当归补血汤水提液预处理对缺氧/复氧H9c2心肌细胞线粒体损伤保护机制研究

目的探讨当归补血汤预处理对缺氧/复氧H9c2心肌细胞线粒体损伤保护机制。方法复制缺氧/复氧大鼠H9c2心肌细胞损伤模型,以始终在正常培养条件下的心肌细胞为正常对照组,将预先加入当归补血汤的细胞(当归补血汤组)在正常条件下培养24 h,与未处理细胞(模型组)同时进行缺氧/复氧培养,JC-1染色,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,RT-PCR荧光相对定量检测B淋巴细胞瘤2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)、bcl-2/腺病毒E1B 19 000相互作用蛋白3(Bnip3)的mR NA表达水平,Western blot检测细胞色素C蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组线粒体膜电位下降的细胞比例显著增加(P0.05),细胞内ROS水平增加明显(P0.05),细胞色素C蛋白表达显著升高(P0.05),Bcl2 mR NA表达水平明显降低(P0.05),Bax mR NA表达水平显著升高(P0.05)。当归补血汤干预后,与模型组比较,线粒体膜电位下降的细胞明显减少(P0.05),细胞色素C蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bcl2 mR NA水平显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 H9c2心肌细胞缺氧/复氧后,线粒体膜电位明显下降,细胞色素C释放增加。当归补血汤可能通过促进Bcl2表达,减少ROS产生等机制稳定心肌细胞线粒体膜电位,减轻复氧后对线粒体功能的损伤作用。     

基于FasL/TNF-α信号通路的当归补血汤对放射性心肌损伤凋亡反应的影响探讨

目的研究当归补血汤对大鼠放射性心肌损伤FasL/TNF-α信号通路介导心肌细胞凋亡反应的影响。方法选取SPF级Wistar雄性大鼠45只,随机分为空白组(不干预)、模型组(15 Gy X线照射+生理盐水)、当归补血汤低、中、高剂量组(15Gy X线照射+当归补血汤),每组各9只。给予灌胃1次/d,干预6周后处死大鼠,采用ELISA法检测各组大鼠血清中FasL及TNF-α含量,RT-PCR技术检测FasL及TNF-α基因在心肌细胞中的表达情况, Annexin V-Fitc流式细胞分析法检测各组心肌细胞凋亡情况。结果与空白组比较,模型组FasL/TNF-α的表达明显增高(P0.01),心肌细胞凋亡数目明显增多(P0.01);与模型组比较,当归补血汤低剂量组FasL/TNF-α的表达无明显下降(P0.05),心肌细胞凋亡数目无明显减少(P0.05),当归补血汤中、高剂量组FasL/TNF-α的表达明显降低(P0.05),心肌细胞凋亡数目明显减少(P0.05)。结论当归补血汤具有减轻放射性心肌损伤的作用,其机制可能与干预FasL/TNF-α的表达,阻断凋亡信号的传导通路,抑制心肌细胞凋亡有关。     

大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型肌浆网钙调控相关蛋白表达及当归补血汤的干预作用

目的建立缺氧/复氧大鼠H9c2心肌细胞损伤模型,观察心肌细胞肌浆网钙调控相关蛋白表达及当归补血汤对H9c2细胞缺氧/复氧损伤钙超载的影响。方法 JC-1染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位,Fluo-3 AM钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度,RT-PCR荧光相对定量检测大鼠心肌肌浆网Ca转运ATP酶(SERCA2a)、L型钙通道(CAV1.3)、兰尼碱受体(RyR1,RyR2)、受磷蛋白(PLB)、肌集钙蛋白(CASQ)的mRNA表达水平。结果与正常对照组比较,模型组细胞早期凋亡显著增加(P0.05),细胞内钙离子浓度增加明显(P0.05),CAV1.3mRNA表达水平显著升高(P0.05),RyR1和CASQmRNA表达明显降低(P0.05)。SERCA2a和PLB mRNA表达水平亦降低但差异无统计学意义。当归补血汤干预后,与模型组比较,能够显著降低复氧损伤细胞的早期凋亡率(P0.05),细胞内钙离子浓度降低,差异具有统计学意义(P0.05)。SERCA2a和CASQ mRNA水平显著增加(P0.05),PLB和RyR1 mRNA虽有不同程度的增加,CAV1.3mRNA水平降低,但差异均无统计学意义(P0.05)。结论 H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤后出现明显的钙超载及肌浆网钙调节蛋白调节紊乱现象,当归补血汤能够通过升高肌浆网钙调节蛋白SERCA2a和CASQ mRNA的表达,减轻复氧后钙超载,降低复氧损伤H9c2心肌细胞早期凋亡率。     

