灵丹菌质发酵工艺的初探

目的 筛选灵芝与丹参双向固体发酵菌株,优化发酵工艺参数,获得灵丹菌质最适的发酵组合及工艺参数.方法 由不同灵芝菌株与丹参药性基质组成不同的发酵组合,在一定条件下进行双向固体发酵,以菌丝长势,菌质药效、毒性、化学成分为指标进行发酵菌株筛选及发酵工艺参数优化.结果 灵芝菌株ZL30与丹参双向固体发酵时菌丝长势尤佳、菌质活血化瘀药效显著,为最优发酵菌株,其组合为最适发酵组合,最佳发酵工艺参数为:基质含水量70%、灭菌温度100℃、灭菌时间60 min、发酵终点40 d.结论 以药用真菌双向性固体发酵工程为原理和方法进行灵丹双向固体发酵及灵丹菌质的研发、利用,切实可行.     

双向固体发酵后雷公藤菌质的急性毒性研究

目的：研究雷公藤菌质的急性毒性的变化。方法：运用双向固体发酵的原理与技术,将药用真菌G接种到带皮的雷公藤基质上,在特定条件下进行发酵,得到不同发酵天数的菌质。用Bliss法计算不同发酵天数的雷公藤菌质的半数致死剂量（LD50）,测定其急性毒性。结果：不同发酵时间的雷公藤菌质组LD50均高于雷公藤生药组,其中发酵20~30d菌质的LD50较高。结论：通过双向性固体发酵可以使雷公藤的急性毒性降低,并保持一定的免疫抑制作用。     

中药范畴内的菌物药

中药分类通常是以药材自然属性作为依据，如分为植物药、动物药、矿物药等。“真菌类中药”包括以子实体、菌核等入药的“药用真菌”和真菌的固体发酵产品一从古代的曲、酱、酒等至现代的“菌质”均属“真菌药物”，已有千年以上药用史。但因生物分类学长期来误将真菌视为低等植物，故使“真菌类中药”也随着属于植物药，就既缺乏科学的归属更难以解释“真菌药物”的性质，从而将影响它产品的定位，脱离中药范畴，与那些在理念、工艺、应用上都有显著差异的现代其他各类生物制品统一定位。固体发酵是中药传统范畴内仅有的一项生物技术，它的发展受益于中医药理念、经验的指导，工艺与应用也具有中药特色，近期又接受应用现代中药的研发内容要求与实验方法，其下游工程也和现代中药提取、纯化技术一致，产品有合格质量标准，并按相关规定进行各期临床试验，因此它既有中药历史传统又符合现代中药的要求。虽然“真菌类中药”拥有研发潜力巨大、生产．Y-艺多种、临床涉用面广等优势，且现代中药生物技术一目体发酵工程更已有显著的重要进展，但至今仍因缺乏科学归属与合理定位，而影响它的发展。现代生命科学已确认真菌并非植物，早已成立了真菌界Fungi，又与一些貌似真菌的真核生物如卵菌Oomyces、粘菌Slimemoulds等被统称为菌物Fungi，因此建议在中药范畴内正式冠名一类真菌为主的菌物药，以药用真菌和真菌药物即真菌的“固体发酵系列工程”所产各类菌质将成为重要支柱。本文同时介绍了菌质的历史、理念、工艺、应用等情况和已研发的三种代表性菌质的基本情况与方法。     

药用真菌新型(双向性)固体发酵工程对雷公藤解毒持效的初步研究

目的:探索对有毒中药雷公藤缓解毒性保持药效的新技术.方法:应用"约用真菌新型(双向性)固体发酵工程"(双向发酵)的原理和方法,以雷公藤为药性基质、多种药用真菌为发酵菌种,构成多组发酵组合,在一定条件下进行固体发酵,取得不同药性菌质,用所建"发酵组合三层优选法"进行发酵菌种优选,并对当选优秀发酵组合用"发酵过程成分、药效动态比较法"初步建立它的发酵工艺.结果:已筛选出具有解毒并保持免疫抑制作用的2种发酵真菌即灵芝、槐耳和适当的发酵工艺.结论:药用真菌双向性固体发酵工程可用于研究开发解毒持效的雷公藤菌质.     

