寿胎丸对大鼠卵巢移植术后各级卵泡及黄体的影响

目的:观察寿胎丸对大鼠卵巢移植术后各级卵泡及黄体的影响。方法:将210只Wistar雌性大鼠随机分为7组,每组30只,即自体移植模型组、自体移植+寿胎丸组、异体移植模型组、异体移植+寿胎丸组、异体移植+环孢A(CsA)组、异体移植+CsA+寿胎丸组和正常对照组。各组大鼠于移植术后7、14、21、28、35天分批处死,每次6只。取左侧卵巢,HE染色,光镜下计数整张切片中的各级卵泡和黄体数量。结果:移植后7天,异体移植+寿胎丸组的原始卵泡数比异体移植模型组多(P0.05),异体移植+CsA+寿胎丸组的原始卵泡数、初级卵泡数、次级卵泡数与黄体数在移植后多个时点均比异体移植模型组多(P0.05)。结论:寿胎丸有抗异体卵巢移植排斥反应的作用。     

寿胎丸调控大鼠卵巢移植急性排斥期细胞凋亡的研究

目的:建立SD大鼠和Wistar大鼠同种异体卵巢皮下游离移植模型,并以Wistar大鼠自体卵巢皮下游离移植模型作为对照组,以补肾安胎中药复方“寿胎丸”进行干预,观察移植模型卵巢凋亡指数的变化,探讨“寿胎丸”抗卵巢移植急性排斥反应的机理.方法:210只Wistar雌性大鼠随机分为7组,即自体移植模型组、自体移植+寿胎丸组、异体移植模型组、异体移植+寿胎丸组、异体移植+CsA组、异体移植+CsA+寿胎丸组和正常对照组.各组于移植术后第7、14、21、28、35天分批处死大鼠各6只.取左侧卵巢,用多聚甲醛保存,石蜡包埋切片,TUNEL法检测移植卵巢内的细胞凋亡数.结果:异体移植模型组的凋亡细胞数多于自体移植模型组(P＜0.05);异体移植+寿胎丸组、异体移植+CsA组、异体移植+CsA+寿胎丸组的凋亡细胞均少于异体移植模型组(P＜0.05).结论:细胞凋亡与排斥反应相关,寿胎丸与CsA均能抑制急性排斥反应中卵巢细胞的凋亡,但CsA作用更明显.     

寿胎丸对大鼠卵巢移植术后体质量及E2分泌的影响

目的:建立SD大鼠和Wistar大鼠同种异体卵巢皮下游离移植模型,并以Wistar大鼠自体卵巢皮下游离移植模型作为对照组,以补肾安胎中药复方寿胎丸进行干预,观察移植模型体质量及雌二醇(E2)的水平,探讨寿胎丸抗卵巢移植急性排斥反应的机制.方法:将210只Wistar雌性大鼠随机分为自体移植模型组、自体移植+寿胎丸组、异体移植模型组、异体移植+寿胎丸组、异体移植+ CsA组、异体移植+CsA+寿胎丸组和正常对照组7组.移植术前1日及移植术后第7,14,21,28,35天时测量各组大鼠的体质量.移植术前1天眼眶后静脉丛取血测血清E2,移植术后取3次血(第6 ～15天、第16～25天以及第26～35天),根据阴道涂片,选动情第1天取血测血清E2.结果:在移植后第14天,自体移植模型组大鼠体质量与异体移植模型组、异体移植+寿胎丸组、正常对照组对比,差别有统计学意义(P＜0.05),其余各组,在各时点对比,差别均无统计学意义(P＞0.05);移植术后异体移植模型组各时点的E2水平均较自体移植模型组低(P＜0.05);自体移植模型组和自体移植+寿胎丸组各时点的E2水平对比,差别均无统计学意义(P＞0.05);异体移植+ CsA组、异体移植+CsA+寿胎丸组的E2水平分别高于异体移植模型组、异体移植+寿胎丸组(P＜0.05).结论:寿胎丸不能提高自体移植卵巢成活率;寿胎丸有抗异体卵巢移植排斥反应的作用,但单用寿胎丸,抗排斥效果并不理想;在提高内分泌激素E2水平方面,寿胎丸与CsA有协同作用.     