山核桃叶总黄酮对H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:研究山核桃叶总黄酮对H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:体外培养大鼠H9C2心肌细胞,用不同浓度氯化钴并优化不同缺氧及复氧时间建立缺氧复氧损伤模型。缺氧复氧前加入终浓度为2.5、5、10μg/m L的山核桃叶总黄酮预处理,通过检测细胞上清液中LDH释放量,细胞内MDA含量和SOD活性;并采用MTS检测缺氧复氧损伤后细胞的成活率以及Hoechst-PI双染和流式细胞术观察细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹检测细胞内HIF-1α蛋白表达,来考察山核桃叶总黄酮保护心肌细胞缺氧复氧损伤的作用。结果:利用1 200μmol/L氯化钴缺氧18 h,复氧2 h可建立缺氧损伤心肌细胞模型。与模型组比较,山核桃叶总黄酮能降低H9C2细胞缺氧复氧损伤后LDH释放量及细胞内MDA含量,提高SOD活性,减少细胞凋亡,并使细胞HIF-1α蛋白表达恢复正常水平。结论:山核桃叶总黄酮对心肌细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抗氧化、增强细胞清除自由基能力、减少脂质过氧化物产生及抑制细胞凋亡有关。     

毛冬青皂苷E对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的考察毛冬青皂苷E对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法将H9C2心肌细胞随机分为正常对照组,模型组,毛冬青皂苷E低、中、高剂量对照组(10,50,250μg·m L-1)、毛冬青皂苷E低、中、高剂量治疗组(10,50,250μg·m L-1)。造模前24 h给予相应浓度的药物预处理,缺氧4 h,复氧4 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量,并采用蛋白印迹法(Western Blot)检测Caspase-3和Cleaved caspase-3凋亡蛋白的表达。结果缺氧/复氧后,与正常对照组比较,模型组细胞存活率显著降低(P0.05),细胞内ROS含量显著升高(P0.01),毛冬青皂苷E各剂量治疗组预处理后,细胞存活率增加,ROS含量降低。缺氧/复氧损伤可使Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白表达增加。毛冬青皂苷E各剂量治疗组预处理后,Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白表达均下降。结论毛冬青皂苷E对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与减少ROS生成,抑制凋亡相关蛋白Caspase-3和Cleaved caspase-3的表达有关。     

田蓟苷对缺氧/复氧损伤大鼠心肌细胞H9c2的影响

目的观察田蓟苷对缺氧/复氧损伤大鼠心肌细胞H9c2的影响,探讨其可能的作用机制。方法培养H9c2细胞,缺氧/复氧处理建立缺氧/复氧细胞损伤模型,实验随机分为对照组、模型组和田蓟苷低、中、高剂量组。倒置光学显微镜观察细胞形态;CCK-8法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)水平;JC-1探针检测细胞内线粒体膜电位(MMP)水平;Western blot检测肝X受体α(LXR-α)、p-p38MAPK、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与对照组比较,模型组H9c2细胞活力下降,ROS释放显著增加,MMP降低,细胞凋亡率升高,LXR-α、p-Akt、Bcl-2蛋白表达降低,p-p38MAPK、Bax和Caspase-3蛋白表达升高;与模型组比较,田蓟苷中、高剂量组H9c2细胞活力升高,ROS含量减少,MMP升高,细胞凋亡率降低,LXR-α、p-Akt、Bcl-2蛋白表达升高,p-p38MAPK、Bax和Caspase-3蛋白表达降低。结论田蓟苷可能通过抑制ROS产生、升高MMP、调节LXR-α/MAPK通路及激活Akt抑制细胞凋亡,保护心肌细胞。     

肉桂对慢性缺氧心肌细胞的保护作用研究

目的:研究肉桂通过调控低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达,对慢性缺氧心肌细胞的保护作用。方法:将心肌细胞H9c2分为空白对照组、缺氧组、肉桂低剂量组、肉桂中剂量组、肉桂高剂量组。CCK-8法检测各组细胞增殖情况,TUNEL法检测各组细胞凋亡情况。应用试剂盒检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)水平; Western blot检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、肌红蛋白(Myo)、HIF-1α和血管内皮因子(VEGF)表达。结果:缺氧处理后显著降低了心肌细胞H9c2增殖活力、SOD活性,且增加了细胞凋亡指数、MDA和TBARS含量(均P<0.05)。缺氧处理后显著降低了心肌细胞H9c2的cTnT、CK-MB、Myo、HIF-1α和VEGF表达量(均P<0.05)。各剂量肉桂组能够不同程度的逆转缺氧对心肌细胞H9c2上述指标的影响。结论:肉桂通过调控HIF-1α表达保护缺氧诱导的大鼠心肌细胞损伤。     

