应用PCR技术及ELISA法检测HBV的结果分析

本文报道用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）及聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测６４６例似肝火患者血清乙肝病毒标志物（ＨＢＶ－Ｍ）－乙肝二对半及乙肝病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ－ＤＮＡ）的分析结果。用ＥＬＩＳＡ法检出ＨＢｓＡｇ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋）及ＨＢｅＡｇ（＋）ＨＢｃＡｂ（＋）这两种模式ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）检出率分别高达９５．６％（４４／４６）及９１．１％（１２３／１３５），在虽然有ＨＢｓＡｇ（＋）出现，无（或     

HBV DNA在HBsAg阴性的原发性胆管细胞性肝癌石蜡包埋肝组织中的检出

对２４例酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）ＨＢｓＡｇ阴性的原发性胆管细胞性肝癌的石蜡包埋肝组织，应用ＰＣＲ－ＥＢ法检测了乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，并与ＥＬＩＳＡ法检测的血清免疫学标志物（乙肝５项：ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ）结果进行对比。结果显示血清学乙肝５项均阴性的及ＨＢｓＡｇ阴性但其它４项中至少有１项阳性的胆管细胞性肝癌石蜡包埋肝组织中，ＨＢＶＤＮＡ阳性检出率分别为３８．９％和４５．８％，证实ＨＢｓＡｇ血清学阴性者肝组织中仍有ＨＢＶＤＮＡ存在     

用聚合酶链反应检测乙肝患者血清中的HBV－DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了１１４例传染科门诊病人血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与ＨＢＶ有关的血清学标志（ＨＢＶＭ）进行了比较。结果表明：在９２和ＪＨＢｓＡｇ（＋）病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者５０例，占５４．３４％；在２８例ＨＢｅＡｇ（＋）病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者２６例，占９２．８６％；在２０例ＨＢＶＭ均为阴性的病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者有６例，占３０．００％。证明ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ较用ＥＬＩＳＡ法检测抗原一抗体更加灵敏、可靠。     

PCR法检测HBVDNA及其与乙肝病毒标志物关系探讨

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测２５６例乙型肝炎患者血清中乙肝病毒ＤＮＡ （ＨＢ－ＶＤＮＡ），同时用ＥＬＩＳＡ法检测乙肝病毒标志物，即ＨＢｓＡｇ，抗－ＨＢｓ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ，结果表明ＨＢＶＤＮＡ的检出率与肝病临床类型无明显关系，而与乙肝病毒标志物的存在状态有关。乙肝五项病毒标志物不同组合状态，血清ＨＢＶＤＮＡ检出率不同，以ＨＢｓＡｇ（＋），抗－ＨＢｃ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋）的组合形式检出率     

乙型病毒性肝炎的基因诊断

对１２０例乙肝病毒（ＨＢＶ）感染者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ用ＰＣＲ技术进行检测，结果表明，ＰＣＲ法的敏感性阳性检出率７５．８％，明显高于ＥＬＩＳＡ法（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢＣＡｂ）的阳性率分别为６１％、３８％和６２％）；ＰＣＲ检测ＨＢｓＡｇ和ＨＢＡｂ一血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率分别为２６％、５２％和２４％，ＰＣＲ检测三者均为阳性血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率为１００％慢性迁延肝炎、慢性活动性肝炎     

应用聚合酶链反应检测HBV—DNA的临床价值

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＥＬＩＳＡ法对５３０例乙肝患者（含１１８例病毒携带者）血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ和乙肝病毒标志物进行检测，ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率分别为１）ＨＢｓＡｇ“＋”、ＨＢｅＡｇ“＋”和抗－ＨＢｃ“＋”组为９６．８５％；２）ＨＢｓＡｇ“＋”、抗－ＨＢｅ“＋”和抗－ＨＢｃ“＋”组为４４．１２％；３）ＨＢｓＡｇ“＋”和抗－ＨＢｃ“＋”组为３５．８９％；４）ＨＢＶ标志物均阴性为１３．１１％；５）     

HBV DNA在HBsAg阴怀的原发性胆管细胞性肝癌石蜡包埋肝…

对２４例酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）ＨＢｓＡｇ阴性的生胆管细胞肝癌的石蜡包埋肝组织，ＰＣＲ－ＥＢ法检测了乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，并与ＥＬＩＳＡ法检测的血表免疫学标志物（乙肝５项；ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ抗０－ＨＢｅ、抗－０ＨＢｃ）结果进行对比。结果显示血肖学乙肝５项均阴性的及ＨＢｓＡｇ阴性但其它４项中至少有１项阳性的胆和细胞性肝癌石蜡包埋肝组织中，ＨＢＶＤＮＡ阳性检出率分别为３８     