内障丸对青春期PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2及Bax的影响

目的：探讨内障丸对青春期PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2及Bax表达的影响。方法：以23日龄幼年SD清洁雌性大鼠为研究对象,应用皮下埋植左炔诺孕酮硅胶棒联合皮下注射HCG法建立青春期PCOS动物模型,运用免疫组织化学SABC方法及光、电镜技术等方法,检测大鼠造模前后及给药前后卵巢颗粒细胞Bcl-2,Bax的表达情况。结果：造模后模型组颗粒细胞Bcl一2,Bax,Bcl-2／Bax表达水平与正常对照组差异明显,运用阳性目标面密度进行比较,经治疗后内障丸高、中、低剂量组Bcl-2表达均强于Bax。其中高剂量组的表达与正常组接近。在对照组中,Bax表达较Bcl-2强。结论：内障丸可以抑制多囊卵巢大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及卵泡闭锁,而且可以使多囊卵巢大鼠卵泡闭锁时间提前,减轻卵巢多囊样改变,从而改善卵巢功能。     

补肾复方对初老大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2Bax表达的影响

目的：研究补肾复方对初老雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2，Bax表达的影响。方法：采用12月龄的Wistar雌性大鼠，随机分为模型对照组，补肾复方高、中、低剂量组，阳性对照组,另设4月龄青年对照组和18月龄老年对照组。采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（SABC）方法研究各组大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2，Bax蛋白表达的影响。结果：与青年组比较。初老组、老年组大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2表达明显降低（P〈0．05），Bax表达明显增高（P〈0．05）。Bcl—2／Bax比例降低：经药物干预后，补肾复方高、中、低剂量组及阳性对照组，均能上调Bcl-2表达（P〈0．05）。下调Bax表达（P〈0．05）。使Bcl-2／Bax比例增高；其中高剂量组的Bcl-2，Bax变化表达明显，达到青年组水平（P〉0．05）。结论：上调初老雌性大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2表达，下调Bax表达，可能是补肾复方延缓卵巢衰老的机制之     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮Bcl-2和Bax表达的影响

目的研究大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮Bcl-2和Bax表达的影响。方法选择Wistar大鼠50只，随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、大豆异黄酮高剂量组和大豆异黄酮低剂量组，每组10只，给药6周后处死大鼠，分离摘取阴道，常规石蜡包埋，切片进行HE染色及免疫纽化凋亡蛋白Bel-2和Bax的表达。结果大豆异黄酮能使去卵巢大鼠阴道的重量增加，上皮增厚，但作用弱于雌激素。模型组、阳性药物对照组、大豆异黄酮高剂量组、大豆异黄酮低剂量组Bcl-2的灰度值分别为57．692±4．49，116，847±9．95，101．345±5．87，109．56±9．11。Bax分别为168．049±11．43，106．49±9．58，121．34±15．78，119．82±20．89。结论大豆异黄酮可促进阴道上皮Bel—2蛋白表达，抑制Bax蛋白表达。     

眼针对急性脑梗塞大鼠细胞凋亡及Bcl-2、Bax的影响

目的 从细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达方面探讨眼针治疗急性脑缺血的作用机理。方法 用线栓法制成SD大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型，在阻塞2h，再灌注24h后，应用TUNEL法和免疫组织化学法分别对缺血对照组、缺血加眼针组、缺血加督脉电针组及假手术组大鼠脑组织凋亡细胞的分布及Bcl-2、Bax免疫反应阳性细胞进行观察。结果 眼针、督脉电针均可减少缺血所致DNA双链断裂(TUNEL阳性)，提高梗死周边区皮层Bcl-2／Bax的比值。结论 眼针、督脉电针对急性脑缺血的治疗作用可能通过抑制损伤而抑制细胞凋亡，从而保护脑神经细胞。     

