桑黄增强人外周血单个核细胞产生γ—干扰素的研究

目的 研究桑黄对人外周血单个核细胞（PMNCs)产生γ干扰素（IFN－γ）的影响作用。方法 体外分离PMNCs，与不同浓度的植物血凝素（PHA－M）和桑黄水提取液培养，检测IFN－γ生成量。结果 100μg/ml PHA-M对PMNCs生成IFN-γ的刺激效应最强；在此基础上，桑黄可进一步增强PMNCs产生IFN－γ，在0－200μg/ml范围内，随桑黄浓度升高而促进效应增强。结论 桑黄具有诱生IFN－γ的能力，有利于其发挥调节机体免疫力，抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

桑黄多糖抗肿瘤作用

目的:观察桑黄多糖对荷瘤小鼠的抑瘤效应并探讨其作用机理。方法:建立小鼠肝癌(H22)、肉瘤(S180)和肺癌(Lew-is)模型,测定桑黄多糖对小鼠肿瘤的抑制作用。通过对巨噬细胞(MΦ)功能和肿瘤坏死因子(TNF-α)的测定,探讨其对免疫功能的影响。结果:桑黄250、500、1000mg/kg 3个剂量组对S180、H22和Lew is肺癌均有明显的抑瘤作用,但无明显的量效关系;桑黄激活巨噬细胞的最小有效剂量为100μg/m l,桑黄还能促进小鼠巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子,100μg/m l桑黄组产生的肿瘤坏死因子是对照组的4倍。结论:桑黄对H22、S180和Lew is肺癌均表现出较好的抑瘤作用,激活巨噬细胞、增强其吞噬功能、诱导巨噬细胞产生和分泌肿瘤坏死因子是桑黄抗肿瘤作用的重要机制之一。     

十二指肠溃疡球部粘膜IL-18,IFN-γ水平变化及其临床意义

目的:探讨IL- 18,IFN- γ在十二指肠溃疡(DU)发生机制中的作用。方法:在洛赛克、克拉霉素、替硝唑一周三联疗法之前和之后4～6周从十二脂肠溃疡患者球部钳取粘膜组织,应用EL ISA法测定IL - 18,IFN-γ的含量。结果:三联疗法治疗前,DU患者球部粘膜IL- 18,IFN- γ的含量均显著高于对照组〔(12 7.76±18.75 ) pg/ ml,(78.2 9±10 .0 1) pg/ ml;(80 .4 1±10 .99) pg/ ml,(2 5 .6 1±7.38) pg/ ml,P<0 .0 1〕,且IL- 18,IFN- γ的含量呈正相关(r=0 .91,P<0 .0 1) ,治疗后IL-18,IFN-γ的含量均显著下降〔(73.34±9.74 ) pg/ ml,(2 3.88±5 .5 5 ) pg/ ml,P<0 .0 1)〕,且IL - 18,IFN-γ的含量也呈正相关(r=0 .92 ,P<0 .0 1)。结论:细胞因子IL- 18,IFN- γ可能在十二指肠溃疡发生机制中有重要作用。一周三联疗法治疗后,促炎细胞因子IL - 18,IFN-γ的分泌得到有效抑制,为粘膜修复重建创造有利环境。     

桑黄提取物的抗肿瘤作用研究

目的 研究桑黄提取物对小鼠S180实体瘤、H22肝癌和Lewis肺癌实体瘤的生长抑制作用,体外对人瘤细胞的直接抑制作用.方法 建立小鼠S180实体瘤、H22肝癌和Lewis肺癌实体瘤模型,观察桑黄提取物高(1000mg/kg)、中(500mg/kg)、低(250mg/kg)剂量组体内抑制肿瘤生长作用,MTT法检测桑黄提取物抑制人肿瘤细胞增殖的作用.结果 ①桑黄提取物高、中、低剂量对小鼠S180实体瘤的抑制作用分别为27.9%、75%、31.2%;对小鼠H22肝癌的抑制率分别为46%、63%、57%;对小鼠肺癌Lewis的抑制率分别为57.1%、54.5%、45.9%.②体外对人瘤细胞的抑制作用:桑黄提取物给药剂量(20 μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160 μg/ml)对人卵巢癌细胞(A2780)的抑制率分别为16.9%、18.5%、25.8%、31.5%;对人乳腺癌(MCF7)细胞的抑制率分别为19.9%、28.1%、32.25%、30.8%.结论 桑黄提取物各剂量组对小鼠H22、S180、Lewis实体型肿瘤的生长均有抑制作用,体外对人肿瘤细胞MCF7,OVCA278有直接杀伤作用.     

