黄芪甲苷抑制缺氧缺糖复氧复糖PC12细胞凋亡的研究

目的:研究黄芪甲苷对缺氧缺糖复氧复糖PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:取对数期PC12细胞随机分为6组:正常对照组(Normal组)、黄芪甲苷溶剂对照组(DMSO组)、模型组(缺氧缺糖复氧复糖组,Model组)、黄芪甲苷高剂量组(AST H组,100μmol/L)、黄芪甲苷中剂量组(AST M组,50μmol/L)、黄芪甲苷低剂量组(AST L组,25μmol/L)。正常对照组正常培养不进行任何处理;其余各组均进行缺氧缺糖复氧复糖造模:缺氧缺糖4 h后复氧复糖24 h;黄芪甲苷各剂量组和溶剂对照组于造模前0.5 h给药,直至培养结束。用MTT方法检测细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞的形态,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:与正常组相比,模型组细胞折光性差,细胞肿胀簇状聚集,甚至脱落,细胞之间的突触消失,细胞本身明显肿胀,存活率明显降低,细胞凋亡率增加(P0.05)。与模型组相比,溶剂对照组和黄芪甲苷低剂量组细胞形态无明显变化,存活率和凋亡率差异没有显著性(P0.05),但黄芪甲苷高、中剂量组细胞肿胀等变化明显减轻,存活率均增加,细胞凋亡率降低(P0.05)。黄芪甲苷高剂量组比中、低剂量组细胞存活率高和凋亡率低(P0.05)。结论:黄芪甲苷可抑制PC12细胞缺氧缺糖复氧复糖后的损伤和凋亡,其最佳作用浓度是100μmol/L。     

巴利森苷A对氧糖剥夺/复糖复氧损伤的HT22细胞的保护作用

目的：探讨巴利森苷A(PA)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的HT22细胞的保护作用。方法：将HT22细胞随机分为6组，分别是空白组(Control组)、OGD/R组、依达拉奉(EDA)组、PA低剂量组(40μmol·L^-1)、PA中剂量组(80μmol·L^-1)、PA高剂量组(160μmol·L^-1)。以连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)10 mmol·L^-1合并无糖DMEM培养基造成氧糖剥夺培养2 h,然后恢复为无血清高糖DMEM培养2 h作复糖复氧处理，以建立体外OGD/R模型。EDA和PA组自氧糖剥夺前24 h即加入相应药物的浓度，一直持续到复糖复氧结束。采用MTT比色法检测细胞存活率；乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞损伤率；采用试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞内的活性氧(ROS)水平；Western blot法检测各组细胞缺氧诱导因子通路相关蛋白HIF-...     

淫羊藿苷对氧糖剥夺PC12细胞活力和细胞形态的影响

目的:观察淫羊藿苷对PC12细胞的毒性作用以及不同给药方法、给药剂量对氧糖剥夺PC12细胞活力的影响。方法:将不同浓度的淫羊藿苷与PC12细胞作用24 h后,用MTT法检测细胞活力。用预给药1 h,氧糖剥夺期间给药2 h,预给药1 h+氧糖剥夺期间给药2 h方法给药,细胞复氧复糖24 h后,用MTT法检测细胞活力,预给药1 h+氧糖剥夺期间给药2 h组在造模结束后用倒置显微镜观察细胞形态。结果:PC12细胞用10~(-8)~10~(-4)mol/L淫羊藿苷孵育24 h后,细胞活力与正常组比较均显著下降(P0.01);10~(-8)~10~(-5)mol/L淫羊藿苷预给药1 h均使模型细胞的活力显著升高(P0.01);10~(-8)~10~(-4)mol/L淫羊藿苷氧糖剥夺期间给药2 h均使模型细胞的活力显著下降(P0.01);10~(-8)~10~(-5)mol/L预给药1 h+氧糖剥夺期间给药2 h均使模型细胞的活力显著升高(P0.01),使模型细胞数量增加,细胞形态改善。结论:淫羊藿苷与细胞的作用时间不宜过长,预给药1h+氧糖剥夺期间给药2 h对氧糖剥夺-复氧PC12细胞能起到较好的保护作用。     