中药范畴内的菌物药

中药分类通常是以药材自然属性作为依据,如分为植物药、动物药、矿物药等."真菌类中药"包括以子实体、菌核等入药的"药用真菌"和真菌的固体发酵产品--从古代的曲、酱、酒等至现代的"菌质"均属"真菌药物",已有千年以上药用史.但因生物分类学长期来误将真菌视为低等植物,故使"真菌类中药"也随着属于植物药,就既缺乏科学的归属更难以解释"真菌药物"的性质,从而将影响它产品的定位,脱离中药范畴,与那些在理念、工艺、应用上都有显著差异的现代其他各类生物制品统一定位.固体发酵是中药传统范畴内仅有的一项生物技术,它的发展受益于中医药理念、经验的指导,工艺与应用也具有中药特色,近期又接受应用现代中药的研发内容要求与实验方法,其下游工程也和现代中药提取、纯化技术一致,产品有合格质量标准,并按相关规定进行各期临床试验,因此它既有中药历史传统又符合现代中药的要求.虽然"真菌类中药"拥有研发潜力巨大、生产工艺多种、临床涉用面广等优势,且现代中药生物技术--固体发酵工程更已有显著的重要进展,但至今仍因缺乏科学归属与合理定位,而影响它的发展.现代生命科学已确认真菌并非植物,早已成立了真菌界Fungi,又与一些貌似真菌的真核生物如卵菌Oomyces、粘菌Slimemoulds等被统称为菌物Fungi,因此建议在中药范畴内正式冠名一类真菌为主的菌物药,以药用真菌和真菌药物即真菌的"固体发酵系列工程"所产各类菌质将成为重要支柱.本文同时介绍了菌质的历史、理念、工艺、应用等情况和已研发的三种代表性菌质的基本情况与方法.     

14个灵芝菌株的新型(双向型)固体发酵及菌质多糖含量测定

目的：探索甘草渣和11种不同的灵芝菌株的复合型双向发酵，考察灵芝发酵基质中多糖含量的变化。方法：以甘草渣为培养基质进行灵芝菌的新型固体发酵，采用苯酚一硫酸法测定发酵基质中的多糖含量。结果：经过灵芝菌发酵的菌质多糖含量，都比没有经过发酵的纯甘草渣有了不同程度的提高。结论：利用灵芝菌和甘草渣进行的新型复合发酵能够有效提高基质中的药用成分。     

中药内的菌物药

现代生命科学已确证真菌独立成为真菌界,又以其为主出现了“菌物”(fungi)的概念和名词.因此,以往归属于中药“植物药”内的“真菌类中药”应冠名为“菌物药”,仍归属于中药,这将有助于对其所研发的新药进行合理定位.菌物药具有“药用真菌”和“真菌药物”二类药用方式,前者以真菌自身组织入药(如灵芝、茯苓等),后者是中药所独创也是唯一的一类生物制药工艺(如古代中药神曲和现代槐耳菌质).新创立的基于药性基质的“双向固体发酵”工程取得了良好进展,如具抗病毒作用的“槐芪菌质”及对雷公藤进行解毒持效的“灵雷菌质”等;利用中药药渣作为药性基质,进行中药二次开发并涉及环境保护等研究已引起业内各方的高度重视,对此取得的新进展进行简要概述.     

菌质—中药的一个新领域

菌物界估计逾十万种,高等真菌约数千种,至今供药用的仅二十余种,潜力巨大。除子实体培育和进行深层培养外,我国在2500年前已用固体发酵生产“神曲”,但这种方法未能继续发展。用现代技术将各种有效真菌与中草药所组成的不同发酵基质,构成各种发酵组合,在一定条件下进行固体发酵,产生各种性质不同的菌质,可能构成中药的一个新领域,值得研究开发。     

灵芝-淫羊藿菌质总多糖量动态变化的初步研究

目的 探讨灵芝-淫羊藿菌质发酵的工艺及总多糖的动态变化.方法 选取4个灵芝菌株,以淫羊藿为培养基质进行固体发酵,并利用苯酚-硫酸法测定灵芝-淫羊藿菌质的总多糖量.结果 灵芝-淫羊藿菌质总多糖量明显高于对照培养的灵芝多糖量(P＜0.05);对灵芝和淫羊藿发酵组合的多糖量进行动态变化研究,发现灵芝菌种A-淫羊藿菌质的发酵终点确定为21 d,灵芝菌种B、C和D的发酵终点确定为28 d.结论 与对照培养灵芝及未发酵的淫羊藿相比,灵芝对淫羊藿发酵可提高总多糖量3～13倍,效果良好.     

