扶正祛邪中药复方对猴艾滋病模型实验研究

扶正被动邪中药复方“艾克冲剂“对猴SIV感染模型(SAIDS)治疗作用。方法：利用SIVmac病毒液静脉接种恒河猴造成猴艾滋病实验模型，流式细胞仪测定感染及治疗动物外周血CD4^ 细胞、CD8^ 细胞数及CD4^ /CD8^ 比值，并以MTT法观察T、B细胞对有丝分裂原诱导分化增殖反应。结果：艾克冲剂能提高CD4^ 细胞百分数及CD4^ /CD8^ 比值，并能促进T、B淋巴细胞增殖。结论：扶正被动邪中药艾克冲剂能够提高、改善SIVmac感染动物免疫功能。     

益气活血解毒方对肾癌小鼠免疫功能调节作用机制的研究

目的：通过研究“益气活血解毒方”对动物细胞免疫CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞数量、CD4^＋／CD8^＋的比值及血清中IFN-γ的作用变化,探索其抗癌免疫作用机制。方法：以莪术、龙葵、白芍等药为基础制定益气活血解毒方,将30只BALB／c小鼠制备荷肾癌鼠模型,随机分为生理盐水空白对照组、氟尿嘧啶实验对照组、益气活血解毒方治疗组,对三组荷瘤小鼠进行血清IFN-γ含量检测、荷瘤小鼠脾T细胞亚群检测（CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞数量、CD4^＋／CD8^＋的比值）,做统计学分析。结果：与氟尿嘧啶和生理盐水对比,益气活血解毒方能够促进荷瘤小鼠外周血中IFN-γ的分泌,提高荷瘤小鼠脾脏中CD4^＋T细胞亚群和CD8^＋T细胞亚群的百分比和CD4^＋／CD8^＋比值,差别有显著性意义。结论：“益气活血解毒方”通过促进荷瘤小鼠外周血中IFN-γ的分泌及提高荷瘤小鼠脾脏中CD4^＋T细胞亚群和CD8^＋T细胞亚群数量,调节荷瘤小鼠免疫功能,抑制肿瘤生长。     

针灸及其血清对荷瘤小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖的影响

目的:观察针灸治疗对H_(22)荷瘤小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞(CD4~+CD25~+regulatory T cells)体外增殖的影响和针灸血清刺激下的CD4~+CD25~+Treg细胞的体外增殖变化,探讨针灸及其血清对荷瘤小鼠免疫调节细胞的干预作用。方法:48只小鼠随机分为电针治疗组、艾灸治疗组、肿瘤对照组、正常对照组。采用H_(22)肿瘤细胞移植性实体瘤模型,电针和艾灸"大椎"治疗后,磁珠分离CD4~+CD25~+Treg细胞,氚标记胸腺嘧啶核苷掺入法观察不同组小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖能力和针灸血清对CD4~+CD25~+ Treg细胞体外增殖的影响。结果:肿瘤对照组CD4~+CD25~+Treg细胞增殖水平比正常对照组明显增高(P<0.05);电针治疗组和艾灸治疗组CD4~+CD25~+Treg细胞增殖水平与肿瘤对照组比较均明显降低(P<0.01)。电针治疗组和艾灸治疗组1:1、1:8稀释度血清刺激正常小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖,较正常对照、肿瘤对照组血清显著增高(P<0.05),各组1:16、1:32稀释度血清对Treg细胞作用的差别无统计学意义(P>0.05)。结论:针灸治疗能下调荷瘤小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖能力。不同浓度针灸血清体外刺激CD4~+CD25~+Treg细胞增殖表现出不一致的效应。     

肺炎合剂对小鼠CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞亚群调节作用的研究

目的 研究肺炎合剂对CD4^ 、CD8^ 细胞百分数的调节作用。方法：建立免疫低下模型，分别检侧CD4^ 、CD8^ 细胞百分数及CD4^ ／CD8^ 比值的变化。结果：肺炎合剂能显著提高免疫功能低下小鼠CD4^ 、CD8^ 细胞百分比，调整CD4^ ／CD8^ 比值。结论：肺炎合剂有提高和保护CD4^ 、CD8^ 细胞的作用。     

拔火罐和穴位注射对反复呼吸道感染患儿T细胞亚群的影响

目的：观察拔火罐和穴位注射对反复呼吸道感染患儿(简称“复感儿”)的治疗效果及对T淋巴细胞亚群的影响。方法：测定治疗组、对照组复感儿治疗前后外周血T淋巴细胞亚群水平，治疗组采用拔火罐和穴位注射疗法，对照组使用转移因子口服液治疗。结果：经拔火罐和穴位注射治疗后复感儿CD3^ 、CD4^ 、CD4^ /CD8^ 显著升高，CD8^ 明显降低(P＜0．001)。对照组CD3^ 、CD4^ 、CD4^ ／CD8^ 均较治疗前升高(P＜0．01)，CD8^ 则无明显改变(P＞0．05)。临床疗效治疗组较转移因子对照组为化，但差异无显著性(P＞0．05)。结论：拔火罐和穴位注射可提高和改善复感儿的细胞免疫功能，并有较高的临床疗效。     