PC12细胞氧糖剥夺模型细胞自噬与损伤的关系及黄芪甲苷的保护作用研究

目的:研究PC12细胞OGD/R后自噬与损伤的经时性变化以及黄芪甲苷的干预效应。方法:探讨PC12细胞OGD/R后不同时间自噬的变化及与细胞损伤的关系,初步确定细胞发生自噬性损伤的时间点,再制作PC12细胞OGD/R自噬性损伤模型,研究黄芪甲苷抗自噬性损伤的作用。结果:复糖复氧6~36 h后,细胞存活率降低、LDH漏出率增加;用3-MA预处理后,可使复糖复氧6~12 h细胞存活率降低、LDH漏出率增加,复糖复氧后24~36 h相反。激光共聚焦和western-blot检测显示,复糖复氧后6 h LC3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,至24 h达高峰;p62蛋白表达随再复糖复氧时间的延长逐渐降低。黄芪甲苷对OGD 2 h复糖复氧24 h的PC12细胞自噬具有显著抑制作用,且呈剂量依赖性。结论:PC12在在OGD复糖复氧6~12 h,自噬减轻神经细胞的损伤,而在24~36 h后加重细胞损伤;黄芪甲苷可通过抑制细胞过度自噬诱导的细胞损伤,从而发挥对受损细胞的神经保护作用。     

附子人参不同配伍比例对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞的保护作用

目的观察不同配伍比例的附子人参对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞的保护作用。方法将原代培养6 d的心肌细胞分为正常对照组、模型组、不同配伍比例的附参组、空白血清组。建立原代大鼠心肌细胞缺糖缺氧/复糖复氧损伤模型,观察不同配伍比例的附子人参血清对损伤心肌细胞自发搏动、细胞活力的作用,并测定心肌细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及心肌组织上清液中一氧化氮(NO)分泌量和乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果与空白血清组比较,各附参配伍组心肌细胞自发搏动频率、细胞活力显著升高(P0.05),心肌细胞SOD活性显著升高(P0.05),MDA含量、NO分泌量和LDH释放率均显著降低(P0.05),而且附参(2∶1)组对心肌细胞的自发搏动频率、细胞活力、SOD、MDA和LDH作用均不同程度地优于其余各配伍组。结论各附参配伍组对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞具有保护作用,其中以附参(2∶1)组作用效果最为显著。     

梓醇对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及对电压依赖性钾通道亚型表达的影响

目的:考察梓醇对氧糖剥夺的PC12细胞损伤的保护作用及对电压依赖性钾通道亚型表达的影响。方法:采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)合并无糖培养基造成PC12细胞氧糖剥夺模型,给予梓醇预处理24h后,MTT法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态;测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;还原型谷胱甘肽(GSH)含量;Western blot检测PC12细胞内电压依赖性钾通道Kv1.4、Kv1.5、Kv 2.1、Kv 4.2蛋白的表达。结果:PC12细胞氧糖剥夺损伤后细胞存活率下降,梓醇100μmol/L、10μmol/L能明显对抗氧糖剥夺对PC12细胞的损伤,使细胞存活率明显增加。PC12细胞氧糖剥夺损伤后培养液中LDH释放增多,细胞内SOD活性显著下降,MDA含量升高、GSH含量降低,梓醇能抗氧化应激,抑制细胞LDH释放,升高细胞内SOD活力,升高细胞内GSH含量,降低细胞内MDA含量。PC12细胞氧糖剥夺损伤后,细胞内电压依赖性钾通道Kv1.5和Kv2.1蛋白表达明显上调,梓醇能下调氧糖剥夺PC12细胞内Kv1.5和Kv2.1蛋白表达。结论:梓醇对缺糖缺氧PC12有保护作用,能抗氧化应激损伤,其机制可能与下调电压依赖性钾通道Kv1.5和Kv2.1蛋白表达有关。     

黄芪甲苷介导Akt/mTOR/HIF-1α通路调控氧糖剥夺PC12细胞自噬的机制研究

探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)诱导的PC12细胞自噬损伤的保护作用及可能机制。体外建立OGD PC12细胞自噬损伤模型,PC12细胞分为正常组,OGD组,AS-Ⅳ低、中、高剂量组,阳性药右美托咪定(DEX)组。MTT法检测PC12细胞存活率,透射电子显微镜观察自噬小体及自噬溶酶体,MDC荧光染色法观测自噬小体的荧光强度,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、HIF-1α自噬相关蛋白表达情况。与正常组比较,OGD组细胞存活率显著降低(P<0.01),自噬小体显著增多(P<0.01),MDC荧光强度显著增强(P<0.01),Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、HIF-1α显著上调(P<0.05或P<0.01),p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR显著下调(P<0.05或P<0.01)。与OGD组比较,AS-Ⅳ低、中剂量组及DEX组细胞存活率显著提高(P<0.01...     

