淫羊藿苷对慢性哮喘大鼠氧化应激及肺组织Nrf2、HO-1表达的影响

目的:探究淫羊藿苷对慢性哮喘大鼠肺组织Nrf2、HO-1表达的影响及对氧化应激的干预作用。方法:采用OVA致敏法建立慢性哮喘大鼠模型。将模型大鼠随机分为正常对照组,模型组,布地奈德组及淫羊藿苷组。于末次激发24 h内处死大鼠,取右肺组织以ELISA方法检测氧化/抗氧化因子ROS及SOD的表达,并以RT-PCR及Western Blot方法分别检测Nrf2 mRNA和HO-1蛋白表达。结果:与模型组比较,淫羊藿苷组及布地奈德组均可提升哮喘大鼠肺组织中SOD、Nrf2 mRNA以及HO-1蛋白的表达,差异显著(P0.05),且组内比较无明显差异(P0.05);并可有效降低哮喘大鼠肺组织中ROS表达,与模型组比较差异显著(P0.05),且组内比较无明显差异(P0.05)。结论:淫羊藿苷可有效调控慢性哮喘大鼠氧化应激水平,且可显著上调慢性哮喘大鼠肺组织Nrf2、HO-1表达,其可能通过抗氧化方法对哮喘的治疗产生干预作用。     

淫羊藿及女贞子协同布地奈德对哮喘大鼠糖皮质激素受体及抗炎作用的影响

目的研究淫羊藿、女贞子协同布地奈德对哮喘大鼠糖皮质激素受体(GR)及抗炎作用的影响。方法 SPF级健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、哮喘模型组、布地奈德组(0.01%布地奈德雾化20 min)、煎剂组(淫羊藿、女贞子煎剂3.5 g/kg灌胃)、布地奈德合煎剂组(0.01%布地奈德雾化20 min+淫羊藿、女贞子煎剂3.5 g/kg灌胃)。采用酶免法检测血清皮质酮(CORT)、白介素-4(IL-4)、免疫球蛋白E(Ig E)含量,流式细胞术检测肺泡灌洗液(BALF)中GR蛋白表达及结合力。结果布地奈德组及布地奈德合煎剂组可显著降低血清IL-4、Ig E含量(P0.05,P0.01);煎剂组能显著降低血清Ig E含量(P0.05)、升高血清CORT、BALF GR蛋白含量(P0.05);布地奈德合煎剂组能显著升高血清CORT含量、BALF GR蛋白含量及蛋白结合力(P0.01,P0.05)。结论保护糖皮质激素(GC)发挥作用的环节及局部抗炎作用的敏感性可能是淫羊藿、女贞子协同布地奈德治疗哮喘的作用机制之一。     

淫羊藿女贞子配伍协同激素对哮喘大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的观察淫羊藿女贞子配伍协同激素对哮喘大鼠肺组织细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法SD雄性大鼠,随机分为7组,分别是正常对照组(对照组)、哮喘模型组(模型组)、布地奈德组、淫羊藿女贞子煎剂组(煎剂组)、布地奈德合煎剂组(合煎剂组)、淫羊藿女贞子提取物组(提取物组)、布地奈德合提取物组(合提取物组)。卵蛋白致敏及激发建立大鼠哮喘模型,药物治疗4周。TUNEL法检测肺组织细胞凋亡水平,荧光实时定量PCR检测肺组织Caspase-9、Fas、Hras、NF-κB、Xiap mRNA表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织凋亡水平及Caspase-9 mRNA表达显著下调(P 0.01),NF-κB和Xiap m RNA显著升高(P 0.01),Fas及Hras mRNA差异无统计学意义(P 0.05)。与模型组比较,各给药组均能显著上调细胞凋亡水平(P 0.05或P 0.01),抑制NF-κB mRNA的表达(P 0.05或P 0.01);除布地奈德组外其余4个给药组可上调Xiap mRMA的表达(均P 0.05或P 0.01);煎剂组、合煎剂组、提取物组Caspase-9、Fas mRNA表达均显著差异(P 0.05或P 0.01)。结论上调哮喘大鼠肺组织凋亡水平,调节Caspase-9、Fas、NF-κB、Xiap mRNA的表达可能是淫羊藿女贞子协同激素治疗哮喘的作用机制之一。     