桑黄多糖抗肿瘤作用

目的：观察桑黄多糖对荷瘤小鼠的抑瘤效应并探讨其作用机理。方法：建立小鼠肝癌（H22）、肉瘤（S180）和肺癌（Lewis）模型，测定桑黄多糖对小鼠肿瘤的抑制作用。通过对巨噬细胞（MФ）功能和肿瘤坏死因子（TNF-α）的测定，探讨其对免疫功能的影响。结果：桑黄250、500、1000mg／kg3个剂量组对S180、H22和Lewis肺癌均有明显的抑瘤作用，但无明显的量效关系；桑黄激活巨噬细胞的最小有效刺量为100μg／ml，桑黄还能促进小鼠巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子，100μg／ml桑黄组产生的肿瘤坏死因子是对照组的4倍。结论：桑黄对H22、S180和Lewis肺癌均表现出较好的抑瘤作用，激活巨噬细胞、增强其吞噬功能、诱导巨噬细胞产生和分泌肿瘤坏死因子是桑黄抗肿瘤作用的重要机制之一。     

马兜铃酸对肾小管上皮细胞释放ET、Ang-Ⅱ的影响及甘草酸干预作用的实验研究

为探讨马兜铃酸 (AA)对体外培养的肾小管上皮细胞释放内皮素 (ET)、血管紧张素(Ang II)的影响 ,以及甘草酸的干预作用 ,以不同浓度AA作为刺激物 ,观察AA对体外培养的肾小管上皮细胞系 (LLC PK1)分泌和释放Ang II、ET的影响 ;另各培养体系中分别加入AA (4 0 μg/ml)和不同浓度甘草酸 ,观察甘草酸对AA作用下LLC PK1释放AngII、ET的干预作用。各组培养 2 4h后 ,提取培养上清 ,用放射免疫法测定ET、Ang II的浓度。结果显示 :①AA(4 0、80、16 0 μg/ml)可明显刺激细胞释放ET、Ang II(P <0 0 1)。②甘草酸在 5 0 μg/ml、10 0 μg/ml、2 0 0 μg/ml浓度时可使AA刺激细胞分泌和释放ET、Ang II水平下降 (P <0 0 5或P <0 0 1)。提示 :AA可刺激肾小管上皮细胞分泌和释放ET、Ang II ,此作用可能与AA的细胞毒性损害有关 ;甘草酸可使AA刺激细胞分泌和释放ET、Ang II水平下降 ;甘草酸的保护作用可能与抑制AA作用下细胞分泌和释放ET、Ang II有关。     

归元口服液促IL-2分泌和IFN-γ产生量的体外实验

目的 探讨归元口服液抑制肿瘤作用机制及中药的生物效应鉴定法.方法 对归元口服液进行了促IL-2分泌和IFN-γ产生量的体外实验研究.结果 归元口服液1 μg/mL时,有很强的促进IL-2水平的作用,且量效关系明显;归元口服液10 μg/mL,时,有很强的促进IFN-γ细胞因子的作用,且量效关系明显.结论 IL-2分泌和IFN-γ产生量可以作为归元口服液的评价指标.     

二妙散对大鼠骨髓来源的巨噬细胞M1/M2极化的影响

目的:探索二妙散(EMS)对脂多糖(LPS)+干扰素(IFN)-γ诱导大鼠骨髓来源巨噬细胞(Macrophage)M1极化及白细胞介素(IL)-4+IL-13诱导M2极化的影响。方法:体外提取大鼠骨髓来源的单核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF),诱导成巨噬细胞(F4/80标记),加入LPS+IFN-γ,诱导其向M1型巨噬细胞极化;加入IL-4和IL-13,诱导其向M2型巨噬细胞极化;加入不同浓度二妙散(0.2,0.4,0.8 g·L^-1)作用后,采用免疫荧光分别检测M1(CD68及iNOS标记)及M2(CD206及Arginase标记)表型,检测二妙散对大鼠骨髓来源的巨噬细胞M1/M2极化的影响。结果:与空白组比较,LPS+IFN-γ能显著增加M1的极化(P<0.01),IL-4+IL-13能显著增加M2的极化(P<0.01);与LPS+IFN-γ/IL-4+IL-13组比较,二妙散(0.2,0.4,0.8 g·L^-1)作用24 h对LPS+IFN-γ诱导的M1极化具有明显抑制作用(P<0.05),对IL-4+IL-13诱导的M2极化没有明显影响。结论:二妙散可抑制LPS+IFN-γ诱导的M1极化,而对IL-4+IL-13诱导的M2极化没有影响。     

