检测显示,hTERT在MSCs中有微弱表达,在MSCs诱导成脂分化过程中,hTERT和Tankyrase 1表达水平升高,以第7天最高,此后逐渐下降,而TRF1表达水平保持不变。结论体外培养的MSCs端粒酶呈微弱表达,MSCs在成脂诱导分化过程中,端粒酶活性先升高,其后逐渐下降,而Tankyrase 1可能在其中发挥重要作用。