黄芪甲苷减轻异丙肾上腺素诱导H9c2细胞肥大损伤的机制研究

目的:探讨黄芪甲苷减轻异丙肾上腺素(ISO)诱导H9c2心肌细胞肥大损伤的保护作用及潜在机制。方法:以100μmol/L ISO作用H9c2细胞建立细胞肥大损伤模型。将细胞分为正常对照组、模型组及黄芪甲苷6.25、12.5、25μmol/L组,黄芪甲苷预给药2 h,ISO作用24 h。CCK-8法检测细胞活力,荧光染色测定细胞表面积,Hoechst 33342和TUNEL染色测定细胞凋亡率。比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平,WST-8法测定超氧化物歧化酶(SOD)水平。q RT-PCR检测Bcl-2、Bax、P62、LC3 m RNA水平。Western Blot检测Sirt1、P62、Caspase-3、Beclin、P53蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平。结果:黄芪甲苷能显著减轻ISO诱导的H9c2细胞肥大损伤,减少心肌细胞表面积及LDH的释放,降低细胞凋亡率及细胞内ROS水平,升高SOD水平,上调自噬相关m RNA及蛋白的表达,下调凋亡相关m RNA及蛋白的表达。结论:黄芪甲苷能有效抑制ISO诱导的H9c2细胞肥大及凋亡,其机制可...     

蕨麻正丁醇部位下调缺氧内皮细胞HIF-1α及ET-1表达

[目的]探讨蕨麻正丁醇部位对内皮细胞缺氧损伤的保护机制。[方法]采用人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)建立缺氧损伤实验模型,实验设常氧对照组、缺氧模型组、高(3.00 g/L)、中(1.50 g/L)、低浓度(0.75 g/L)蕨麻正丁醇部位组,复方丹参(3.0 g/L)组。胎盘兰染色法测定各组细胞存活率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)m RNA和内皮素-1(ET-1)m RNA表达,免疫细胞化学染色及Western Blot方法检测HIF-1α蛋白表达。放免法测定培养基中ET-1的活性。[结果]与对照组比较,缺氧模型组细胞存活率显著降低,HIF-1α和ET-1m RNA及蛋白表达增加(P0.01);蕨麻正丁醇部位各剂量组与缺氧模型组比较,细胞存活率显著升高,高、中、低剂量蕨麻正丁醇部位组、复方丹参组细胞HIF-1α和ET-1 m RNA及蛋白水平显著降低(P0.01)。[结论]在缺氧状态下,蕨麻正丁醇部位可能通过HIF-1α途径调控靶基因的表达,从而发挥保护作用。     

当归补血汤对冠脉结扎致心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨当归补血汤对冠脉结扎致心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法将75只健康雄性SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、地尔硫艹卓(10 mg/kg)组、当归补血汤(3 g生药/kg)组、当归补血汤(6 g生药/kg)组,连续给药7 d后,行冠脉左前降支结扎术以建立大鼠心肌梗死模型,采用HE染色检测心肌病理学改变,原位末端标记(TUNEL)法染色检测心肌凋亡,试剂盒测定各组血清中肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)的含有量,蛋白质印迹(Western blot)法检测心肌组织凋亡蛋白BCL2、BAX和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Caspase-3、Caspase-9的表达水平。结果与模型组相比,给予当归补血汤(3、6 g生药/kg)治疗后均能明显改善心脏病理学改变,抑制心肌细胞凋亡,降低凋亡指数,减少心肌细胞内CK和LDH的释放,增强心肌抗凋亡蛋白BCL2的表达,减少促凋亡蛋白BAX、Caspase-3和Caspase-9的表达。结论当归补血汤可能通过调节相关凋亡蛋白来改善冠脉结扎诱导的大鼠心肌缺血。     