止嗽膏液体外抗病毒的实验研究

目的 :研究止嗽膏液的抗病毒作用。方法 :采用细胞培养技术 ,观察止嗽膏液在人咽癌(Hep2 )细胞中对呼吸道合胞病毒、腺病毒的抑制作用。结果 :止嗽膏液半数中毒浓度 (TC50 )为2 4 1 0 μg/ml;抗呼吸道合胞病毒的半数有效浓度 (EC50 )为 >80 0 μg/ml;抗腺病毒的半数有浓度(EC50 )为 72 3 4 μg/ml;且根据 5 0 %的抑制浓度 ,其对病毒的抑制作用存在明显的量效反应关系。结论 :止嗽膏液在Hep2细胞中对呼吸道合胞病毒、腺病毒有明显抑制作用     

阴虚与阳虚动物模型中Th1/Th2类细胞因子表达的差异性

目的 :探讨阴阳失调模型小鼠 Th1/ Th2两类细胞因子的表达模式。方法 :分别采用甲状腺素灌胃和氢化可的松肌肉注射法建立阴虚、阳虚 BAL B/ c小鼠模型 (生理盐水作对照 ) ;利用 RT- PCR方法检测模型动物脾脏单个核细胞中 Th1类细胞因子 (IFN- γ,IL- 2 )、Th2类细胞因子 (IL- 4 ,IL- 10 )的基因转录状态。结果 :阴阳调和的正常小鼠可以同时表达 IFN- γ、IL- 2、IL- 4、IL- 10 ,处于 Th1/ Th2平衡状态 ;阴阳失调模型小鼠在表现明显的阴虚、阳虚体征的同时 ,其 Th1/ Th2两类细胞因子 m RNA的表达显著降低 (P<0 .0 1) ,Th1/ Th2平衡模式发生漂移 ,阴虚小鼠 IFN- γ表达与阳虚模型对比有显著性差异 (P<0 .0 1)。结论 :阴阳失调模型小鼠的 Th1/ Th2类细胞因子表达呈抑制状态 ,阴虚与阳虚的差别在于 Th1类细胞因子 IFN- γ表达的抑制程度不同 ,其中阴虚模型小鼠 IFN- γ的表达处于相对优势     

Antiproliferative and antimetastatic effects of the ethanolic extract of Phellinus igniarius (Linnearus: Fries) Quelet

AIM OF THIS STUDY: Phellinus igniarius (Linnearus: Fries) Quelet (Phellinus igniarius) has been used in oriental countries for treatment of various diseases including cancer. However, it is unclear how Phellinus igniarius exerts anticancer effects. MATERIALS AND METHODS: In this study the ethanolic extract from the fruiting body of Phellinus igniarius (EEPI) was used to evaluate the antiproliferative and antimetastatic effects in human hepatocarcinoma SK-Hep-1 cells and rat heart vascular endothelial cells (RHE cells). RESULTS: We found that EEPI inhibited the proliferation of both cell lines in a dose-dependent manner, and the IC50 values at 48 h were 72 and 103 microg/ml for SK-Hep-1 cells and RHE cells, respectively. EEPI at non- or sub-cytotoxic concentrations (25-100 microg/ml) markedly inhibited the migration and invasion of SK-Hep-1 cells. EEPI added at 25 microg/ml significantly decreased the secretion of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) (49%, p<0.01) and vascular endothelial growth factor (VEGF) (13%, p<0.05) in SK-Hep-1 cells. EEPI at 25 microg/ml completely inhibited matrigel-induced tube formation in RHE cells. Importantly, EEPI (25 or 50 microg/ml) in combination with oxaliplatin (Oxa) or 5-flurouracil (5-FU) synergistically inhibited the proliferation of SK-Hep-1 cells. CONCLUSION: These results demonstrate the antiproliferative and antimetastatic effects of EEPI in vitro and the potential of EEPI as an adjuvant for chemotherapy.     

桑黄液体发酵生产多糖工艺研究

目的 考察不同培养条件对桑黄菌液体发酵生产多糖的影响.方法 通过正交试验设计,对不同培养基种类、起始pH值、发酵温度和摇床转速进行优化,在此工艺基础上,采用5L发酵罐进行发酵放大试验.结果 采用添加0.3 9/L维生素B1和0.3 g/L维生素B2的PD培养基,起始pH值5,发酵温度28℃,摇床转速180 r/min条件下,桑黄菌摇瓶发酵液中胞内多糖和胞外多糖分别为5.80、2.37 g/L;5 L发酵罐发酵液中桑黄胞内多糖和胞外多糖分别为5.85、2.30 g/L.结论 桑黄液体发酵可获得桑黄多糖,本实验结果为桑黄液体发酵工业化生产提供参考.     

