抗纤Ⅰ号对实验性肝纤维化大鼠组织Ⅰ、Ⅲ型胶原及转移生长因子β1 mRNA表达的影响

目的:从分子水平研究抗纤Ⅰ号方剂治疗肝纤维化作用机理.方法:利用CCl4制造大鼠肝纤维化模型,设立正常对照组、肝纤维化模型组及中药治疗组,中药灌胃治疗42d,检测病理学指标、肝纤维化血清学指标、肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化,以及肝组织TGF β1mRNA表达量的变化.结果:肝组织病理学以及血清学指标同对照组统计学尚有显著差异,同时实验也表明治疗组能够明显减少肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原以及TGF β1mRNA的表达量.结论:抗纤Ⅰ号具有逆转肝纤维化的作用,其作用机理可能是通过下调TGF β1mRNA,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成而减轻肝纤维化.     

抗纤Ⅰ号和硒对肝纤维化大鼠免疫功能的调节作用

目的:研究抗纤Ⅰ号、抗纤Ⅰ号加硒对大鼠肝纤维化的治疗作用和免疫调节作用,并从分子水平对其机制进行探讨.方法:利用CCl4、胆固醇等复合因素制造大鼠肝纤维化模型,设立空白对照组、肝纤维化模型组、西药组、抗纤Ⅰ号及抗纤Ⅰ号加硒组,治疗组灌胃治疗42d,检测病理学指标、血清酶学、肝纤维化指标、肝组织羟脯氨酸含量、脾指数、胸腺指数、T淋巴细胞亚群、T淋巴细胞增殖、血清循环免疫复合物、巨噬细胞吞噬功能、肝组织TGF-β1mRNA表达量的变化.结果:与秋水仙碱组相比,中药治疗组大鼠肝脏损伤明显减轻,血清ALT、AST、HA、LN和Hyp均显著降低,提示抗纤Ⅰ号和硒具有很好的抗肝纤维化作用.同时中药治疗组大鼠脾指数降低,胸腺指数升高,胸腺组织CD 4、CD 4/CD 4明显高于秋水仙碱组,T淋巴细胞增殖抑制得到大大改善.血清循环免疫复合物明显减少,巨噬细胞吞噬功能有所上升.RT-PCR实验表明,抗纤工号能够明显抑制TGF-β1mRNA的表达量.结论:抗纤Ⅰ号对大鼠肝纤维化具有明确的治疗作用,且有提高机体免疫力的作用,同时加硒效果更好.其作用机制可能是通过下调TGF-β1mRNA,从而抑制胶原合成实现的.     

抗纤I号对实验性肝纤维化大鼠组织I、Ⅲ型胶原及转移生长因子β1mRNA表达的影响

目的：从分子水平研究抗纤I号方剂治疗肝纤维化作用机理。方法：利用CCL4制造大鼠肝纤维化模型，设立正常对照组、肝纤维化模型组及中药治疗组，中药灌胃治疗42d，检测病理学指标、肝纤维化血清学指标、肝组织I、Ⅲ型胶原的免疫组化，以及肝组织TGFβ1mRNA表达量的变化。结果：肝组织病理学以及血清学指标同对照组统计学尚有显著差异，同时实验也表明治疗组能够明显减少肝组织I、Ⅲ型胶原以及TGFβ1mRNA的表达量。结论：抗纤I号具有逆转肝纤维化的作用，其作用机理可能是通过下调TGFβ1mRNA，抑制I、Ⅲ型胶原的合成而减轻肝纤维化。     

抗纤Ⅱ号抗大鼠免疫性肝纤维化的作用研究

目的:研究中药抗纤Ⅱ号对大鼠免疫性肝纤维化的治疗作用并分析其作用机制.方法:40只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、抗纤Ⅱ号组,猪血清腹腔注射制作免疫性肝纤维化模型.水煮醇提制备抗纤Ⅱ号并用于大鼠,通过RT-PCR、免疫组化以及病理组织学等观察药物的治疗效果.结果:抗纤Ⅱ号组的肝纤维化分级明显改善.免疫组化结果显示,Ⅰ、Ⅲ型胶原和TIMP-1的表达在抗纤Ⅱ号组明显低于模型对照组.TIMP-1 mRNA在抗纤Ⅱ号组肝组织中的表达也明显低于模型对照组,治疗效果与秋水仙碱无差异.结论:抗纤Ⅱ号对大鼠免疫性肝纤维化有治疗作用,并可能通过抑制TIMP-1活性表达、促进肝细胞外基质降解来发挥作用.     