寿胎丸对去势大鼠雌激素水平及骨形态计量学的影响

目的 观察寿胎丸对去势大鼠血清雌激素水平和骨形态计量学参数的影响。方法 84只雌性SD大鼠随机分为6组,除假手术组外,其余5组建立去势模型（均行双侧卵巢切除术）,寿胎丸高、中、低剂量组每天灌胃剂量分别为26.8,13.4,6.7 g·kg-1的药液,阳性对照药戊酸雌二醇组灌胃剂量为0.104 mg·kg-1的药液,假手术组与模型组予等量生理盐水灌胃。于术后12周处死动物,取静脉血检测血清雌二醇（E2）水平;获取右侧胫骨标本测定骨形态计量学参数。结果 与假手术组比较,模型组血清E2水平下降且差异具有统计学意义（P ＜0.05）;与模型组比较,寿胎丸高、中、低剂量组及戊酸雌二醇组血清E2水平均有明显升高（P ＜0.05）;寿胎丸高、中剂量组及戊酸雌二醇组血清E2水平与寿胎丸低剂量组比较差异均有统计学意义（P ＜0.05）。与假手术组及模型组比较,各给药组在骨矿化沉积率无明显变化（P \> 0.05）;与模型组比较,各给药组骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁密度、骨表面骨形成率、骨体积骨形成率升高,骨小梁分离度及破骨细胞数则降低,差异均有统计学意义（P ＜0.05）。血清E2水平与骨形态计量学中骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁密度骨小梁分离度、骨表面骨形成率、骨体积骨形成率、破骨细胞数明显相关（P ＜0.05）。结论 雌激素水平与绝经后骨质疏松骨组织的微观结构改变密切相关。寿胎丸中、高剂量可提高血清E2水平,改善骨组织微观结构、抑制骨结构退化、促进骨形成、抑制骨吸收。     

乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠上皮细胞凋亡和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的:观察乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠上皮细胞凋亡和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响,揭示该方治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法:以SD大鼠为研究对象,采用TNBS/乙醇灌肠诱导UC形成,通过乌梅丸灌胃给药,TUNEL法检测结肠上皮细胞的凋亡,免疫组化法检测结肠上皮Bcl-2、Bax表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠结肠上皮细胞凋亡显著增多,Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白的表达增强(P0.05);与模型组比较,乌梅丸大、中、小剂量组大鼠结肠上皮细胞凋亡明显减少,Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白的表达减弱(P0.05)。结论:乌梅丸可通过抑制结肠上皮细胞的过度凋亡对溃疡性结肠炎起治疗作用,其作用机制与调节Bcl-2和Bax基因表达密切相关。     

大黄水提物对成年雌性大鼠卵巢Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:观察长期灌胃大黄对成年雌性大鼠卵巢组织中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,分析大黄对卵巢功能的影响及与用药剂量和时间的关系。方法:雌性大鼠90只,随机分为正常对照组、大黄水提物1.0 g/kg给药30d、40d、50d、60d组和2.0 g/kg给药30d、40d、50d、60d组,灌胃给药,采用HE染色法观察卵巢组织病理变化,免疫组化法检测卵巢Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果:大黄水提物1.0 g/kg 60d组和2.0 g/kg 40d、50d、60d组Bcl-2表达显著低于正常对照组,Bax表达显著高于正常对照组;给药50d、60d、1.0 g/kg和2.0 g/kg剂量组相同给药时间比较Bcl-2、Bax表达差异具有统计学意义。相同给药剂量不同给药时间组比较:1.0 g/kg 30d与60d组Bcl-2、Bax表达差异具有统计学意义,2.0 g/kg 30d与50,60d组,40d与50、60d组比较Bcl-2、Bax表达差异具有统计学意义,其他各组Bcl-2、Bax表达差异无统计学意义。结论:长期应用大黄可不同程度地下调卵巢中Bcl-2表达,上调Bax表达,其影响程度与给药剂量及时间呈正相关,推测长期应用大黄可能会通过Bcl-2/Bax途径诱导卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能。     