人参川芎含药血清对氧糖剥夺/复氧培养神经干细胞ERK信号通路和增殖、活力的影响

目的 观察人参、川芎组合对体外培养氧糖剥夺/复氧大鼠神经干细胞细胞外信号调节激酶（extracellular-signal-responsive kinase,ERK）信号通路和增殖、活力的影响。方法 神经干细胞培养分为5组：正常对照组、氧糖剥夺/复氧组、氧糖剥夺/复氧加人参药物血清组、氧糖剥夺/复氧加川芎药物血清组、氧糖剥夺/复氧加人参川芎药物血清组。免疫印迹方法观察ERK及p-ERK蛋白表达水平,5-溴脱氧尿核苷（5-bro-modeoxyuridine,BrdU）掺入法观察神经干细胞的增殖,噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）检测细胞活性。结果 ERK磷酸化水平于复氧后10 min、30 min一过性升高,但4 h、6 h、1 d各时间点均降至正常水平;取复氧后6 h时间点观察发现,相比氧糖剥夺/复氧组,人参、川芎、人参川芎含药血清均可升高ERK磷酸化水平,促进复氧后1 d时神经干细胞的增殖,提高其活力,且人参川芎联合运用优于单用人参和单用川芎。结论 益气活血药物人参川芎可能通过ERK信号通路促进氧糖剥夺、复氧后大鼠神经干细胞的增殖,提高细胞活力,效果优于单用益气药物人参和活血药物川芎。     

芦荟苷对PC12细胞氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用

目的探讨芦荟苷对PC12细胞氧糖剥夺再灌注损伤是否具有保护作用。方法将PC12细胞随机分为正常组、模型组、尼莫地平组、芦荟苷低、中、高剂量组,采用氧糖剥夺再灌注损伤模型,通过采用2-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)检测细胞存活率,紫外分光光度计检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,荧光分光光度计测定细胞内活性氧(ROS)含量;运用激光共聚焦显微镜(CLSM)测定PC12细胞线粒体膜电位水平(MMP);通过生化方法测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与正常组相比,芦荟苷(10,20,和40μg/ml)可以显著升高细胞存活率,降低细胞内乳酸脱氢酶漏出率、活性氧含量和线粒体膜电位水平,并且降低丙二醛和升高超氧化物歧化酶活性。结论芦荟苷对PC12细胞氧糖剥夺再灌注损伤具有明显的保护作用。     

淫羊藿苷对氧糖剥夺所致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究淫羊藿苷对氧糖剥夺PC12细胞所致炎症损伤的保护作用。方法采用PC12细胞复制氧糖剥夺2 h细胞损伤模型。实验分成6组,即正常组,模型组,尼莫地平组(10-5mol·L-1),淫羊藿苷高、中、低剂量组(10-5,10-6,10-7mol·L-1)。将淫羊藿苷各剂量组预给药1 h加氧糖剥夺期间给药2 h后,用MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞上清液的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-lβ(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果淫羊藿苷各剂量组均能显著降低氧糖剥夺PC12细胞上清液的TNF-α、IL-1β、IL-6含量,提高细胞的活力,与模型组比较,差异均有显著性意义(P0.05,P0.01)。结论淫羊藿苷能减轻氧糖剥夺PC12细胞所致的炎症损伤,具有细胞保护作用。     

清脑滴丸下调HIF-1α/BNIP3表达拮抗氧糖剥夺/复氧诱导C6胶质细胞凋亡

目的研究清脑滴丸对氧糖剥夺诱导C6胶质细胞损伤的HIF-1α/BNIP3以及细胞凋亡的影响及机制。方法采用氧糖剥夺/复氧方法建立C6胶质细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组、清脑滴丸组。采用Western Blot法检测各组HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3蛋白表达,免疫荧光染色法观察各组HIF-1α、Cleaved Caspase-3的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与正常组比较,模型组细胞活力降低(P0.01),HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3表达增加(P0.01,P0.05),细胞凋亡率明显升高(P0.01);与模型组比较,清脑滴丸1.25 g/L组细胞活力升高(P0.05),HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3表达和细胞凋亡率均降低(P0.01,P0.05)。结论清脑滴丸抑制C6胶质细胞凋亡的作用机制可能与通过下调HIF-1α和BNIP3过表达,降低Cleaved Caspase-3表达有关。     