虎金颗粒对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1表达的影响

目的:探讨虎金颗粒对免疫性肝纤维化大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。方法:建立猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化模型,并给予虎金颗粒进行治疗,采用免疫组化法检测肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,并通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法测定肝组织中TIMP-1mRNA的表达。结果:虎金颗粒可使受试动物肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原增生减少,纤维间隔变窄,肝组织TIMP-1 mRNA表达降低,与模型组比较差异显著(P<0.01)。结论:虎金颗粒可通过抑制肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白和TIMP-1的合成表达,而发挥抗纤维化作用。     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝脏MMP-1mRNA及TIMP-1mRNA表达的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响,探讨其防治肝纤维化的作用.方法采用250mL/L四氯化碳给大鼠皮下注射制备肝纤维化模型,并同时给与秋水仙碱及抗纤软肝颗粒小、大剂量治疗,免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、ⅢⅡ型胶原,原位杂交的方法检测MMP-lmRNA、TIMP-1mRNA.结果抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达(P＜0.05),抑制TIMP-1的表达(P＜0.01),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P＜0.01).结论抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用.     

电针对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的 探讨电针对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响.方法 Wistar大鼠随机分为4组(电针治疗组、药物治疗组、模型对照组和正常对照组),应用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型,电针治疗组采用电针肝俞、足三里治疗,药物治疗组采用秋水仙碱治疗.应用Masson染色观察肝组织胶原纤维增生情况,采用实时荧光定量PCR技术检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的变化.结果 与正常对照组比较,模型对照组大鼠肝组织胶原增生,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均明显增加(均P<0.01);与模型对照组比较,电针治疗组大鼠肝组织胶原面积明显减少,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均明显降低(均P<0.01).结论 电针肝俞、足三里能够下调肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达,该作用可能是其抗肝纤维化的重要分子机制.     

芪参益气滴丸抗大鼠肝纤维化的实验研究

目的研究芪参益气滴丸抗肝纤维化的作用机制。方法60只大鼠随机分为正常组、模型组、干预组、对照组及芪参益气滴丸组（简称治疗组）。采用二甲基亚硝胺腹腔内注射建立肝纤维化大鼠模型。按6期分类法评价各组肝纤维化程度。应用RT—PCR检测各组肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原和1型组织性基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）mRNA水平;应用免疫组织化学技术检测各组动物肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原和TIMP-1的表达。结果干预组与治疗组大鼠肝纤维化程度、肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TIMP—1mRNA水平及肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TIMP-1的阳性表达均分别较模型组与对照组显著减轻与下降。结论芪参益气滴丸能明显减轻肝组织病理改变和肝纤维化程度,抑制Ⅰ、Ⅲ胶原和TIMP-1的表达是其抗肝纤维化的部分机制。     

化浊抗纤保肝汤对肝纤维化大鼠的影响及其机制

目的探讨化浊抗纤保肝汤对肝纤维化大鼠的影响及其作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、膈下逐瘀汤组及化浊抗纤Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,每组10只。除正常组外,其余各组均采用猪血诱导大鼠肝纤维化。诱发肝纤维化同时,模型组给予蒸馏水灌胃至第9周,膈下逐瘀汤组和化浊抗纤Ⅰ组分别给予相应药物灌胃至第9周,化浊抗纤Ⅱ组自造模的第3周、化浊抗纤Ⅲ组自造模的第6周给予化浊抗纤保肝汤灌胃至第9周。检测各组大鼠血清AST、ALT、HA、LN和PCⅢ水平;取肝组织行HE和Mallory染色,观察大鼠肝组织病理学改变;采用免疫组化和Northern blot杂交技术检测肝组织中TGF-β1、TIMP-1和MMP-1表达情况。结果各造模组大鼠血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ水平及肝组织中TGF-β1、TIMP-1蛋白与mRNA表达水平均明显高于正常组(P均0.05),各给药组上述指标水平均明显低于模型组(P均0.05);各造模组大鼠肝组织中MMP-1蛋白与mRNA表达水平均明显低于正常组(P均0.05),各给药组大鼠肝组织中MMP-1蛋白与mRNA表达水平均明显高于模型组(P均0.05)。膈下逐瘀汤组与化浊抗纤Ⅰ组各指标水平比较差异均无统计学意义(P均0.05),化浊抗纤Ⅰ组与化浊抗纤Ⅱ组、化浊抗纤Ⅲ组比较差异均有统计学意义(P均0.05),化浊抗纤Ⅱ组与化浊抗纤Ⅲ组比较差异均有统计学意义(P均0.05)。结论化浊抗纤保肝汤能明显减轻肝纤维化大鼠肝功能损伤和肝纤维化程度,其可能通过下调大鼠TGF-β1的表达而减少细胞外基质沉积,降低大鼠TIMP-1的水平而减轻对MMP-1的抑制作用进而促进细胞外基质降解。     