淫羊藿、女贞子协同地塞米松影响哮喘大鼠糖皮质激素受体的研究

目的观察中药淫羊藿、女贞子对地塞米松干预大鼠哮喘模型全身及局部不同水平糖皮质激素受体(GR)的影响。方法建立大鼠哮喘模型,腹腔注射地塞米松2周治疗,同时配合灌胃淫羊藿女贞子煎液,流式细胞术检测支气管肺泡灌洗液(BALF)与血淋巴细胞中GR蛋白及GR结合力的表达。结果哮喘模型组血淋巴细胞及BALF中GR结合力均显著降低(P0.05或P0.01);与哮喘模型组比较,激素干预组BALF中GR蛋白表达量明显降低(P0.01),血淋巴细胞及BALF中GR结合力均明显降低(P0.05或P0.01);应用激素的同时合用淫羊藿女贞子,能显著上调BALF中GR蛋白量(P0.05)及血淋巴细胞及BALF中GR结合力(P0.05或P0.01)。结论在激素应用的同时合用中药淫羊藿、女贞子在整体及局部水平均能提高因糖皮质激素(GC)干预下降的GC结合力,改善GR对GC的耐受,提高支气管肺组织及机体对激素的敏感性。     

基于RhoA/ROCK通路探讨淫羊藿苷对肾病综合征大鼠的保护机制

目的:研究淫羊藿苷对肾病综合征(NS)大鼠肾素同源蛋白A(RhoA)/Rho相关激酶(ROCK)通路的影响和保护机制。方法:实验对象为54只清洁级雄性SD大鼠,随机均分为正常组,模型组,RhoA抑制剂组(Rhosin,40 mg·kg^-1·d^-1)和淫羊藿苷低、中、高剂量组(30,60,120 mg·kg^-1·d^-1)。模型组大鼠尾静脉注射6.5 mg·kg^-1盐酸阿霉素给,诱导大鼠NS发生。造模后腹膜给药,正常组和模型组给予生理盐水2.5 mL·d^-1,抑制剂组和各剂量组分别给对应剂量的Rhosin和淫羊藿苷进行干预。试剂盒检测各组大鼠尿总蛋白(Alb),尿肌酐(Cre)水平,计算尿总蛋白/肌酐值(A/C);透射电镜(TEM)鉴定肾脏超微病理;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA水平和蛋白表达。结果:TEM结果显示,正常组基底膜完整,足突规整;模型组基底膜损坏严重,足突出现消失、融合严重;淫羊藿苷低剂量组基底膜损伤减轻,足突的数量和密度改善、融合明显;淫羊藿苷中剂量组和抑制剂组,基底膜增厚情况减轻,足突轻度融合;淫羊藿苷高剂量组基底膜结构较完整,足细胞较长、排列较紧密。与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白量、尿液中Cre,A/C,肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,抑制剂组和淫羊藿苷低、中、高剂量组24 h尿蛋白量,A/C和肾组织中RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平,抑制剂组和淫羊藿苷高剂量组尿液中Cre明显降低(P<0.05)。与抑制剂组比较,淫羊藿苷高剂量组24 h尿蛋白量、尿液中Cre和肾组织RhoA蛋白水平明显降低(P<0.05);淫羊藿苷低剂量组24 h尿蛋白量、尿液中Cre,A/C和肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平,淫羊藿苷中剂量组肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA水平明显升高(P<0.05)。与淫羊藿苷低剂量组比较,淫羊藿苷中、高剂量组尿液中Alb,A/C和肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平,淫羊藿苷高剂量组尿液中Cre明显降低(P<0.05)。与淫羊藿苷中剂量组比较,淫羊藿苷高剂量组24 h尿蛋白量、尿液中Cre和肾组织RhoA,ROCK1 mRNA和蛋白水平,肾组织ROCK2 mRNA明显降低(P<0.05)。结论:在NS大鼠治疗过程中,淫羊藿苷可能通过影响RhoA/ROCK通路,实现肾小球内皮和足细胞保护作用。     

