黄酮类化合物在Caco-2细胞模型上的转运和代谢研究进展

 目的介绍近年来黄酮类化合物在Caco-2细胞模型上的转运和代谢研究进展。方法总结了国内外有关黄酮类化合物在Caco-2细胞模型上的生物利用度研究、黏膜毒性、药物相互作用和吸收转运机制;体外代谢中的结构-代谢关系、对代谢酶的影响以及动态代谢模型和酶-转运体合用模型的应用等。结果和结论对黄酮类化合物在Caco-2细胞模型上的转运和代谢的研究,可以用来研究该类化合物的吸收机制、预测其体内吸收和药物相互作用。     

Caco-2细胞模型及其在中药吸收转运研究中的应用

Caco-2细胞模型是一种筛选药物离体口服吸收特性的模型,现已广泛应用于评价药物在小肠的吸收特性和转运机理的研究。作者描述了Caco-2细胞的培养及其细胞单层模型如何建立和验证;探讨了Caco-2细胞用于药物吸收转运研究的机制;对其在中药被动转运、载体介导的主动转运、中药外排机制和吸收过程中药物相互作用等方面的应用进行了详细的阐述;并评价了该细胞用于中药吸收转运机制研究中的作用;最后对该细胞模型可能的应用发展前景提出了展望。     

改善葛根素肠道吸收的体外研究

目的研究葛根素肠道吸收的机制,探讨提高其肠道吸收的方法。方法改变实验时间、温度及药物质量浓度,考察葛根素在Caco-2细胞中的转运特性,并考察不同的吸收促进剂对其跨膜转运的影响。结果葛根素的膜渗透性低,被动扩散是其跨膜转运的主要机制;十二烷基磺酸钠(SDS)破坏Caco-2单细胞层的完整性,提高葛根素转运;聚氧乙烯月桂基醚(Brij 35)、牛血清白蛋白(BSA)和分离乳清蛋白对葛根素转运有促进作用,但不影响Caco-2细胞的跨膜电阻(TEER);相对分子质量较高的壳聚糖通过可逆性地降低TEER,促进细胞间转运,提高葛根素的膜渗透性。结论葛根素的膜渗透性低是口服生物利用度低的主要原因,不同吸收促进剂可通过不同机制改善其膜渗透性。     

盐酸巴马汀在Caco-2细胞中的吸收机制

目的:研究盐酸巴马汀在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法:用Caco-2细胞单层模型研究盐酸巴马汀的双向转运,并考察时间、药物浓度、抑制剂、pH及温度对盐酸巴马汀吸收的影响。用高效液相色谱法检测药物浓度,计算其表观渗透系数。结果:盐酸巴马汀在Caco-2细胞模型中,从单层细胞层顶端到基底端的转运大于基底端到顶端的转运,随时间和浓度的增加,药物吸收呈饱和趋势,且P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂维拉帕米、pH和温度对它的转运有影响。结论:盐酸巴马汀在Caco-2细胞模型中的吸收主要是由载体介导的主动转运,且该主动转运的载体位于Caco-2细胞单层的顶端。     

氧化槐果碱在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究

目的:研究氧化槐果碱在Caco-2细胞模型中的吸收机制.方法:MTT实验考察氧化槐果碱在Caco-2细胞中的安全浓度范围,再利用Caco-2细胞单层模型研究氧化槐果碱的双向转运机制,以转运量及表观渗透系数(Papp)为观测指标,考察时间、浓度、pH和P-gp抑制剂维拉帕米对其吸收的影响.结果:氧化槐果碱在Caco-2细胞模型中的转运与时间和浓度呈正相关,并受pH影响;P-gp抑制剂维拉帕米对其转运无影响,从单层细胞层顶端(AP)到基底端(BL)的转运与基底端到顶端的转运大致相同.结论:氧化槐果碱在Caco-2细胞模型中的吸收是被动转运.     

药理实验中Caco-2细胞模型建立的评价指标

目的:建立Caco-2细胞模型并对该模型进行评价。方法:通过显微镜观察细胞形态学特点,测定跨上皮细胞膜电阻,碱性磷酸酶活性和标志物普萘洛尔的转运特性等指标对Caco-2细胞模型进行评价。结果:各项指标的测定值与文献相符。本实验建立的Caco-2细胞模型的完整性、紧密性、通透性以及碱性磷酸酶活性较好。结论:建立的Caco-2细胞模型符合各项指标的要求,可用于研究口服药物转运的吸收机制。     

Caco-2细胞模型在口服药物吸收过程研究中的应用

目的：介绍Caco-2细胞模型的特点及其在口服给药吸收过程研究中的应用。方法：概括了近年来Caco-2细胞模型在口服药物开发中的应用情况和研究成果。结果：药物经Caco-2单层细胞转运情况的研究，可以预测药物在体内的吸收规律。为药物设计及制剂处方筛选提供科学依据。结论：Caco-2细胞醋 药物吸收过程研究的很好工具。     