益气强心饮对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因蛋白表达影响的实验研究

[目的]本实验旨在通过动物实验观测中药益气强心饮对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因蛋白表达的影响。[方法]采用腹主动脉缩窄法结合皮质激素造模法建立慢性心衰阳虚水泛证大鼠模型,随机分为模型组、西药对照组、中药对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、假手术组,用药8周后,观察各组大鼠的心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因蛋白表达。[结果]益气强心饮能明显下调慢性心衰大鼠心肌组织Bax基因蛋白表达、上调Bcl-2基因蛋白表达,疗效等同西药对照组。[结论]益气强心饮可调控慢性心衰大鼠的心肌细胞凋亡,具有治疗及延缓心衰发展等作用。     

姜黄素对肝纤维化大鼠肝组织Bcl-2及Bax表达的影响

目的:观察姜黄素对肝纤维化大鼠肝组织抑凋亡细胞(Bcl-2)、促凋亡细胞(Bax)的影响,探讨其抗肝纤维化的机理。方法:采用四氯化碳皮下注射加乙醇灌胃制备大鼠肝纤维化模型,用免疫组织化学方法(SABC)检测各组大鼠肝组织中Bcl-2、Bax的含量。结果:与模型组比较,姜黄素大、中剂量组肝组织纤维间隔中Bcl-2的表达明显下降(P<0.05),Bax的表达无明显改变(P>0.05),Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05)。结论:姜黄素可有效升高纤维间隔中Bax/Bcl-2比值,并能抑制肝星状细胞(HSC)活化增殖,诱导活化的HSC凋亡,具有治疗肝纤维化的作用。在一定有效剂量范围内,其抗肝纤维化作用强度与剂量无明显依赖性。     

复方蜥蜴散不同微粒组合剂对CAG模型大鼠细胞凋亡基因Bcl-2与Bax表达影响的实验研究

目的研究复方蜥蜴散不同微粒组合剂对慢性萎缩性胃炎(CAG)细胞凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,从分子生物学水平揭示其治疗CAG的机制及其效果。方法将90只SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,复方蜥蜴散大、中、小剂量组及维酶素组,除正常组外,均采取55℃热盐水、2%水杨酸、20mmol/L脱氧胆酸钠3个致萎缩因素配合饥饱失常造成CAG模型。分别运用复方蜥蜴散不同微粒组合剂大、中、小剂量及维酶素治疗,应用免疫组化法检测大鼠胃组织Bcl-2及Bax蛋白表达,光镜观察胃黏膜病理组织学变化。结果通过人工计数法对免疫组化结果分析各组大鼠细胞凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白的阳性表达率有显著差异(P<0.05)。通过图像分析系统对免疫组化图像光密度的测算,复方蜥蜴散不同微粒组合剂大、中、小剂量组细胞凋亡基因Bcl-2蛋白的阳性表达率显著低于模型组(P<0.01),复方蜥蜴散不同微粒组合剂大、中剂量组细胞凋亡基因Bcl-2蛋白的阳性表达率显著低于维酶素组(P<0.05)。复方蜥蜴散不同微粒组合剂大、中、小剂量组细胞凋亡基因Bax蛋白的阳性表达率显著高于模型组(P<0.05),复方蜥蜴散不同微粒组合剂大、中剂量组细胞凋亡基因Bax蛋白的阳性表达率显著高于维酶素组(P<0.05)。结论胃黏膜细胞凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白表达异常是CAG发生的重要因素之一,复方蜥蜴散不同微粒组合剂对胃黏膜的损害具有保护作用,且能降低Bcl-2蛋白的表达并且提高胃黏膜Bax蛋白表达,部分逆转胃黏膜病理变化,揭示了复方蜥蜴散不同微粒组合剂治疗CAG的作用机制。     