晚期原发性肝癌患者血清PCR－HBV DNA的意义

目的：为进一步研究ＨＢＶ感染与原发性肝细胞癌的关系．方法：ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ，抗－ＨＢｃ和抗－ＨＢｓ；ＰＣＲ检测血清ＨＢＶＤＮＡ．结果：３７例晚期原发性肝癌患者血清ＨＢ－ｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ和抗－ＨＢｃ阳性者分别为１７例（４５．９５％），４例（１０．８１％），１６例（４３．２４％）和９例（２４．３２％），而抗－ＨＢｓ全部阴性．聚合酶链式反应检测ＨＢＶＤＮＡ，１８例（４８．６９％）阳性，非常显著地高于ＨＢｅＡｇ检出率（Ｐ＜０．０１）．抗－ＨＢｅ阳性中有７例ＰＣＲ－ＨＢＶＤＮＡ阳性．ＨＢＶ总感染率８９．１９％．结论：提示原发性肝癌发生与ＨＢＶ感染有关．     

350例病毒性肝炎患者检测HBV-DNA与HBV血清学标志物相关性研究

采用ＰＣＲ技术对３５０例各型病毒性肝炎进行检测，旨在研究血清ＨＢＶ－ＤＮＡ与血清ＨＢＶ－Ｍ之间的相关性，以确定ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的临床意义。并以ＨＢＶ－ＤＮＡ为依据进一步考察ＨＢＶ－Ｍ的临床价值。结果显示：在ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）病例中ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）者１０２例（９０．２７％），说明ＨＢｅＡｇ基本可反应病毒处于复制状态；在１３７例ＨＢｅＡｇ（－）／抗－ＨＢｅ（＋）中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）为６８例（４９．６３％），表明病毒活动并未终止；在抗－ＨＢｓ（＋）１４例中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）２例（１４．２９％），说明抗－ＨＢｓ出现后仍然可有ＨＢＶ复制；在ＨＢＶ－Ｍ均阴性的８５例中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）２３例（２７．０６％），说明不能单纯依靠ＨＢＶ－Ｍ检测来诊断乙肝，需定期查ＨＢＶ－ＤＮＡ或肝活体组织检查ＨＢＶ－ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ及ＨＢｃＡｇ。     

乙型肝炎病毒血清学标记物与PCR HBV-DNA检测结果的比较

对３０９例乙型肝炎病毒血清学标记物１５种阳性形式进行ＰＣＲＨＢＶ－ＤＮＡ检测比较,ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）形式的ＰＣＲ阳性率９５．２％;ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）形式的ＰＣＲ阳性率８３．３％。抗－ＨＢｓ（＋）、抗－ＨＢ     

HBV-DNA、HBVpreS1-Ag、HBeAg之间的相关性分析与临床意义

目的为了观察HBV-DNA、HBVpreS1-Ag、HBeAg之间的相关性与临床意义。方法对120例HBV感染者采用ELISA法检测HBVpreS1-Ag与HBeAg,PCR法检测HBV-DNA。结果84例HBV-DNA阳性患者中,PreS1-Ag与HbeAg的阳性率分别为83.33%(70/84)和79.76%(67/84),二者无显著差异(P>0.05);48例HBeAg阴性患者HBV-DNA和HBVpreS1-Ag的阳性率分别为35.42%(17/48)和31.25%(15/48),明显低于阳性患者(P<0.05)。结论HBV-DNA、HBVpreS1-Ag与HBeAg之间有密切的相关性,联合监测对更好的早期诊断HBV感染,了解病毒的复制情况,疗效观察和预后判断具有极其重要的意义。     

荧光定量PCR检测HBV DNA及其与Pre-S1和HBeAg关系探讨

目的探讨慢性乙肝患者HBVDNA与血清标志物前S1抗原(Pre-S1)和HBeAg的相互关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术(FluorescencequantitativePCR,FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对931份HBV-M不同阳性模式及35份HBV-M全阴模式血清进行HBVDNA及其标志物检测。结果在931例不同阳性模式乙肝患者中,HBeAg阳性总检出率为20.7%,Pre-S1抗原阳性总检出率为30.2%,HBVDNA阳性总检出率为45.3%。在422例HBVDNA(+)乙肝患者中,Pre-S1抗原阳性检出率为57.3%,HBeAg阳性检出率为44.1%。在281例Pre-S1(+)乙肝患者中,HBVDNA阳性符合率达86.1%,在Pre-S1(-)组HBVDNA阳性率仅为27.7%。结论HBVDNA检测是反映HBV复制最直接的分子生物学指标;Pre-S1抗原和HBeAg是反映HBV复制的血清学指标,Pre-S1抗原甚至比HBeAg更灵敏地反映HBV复制。     