桑黄胞内及胞外多糖对荷瘤小鼠减毒增效作用的研究

研究桑黄发酵产物中多糖对荷瘤小鼠的减毒增效作用。通过液体深层发酵技术获得桑黄菌丝体和发酵液,并从中提取胞内、外多糖PIP和PIE,并建立移植性S180肿瘤小鼠模型,分别观察环磷酰胺单用以及与桑黄发酵产物多糖联合应用时抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、体质量以及外周血细胞和IFN-γ含量的变化。结果表明桑黄发酵产物多糖可明显提高化疗小鼠的免疫功能,降低环磷酰胺的毒性,增强其抗肿瘤作用。     

桑黄胞外多糖对胶原诱导性关节炎大鼠的免疫调节作用

目的研究桑黄胞外多糖对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠的治疗效果,并探讨其治疗机制。方法将60只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,阳性对照组,桑黄胞外多糖低、中、高剂量组,每组10只,连续给药30天。采用组织容积法测定关节肿胀程度,关节病理切片观察关节组织病理情况,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-17(IL-17)的表达水平。结果与空白组比较,模型组各指标差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,各治疗组均能抑制非致炎足足趾肿胀(P0.05),改善关节组织病理情况,显著降低血清中TNF-α、IL-1β、IL-17的表达(P0.05)。与阳性药对照比较,桑黄胞外多糖高、中剂量组TNF-α、IL-1β、IL-17的表达及桑黄胞外多糖低剂量组TNF-α、IL-1β的表达差异无统计学意义(P0.05)。桑黄胞外多糖高剂量组血清中TNF-α、IL-1β的表达与空白组差异无统计学意义(P0.05)。结论桑黄胞外多糖对CIA大鼠有一定的治疗效果,其作用机制可能是通过抑制NF-κB信号通路和炎症细胞因子的表达来实现的。     

桑黄总三萜的提取及其体外抗脑胶质瘤U251活性

目的:优化药用真菌桑黄总三萜的超声提取工艺并测定其对脑胶质瘤U251生长的抑制作用.方法:采用正交设计试验对超声辅助提取过程中影响桑黄总三萜得率的乙醇体积分数、超声时间、超声温度和料液比等因素进行优化;采用MTT比色法测定桑黄总三萜对U251细胞株增殖的抑制率,应用倒置相差显微镜观察桑黄总三萜对肿瘤细胞形态结构的影响.结果:超声辅助提取桑黄总三萜的最佳工艺条件为70％乙醇,超声提取20 min,温度60℃,料液比1∶25.在此条件下,桑黄总三萜提取率可达9.40 mg·g-1.桑黄总三萜对脑胶质瘤U251细胞株有抑制增殖作用,且表现出浓度依赖关系,倒置相差显微镜下可见部分细胞形成凋亡小体.结论:采用超声辅助提取桑黄总三萜时间短、得率高,是一种高效、快捷的方法,桑黄总三萜可抑制脑胶质瘤U251细胞株的增殖,诱导肿瘤细胞凋亡.     

药用真菌桑黄菌丝体多糖抗肿瘤作用的研究

目的：研究桑黄菌丝体多糖对小鼠S180实体瘤、腹水瘤的生长抑制作用和对荷瘤小鼠免疫调节作用。方法：将昆明种小鼠接种S180实体瘤或腹水瘤后随机分组,饲喂不同剂量(100,200,400 mg·kg^-1·d^-1)的桑黄菌丝体多糖,以饲喂生理盐水和环磷酰胺为空白对照组和阳性对照组。检测受试药物对小鼠S180实体瘤生长的抑制作用以及对荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指数的影响,计算腹水型荷瘤小鼠的存活时间。结果：饲喂桑黄菌丝体多糖的荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数显著增加；3个剂量的桑黄菌丝体多糖对S180实体瘤的抑瘤率分别为31.88%,46.25%,53.13%；并且可以显著延长腹水型荷瘤小鼠的存活时间。结论：桑黄菌丝体多糖具有较强的抗肿瘤作用和免疫调节活性。     