淫羊藿和熟地煎剂对糖皮质激素受体下调模型大鼠糖皮质激素受体的影响

目的 观察温阳、滋阴代表中药淫羊藿、熟地水煎剂对糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）下调模型大鼠GR的影响。方法 皮下注射氢化可的松法，建立GR下调模型。72只SD大鼠随机分为正常组、模型组、淫羊藿组、熟地组，每组再分别分为3个不同时间点组（给药第3、7、14天），每组6只大鼠。采用放免法和流式细胞术检测给药后不同时间点（第3、7、14天）各组大鼠血浆皮质酮水平及脾淋巴细胞GR的蛋白表达和结合力的变化。结果 不同时间点模型组血浆皮质酮水平与正常对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05），灌胃给药14天后，熟地组血浆皮质酮水平较模型组降低（P＜0.05）。GR蛋白表达和结合力模型组较正常组明显下降(P＜0.01），熟地给药7天和14天组较模型组均明显上调（P＜0.01），淫羊藿给药14天组较模型组也升高（P＜0.01）。结论 淫羊藿、熟地水煎剂均能不同程度改善GR下调模型大鼠GR的蛋白表达和结合力，但其作用时间点不一致。     

淫羊藿苷对血管性痴呆大鼠海马组织BDNF mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察淫羊藿苷对血管性痴呆大鼠海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA及蛋白表达的影响。方法:80只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、维生素D[0.025μg/(kg·d)]阳性对照组及淫羊藿苷低[200 mg/(kg·d)]、中[400 mg/(kg·d)]、高[800 mg/(kg·d)]剂量组。造模成功后药物干预8 w,HE染色观察脑组织的病理学改变;ELISA法检测血清BDNF水平;采用TUNEL法观察大鼠脑组织海马区神经元细胞凋亡;RT-PCR检测海马组织BDNF mRNA表达水平;Western blot法检测海马组织BDNF蛋白表达水平。结果:假手术组大鼠海马组织细胞结构与形态均正常,细胞排列整齐,形态完整;模型组大鼠海马出现弥散性损伤,海马组织细胞排列紊乱,形态不完整,细胞数目较少,结构不正常,细胞核固缩;各给药组与模型组比较有所改善,大鼠神经元损伤较模型组减轻,神经细胞变性坏死减轻,排列较整齐。与假手术组比较,模型组大鼠血清BDNF水平降低,海马神经元凋亡率显著升高,海马组织中BDNF mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05或P0.01);与模型组比较,淫羊藿苷高剂量组上述指标均显著改善(P0.05或P0.01)。结论:淫羊藿苷能改善血管性痴呆大鼠海马组织BDNF的表达,这可能是淫羊藿苷治疗血管性痴呆的机制。     