白藜芦醇对缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的:观察白藜芦醇(Res)对缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。方法:建立体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧模型,MTT法检测心肌细胞活力,免疫组织化学法检测心肌细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平,检测心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平和心肌细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果:大鼠乳鼠心肌细胞在体外缺氧培养24 h后,HIF-1α表达水平明显升高;心肌细胞培养液中LDH活性从正常对照组的(93.07±15.84)U.L-1上升到(750.77±181.51)U.L-1(P0.01);心肌细胞内GSH-Px活性从正常对照组(46.96±8.36)U.mL-1下降为(27.13±4.76)U.mL-1(P0.01)。25,50,75μmol.L-1Res可剂量依赖性抑制缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞内HIF-1α表达增加;心肌细胞培养液中LDH含量呈剂量依赖性下降,分别为(486.17±69.97),(189.43±32.07),(155.34±29.57)U.L-1(P0.05或P0.01);心肌细胞内GSH-Px活性呈剂量依赖性升高,分别为(33.55±6.34),(37.67±6.73),(41.44±7.91)U.mL-1(P0.05或P0.01)。结论:Res对缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤有良好保护作用。     

羟基红花黄色素A通过抑制Mst1激酶活化对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的观察羟基红花黄色素(Hydroxysaffl or yellow A,HSYA)对乳鼠原代心肌细胞缺氧复氧(anoxiareoxygenation,A/R)损伤的保护作用,并进一步探讨该作用与Mst1/YAP信号中Mst1激酶之间的关系。方法分离新生SD大鼠心肌细胞,孵育48 h,细胞贴壁,然后进行分组实验。正常对照组(Con组):正常条件下孵育36 h;缺氧复氧组(A/R组):正常孵育24 h后行缺氧10 h复氧2 h;羟基红花黄色素处理组(A/R+H组):正常孵育24 h后行缺氧10 h同时加用HSYA,后复氧2 h;Mst1si RNA后缺氧复氧组(Mst1si RNA+A/R组):小干扰转染后6 h,换正常培养基,孵育18 h,缺氧10 h复氧2 h。收集各组心肌细胞培养基上清测LDH,流式细胞仪检测活性氧水平及凋亡率,Western blot检测Mstl,cleaved caspase-3,Caspase-3蛋白表达变化。结果与Con组比较,A/R组ROS升高,凋亡率增加,活化Mst1的表达增加,cleaved caspase-3蛋白表达增加,差异有统计学意义;与A/R组比较,A/R+H组ROS水平降低,凋亡率下降,P-Mst1蛋白表达下降,cleaved caspase-3蛋白表达减少,差异有统计学意义。与A/R组比较,Mst1si RNA组ROS无明显变化,凋亡率下降,总Mst1及P-Mst1的蛋白表达下降,cleaved caspase-3下降,差异有统计学意义;与A/R+H组比较,Mst1si RNA组ROS水平较高,心肌细胞凋亡率增加,且差异具有统计学意义。结论 HSYA处理能减轻原代心肌细胞的氧化应激水平,减少心肌细胞凋亡,其机制可能部分依赖于抑制Mst1蛋白激活有关,但存在其他通路。     

丹酚酸B调控NIX介导的线粒体自噬保护H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

探讨丹酚酸B保护H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制是否与调控NIX介导的线粒体自噬有关。体外培养H9c2心肌细胞,分为正常组、模型组、丹酚酸B组(50μmol·L~(-1)),缺氧4 h复氧2 h建立缺氧/复氧损伤模型。正常组:高糖DMEM培养基培养;模型组:无糖无氧DMEM培养基培养,缺氧、复氧均不加任何药物;丹酚酸B组:缺氧同时加入用无糖DMEM培养基配制的丹酚酸B,其余过程同模型组。CCK-8法检测心肌细胞活力,微量酶标法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,化学荧光法检测细胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(ΔΨm)变化,萤光素酶法检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ、凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及线粒体自噬受体蛋白NIX表达。与正常组相比,模型组H9c2心肌细胞活力、ATP水平降低(P0.05),LDH漏出、ROS生成增多(P0.01),ΔΨm降低(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、cleaved caspase-3、NIX蛋白表达均升高(P0.05);与模型组相比,丹酚酸B可显著升高细胞活力、降低LDH漏出量和ROS水平(P0.01),升高细胞内ATP含量(P0.05)及ΔΨm(P0.01),降低自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(P0.01),下调cleaved caspase-3和NIX蛋白表达(P0.05)。丹酚酸B对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用与抑制线粒体自噬发生有关,其具体机制可能为抑制NIX介导的线粒体自噬激活,从而升高ΔΨm,降低ROS生成,降低cleaved caspase-3和LC3-Ⅱ蛋白表达,升高细胞活力。     