口服纳米颗粒在胃肠道中的跨膜转运研究进展

口服纳米颗粒逐渐成为改善生物药剂学分类系统（BCS）Ⅱ,Ⅲ及Ⅳ类药物口服生物利用度的潜在递药手段,其在胃肠道中的跨膜转运机制很大程度上取决于纳米颗粒的理化性质。采取合理的研究模型剖析口服纳米颗粒在胃肠道中的转运机制,揭示纳米颗粒的理化性质与转运机制之间的关系,将有助于指导设计具有更高转运效率的纳米载体,从而有效提高药物的口服生物利用度。笔者归纳了口服纳米颗粒的主要跨膜转运方式,对比分析了常用的细胞模型及其优缺点,并总结了纳米颗粒的理化性质如载体材料、粒径、形状、表面电荷、表面修饰等与跨膜转运机制之间的潜在联系,提出了基于在体肠吸收的纳米颗粒转运机制研究思路,以期为选择适合于不同纳米颗粒转运机制研究的细胞模型提供参考,为反馈调控纳米颗粒设计优化粒子转运性能进而提高药物口服生物利用度提供理论依据,并最终拓展口服纳米颗粒在新药研发中的应用。     

替米沙坦在Caco-2细胞模型中的体外转运研究

 目的研究替米沙坦(telmisartan,TMS)在Caco-2细胞中的跨膜转运特征。方法采用体外培养的人小肠上皮细胞Caco-2模型对TMS的跨膜转运进行研究。考察了浓度、pH、P-糖蛋白(P-glyprotein,P-gp)抑制剂对TMS跨膜转运的影响。结果TMS在Caco-2细胞中的转运存在外排作用,并且外排作用随着浓度的增加趋于饱和;另外TMS的吸收转运随pH值的增加而减少。加入P-糖蛋白抑制剂环孢素A和胺碘酮后,P_ratio从3.5分别下降到1.2和0.9,加入前后有极显著性差异(P<0.01)。结论P-gp参与了TMS的跨膜转运,从而从吸收机制上初步解释了P-gp的外排作用可能是TMS生物利用度低,个体差异大的原因。     

Caco-2细胞模型评价药物口服吸收的局限性及对策

 目的 综述Caco-2细胞模型用于评价药物口服吸收时的局限性,以及相应的改进策略。方法 查阅文献,归纳Caco-2细胞模型局限性及对策的研究现状。结果 Caco-2细胞并不能被称为一个“完美的”药物吸收评价工具,与小肠上皮细胞相比,该细胞本身存在许多局限性,例如转运体、代谢酶、核受体的表达与小肠不一致,细胞间紧密连接过紧,缺乏黏液层,培养周期长等。此外,培养体系容易受辅料的影响,加以pH梯度和药物非特异性结合等因素,会导致在预测药物的渗透性时,出现和体内实验不一致的情况。对于上述局限性的改进工作已经广泛开展,其中包括改善细胞内代谢酶和转运蛋白表达,增加黏液层,缩短培养周期,增加药物溶解性和减少非特异性结合等。结论 研究Caco-2细胞模型局限性对其应用具有重要的借鉴意义,对相应的局限性进行的改进拓展了此模型的使用范围,使之更好地为新药筛选评价工作服务。     

赤芍通过抗神经胶质增生及抗氧化保护局部短暂性脑缺血小鼠海马部位神经的研究

目的：卒中是全球第二大死亡原因。本研究探究赤芍（Paeoniae Radix Rubra， PRR）对缺血性脑卒中小鼠的神经保护作用。方法：使用小鼠大脑中动脉堵塞法构建局部脑缺血模型。将实验动物分为4组，假手术组（Sham 组）、假手术给药组（PRR-sham组）、手术组（Isch组）、手术给药组（PRR-Isch组）。采用TTC染色法测量各组小鼠脑梗死体积；免疫组织化学染色观察各组之间小鼠缺血侧大脑海马区神经元细胞的凋亡情况以及星形胶质细胞和小胶质细胞的活化程度；采用蛋白印迹法观察小鼠缺血侧海马超氧化物歧化酶1（SOD1）、超氧化物歧化酶2（SOD2）、过氧化氢酶抗体（Catalase）表达水平。结果：赤芍可以明显减少局部脑缺血小鼠的脑梗死体积，并能抑制海马CA1区星形胶质细胞和小胶质细胞的活化程度，同时可以改善由缺血再灌注损伤引起的SOD1、SOD2和Catalase的表达水平下降情况。结论：赤芍可以通过抗胶质增生以及抗氧化作用改善局部短暂性脑缺血小鼠的神经损伤情况。     