四神丸对实验性结肠炎结肠组织Bax/Bcl-2 mRNA, Fas/FasL的调控作用

目的:评价四神丸灌肠给药治疗实验性结肠炎疗效的同时,探讨其对结肠炎结肠黏膜Fas/FasL,Bax/Bcl-2 mRNA的调控作用.方法:三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)/乙醇法复制实验性结肠炎,实验动物随机分成正常组、模型组、四神丸高、中、低剂量组(10,5,2.5 g· kg-1)及柳氮磺吡啶(salicylazosulfapyridine,SASP,30 mg·kg-1)组,灌肠给药10d后,通过体重、结肠湿重、结肠质量指数、病理损伤评分及形态学分析评价其疗效,同时分别采用流式细胞术和RT-PCT技术检测大鼠结肠组织Fas/FasL水平和Bax/Bcl-2 mRNA表达.结果:与模型组比较,四神丸中剂量组可明显降低结肠湿重及结肠指数(P＜0.05),且3个剂量组均可明显降低病理损伤评分(P＜0.05),同时典型治疗组病理切片分析可见上皮修复,黏膜下纤维结缔组织增生,溃疡浅而小,少量淋巴滤泡增生和炎细胞浸润,而且3个剂量组均可显著降低Fas在结肠黏膜表达(P＜0.05),升高Bcl-2/Bax(P ＜0.05).结论:四神丸灌肠给药有效治疗溃疡性结肠炎的作用机制之一可能是通过调控结肠组织Fas/FasL,Bax/Bcl-2 mRNA表达,延缓结肠上皮细胞凋亡或促进炎细胞凋亡实现的.     

银杏叶提取物预处理对大鼠脑梗死后皮质Bax、Bcl-2表达的影响

目的 观察银杏叶提取物(GBE)预处理对大鼠脑梗死后皮质Bax、Bcl-2表达的影响.方法 大鼠随机分为假手术组,模型组以及GBE预处理组,线栓法制作永久性大脑中动脉闭塞模型.假手术组以及模型组手术前30min腹腔注射生理盐水0.4ml,GBE预处理组腹腔注射舒血宁35mg/kg.造模24h后取大脑皮质,TTC染色测定梗死体积,免疫荧光化学法测定Bax、Bcl-2的表达.结果 TTC染色测得的梗死体积百分比在GBE预处理组为(25.87±1.56)%,免疫荧光化学法测得Bax蛋白表达阳性细胞数为(13.79±1.95)个/视野,Bcl-2表达阳性细胞数为(52.68±4.35)个/视野,各指标与模型组差异显著.结论 GBE可有效减轻梗死体积,调节Bax/Bcl-2的表达可能是其发挥作用的机制之一.     

针刺对脑缺血后细胞凋亡相关基因Bcl-2Bax调节作用的研究

目的总结针刺对脑缺血后细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax的调节作用,探讨其效应特点。方法基于近10年的现代实验研究文献,简述Bcl-2、Bax基因与脑缺血后细胞凋亡的相关性,着重从整体特征、时效特点及不同针刺治疗方案的作用比较等三方面,就针刺对脑缺血后细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax的调节作用进行总结评述。结果针刺对Bcl-2、Bax基因的作用具有整体、双向性的调衡特征,能促进抗细胞凋亡基因Bcl-2蛋白的表达,抑制促细胞凋亡基因Bax蛋白的表达,增大Bcl-2/Bax比值,达到抗细胞凋亡的作用。结论针刺对Bcl-2、Bax基因的调节作用具有一定的时效特点,起效快,维持时间较长,介入治疗的最佳时机应在脑缺血早期。在总体效应基本趋同的基础上,不同的选穴组方或针刺方法,其调节作用又存在优劣程度的区别。     