淫羊藿苷对类风湿关节炎小鼠NLRP3炎性小体信号通路的影响

目的探讨淫羊藿苷对类风湿关节炎小鼠的干预作用及NLRP3炎性小体信号通路的影响。方法将50只雄性DBA/1小鼠随机分为对照组、模型组、淫羊藿苷10 mg/kg组、淫羊藿苷20 mg/kg组、淫羊藿苷40 mg/kg组,每组10只。模型组和淫羊藿苷各组尾巴根部皮下注射含Ⅱ型胶原的完全弗氏佐剂诱导类风湿关节炎模型,在第21天二次免疫造模后,淫羊藿苷各组开始给予相应剂量淫羊藿苷灌胃,对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水,均每天1次,连续3周。观察各组小鼠关节炎评分和关节肿胀度;眼球取血,采用ELISA法检测各组小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;分离关节滑膜组织,采用HE和番红O染色观察各组小鼠关节滑膜的病理变化;采用RT-PCR检测各组小鼠滑膜组织中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平;采用Western blot法检测各组小鼠滑膜组织中NLRP3炎性小体信号通路分子(IL-1β、Caspase-1及NLRP3)表达水平。结果首次免疫21 d后,模型组及淫羊藿苷各组小鼠的关节炎评分开始增加,模型组小鼠的关节炎评分持续增加至实验结束;从第27天开始,淫羊藿苷各组小鼠的关节炎评分与模型组比较呈剂量依赖性降低(P均0.05)。淫羊藿苷各组关节肿胀度均明显低于模型组(P均0.05),且呈剂量依赖性降低。模型组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平和滑膜组织中IL-1βmRNA、IL-18 mRNA、IL-1β、Caspase-1、NLRP3表达水平均显著高于对照组(P均0.05);淫羊藿苷各组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平和滑膜组织中IL-1βmRNA、IL-18 mRNA、IL-1β、Caspase-1、NLRP3表达水平均显著低于模型组(P均0.05),且呈剂量依赖性降低。病理结果显示模型组小鼠滑膜组织中出现严重的炎性细胞浸润、基质破坏及钙含量显著减少,淫羊藿苷各组炎性症状及基质破坏减轻,钙含量显著增加。结论淫羊藿苷可通过抑制NLRP3炎性小体介导的炎症反应来缓解类风湿关节炎,对类风湿关节炎的治疗具有潜在价值。     

淫羊藿对哮喘大鼠肺组织RANTES及MCP-3表达的影响

目的 观察补肾中药淫羊藿对哮喘大鼠肺组织调节激活正常T细胞表达和分泌因子(regulated on activation, normal T cell expressed and secreted，RANTES)、单核细胞趋化蛋白3（monocyte chemotactic protein-3，MCP-3）表达的影响，进一步探讨淫羊藿防治哮喘的作用机制。 方法 将挪威大鼠随机分成6组：正常组、模型组、阳性药组（给地塞米松）、淫羊藿低、中、高剂量组（分别给淫羊藿0.125、0.5、2.0 g/mL)。用Real-time PCR法检测肺组织RANTES、MCP-3 mRNA的表达，ELISA法检测各组血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）4、5的含量。结果 与模型组比较，各用药组大鼠肺组织RANTES、MCP-3 mRNA的表达下调（P＜0.05或P＜0.01），TNF-α水平均明显降低（P=0.000），阳性药组和淫羊藿中、高剂量组IL-4水平均明显下降（P=0.007，P=0.047，P=0.033）, IL-5水平仅见阳性药组和淫羊藿高剂量组显著下降（P=0.003，P=0.005）。结论 哮喘发作期给予淫羊藿可减轻哮喘气道炎症，并且其与抑制肺组织RANTES、MCP-3表达有关。     

淫羊藿苷激活Nrf2/HO-1信号通路减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤研究

目的探究淫羊藿苷对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用及其分子机制。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为青年对照组(2月龄)、衰老模型组(16月龄)和淫羊藿苷低、高剂量组(2、6 mg/kg,16月龄),每组8只,给予普通或含药饲料饲养4个月,禁食12 h后处死大鼠。HE染色法观察睾丸组织形态变化;黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)水平;免疫荧光法检测睾丸组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)及DNA损伤相关蛋白γ-H2AX的表达和定位;Western blotting法检测睾丸组织中Nrf2及其下游相关蛋白血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、γ-H2AX和DNA损伤修复相关蛋白p-p53和p21表达水平。结果HE染色结果表明,淫羊藿苷能明显改善自然衰老大鼠睾丸组织形态学变化,显著提高衰老大鼠睾丸组织SOD活力,降低MDA水平;免疫荧光结果显示,淫羊藿苷能明显上调衰老大鼠睾丸组织中各级生精细胞内Nrf2蛋白表达水平,明显下调初级精母细胞和精原细胞中γ-H2AX蛋白表达水平;Western blotting结果显示,淫羊藿苷能显著上调衰老大鼠睾丸组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平,下调γ-H2AX、p-p53和p21蛋白表达水平。结论淫羊藿苷可减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤,其机制与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织MMP-9mRNA表达的影响