半枝莲水煎液对免疫性肝纤维化大鼠TGF-β1及TIMP-1表达的影响

目的 研究半枝莲水煎液对免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1及TIMP-1表达的影响.方法 Wistar大鼠72只随机分为正常对照组、模型组和半枝莲水煎液低、中、高剂量治疗组及秋水仙碱对照组共6组;采用猪血清腹腔内注射构建肝纤维化大鼠模型,肝组织切片HE染色后,光镜下观察大鼠肝组织纤维化程度;免疫组化染色法(SABC型)观察肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1及TIMP-1含量变化.结果 半枝莲水煎液各治疗组与模型组相比肝纤维化程度显著减轻;半枝莲中、高剂量治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1及TIMP-1水平又显著低于模型组(P<0.01).结论 半枝莲水煎液能够显著降低免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1及TIMP-1表达.     

复方861抑制四氯化碳大鼠肝纤维化模型Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的研究

目的:观察复方861对四氯化碳大鼠肝纤维化模型Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响.方法:实验分为对照组(20只)、四氯化碳模型组(20只)、复方861干预组(20只)3组,实验8周,处死大鼠,取肝组织,应用RT-PCR检测肝组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达和病理组织特殊染色.结果:表明与模型组(0.90±0.03、0.9±0.05)比较,复方861组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平分别为0.77±0.06、0.75±0.05,差异具有显著性(P＜0.01).结论:复方中药861能够抑制Ⅰ、Ⅱ型胶原的基因水平,减少细胞外基质的沉积,是其抗肝纤维化的作用机理之一.     

姜黄素对肝纤维化模型肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA影响的研究

目的:观察姜黄素对肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:采用二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型,姜黄素灌胃给药,采用实时定量PCR技术检测各组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平。结果:姜黄素能明显降低肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平,与病理模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:姜黄素能够抑制肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,从而发挥其抗纤维化的作用。     

消痰化瘀抗纤方药物血清对肝星状细胞增殖及胶原降解基因表达的影响

目的:观察消痰化瘀抗纤方(简称抗纤方)药物血清对肝星状细胞(HSC)增殖,Ⅰ型胶原含量及相关基因表达水平的影响,探讨该方抗肝纤维化的细胞分子学机制。方法:正常大鼠血清和药物血清干预HSC-T6细胞24h,MTT法检测抗纤方药物血清对HSC增殖,ELISA法测定细胞上清液Ⅰ型胶原含量变化,RT-PCR法检测细胞中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的mRNA表达量。结果:抗纤方高(13.5倍)、中(4.5倍)、低(1.5倍)剂量组药物血清能明显抑制HSC增殖(P<0.05),且增殖抑制率与剂量呈正相关;对上清液中Ⅰ型胶原含量影响,随药物剂量增加明显降低(P<0.05);能明显抑制TIMP-1mRNA表达(P<0.05),促进MMP-1mRNA表达(P<0.05)。结论:抗纤方药物血清能抑制HSC增殖,减少Ⅰ型胶原含量,抑制TIMP-1表达,促进MMP-1表达,具有抗肝纤维化作用。     

益气活血中药对肾间质纤维化大鼠肾组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原,MMP-1和TIMP-1表达的影响

目的 探讨益气活血中药抗肾间质纤维化的作用机制.方法 采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型.应用免疫组化等技术,通过医学病理图像分析系统检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,基质金属蛋白酶1(MMP-1),金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达.结果 模型组Ⅲ型胶原蛋白的表达较假手术组显著增强;MMP-1在模型组表达较假手术组显著减弱且分布面积减少,同时模型组TIMP-1的表达与假手术组比较显著增强;中药治疗组与西药蒙诺治疗组都能逆转Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,MMP-1和TIMP-1的表达,但两组间无显著差异,中药大剂量的治疗效果明显优于中、小剂量.结论 益气活血中药与血管紧张素转换酶抑制剂的治疗效果和机制较为一致,可能通过恢复MMP/TIMP间的网络平衡来减少细胞外基质中胶原蛋白的合成,增加其降解,从而达到减轻或抑制肾小管间质纤维化进程的目的.     