HIF-1α基因沉默联合丹参酮ⅡA抑制低氧人肝癌HepG2细胞增殖及其机制

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默联合丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法依据人HIF-1α基因信息筛选RNAi有效靶序列,设计慢病毒载体引物并构建质粒,包装慢病毒表达载体,转染HepG2细胞,沉默低氧条件下HepG2细胞株中HIF-1α基因表达。将细胞分为正常对照组(野生型HepG2细胞)、干扰对照组(HepG2细胞转染NC-shRNA)、干扰组(HepG2细胞转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150μmol/L CoCl_2)加入培养液模拟肿瘤细胞低氧微环境,采用Western Blot检测各组细胞HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,采用CCK-8检测5 mg/L TanⅡA处理对低氧条件下各组细胞增殖活性的影响,采用Western Blot检测TanⅡA处理对各组细胞内p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白表达的影响。结果 (1)HIF-1α-shRNA慢病毒载体包装成功且转染效率高,低氧培养各组细胞24 h后,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中HIF-1α蛋白表达明显降低(P0.01)。(2)TanⅡA能时间依赖性抑制低氧条件下各组细胞增殖,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞增殖明显活性下降(P0.01,P0.05)。(3)低氧培养各组细胞24 h,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白表达水平明显增高(P0.05)。结论 HIF-1α基因沉默可增强TanⅡA对低氧HepG2细胞的增殖抑制作用,其机制可能与p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白水平上调有关。     

原花青素经ROS介导的SIRT3/HIF-1α轴抑制缺氧PANC-1细胞增殖的研究

目的：探讨原花青素抑制缺氧胰腺癌PANC-1细胞增殖的作用及机制。方法：通过GEPIA网站预测SIRT3与HIF-1α基因在胰腺癌中的表达及其相关性;采用厌氧培养袋物理诱导法模拟PANC-1细胞体内缺氧环境,分为常氧对照组、模型组及原花青素低(15μg/mL)、中(30μg/mL)、高(60μg/mL)浓度组;CCK-8法检测不同浓度原花青素对PANC-1细胞活力的影响;倒置荧光显微镜观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞中活性氧(ROS)水平;采用生化试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和总抗氧化能力(T-AOC);Western Blot检测细胞中SIRT3、HIF-1α蛋白表达。结果：GEPIA数据库预测SIRT3的表达在胰腺癌中具有上调趋势,而HIF-1α表达显著上调且两者呈正相关;在缺氧条件下,CCK-8实验表明原花青素可显著抑制PANC-1细胞的活性;原位荧光检测表明模型组细胞中ROS水平显著升高且未见明显凋亡,原花青素能逆转细胞中ROS水平并诱导凋亡;抗氧化活性检测显示模型组细胞中SOD活性显著...     

荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:探究荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:利用氯化钴(CoCl_2)建立缺氧复氧损伤H9c2细胞模型,实验分正常对照组、模型组及荭草花提取物不同浓度组。应用MTS检测细胞存活率;生化试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)释放量及细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot测定cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:利用800μmol/L CoCl_2缺氧22 h,复氧2 h可建立缺氧复氧损伤心肌细胞模型。与模型组比较,荭草花提取物能显著升高心肌细胞存活率,降低LDH、CK释放量及细胞内MDA含量,提高细胞内SOD、CAT活性,并呈浓度依赖性抑制CoCl_2诱导的缺氧复氧损伤。荭草花提取物能下调促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、Bax的表达,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡。结论:荭草花提取物对心肌细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制细胞凋亡有关。     

当归补血汤含药血清对血管紧张素II诱导的 心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的: 探讨当归补血汤含药血清对血管紧张素II (Ang II) 诱导的心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法: 应用血清药理学方法制备含药血清。体外培养心肌细胞,收集对数期细胞分为4组:空白对照组、AngⅡ(10^-7mol·L^-1)组、缬沙坦(10^-6mol·L^-1)组、10%当归补血汤含药血清(0.84 g·L^-1)组,共同作用48 h后,用MTT 法测定细胞活性、单细胞电泳法检测细胞DNA损伤情况、激光共聚焦检测线粒体膜电位,Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白p53,Caspase-3表达变化。结果:与空白对照组相比,Ang II组心肌细胞活力(A)(0.159±0.024)、线粒体膜电位(170.19±16.15)Δψ_m明显降低(P<0.05),并且心肌细胞DNA损伤,p53(0.497±0.029)、Caspase-3(0.509±0.041)蛋白表达显著升高(P<0.05);与Ang II组相比,当归补血汤含药血清组心肌细胞活性(A)(0.197±0.035)、线粒体膜电位(242.39±18.27)Δψ_m明显升高(P<0.05),心肌细胞DNA损伤、p53(0.387±0.020),Caspase-3(0.385±0.029)蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论: 当归补血汤可抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体通路有关。     