药用真菌新型固体发酵工程与槐芪菌质的研制

目的 研制抗乙肝病毒等新药槐芪菌质。方法 采用双向性发酵工程。结果 槐耳菌和黄芪构成发酵组合所产槐芪菌质所提成分有促进机体免疫功能、抗病毒与保肝功效结论 药性菌质的优良作用显示双向性发酵工程可能成为中药新药研制的新途径，各种菌质将成为中药的新领域。     

基于固体发酵的白钱菌质急性毒性及镇痛作用的研究

目的:利用药用真菌白僵菌固体发酵中药马钱子,使马钱子毒性下降,同时保持其镇痛作用。方法:选用对马钱子基质适应性较强的白僵菌,在一定条件下对马钱子进行双向固体发酵,获得白钱菌质;观察马钱子发酵前后小鼠急性毒性(LD50)的变化情况,并比较它们对醋酸腹腔刺激所致小鼠扭体的抑制作用和对小鼠热板致痛的影响。结果:发酵组的LD50为167.3mg/kg,与马钱子生品相比,LD50上升率为33.8%,各发酵组均可明显延长小鼠舔后足的潜伏期(P0.001),发酵组的高、中剂量组可明显减少小鼠腹腔注射醋酸引起的扭体反应次数(P0.05或P0.01),但低剂量组对减少扭体次数未见明显效果。结论:马钱子经白僵菌发酵后毒性明显降低,并保持了其镇痛作用。     

双向固体发酵对板蓝根和大青叶抑菌的增效作用初探

目的探讨25种不同食(药)用真菌菌株对板蓝根和大青叶的双向固体发酵的转化作用,得到具有较好抑菌作用的发酵菌质产物。方法经过板蓝根和大青叶平板初筛法和三角瓶复筛法,获得能在大青叶和板蓝根上生长的优势菌株;进一步通过抑菌实验和薄层色谱(TLC)实验,确定发酵得到的菌质产物的抑菌作用。结果复筛得到能够在板蓝根(灵芝11、灵芝13、灵芝7)和大青叶(灵芝2、灵芝11、灵芝3)上生长良好的菌株,其中含灵芝3和灵芝11的发酵液与空白对照相比具有较好的抑菌作用。TLC结果显示,灵芝2发酵大青叶的甲醇提取物有蓝色斑点为发酵后新增成分。结论板蓝根和大青叶经药用真菌进行双向固体发酵后能够有效提高其抑菌作用,而且有新物质产生。     

钩吻发酵减毒的谱效关系

目的研究钩吻发酵解毒的机理。方法运用双向固体发酵原理与技术,将不同药用真菌接种到灭菌的钩吻药性基质上,在特定条件下进行发酵,得到药性菌质;用HPLC法对发酵前后菌质中的钩吻碱甲、钩吻素子、葫蔓藤碱甲、钩吻绿碱、葫蔓藤碱乙含量进行测定。结果相同发酵条件下,不同真菌对钩吻的发酵情况有所不同,灵芝、云芝、赤芝能够正常生长,其生物碱含量与钩吻生品比较呈下降趋势。结论双向固体发酵后菌丝体生长良好的菌质中,钩吻的液相色谱行为发生了质和量的变化。     

灵芝双向固体发酵雷公藤后菌质化学成分变化初步研究

目的对灵芝双向固体发酵雷公藤所得菌质化学成分的变化进行初步研究,针对性地分离并鉴定出发酵过程中有明显变化规律的化学成分。方法采用高效液相色谱法对雷公藤药材及灵芝双向固体发酵雷公藤所得到的不同时间点灵雷菌质的醋酸乙酯提取物进行化学成分分析,采用溶剂法、柱色谱法、高效液相制备法、核磁共振等对HPLC色谱图中部分具有明显变化规律的化学成分进行提取分离、结构鉴定。结果与雷公藤生药相比,发酵所得菌质的液相色谱图具有明显规律性的改变;针对性地分离并鉴定出4个化合物,分别为12-甲氧基雷酚萜(1)、雷酚萜(2)、邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP,3)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP,4);其中菌质中化合物DIBP、DBP的量随发酵时间的延长而降低。结论灵芝双向固体发酵雷公藤的过程中,菌质中DIBP、DBP等邻苯二甲酸酯类有毒化合物的量降低。     

冬虫夏草菌固体发酵人参的工艺优化

目的 优化冬虫夏草菌发酵人参药材的工艺.方法 采用双向固体发酵技术,以冬虫夏草菌丝形成明显的菌蕾结构即为发酵终点,记录的发酵周期为响应值,药材粉碎粒度、基质含水量、CaCl2浓度为自变量,在单因素实验基础上利用响应面法进行设计实验,筛选出冬虫夏草菌发酵人参的最佳工艺.结果 最优的发酵工艺为药材粉碎粒度80目,基质含水量为28％,CaCl2的加入量为206 μmol/g,冬虫夏草菌丝体湿重与人参固体培养基干重的比例(m∶m)=200％;按照以上条件接种后放入微生物培养箱中28℃避光培养,发酵周期为27d即可得到成熟的发酵人参产物.结论 优化后的工艺稳定可行,重复性好,为后续发酵人参的研究提供了物质基础.     