目的观察咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织MMP-9 mRNA表达的影响。方法取SD大鼠40只,随机分为正常对照组、模型对照组、咳喘宁高、低剂量组(27,13.5 g/kg)和桂龙咳喘宁组(0.41 g/kg),每组8只。除正常对照组外,其余各组以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠支气管哮喘模型,各给药组均从第1次哮喘激发开始(造模第3周)至处死前每天灌胃给药,激发并给药4周后处死大鼠,采用RT-PCR法检测MMP- 9 mRNA的表达,HE染色法观察肺和支气管病理组织学变化。结果与正常对照组相比较,模型对照组大鼠支气管管壁和平滑肌厚度、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞数以及肺组织MMP-9 mRNA表达均明显增加(P<0.01);与模型对照组比较,各治疗组均可显著降低支气管管壁和平滑肌厚度、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞数以及MMP-9 mRNA的表达(P<0.01)。结论咳喘宁能够降低肺组织MMP-9 mRNA的表达,抑制气道炎症和气道重塑。     

止喘汤对哮喘大鼠模型气道重构中MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的:观察中药止喘汤对哮喘大鼠气道重构的干预,并探讨其对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。方法:50只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德(BUD)组、黄芩组及止喘汤组5组。采用卵清白蛋白(OVA)致敏加激发法复制大鼠哮喘模型,苏木精-伊红染色测气道形态学参数,免疫组化染色测定气道壁MMP-9、TIMP-1及IV型胶原含量。结果:哮喘组较正常组大鼠气道壁明显增厚,MMP-9、TIMP-1表达增多(P<0.01)。用中药和BUD干预后大鼠气道壁明显变薄,MMP-9、TIMP-1表达减少,与哮喘组比较有统计学意义(P<0.01);其中复方组肺纤维化轻于单味组,各项指标比较有统计学意义(P<0.05)。大鼠气道壁的厚度、IV型胶原含量、MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP间有相关关系。结论:中药具有干预哮喘大鼠模型气道重构的作用,这些作用可能是通过调节MMP-9和TIMP-1而实现的,基于中医基本病机证型的复方优于单味中药。     