文冠果种仁粕中的一个新香豆素

Objective: To study the coumarin from the seeds oil leavings of Xanthoceras sorbifolia.Methods: The chemical constituents were isolated and purified by combination of silica gel, macroporous resin, Sephadex LH-20, and ODS column chromatography. Their structures were elucidated by spectral and chemical methods. The cytotoxicity of the new compound against 10 selected human cancer cell lines was assayed.Results: Five comarins were isolated and identified as fraxetin-7-O-β-D-[6'-(3"–hydroxyl–3"-methylglutaryl)] glucopyranoside(1), fraxoside(2), fraxetin(3), scopoline(4), and esculetin(5), respectively.Conclusion: Compound 1 is a new compound. Unfortunately, this compound exhibited no cytotoxicity with tested cell lines.     

药代动力学和核磁共振代谢组学方法评价小檗碱和黄连对脓毒症的治疗效果

目的：脓毒症是由感染引起的系统性炎症反应，经常会导致器官功能障碍。尽管其死亡率和发病率很高，但其病理生理学仍然知之甚少。黄连及其主要活性成分小檗碱（生物碱类化合物）已经在临床上用作抗菌和抗炎药物。本研究的目的是为了研究小檗碱和黄连在大鼠体内的吸收与分布，以及对脓毒症的治疗效果。 方法：对黄连及其主要活性成分小檗碱进行药代动力学和代谢组学研究。 结果：盲肠结扎穿孔诱导的脓毒症大鼠的能量代谢和氨基酸代谢明显被扰乱，而黄连和小檗碱治疗之后能让代谢物的扰乱向正常大鼠回归。 结论：小檗碱与黄连在脓毒症的治疗上，具有相当甚至更好的药效。     

基于药代动力学和荧光光谱研究监测联合用药中游离态华法林

Objective: Monitoring the unbound drug concentration in blood in combination therapy is necessary,because its concentration determines the efficacy of drug therapy. This study was designed to explore the effect of Dan Hong Injection(DHI) on the unbound warfarin using two approaches including an in vivo pharmacokinetic and in vitro fluorescence studies.Methods: The effect of DHI on the pharmacokinetic properties of the unbound warfarin was investigated by a microdialysis sampling method coupled with LC–MS/MS. The effect of DHI and salvianolic acid B(Sa B) on warfarin binding with bovine serum albumin(BSA) was conducted by fluorescence spectrometry.Results: The AUC_(0-tn)of warfarin with DHI group was higher than that of warfarin alone group. The result showed that DHI could increase the concentration of unbound warfarin in rat blood, which may be due to the competition between warfarin and DHI as well as its components binding to serum albumin. The competition process was demonstrated by fluorescence study.Conclusion: Combination therapy of DHI with warfarin could enhance the release profile of warfarin from serum protein.     

JAK2/STAT3信号通路介导灯盏花乙素抗人心脏微血管内皮细胞缺氧-复氧损伤

Objective: To investigate the antagonistic cell injury effect and molecular mechanism of scutellarin(SCU)in hypoxia reoxygenation(HR) treated human cardiac microvascular endothelial cells(HCMECs).Methods: The method of 12 h hypoxia following by 12 h reoxygenation was used to culture HCMECs in vitro to built cell injury model. The groups were divided into control group, model(HR) group, and HR + SCU(0.1 μmol/L, 1 μmol/L, and 10 μmol/L) group. The cell viability was determined by MTT, and oxidative stress was detected by malondialdehyde(MDA) levels by biochemical assay kit. Protein expression of JAK2/p-JAK2 and STAT3/p-STAT3 were evaluated by Western blot.Results: The results of MTT and MDA showed that HR decreased the cell viability(P 0.05) and increased MDA level significantly(P 0.05), SCU played a contrary role in these processes. Western blot analysis indicates that, the expression of JAK2 and p-JAK2, STAT3, and p-STAT3 were increased in model group when compared with control group(P 0.05); Compared with model group, their expression were reduced by SCU(P 0.05).Conclusion: SCU took a protective effect on HR-treated HCMECs, and the molecular mechanism may be associated with the inhibition of JAK2/STAT3 signal transduction pathway.     

龙胆苦苷对炎症靶点iNOS和COX-2抗炎活性研究

目的 本文旨在从中药材黄管秦艽中分离出高纯度龙胆苦苷化合物，并通过其对炎症靶点的抑制作用来考察其抗炎活性。方法 采用HPLC、IR、NMR和MS等方法对龙胆苦苷的纯度及分子结构进行了鉴定，并通过体内、体外及分子对接实验考察其抗炎活性。结果 体外实验以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象，考察不同浓度的龙胆苦苷对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞产生NO以及释放炎症因子PEG2及1L-6的抑制状况，结果表明，龙胆苦苷能够明显抑制NO及炎症因子PEG2、1L-6产生和释放。体内实验以KM小鼠为研究对象，利用二甲苯致小鼠耳肿胀实验考察龙胆苦苷对急性炎症的抑制活性，结果发现龙胆苦苷能有效的抑制小鼠耳肿胀且抑制率达34.17%。分子模拟对接实验发现龙胆苦苷中的糖片段能够与炎症靶点COX-2及iNOS中的氨基酸以氢键的形式有效的结合，进而通过对二者的抑制作用表现出其生物活性。结论 龙胆苦苷是一种潜在的且对炎症靶点COX-2及iNOS具选择性的抑制剂，具有良好的抗炎活性。     