4种药用真菌发酵对番荔枝种子总内酯成分的影响

目的:观察4种药用真菌发酵番荔枝种子后,番荔枝总内酯含量的变化.方法:将番荔枝种子作为“药性基质”,在一定的条件控制下,使其被灵芝菌等4种药用真菌发酵,产生不同的“药性菌质”,采用反相高效液相色谱法对各组的总内酯成分变化进行比较,用紫外-可见分光光度法对种子发酵前后的总内酯含量进行检测.结果:在一定的时间范围内,D,V,F菌在番荔枝种子基质上的适应性良好,菌丝体生长旺盛.4种菌发酵之后的菌质中总内酯含量与生药材、发酵空白组比较均有明显的升高,同时伴随峰的消失和相对峰值的变化,各菌发酵品中12,15-cis-squamostatin-A及布拉他辛(bullatacin)的含量较发酵空白组显示不同程度地变化.结论:发酵后,4种“药性菌质”中总内酯含量明显升高,内酯的相对含量发生变化,间双四氢呋喃(THF)及邻双THF内酯含量有不同程度地改变,提示真菌发酵可能利于某种类型番荔枝内酯的富集.     

灵芝菌发酵基质的条件优化及菌质活性物质的分析

目的：通过灵芝菌与玉米须、玉米芯的双向固体发酵,形成新的药性菌质,并对其活性成分进行分析。方法：以不同配比的玉米须和玉米芯为基质,以活性物质多糖和三萜的含量为指标考察菌质的最佳培养基配比,分别采用紫外分光光度法、薄层色谱法和高效液相色谱法进行定性及定量分析。结果：玉米须和玉米芯以1：0,1：1,1：2,1：3,1：4,1：5,0：1配比,用灵芝菌发酵,形成的菌质多糖含量递增,三萜含量递减;薄层色谱结果显示,与发酵前对比,发酵后色谱斑点由红色转为蓝绿色荧光,并随着玉米须在培养基中比重增加而斑点越明亮;高效液相色谱结果显示,发酵后原有一些物质峰减弱或消失,并生成新的物质。结论：以玉米须-玉米芯1：5作为基质产生的菌质长势及活性成分含量最高,发酵前后菌质的物质组成有明显改变。     

灵雷菌质抗炎镇痛作用的研究

目的 考察灵雷菌质的抗炎镇痛作用.方法 通过二甲苯致耳肿胀及醋酸引起毛细血管扩张法观察灵雷菌质的抗炎作用;采用热板法观察灵雷菌质的镇痛作用.结果 灵雷菌质对二甲苯所致小鼠耳肿胀和醋酸引起的毛细血管扩张有良好的抑制作用;并能提高热致痛小鼠的痛阈.结论 双向固体发酵后的灵雷菌质仍保留一定的抗炎与镇痛作用.     

虫草菌YMCS1固体发酵产物化学成分分析

虫草菌TNCS1分离自野生冬虫夏草，将其固体发酵培养产物与野生冬虫夏草进行化学成分分析、比较。结果显示该虫草菌与天然野生冬虫夏草化学成分相似，能够成为野生冬虫夏草的替代品。     

真菌固体发酵提高人参药材中皂苷含量的研究

目的:采用功能真菌固体发酵的方法,提高人参药材中皂苷类成分的含量。方法:将菌种M1与湿热灭菌后的人参药材进行固体发酵培养,分别利用紫外分光光度法和高效液相色谱法,对人参药材发酵前后的总皂苷以及单体皂苷含量的变化进行分析检测。结果:M1真菌能够显著提高人参药材中人参总皂苷的水平,总皂苷含量在第12天达到最高,增长率为103.82%;六种单体人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2和Rd的含量之和也有显著提高。结论:采用固体发酵的方法,通过真菌M1的生物转化作用,可以显著提高人参药材中有效成分人参皂苷的含量。