高山红景天对肝纤维化大鼠TIMP-1mRNA表达的影响

目的:观察高山红景天对大鼠实验性肝纤维化的治疗效果,并探讨其作用机制。方法:用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型,将实验动物随机分为正常对照组(A)、模型组(B)、秋水仙碱组(C)、红景天高剂量组(D)、红景天低剂量组(E)。除正常对照组外,其余4组均用四氯化碳诱发肝纤维化,并相应灌药8周。各组于造模第8周末处死动物,分别用放射免疫法检测血清层黏连蛋白(LN),Ⅲ型前胶原(PCⅢ),透明质酸(HA)及Ⅳ型胶原(CⅣ);RT-PCR检测肝组织金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)mRNA的表达;肝组织HE染色和胶原纤维染色。结果:与模型组大鼠比较,各用药组大鼠血清中LN、HA、PCⅢ、CⅣ水平明显降低(P<0.01);大鼠肝组织内TIMP-1mRNA表达明显下降(P<0.01);大鼠肝组织病理学检测改善显著。结论:高山红景天能有效地抑制肝纤维化的发展,其机制可能是通过下调肝组织内TIMP-1mRNA表达,降低ECM的分泌而达到的。     

加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA影响的研究

目的观察加味四逆散对肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA影响,探讨其抗肝纤维化的药理机制和作用。方法采用二甲基亚硝胺腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型,加味四逆散灌胃给药,采用实时定量PCR技术检测各组大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA表达的水平。结果加味四逆散能明显降低肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原的含量,与病理模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论加味四逆散可有效的减少肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原的生成,对肝纤维化有肯定的治疗作用。     

中药乙肝散逆转实验性肝纤维化的机理研究

目的:探讨乙肝散逆转免疫损伤性肝纤维化的作用.方法:雄性Wistar大鼠尾静脉注射白蛋白建立免疫损伤性肝纤维化模型后,用含乙肝散颗粒饲料喂养12周,应用流式细胞仪定量分析术、免疫组织化学及纤维化学染色结合血清学纤维化指标,动态观察不同时期肝组织TGF-β1、TIMP-1、MMP-2基因表达量及肝纤维化组织变化.结果:乙肝散组肝组织TGF-β1、TIMP-1表达量较模型对照组明显降低,MMP-2变化无统计学差异;同时肝组织Ⅰ胶原、Ⅲ胶原、Ⅳ胶原水平和肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量明显降低.结论:乙肝散逆转肝纤维化过程中抑制肝组织TGF-β1、TIMP-1基因表达,TGF-β1、TIMP-1在肝纤维化的逆转中起重要作用.     

三甲复肝合剂抗肝纤维化的实验研究

目的:探讨三甲复肝合剂抗肝纤维化的作用机制。方法:采用四氯化碳(CCL4)制作肝纤维化大鼠模型,设正常对照组,肝纤维化模型组,三甲复肝合剂高、低剂量组,复方鳖甲软肝片组。对模型大鼠的肝组织行HE及免疫组化染色,观察肝纤维化、炎症积分,Ⅰ型、Ⅲ型胶原,基质金属蛋白酶(MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1),血清纤维化指标的变化。结果:三甲复肝合剂能显著降低模型大鼠肝组织的炎症及纤维化积分,改善血清纤维化指标,降解Ⅰ型、Ⅲ型胶原,促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的产生与活性。其疗效与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:三甲复肝合剂降解Ⅰ型、Ⅲ型胶原,上调MMP-1、下调TIMP-1的肝组织表达可能是抗肝纤维化的主要机制。     

异甘草酸镁对肝纤维化大鼠氧化应激反应的影响研究

目的观察异甘草酸镁(Mg IG)对肝纤维化大鼠氧化应激反应指标的影响,探讨异甘草酸镁治疗肝纤维化的机制。方法将24只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和异甘草酸镁组,每组8只。正常组大鼠给予正常饲养,其余2组大鼠均采用四氯化碳(CCl4)建立大鼠肝纤维化模型。建模成功后,模型组与异甘草酸镁组继续给予CCl4皮下注射,每2周注射1次,共8周;异甘草酸镁组同时给予异甘草酸镁30 mg/kg腹腔注射,每日1次,共8周。末次注射24 h后断头取血检测肝功能指标和肝纤维化指标水平,采用实时定量PCR和免疫印迹技术检测肝组织中胶原(Collagen)Ⅰ、CollagenⅢ、基质金属蛋白酶13(MMP-13)和组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)mRNA和蛋白表达情况,采用化学发光法检测肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果异甘草酸镁组肝功能指标及肝纤维化指标均较模型组明显改善(P均<0.05),CollagenⅠ、CollagenⅢ和TIMP-1 mRNA和蛋白表达水平及MDA含量均明显低于模型组(P均<0.05),MMP-13 mRNA和蛋白表达水平及SOD、GSH含量均明显高于模型组(P均<0.05)。结论异甘草酸镁可通过降低氧化应激水平起到抗肝纤维化的作用。     

抗纤软肝中剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的从细胞分子学水平探讨抗纤软肝中剂抗肝纤维化的作用机制.方法抗纤软肝中剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照.ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量;半定量法RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶(MMP1)的mRNA表达.结果抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组(P＜0.01);能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达(P＜0.01),且能促进MMP1的mRNA表达(P＜0.01).结论抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达,从而可达到抑制胶原合成,促进胶原降解,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.