糖皮质激素、香菇多糖对哮喘气道重塑大鼠肺组织c-Jun氨基末端激酶表达的影响

 目的 研究糖皮质激素、香菇多糖（lentinan,LNT）对哮喘气道重塑大鼠肺组织c-Jun氨基末端激酶（JNK）表达的影响。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘组、布地奈德（BUD）组、地塞米松（DXM）组、LNT组,以卵白蛋白致敏和激发复制哮喘气道重塑模型,干预组分别于每次雾化激发前以BUD雾化或DXM、LNT腹腔注射干预,正常对照组以生理盐水代替卵清白蛋白致敏和激发。留取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞分类计数。采用图像分析技术测定支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）,免疫组化（IHC）检测肺内磷酸化JNK（p-JNK）蛋白表达,WESTERN BLOT检测肺匀浆p-JNK表达,直线相关分析肺组织p-JNK蛋白平均吸光度（A_m）与BALF中嗜酸性粒细胞百分比（EOS%）的相关性以及Wat、Wam与p-JNK蛋白的相关性。 结果 哮喘组BALF中EOS%显著高于正常对照组（P＜0.01）,各干预组EOS%均显著低于哮喘组（均P＜0.01）,但仍高于正常对照组（P＜0.05或P＜0.01）;哮喘组气道壁厚度较正常对照组显著增加,各干预组可抑制气道壁增厚;BUD、DXM组Wam比较,无显著性差异（P＞0.05）,二者均低于LNT组（均P＜0.01）;BUD、LNT组Wat比较无显著性差异（P＞0.05）,但均比DXM组高（P＜0.05或P＜0.01）;IHC显示p-JNK蛋白主要表达于支气管上皮细胞、平滑肌细胞及散在炎性细胞的胞浆和胞核;IHC、WESTERN BLOT检测均显示哮喘组肺组织p-JNK蛋白表达增高;BUD、DXM、LNT均可抑制JNK磷酸化;BUD、DXM组p-JNK表达均较LNT组低（均P＜0.01）;肺组织p-JNK A_m与BALF中EOS%呈显著正相关（P＜0.01）,Wat、Wam与p-JNK A_m均呈显著正相关（均P＜0.01）。结论 BUD、DXM、LNT有减轻哮喘气道EOS炎症,抑制哮喘气道重塑的作用,其机制可能与其下调JNK表达有关;LNT抑制气道重塑的作用较糖皮质激素弱。     

加减乌梅丸颗粒对哮喘大鼠激素干预模型气道重塑及转化生长因子-β1/Smad信号通路的影响

目的:观察加减乌梅丸颗粒对哮喘大鼠激素干预模型气道重塑及转化生长因子(TGF)-β1/Smad信号通路的影响。方法:选取30只雄性SD大鼠并随机分为正常组、哮喘组、地塞米松组、布地奈德组及中药组,除正常组外其余组以卵蛋白致敏、雾化激发方法建立哮喘大鼠模型,除正常组和哮喘组外其余均予地塞米松干预并逐步撤减,布地奈德组予以普米克令舒雾化,中药组予以加减乌梅丸颗粒灌胃。光镜下观察各组大鼠肺组织病理形态学改变,测定气道壁面积百分比(Wat%)、气道平滑肌面积百分比(Wam%),免疫组织化学法比较各组Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)表达水平,蛋白质印迹法和荧光定量PCR法比较TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7蛋白及基因表达水平。结果:与正常组比较,哮喘组大鼠气道壁及平滑肌层明显增厚,管腔变窄,Wat%、Wam%升高,差异有统计学意义(P<0.05),CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白及基因表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05),Smad7表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与哮喘组比较,地塞米松组Wat%降低,差异有统计学意义(P<0.05),CollagenⅠ、CollagenⅢ表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),TGF-β1、Smad3蛋白及基因表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与地塞米松组比较,中药组Wat%降低,差异有统计学意义(P<0.05),CollagenⅠ、CollagenⅢ表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白及基因表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加减乌梅丸颗粒可通过调控TGF-β1/Smad信号通路从而减少气道平滑肌增生以及CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白沉积,抑制气道壁增厚,延缓气道重塑的发展。     

喘敷灵穴位贴敷对哮喘模型大鼠疗效机制的探讨

目的:探讨喘敷灵巴布剂防治哮喘的作用机制.方法:将30只雌性SD犬鼠随机分为正常组(生理盐水腹腔注射+空白敷贴+生理盐水雾化)、模型组(卵蛋白生理盐水腹腔注射+空白敷贴+卵蛋白生理盐水雾化)、敷贴组(卵蛋白生理盐水腹腔注射+喘敷灵巴布剂敷贴+卵蛋白生理盐水雾化),每组10只.观察各组大鼠发生点头呼吸的潜伏期、哮喘发作症状;检测各组大鼠白介素4信使RNA(IL-4 mRNA),γ-干扰素信使RNA(γ-IFN mRNA)的表达;观察右肺中叶肺组织病理变化.结果:①与正常组比较,模型组外周血单核细胞(PBMC)中IL-4 mRNA表达增强、肺组织充血渗出及嗜酸性粒细胞(EOS)浸润严重(P＜0.01);②与模型组比较,敷贴组PBMC中IL-4 mRNA降低,第5、7次诱喘发生点头呼吸的潜伏期延长、频率减少、肺组织EOS浸润减轻(P＜0.05),而肺组织充血渗出无显著差异(P＞0.05).结论:喘敷灵巴布剂能抑制哮喘大鼠PBMC中IL-4基因的转录及气道内EOS释放炎症介质、细胞因子,减轻气道上皮损伤和气道高反应性.     