槲皮素保护H2O2诱导的H9C2心肌细胞氧化损伤的作用机制

目的:探讨在H_2O_2诱导的氧化应激损伤中槲皮素对H9C2心肌细胞存活率、活性氧分子(ROS)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶、细胞凋亡等关键因子的影响,初步阐明槲皮素对心肌细胞的保护机制。方法:H_2O_2刺激H9C2心肌细胞建立氧化应激损伤模型,分为正常组、模型组、槲皮素组,采用噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞活力,活性氧检测试剂盒检测槲皮素处理后ROS变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞氧化应激反应、细胞凋亡机制相关分子[NADPH氧化酶-4(NOX-4),NADPH氧化酶亚单位p22phox,B淋巴细胞瘤-2原瘤基因(Bcl-2),Bcl-2相关X基因(Bax),半胱胺酸蛋白酶-8(Caspase-8)]基因和蛋白表达水平。结果:10μmol·L-1槲皮素具有显著的抗氧化、抗凋亡作用。与模型组比较,槲皮素组细胞存活率明显提高(P0.05),ROS水平与细胞凋亡率明显降低(P0.05,P0.01)。此外,槲皮素组中Bcl-2,NOX-4基因表达上调(P0.05);p22phox,Bax,Caspase-8基因表达明显下调(P0.05)。同时槲皮素能够抑制Bax,p22phox蛋白的表达(P0.05),上调磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:10μmol·L-1槲皮素能有效减少H_2O_2介导的心肌细胞氧化损伤,进而抑制心肌细胞凋亡。该机制可能是通过调节NADPH氧化酶亚型NOX-4与p22phox,减少ROS生成,激活PI3K表达,升高Bcl-2实现。     

二参颗粒对氯化钴诱导的H9C2细胞氧化应激介导的细胞凋亡的保护作用

目的:通过观察二参颗粒对氯化钴(CoCl_2)诱导的缺氧损伤和大鼠心肌细胞H9C2凋亡的影响,阐明二参颗粒对心脏的保护作用。方法:以500μmol/L的CoCl_2与H9C2细胞共同作用24 h,建立心肌细胞缺氧缺血模型。将H9C2细胞分为空白对照组、模型对照组、二参颗粒50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组。酶联免疫法检测胞外培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)和凋亡水平,蛋白质印迹分析法检测细胞内Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞活力下降、活性氧(ROS)荧光表达值升高、线粒体膜电位JC-1单体阳性细胞显著升高以及细胞培养液中LDH含量升高,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,二参颗粒能有效改善细胞活力,降低LDH的含量,显著降低胞内ROS荧光表达值,改善线粒体膜电位和凋亡水平,下调凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达,升高Bcl-2/Bax的比值(P<0.05或P<0.01)。结论:二参颗粒可以抑制CoCl_2诱导的心肌细胞ROS水平,减少氧化应激发生,进而改善氧化应激介导的心肌细胞的细胞凋亡。     

清脑滴丸下调HIF-1α/BNIP3表达拮抗氧糖剥夺/复氧诱导C6胶质细胞凋亡

目的研究清脑滴丸对氧糖剥夺诱导C6胶质细胞损伤的HIF-1α/BNIP3以及细胞凋亡的影响及机制。方法采用氧糖剥夺/复氧方法建立C6胶质细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组、清脑滴丸组。采用Western Blot法检测各组HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3蛋白表达,免疫荧光染色法观察各组HIF-1α、Cleaved Caspase-3的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与正常组比较,模型组细胞活力降低(P0.01),HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3表达增加(P0.01,P0.05),细胞凋亡率明显升高(P0.01);与模型组比较,清脑滴丸1.25 g/L组细胞活力升高(P0.05),HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3表达和细胞凋亡率均降低(P0.01,P0.05)。结论清脑滴丸抑制C6胶质细胞凋亡的作用机制可能与通过下调HIF-1α和BNIP3过表达,降低Cleaved Caspase-3表达有关。