乙型肝炎病毒基因定量检测及临床应用

目的：了解乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒基因(HBVDNA)水平与乙型肝炎病毒(HBV)感染的临床关系及HBVDNA定量分析在拉米夫定治疗中的应用；方法：用聚合酶链反应(PCR)技术测定109例HBV感染者血清中HBVDNA水平及观察35例乙型肝炎患者拉米夫定治疗效果；结果：109例HBV感染者血清中HBVDNA水平与乙型肝炎病毒五项指标(HBV—M)的阳性模式有一定相关性，在HBsAg、HBeAg阳性模式中约有93％以上病例HBVDNA阳性，其含量最高，而在HBsAg，抗—HBe，抗—HBc阳性模式中其HBVDNA阳性检出率仅为67．7％，其含量不高。HBVDNA水平与乙型肝炎临床分型的相关性不显著(P＞0．05)。拉米夫定治疗前后血清HBVDNA含量有显著性差别(P＜0．01)；结论：应用PCR技术定量检测血清HBVDNA含量是诊断乙型肝炎和了解病毒复制与临床关系的重要指标，是指导乙型肝炎抗病毒治疗的重要手段。     

乙型肝炎患者治疗后血清中e抗原与病毒DNA水平的关系

目的 通过对乙型肝炎病毒血清学标志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBcIgG)的检测及内标、外标两种聚合酶链反应(PCR)方法 检测乙型肝炎病毒载量的比对,更好地了解人体内乙型肝炎病毒携带情况,指导临床诊治.方法对经治疗后丙氨酸氨基转移酶(ALT)/天冬氨酸氨基转移酶(AST)正常、COBAS AMPLICOR定量PCR(内标法)检测不到乙肝病毒DNA(HBV-DNA)、用Abbott AxSYM微粒子酶免分析法(MEIA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性、表面抗体(抗-HBs)阴性、e抗原(HBeAg)阳性(HBeAg＞4 S/CO)、抗-HBe阴性、抗-HBcIgG阳性的42例血清,再用上海复星长征医学科学有限公司提供的HBV-PCR外标法荧光定量检测试剂盒,Light Cycler实时荧光定量PCR仪检测.结果 42例ALT/AST正常,HBeAg阳性(HBeAg＞4 S/CO以上),HBeAg的平均值42.26 S/CO.COBAS AMPLICOR定量PCR(内标法)未检测到HBV-DNA(＜300拷贝/ml)的血清;用Light Cycler定量PCR仪(外标法)检测HBV-DNA,有7例为阳性,7例HBV-DNA的平均含量3.1×105拷贝/ml,,阳性率17%.结论 乙型肝炎病毒e抗原阳性并不说明体内病毒复制一定活跃.经治疗后,病毒复制下降,部分患者e抗原仍阳性,e抗原何时消失有待进一步研究.血清学标志与HBV复制状态存在不一致性,兼顾内、外标两种PCR方法检测HBV-DNA更客观.     

酶联免疫吸附和胶体金与荧光定量PCR技术在乙肝病毒检测中的应用

目的探讨酶联免疫吸附(ELSIA)、胶体金与荧光定量PCR检测方法在乙肝病毒检测中的应用价值。方法采用ELSIA分析法及快速胶体金方法分别对标准品血清、阴阳性对照血清及43份随机抽样血清进行乙肝两对半检测;对乙肝两对半中不同项目阳性的68份血清标本做荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,并将检测结果进行对比分析。结果ELSIA、胶体金两种方法检测结果比较,HBsAg、HBsAb阳性符合率达90.2%,HBeAg阳性符合率达到100%,HBeAb、HBcAb阳性符合率分别为80.1%、77.8%。HBsAg、HBeAg及HBcAb均阳性者荧光定量PCR阳性率达93.33%。结论ELSIA方法具有较好的灵敏度、特异性。胶体金检测方法可以避免Hock效应所致的假阴性结果,可作为急诊筛查检测方法。HBeAg阳性与HBVDNA阳性吻合度最高,是判定病毒复制与传染性的可靠指标。     

PCR法检测HBVDNA及其与乙肝病毒标志物关系探讨

采用聚合酶链反应 (PCR)法检测 2 56例乙型肝炎患者血清中乙肝病毒 DNA(HBVDNA) ,同时用 EL ISA法检测乙肝病毒标志物 ,即 HBs Ag,抗 - HBs、抗 - HBc、HBe Ag、抗 -HBe。结果表明 HBVDNA的检出率与肝病临床类型无明显关系 ,而与乙肝病毒标志物的存在状态有关。乙肝五项病毒标志物不同组合状态 ,血清 HBVDNA检出率不同 ,以 HBs Ag(+)、抗 - HBc(+)、HBe Ag(+)的组合形式检出率最高 (94 .34% ) ,乙肝病毒标志物中出现抗体及乙肝病毒标志物全阴者仍有 HBVDNA检出     