补肾益气方对哮喘大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴及CD4^+CD25^+调节性T细胞功能的影响

目的通过观察哮喘大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴与CD4^+CD25^+调节性T细胞(Regulatory T cells,Tregs)功能的改变,探讨补肾益气方对哮喘的干预机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、布地奈德组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组,每组10只。采用卵蛋白致敏并激发制备哮喘模型,中药组采用相应剂量药物灌胃给药,西医治疗组采用布地奈德雾化吸入。最后1次激发24 h后,采用Buxco有创肺功能仪检测气道阻力;HE染色观察肺组织病理形态学改变;Bio-Plex悬液芯片技术检测血清、BALF中细胞因子水平;流式细胞术检测BALF中Tregs比例;ELISA法测定血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)水平;采用Real time-PCR法检测下丘脑促肾上腺激素释放激素(CRH)mRNA的表达。结果与正常组比较,哮喘组气道阻力及气道炎症显著增加(P<0.05);BALF中Tregs比例明显下降(P<0.05);血清及BALF中IL-10水平显著下降(P<0.05);血浆中CORT、ACTH水平明显下降(P<0.05);下丘脑CRH mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。与哮喘组比较,低、中、高剂量中药组气道阻力和气道炎症明显减轻(P<0.05);BALF中Tregs比例显著增加(P<0.05),并增加血清中IL-10水平(P<0.05);血浆中CORT、ACTH水平明显升高(P<0.05);下丘脑CRH mRNA表达水平明显增加(P<0.05)。结论哮喘大鼠存在下丘脑-垂体-肾上腺轴与Tregs功能紊乱,补肾益气方可显著改善哮喘大鼠气道炎症和气道高反应性,可能与其改善HPA轴与调节Treg细胞功能,增加内源性皮质酮,增加血清IL-10分泌有关。     

咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织白细胞介素-5mRNA表达的影响

目的观察咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织白细胞介素-5（IL-5）mRNA表达的影响。方法40只sD大鼠随机分为正常组、模型组、咳喘宁高剂量组（27g原药材／kg体重）、咳喘宁低剂量组（13．5g原药材／kg体重）、桂龙咳喘宁对照组（0．41g／kg体重），每组8只。除正常组外，以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠支气管哮喘模型，各治疗组均从第1次哮喘激发开始（造模第3周）至处死前每日灌胃给药，激发并给药4周后处死大鼠。采用RT—PCR检测IL-5mRNA表达，采用HE染色观察肺和气管病理组织学变化。结果与正常组比较，模型组大鼠支气管管壁和平滑肌厚度、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞数以及肺组织IL-5mRNA表达明显增加（P〈0．01）；与模型组比较，各治疗组均可显著降低支气管管壁和平滑肌厚度、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞数以及IL-5mRNA表达（P〈0．05或者P〈0．01）。结论咳喘宁可降低肺组织IL-5mRNA的表达，抑制嗜酸性粒细胞在气道的浸润、聚集和活化，减轻哮喘气道炎症。     