心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧损伤原代神经元的保护作用

[目的]探讨心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤的原代神经元细胞活力及微管相关蛋白2(MAP-2)表达的影响。[方法]取新生24 h内SD大鼠的大脑皮质进行神经元原代培养,并通过免疫荧光法进行MAP-2目的蛋白鉴定;建立神经元OGD/R损伤的体外模型,CCK-8检测不同浓度的心脑舒通胶囊对体外正常培养和OGD/R损伤后神经元细胞活力的影响;选取最佳浓度的心脑舒通胶囊进行MAP-2的荧光表达强度实验,通过倒置荧光显微镜进行拍照处理,并通过软件对神经元突触长度进行测量及统计处理,Western blot法检测MAP-2的蛋白表达情况。[结果]神经元原代培养成功,且MAP-2染色阳性。CCK-8结果显示心脑舒通胶囊在10、25、50μg/mL浓度对正常培养神经元细胞有细胞毒作用(P<0.05),因此选取低于10μg/mL浓度的心脑舒通胶囊进行后续实验。而在OGD/R损伤条件下,与模型组比较,心脑舒通胶囊在3.125、6.25μg/mL浓度能显著增加OGD/R损伤神经元的细胞活力(P<0.05);免疫荧光实验结果显示,与对照组比较,模型组MAP-2荧光表达强度及神经元突触长度明显降低(P<0.05);与模型组比较,心脑舒通胶囊在3.125μg/mL浓度能显著增加MAP-2的荧光表达强度及神经元突触长度(P<0.05)。Western blot实验结果显示,与对照组比较,模型组MAP-2蛋白表达显著降低(P<0.05),与模型组比较,心脑舒通胶囊能显著增加MAP-2的蛋白表达(P<0.05)。[结论]心脑舒通胶囊能促进OGD/R损伤神经元活力,其作用机制与促进细胞骨架蛋白MAP-2表达及突触稳定性有关。     

miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧致SH-SY5Y细胞损伤中的作用研究

目的观察miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中的作用并从炎症/凋亡途径探讨其机制。方法 SH-SY5Y细胞分为control组、OGD/R组、OGD/R+miR-204-5p mimic组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor组、OGD/R+miR-204-5p mimic negative control组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor negative control组。采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞术、TUNEL染色法检测细胞凋亡、酶联免疫法检测炎症因子(IL-10、IL-1β、TNF-α、PGE2)含量、qRT-PCR检测miR-204-5p的表达、western blot检测炎症及凋亡相关蛋白(COX-2、Bcl-2、Bax)的表达。结果与对照组相比,OGD/R组细胞miR-204-5p表达显著降低,IL-1β、TNF-α、PGE2含量增多,IL-10含量减少,COX-2、Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下降,细胞损伤明显加重;与OGD/R组比较,miR-204-5p mimic下调COX-2、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,IL-10含量增加,IL-1β、TNF-α、PGE2含量减少,细胞活力明显增加、凋亡率显著降低,细胞损伤减轻。结论 miR-204-5p对OGD/R致SH-SY5Y细胞损伤具有明显保护作用,其机制可能与减轻细胞炎症和凋亡有关。     

miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧致SH-SY5Y细胞损伤中的作用研究

目的观察miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中的作用并从炎症/凋亡途径探讨其机制。方法 SH-SY5Y细胞分为control组、OGD/R组、OGD/R+miR-204-5p mimic组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor组、OGD/R+miR-204-5p mimic negative control组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor negative control组。采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞术、TUNEL染色法检测细胞凋亡、酶联免疫法检测炎症因子(IL-10、IL-1β、TNF-α、PGE2)含量、qRT-PCR检测miR-204-5p的表达、western blot检测炎症及凋亡相关蛋白(COX-2、Bcl-2、Bax)的表达。结果与对照组相比,OGD/R组细胞miR-204-5p表达显著降低,IL-1β、TNF-α、PGE2含量增多,IL-10含量减少,COX-2、Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下降,细胞损伤明显加重;与OGD/R组比较,miR-204-5p mimic下调COX-2、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,IL-10含量增加,IL-1β、TNF-α、PGE2含量减少,细胞活力明显增加、凋亡率显著降低,细胞损伤减轻。结论 miR-204-5p对OGD/R致SH-SY5Y细胞损伤具有明显保护作用,其机制可能与减轻细胞炎症和凋亡有关。     