Metabolite Characterization of Penta-O-galloyl-??￠-D-glucose in Rat Biofluids by HPLC/QT of MS

Objective: To understand the in vivo metabolic fate of 1,2,3,4,6-Penta-O-galloyl-β-d-glucose(PGG)naturally existed in many medicinal herbs and food plants such as Rhus chinensis,Paeonia suffruticosa,Paeonia lactiflora and Mango.Methods: The metabolites of PGG in rat biofluids were characterized using high performance liquid chromatography combined with quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry(HPLC-QTOF-MS).Results: Ten metabolites in urine,five metabolites in feces and two metabolites in plasma,were observed when the rats were administrated with a single intravenous injection of PGG(20 mg/kg).Conclusion: PGG is firstly metabolized to gallic acid,then gallic acid undergoes sulfation,glucuronidation and methylation by rat liver.The determination of metabolites and the proposed metabolic pathway of PGG in vivo will be benefit to gain deeper insights into its pharmacological activities.     

三七通栓片对大鼠脑卒中后遗症的保护作用研究

Objective: To identify the therapeutic effect and possible mechanisms of Chinese medicine Sanqi Tongshuan Tablets(SQTS) on sequelae post-stroke in rats.Methods: The rat cerebral ischemia sequelae post-stroke models were successfully induced by blocking the middle cerebral artery with electric coagulator after the seventh week and balance beam test ≤ 4. The rats were then received with SQTS(0.5, 1, and 2 g/kg) and Naodesheng(NDS, 1.24 g/kg), Vinpocetine(VP,1.55 mg/kg) for 30 d. The beam-walking test and shuttle test were performed before and after 10, 20, and 30 d of administration. In addition, histopathology changes and GAP-43, GFAP were measured by HE staining and immunohistochemisty.Results: The model displayed signs of brain damage on motor function, learning and memory function and histopathology. After 30 d of treatment, SQTS at different doses(0.5, 1.0, and 2.0 g/kg) restored the beam-walking scores by 21.7%(P 0.05), 30.4%(P 0.05), and 39.1%(P 0.05); Decreased electric shock by 35.0%(P 0.05), 50.0%(P 0.05), and 75.0%(P 0.05), respectively. On the other hand, the histological changes were less severe and the GAP-43 expression increased in hippocampal CA1 and cortical region.Conclusion: SQTS showed therapeutic benefits on sequelae post-stroke in rats, which might be through the pathway of regeneration or neuroplasticity.     

Ergosta-7,22-diene-2β,3α,9α-triol(EGDT) from Ganoderma lucidum inhibits nasopharyngeal carcinoma cells by blocking EGFR signaling pathway

Objective

To investigate the efficacy and mechanism of EGDT against NPC cell lines.

佛手柑内酯在MDCK-MDR1细胞中所介导的调节长春新碱转运的机制

目的：研究白芷中佛手柑内酯对长春新碱转运的影响及其可能机制。方法用表观通透性系数（Papp）测定长春新碱经MDCK-MDR1细胞膜的转运,以观察佛手柑内酯对长春新碱转运的影响。采用分子对接预测佛手柑内酯与P-糖蛋白（P-gp）的结合力。通过罗丹明123（Rho123）的蓄积和活性分析,确定了佛手柑内酯对P-gp功能和P-gp ATP酶活性的影响。以1,6-二苯基-1,3- 5-己三烯（DPH）为研究对象,研究了佛手柑内酯对膜流动性的影响,并用Western blot和实时定量pcr 方法：分析了佛手柑内酯对P-gp蛋白和mRNA表达的影响。这些实验阐明了佛手柑内酯对长春新碱的转运的影响,并允许探索佛手柑内酯作用的可能机制。 结果：佛手柑内酯能抑制长春新碱在MDCK-MDR1细胞中的转运,而佛手柑内酯和P-gp之间的结合力较弱。佛手柑内酯能降低Rho123在MDCK-MDR1细胞中的蓄积,增加膜流动性,上调P-gp蛋白和mRNA的表达,但对P-gp ATP酶活性无影响。 结论：佛手柑内酯抑制长春新碱转运的可能机制与佛手柑内酯介导的P-gp蛋白上调、mRNA表达、膜流动性和P-gp酶活性有关。