哮喘大鼠肺组织TGF-β1与Smad3、Smad7蛋白的变化及不同中医治法对其的影响

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smads蛋白在哮喘大鼠肺组织中的变化及宣肺、固本、宣肺固本三种中医治法(宣肺方、固本方、宣肺固本方)对其的影响。方法以卵蛋白复制大鼠哮喘模型,并用不同中医治法(宣肺方、固本方、宣肺固本方)对其进行干预。在激发哮喘并治疗4周后处死,观察各组大鼠肺系数的变化,并用免疫组化法检测大鼠支气管肺组织中TGF-β1和Smad3、Smad7蛋白的表达。结果经治疗后,(1)哮喘大鼠的肺系数有不同程度的升高,中药治疗组与地塞米松组间的差异有统计学意义;(2)哮喘大鼠支气管肺组织TGF-β1、Smad3蛋白的表达水平升高,而Smad7蛋白的表达下降,三种中医治法对其均有影响,宣肺固本治法优于其他治法,有统计学意义。结论哮喘大鼠气道重建模型中TGF-β1、Smad3蛋白与气道重塑呈正相关,而Smad7蛋白则与气道重塑呈负相关;中医宣肺固本法治疗哮喘气道重建可能与调节TGF-β1和Smad3、Smad7蛋白的表达水平有关。     

滋阴清热方对MRL／1pr狼疮鼠皮质醇及糖皮质激素受体mRNA表达的影响

目的 观察MRL／1pr狼疮鼠皮质醇及糖皮质激素爱体（GR）mRNA表达的变化及滋阴清热方对其水平的影响,探讨中药减轻激素不良反应的机理。方法40只MRL／1pr狼疮模型鼠随机分为4组,即模型组、中药组、西药组、中西药组。分别给予生理盐水、滋阴清热方、强的松悬液、滋阴清热复方＋强的松悬液灌胃,均每日1次,每次0．5mL,连续用药10周。另选用昆明小鼠10只作为正常对照组。应用放射免疫法测定MRL／1pr狼疮鼠糖皮质醇水平,反转录酶一聚合酶链反应法（RT—PCR）检测GRmRNA,观察各组皮质醇、GRmRNA表达的变化。结果模型组血清皮质醇水平与正常组比较,P〉0．05,而GRocmRNA表达明显低于正常组（P〈0．05）。西药组GRαmRNA、GRBmRNA下调水平高于中药组和中西药组（P〈0．01或P〈0．05）。结论滋阴清热方可上调MRL／1pr狼疮鼠GRmRNA表达水平,从而增强糖皮质激素的临床疗效,减少激素不良反应。     

桃仁承气汤治疗百草枯中毒肺损伤的实验研究

目的观察桃仁承气汤治疗百草枯(PQ)中毒大鼠肺损伤的效果,探讨其保护作用及机制,为临床治疗百草枯中毒提供依据。方法1)清洁级雄性Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、桃仁承气汤对照组、PQ模型组、桃仁承气汤治疗组。PQ模型组、桃仁承气汤治疗组予PQ溶液(100 mg/kg)灌胃染毒;桃仁承气汤治疗组染毒后3、9、24、48 h予桃仁承气汤灌胃(5.13 g/kg);空白对照组以等量0.9%氯化钠注射液灌胃;桃仁承气汤对照组予桃仁承气汤3、9、24、48 h灌胃。PQ灌胃后72 h,处死大鼠,用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、高迁移族蛋白(HMGB1)变化情况;开胸取肺组织,测肺干/湿重比(D/W)比值;观察肺病理变化并评分。2)同样方法构建模型和分组,观察并记录PQ中毒大鼠一般状况;30 min后观察记录染毒后72 h各组死亡数,计算各组大鼠生存曲线。结果与PQ模型组比较,桃仁承气汤治疗组D/W比值明显上升,肺病理学评分下降,TNF-α、IL-6、HMGB1水平明显下降,SOD水平明显升高,MDA水平明显下降(P<0.05)。PQ模型组大鼠中毒后72 h存活率为60%,低于桃仁承气汤治疗组的90%(P<0.05)。结论桃仁承气汤能延长PQ中毒大鼠的生存时间,降低炎症反应、过氧化损伤等,抑制HMGB1,减轻PQ中毒肺损伤。