桑黄菌原生质体的分离与再生研究

目的：研究桑黄菌原生质体分离与再生的条件。方法：研究以菌丝体为材料的不同酶解条件对桑黄菌原生质体产量的影响及不同再生条件对桑黄菌原生质体再生率的影响。结果：在1.5%溶壁酶＋0.5%崩溃酶的混合酶系、酶解温度为30 ℃、菌龄为8 d、蔗糖为酶解渗透压稳定剂、酶解时间为3 h的条件下,桑黄菌原生质体分离产量较高,但兼顾菌丝量和原生质体的再生,较适宜的菌龄为10 d,较适宜的酶解渗透压稳定剂是甘露醇。另外用甘露醇作为培养基渗透压稳定剂、用加桑枝的马铃薯葡萄糖再生培养基进行再生,桑黄菌原生质体再生率较高。结论：在综合考虑桑黄菌原生质体的产量与再生的前提下,获得了使桑黄菌原生质体产量与再生率均较高的试验条件。     

桑黄乙醇提取物对大鼠尿酸代谢及肠道微生物影响的初步研究

探讨桑黄乙醇提取物对高尿酸血症大鼠的降尿酸作用及对肠道微生物的影响。36只SD大鼠随机分为空白组、模型组、别嘌醇组及桑黄乙醇提取物高、中、低剂量组,每组6只,采用果糖联合氧嗪酸钾(oteracil potassium,OAPS)诱导法构建高尿酸血症大鼠模型,造模1周后予以治疗,别嘌醇组给予别嘌醇(allopurinol,ALLO)50 mg·kg^-1灌胃,桑黄乙醇提取物各剂量组分别以30,60,90 mg·kg^-1剂量给药,连续给药14 d。每周观察实验动物的体质量、血糖和血尿酸变化,第21天进行肌酐、尿素氮、血清黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)和腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)活性检测,取右肾进行病理切片,收集大鼠肠道内容物进行16S rRNA测序分析,观察桑黄乙醇提取物抗高尿酸血症的作用机制及其肠道菌群的变化。结果显示,与模型组相比,桑黄乙醇提取物各剂量组均能够显著降低血尿酸水平(P<0.01),同时能抑制XOD和ADA活性(P<0.01,P<0.05);病理切片显示别嘌醇组大鼠部分肾小管轻微扩张,炎性细胞浸润,桑黄乙醇提取物各剂量组肾脏形态结构与空白组比较无明显差异;肠道菌群分析结果显示Bacteroidetes为高尿酸大鼠优势成分,桑黄乙醇提取物能使肠道Lactobacillus比例上调。因此,桑黄乙醇提取物可能通过抑制XOD和ADA活性降低大鼠血尿酸水平,同时对肠道菌群组成结构具有一定影响。     

Antimutagenicity and induction of anticarcinogenic phase II enzymes by basidiomycetes

Extracts from Phellinus linteus, Phellinus igniarius, and Agrocybe cylindracea have been tested for their antimutagenic properties against direct-acting mutagens [4-nitro-o-phenylenediamine (NPD) and sodium azide (NaN(3))] and indirect-acting mutagens [2-aminofluorene (2-AF) and benzo[a]pyrene (B[a]P)], using the Salmonella typhimurium tester strains TA 98 and TA 100. In addition, the chemopreventive potentials of these extracts to induce NAD(P)H:quinone oxidoreductase (QR) and glutathione S-transferase (GST) activities and glutathione (GSH) level extracts from the filtrate of the cultured broth of P. linteus, polysaccharide extracts from the cultured broth (PI I) and mycelia (PI II) and water extract of fruiting bodies (PI II) of P. igniarius, and polysaccharide extracts from the cultured broth (AC I) and mycelia (AC II) of A. cylindracea showed inhibitory effects on the mutagenic activities induced by the direct-acting mutagens, NPD and NaN(3), and the indirect-acting mutagens, 2-AF and B[a]P. QR was induced with PI I, PI II, AC I, and AC II, and GST activity was induced with PL I, PL II, PI I, PI II, PI III and AC I in murine Hepa1c1c7 cell culture. In addition, PL I, PL II, PI I, PI II, PI III and AC II increased glutathione level. These results suggest that P. linteus, P. igniarius, and A. cylindracea have antimutagenic activities and may play a role in the prevention of cancer by inducing QR and GST activities and increasing GSH level.     

桑黄化学成分研究

目的 :对药用真菌桑黄进行化学成分研究。方法 :利用正相硅胶柱层析 ,Al₂O_{3柱层析 ,SephadexLH-20柱层析 ,反相HPLC ,重结晶等分离手段和IR ,MS及 1D ,2DNMR等结构鉴定光谱方法。结果 :从桑黄中分离鉴定了 5个黄酮和两个香豆素类化合物 ,分别为柚皮素、樱花亭、二氢莰非素、7 甲氧基二氢莰非素、北美圣草素、香豆素及莨菪亭。结论 :这些化合物均为首次从针层孔属真菌中发现。}