PCR检测HBVDNA对HBsAg无症状携带者传染性的监测

用多聚酶链反应和斑点杂交技术检测了５０例ＨＢｓＡｇ无症状携带者血清中ＨＢＶＤＮＡ，检出率分别为５０％（２５／５０）和５８％（２９／５０）。抗－ＨＢｃ、抗－ＨＢｅ和ＨＢｅＡｇ阳性者ＨＢＶＤＮＡ的检出率高于阴性者。单，ＮＨＢｓＡｇ阳性无症状携带者ＨＢＶＤＮＡ在血中呈不同程度地波动，其排毒情况无明显规律可循。     

HBsAg阳性人群乙肝病毒前S1抗原检测的临床意义

目的：探讨乙型肝炎病毒前S1抗原与血清乙肝病毒两对半、HBVDNA的相互关系，了解乙肝病毒感染者血清Pre-S1Ag的临床意义。方法：双抗体夹心ELISA法测定血清Pre-S1Ag，EIA法检测血清乙肝病毒两对半，荧光定量PCR检测血清乙肝病毒DNA。结果：1122例HBsAg阳性人群中，Pre-S1Ag阳性率为50.1％。114例HBVDNA阳性血清，Pre-S1Ag阳性率为78.1％，HBVDNA阴性人群，Pre-S1Ag阳性率15.7％(8/51)；HBeAg阳性人群Pre-S1Ag阳性率为82.2％，HBeAg阴性人群Pre-S1Ag阳性率为35.7％；抗-HBe阳性人群Pre-S1Ag阳性率为31.6％。172例乙肝“两对半”阴性人群Pre-S1Ag阳性率为1.74％。结论：血清Pre-S1Ag与HBVDNA、HBeAg相互关联，可以作为HBV存在和复制的标志。联合检测Pre-S1Ag和HBeAg可相互补充、印证，对判断乙肝病毒的复制和存在更有价值。血清Pre-s1Ag测定还是乙肝患者疗效评估和预后判断的可靠指标。     

乙型病毒性肝炎患者前S1抗原检测的意义

目的:探讨乙型肝炎病毒前S1抗原在临床上的应用价值。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶链反应(PCR)方法,对306例乙型病毒性肝炎(以下简称乙肝)患者和50例健康人分别检测HBV标志、preS1抗原和乙肝病毒-脱氧核糖核酸(HBV-DNA)。结果:306例乙型肝炎患者preS1抗原和HBV-DNA的检出率分别为53.6%和58.8%;preS1-Ag在HBeAg阳性组和HBeAg阴性组中的阳性率分别为90.9%、29.2%,HBV-DNA在HBeAg阳性组和HBeAg阴性组中的阳性率分别为95.9%、34.6%,以HBV-DNA测定结果为判断标准,则preS1-Ag的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值及符合率分别为87.8%、95.2%、96.3%、84.5%和90.8%;HBV-DNA检出率稍高于PreS1-Ag的检出率,但两者的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:乙肝病毒PreS1抗原与HBeAg阳性、HBV-DNA阳性呈高度相关,PreS1-Ag可与HBeAg、HBV-DNA同时作为HBV存在复制和传染性的重要检测指标,值得临床实验室推广应用。     

PCR 法检测 HBV DNA 及其与乙肝病毒标志物关系

目的：了解乙型肝炎患者血清中乙肝病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）的检出情况，探讨其与乙肝病毒标志物的关系。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测２５６例乙型肝炎患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，同时用ＥＬＩＳＡ法检测乙肝病毒五项标志物，即ＨＢｓＡｇ、抗 ＨＢｓ、抗 ＨＢｃ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｅ。结果：ＨＢＶＤＮＡ的检出率在肝炎患者各临床类型之间无明显差异，而在乙肝病毒五项标志物不同组合存在状态之间有差异，以伴有ＨＢｅＡｇ（＋）的组合形式即ＨＢｓＡｇ（＋），抗 ＨＢｃ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋）者、ＨＢＶＤＮＡ检出率最高（９４３４％），乙肝病毒五项标志物中出现抗体及其五项全阴者仍有ＨＢＶＤＮＡ检出。结论：ＨＢｅＡｇ确是ＨＢＶ活动性复制的重要标志，但仅靠乙肝病毒五项标志物的检测来判定ＨＢＶ的复制是不够准确的，同时用ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ能更准确反映体内ＨＢＶ复制情况。