烟酸对缺血/再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2和Fas表达的影响

目的研究大鼠心肌缺血/再灌注损伤时心肌凋亡以及烟酸的干预作用。方法采用结扎左冠状动脉前降支方法制备大鼠缺血/再灌注模型。健康Sprage-Dawley大鼠60只随机分成4组:正常对照组(A组,n=15),心肌缺血/再灌注组(B组,n=15),心肌缺血/再灌注+生理盐水组(C组,n=15),心肌缺血/再灌注+烟酸组(D组,n=15),心电图记录肢体Ⅱ导联ST段的变化。光镜和电镜检测大鼠心肌缺血再灌注损伤形态学凋亡,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。Western Blot方法和RT-PCR方法检测凋亡相关基因蛋白Bax,Bcl-2,Fas的表达。结果B组光镜和电镜可以发现心肌的凋亡,B组心肌凋亡率较A组有显著性差异(P0.05),Bax增高,Bcl-2下降,Bcl-2/Bax下降及Fas升高(P均0.01),C组各项指标与B组比较均无显著性差异。D组的各项指标较B组明显改善,心肌细胞凋亡减少,Bax下降,Bcl-2升高,Bcl-2/Bax升高及Fas下降。结论心肌再灌注损伤引起心肌细胞凋亡增多,Bax增高,Bcl-2下降及Bcl-2/Bax下降,Fas升高;烟酸能够减轻以上变化,说明烟酸对心肌缺血/再灌注损伤有保护作用。     

酸枣仁皂苷A对缺血再灌注损伤大鼠心律失常及Bcl-2、Bax表达的影响

目的 研究酸枣仁皂苷A对缺血再灌注损伤大鼠心律失常、心肌组织的保护及Bcl-2和Bax表达的影响.方法 将24只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和酸枣仁皂苷A组(20 mg·kg-1·d-1),采用结扎(15 min)和松开(30 min)左冠状动脉前降支的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型.记录再灌注过程中Ⅱ导联心电图,并对心律失常进行评分;常规HE染色观察心肌组织的病理改变;免疫印迹技术检测心肌组织中Bcl-2、Bax的表达.结果 模型组心肌组织病理损伤明显,有明显的心律失常,心肌Bcl-2表达显著降低,Bax表达显著升高.酸枣仁皂苷A干预后,心肌组织病理改变减轻,心律失常评分显著降低,心肌组织Bcl-2表达显著升高,Bax表达显著降低,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 酸枣仁皂苷A对缺血再灌注损伤大鼠心律失常具有保护作用,可抑制再灌注损伤后大鼠心肌组织Bcl-2降低和Bax表达的升高.     

芪蓝糖脂宁胶囊对糖尿病合并高脂血症大鼠肝细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨芪蓝糖脂宁胶囊治疗糖尿病合并高脂血症的作用机制.方法:采用高糖高脂饲料喂饲2个月,小剂量(30mg/kg)一次性腹腔注射2%链脲佐菌素的方法复制糖尿病合并高脂血症大鼠模型,造模成功后,灌胃给药,采用流式细胞仪观察芪蓝糖脂宁胶囊对糖尿病合并高脂血症大鼠肝细胞凋亡,及相关调控基因Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结果:模型组大鼠肝细胞凋亡率明显升高,Bax蛋白表达显著增强,Bcl-2蛋白表达显著减弱,芪蓝糖脂宁胶囊能显著降低肝细胞凋亡率,减弱Bax蛋白表达,增强Bcl-2蛋白表达.结论:芪蓝糖脂宁胶囊可通过调整Bax和Bcl-2的蛋白表达强度降低肝细胞凋亡率,为该药调节糖、脂代谢紊乱作用提供实验依据.