苦碟子注射液对氧糖剥夺/复氧损伤大鼠C6胶质细胞IκBα/NF-κB蛋白的调节作用

目的研究苦碟子注射液对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤大鼠C6胶质细胞的保护作用及对IκBα/NF-κB蛋白活化的影响。方法将C6胶质细胞分为空白对照组、OGD/R模型组、苦碟子注射液组,采用OGD/R方法建立C6胶质细胞损伤模型。MTT法确定氧糖剥夺/复氧时间和苦碟子注射液的最佳有效浓度;LDH漏出率检测细胞死亡率;Western Blot法检测p-IκBα/IκBα、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达。结果 C6胶质细胞OGD/R时间为OGD24h/R6h,苦碟子注射液最佳浓度为1.25%。OGD/R损伤后,细胞IκBα和NF-κB的表达上调及磷酸化蛋白增加;苦碟子注射液能够显著降低细胞死亡率,降低细胞p-IκBα和p-NF-κB蛋白高表达。结论 OGD/R损伤C6胶质细胞,促进了IκBα/NF-κB磷酸化,苦碟子注射液可抑制C6胶质细胞中IκBα/NF-κB磷酸化活化,降低细胞死亡率,对胶质细胞起到保护作用。     

刺五加多糖对氧糖剥夺诱导神经元氧化损伤的保护作用

目的 探讨刺五加多糖对氧糖剥夺诱导神经元氧化损伤的保护作用.方法 培养PC12细胞,采用氧糖剥夺(OGD)及厌氧袋相结合法建立缺血诱导神经细胞继发损伤模型,电镜观察细胞形态,应用比色法测定细胞外液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、MDA含量和SOD酶活力.结果 与模型组比较,刺五加多糖干预后PC12细胞氧化损伤明显减轻,细胞SOD酶活力提高,细胞内MDA含量及LDH释放量降低.结论 刺五加多糖对OGD引起的神经元样细胞的损伤具有保护作用,其作用机制可能与刺五加多糖具有抗氧化、清除自由基的作用有关.     

天麻素对糖氧剥夺再复供皮层神经细胞NF-κB炎症级联信号通路表达的影响

目的:研究天麻素对糖氧剥夺再复供损伤原代皮层神经细胞的保护作用,以及对炎症相关信号通路表达的影响。方法:构建皮层神经细胞糖氧剥夺再复供(OGD/R)损伤模型,随机分为空白组、模型组、天麻素(80,60,40 mg·L-1)组。噻唑蓝(MTT)比色法测定皮层细胞存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,高通量RNA-Seq测序分析技术检测处理细胞的所有基因转录本的表达差异,通过功能注释与富集分析筛选出与OGD/R损伤或天麻素预处理保护作用相关的基因分子与代谢通路。结果:OGD/R损伤后皮层细胞活性下降,LDH释放增加,而天麻素预处理能提高细胞存活率,并显著下调LDH漏出率,转录组测序分析发现其分子机制主要涉及核转录因子-κB(NF-κB,18 gene),肿瘤坏死因子(TNF,21 gene)等信号通路的抑制调控。与模型组比较,天麻素下调了NF-κB,Toll样受体2(TLR2),肿瘤坏死因子受体1/2(TNFR1/2),白细胞介素-6(IL-6),细胞间黏附分子-1(ICAM-1),干扰素诱导蛋白-10(IP-10),CC趋化因子2(CCL2),CXC趋化因子1/2/3(CXCL1/2/3),CXC趋化因子9(CXCL9/Mig)等多种炎症相关信号分子的转录表达。结论:天麻素对OGD/R损伤皮层神经细胞具有保护作用,其机制主要与抑制TLR-NF-κB-TNF炎症级联相关信号通路表达相关。     

丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的 基于氧化应激和凋亡探究丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法 采用水提法制备不同配伍比例丹参-葛根提取物,体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞并建立OGD/R损伤模型,采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法筛选最佳配伍比例提取物用于后续实验。将SH-SY5Y细胞分为空白组、OGD/R组和丹参-葛根（SP）提取物低、中、高剂量组（10、30、100 mg·L^-1）,除空白组外,其余各组细胞在氧糖剥夺4 h后迅速复氧12 h进行OGD/R造模。采用CCK-8法检测细胞存活率,显微条件下观察细胞形态,分光光度计法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放率、超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量,2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法（DCFH-DA）检测细胞活性氧（ROS）水平,JC-1法检测线粒体膜电位,Hoechst 33342染色法观察细胞核形态,流式细胞术结合异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染检测细胞凋亡。结果 丹参-葛根2∶1配伍时SH-SY5Y细胞的存活率最佳,与空白组比较,OGD/R组细胞形态破损,细胞上清液LDH释放率、细胞ROS水平和MDA含量显著升高（P<0.01）,SOD活性和GSH水平显著降低（P<0.01）,线粒体膜电位下降,细胞凋亡率升高（P<0.01）;与OGD/R组比较,SP提取物各给药组可呈浓度依赖性地提高细胞存活率,改善细胞形态,降低细胞上清液LDH释放率（P<0.01）;SP提取物30、100 mg·L^-1组可明显降低细胞内ROS水平,明显提高细胞中SOD活性和GSH水平（P<0.05,P<0.01）,100 mg·L^-1可明显降低细胞内MDA含量（P<0.05）;此外,丹参-葛根提取物给药后可提高线粒体膜电位,30、100 mg·L^-1可显著降低细胞凋亡率（P<0.01）。结论 丹参-葛根提取物2∶1配伍对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞有较好的保护作用,这可能与其降低细胞氧化损伤,抑制细胞凋亡相关。     

苦豆碱对氧糖剥夺再灌注损伤后海马神经元的保护作用

目的:探讨苦豆碱对氧糖剥夺再灌注损伤后海马神经元的保护作用。方法:以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象建立氧糖剥夺再灌注损伤模型,MTT法检测神经细胞的存活率,分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,激光共聚焦显微镜(CLSM)测定海马神经元细胞内Ca2+浓度和线粒体膜电位水平(MMP),利用hoechst33342检测细胞凋亡率。结果:与氧糖剥夺再灌注损伤组比较,苦豆碱(25,50,100 mg/L)组可显著提高细胞存活率,降低乳酸脱氢酶漏出率,抑制Ca2+浓度升高,苦豆碱(25,50,100 mg/L)组能显著降低线粒体膜电位水平,降低细胞凋亡率。结论:苦豆碱对海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤具有明显的保护作用。     

补阳还五汤通过上调SIRT1抑制脑微血管内皮细胞氧糖剥夺再灌注诱导氧化应激损伤

目的:通过建立氧糖剥夺再灌注模型,观察补阳还五汤对氧糖剥夺再灌注诱导脑微血管内皮细胞(r BMECs)氧化应激损伤的作用,并进一步探讨沉默调节蛋白1(Sirtuin type 1,SIRT1)是否是其发挥作用的靶点。方法:分离培养原代大鼠脑微血管内皮细胞,建立体外氧糖剥夺再灌注损伤模型,SD大鼠按15g/kg的剂量每日灌胃给药补阳还五汤1次,连续灌胃1周后分离得到血清,将细胞分为尼莫地平组、对照组、模型组、补阳还五汤含药血清低剂量组(10%),补阳还五汤含药血清高剂量组(20%),应用CCK-8法检测细胞存活率,测定补阳还五汤含药血清对r BMECs活力的影响,检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及活性氧簇(ROS)含量,并采用Western blot、实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)检测SIRT1表达水平。结果:与对照组相比,氧糖剥夺再灌注处理组的细胞存活率明显降低,LDH活性及ROS、MDA的含量升高,SIRT1蛋白、m RNA表达明显下降;与损伤组相比,10%、20%的补阳还五汤含药血清能明显提高氧糖剥夺再灌注损伤后细胞的存活率,降低LDH、ROS、MDA的含量,提高SIRT1蛋白、m RNA的表达;尼莫地平组与补阳还五汤高低剂量组差异无显著。结论:补阳还五汤对脑微血管内皮细胞氧糖剥夺再灌注诱导的氧化应激损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能是通过上调SIRT1表达水平实现的。