类风湿性关节炎患者外周血T细胞亚群异常及调节的研究

目的：观察类风湿性关节炎（RA）患者外周血T细胞亚群的变化及扶正祛痹汤治疗对T细胞亚群的影响。方法：将30例RA患者随机分成两组，分别给西药联合治疗及中西药治疗1个月，检测治疗前后外周血CD3^+、CD4^+、CD8^+百分比和血清Ig值。结果：RA患者外周血T细胞CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+比值、血清IgG、IgA水平显著升高（P＜0．05）。中西药治疗后CD4^+/CD8^+、IgG、IgA显著降低（P＜0．05）。结论：RA是存在细胞免疫异常。中西药合用可治疗调节T细胞亚群比例平衡。     

加味玉屏风汤联合艾灸对咳嗽变异性哮喘患儿免疫功能的影响

目的:观察加味玉屏风汤联合艾灸对咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA)患儿免疫功能的影响。方法:将102例CVA患儿按照随机数字表法分为观察组与对照组,每组51例。对照组患儿给予常规药物治疗,观察组给予加味玉屏风汤联合艾灸治疗。观察两组的临床疗效,并记录治疗前后的免疫指标(CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+)、血清炎性因子[血清白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、血清肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]水平及肺功能指标[第1秒用力呼气量/用力肺活量(Forced exhalation in the first second/forced vital capacity,FEV1/FVC)、呼气峰流速(peak expiratory flow,PEF)、最大通气量(maximal voluntary ventilation,MVV)]变化。结果:观察组有效率为94.1%,对照组有效率为80.4%,观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后患儿CD4^+及CD4^+/CD8^+水平低于对照组,CD8^+水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后IL-8、TNF-α水平低于对照组,TGF-β1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后FEV1/FVC、PEF、MVV水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加味玉屏风汤联合艾灸可明显缓解CVA患儿症状,提高患儿免疫能力,且对炎性因子水平调节有积极影响。     

Acupoint injection plus moxibustion on post-chemotherapy leukopenia

目的：研究以黄芪注射液穴位注射配合艾灸疗法对化疗后白细胞减少症患者白细胞数量及细胞免疫的影响。方法：将恶性肿瘤化疗后白细胞减少症患者86例，随机分为黄芪注射液穴位注射配合艾条温和灸治疗组（治疗组）、西药口服组（对照组），分别进行对照治疗，以治疗前后临床症状、外周血白细胞数量、T淋巴细胞亚群CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋含量的变化为指标进行实验观察。结果：黄芪注射液穴位注射配合艾条温和灸较升白药口服有明显提高外周血白细胞数的作用；前者能提高肿瘤患者外周血T细胞亚群CD3^＋、CD4^＋含量、使CD4^＋／CD8^＋比值升高，两组比较有显著性差异（P〈0．01）；并且能明显改善全身虚损症状。结论：黄芪注射液穴位注射配合艾条温和灸能有效升高白细胞，改善恶性肿瘤患者的全身症状。     

补肺片对支气管哮喘缓解期患者CD4+、CD8+及IgE影响的临床研究

目的：观察补肺片对支气管哮喘缓解期患者外周血CD4^＋、CD8^＋及血清IgE的影响。方法：将104例患者随机分为2组各52例，2组急性期均给予常规西医处理（解痉、平喘、抗炎）。缓解期治疗组采用补肺片治疗，对照组不施加特殊治疗，治疗3月后检测CD4^＋,CD8^＋及血清IgE变化。结果：治疗组CD4^＋、IgE水平较对照组明显降低，CD8^＋较对照组明显增加，2组治疗后比较，差异有显著性或非常显著性意义（P〈0．05，P〈0．01）。结论：补肺片可通过降低CD4^＋，升高CD8^＋，从而降低IgE水平，抑制气道炎症，降低气道高反应性，从而控制哮喘发作。     

女性抑郁症内分泌免疫与中医证候相关性考释

目的：探讨抑郁妇女中医证候和血清内分泌、免疫等实验室各项指标之间的相关性。方法：对辨证属肝郁气滞、肝郁脾虚、心脾两虚、肝肾阴虚证的150例抑郁妇女，进行抑郁量表的评定以及内分泌和T淋巴细胞亚群的测定，并进行中医证候量表的评定，进行内分泌、免疫指标和中医证候的相关性分析。结果：肝肾阴虚证FSH与证候分成正相关，而E2和PRL与之成负相关；心脾两虚证CD8^ 与证候分成显著正相关，CD4^ 和CD4^ ／CD8^ 与之成负相关；与正常组相比，肝肾阴虚证血清FSH和LH显著升高，CD4^ 、CD4^ ／CD8^ 显著降低：结论：肝肾阴虚型抑郁症的内分泌表现紊乱，其中FSH、LH升高可能是其特异性的指标；其免疫系统处于抑制状态。     

小半夏加茯苓颗粒对荷瘤小鼠抑瘤及免疫调节作用的研究

目的研究小半夏加茯苓颗粒对小鼠S180、H22实体瘤的抑制作用以及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法建立S180、H22荷瘤小鼠模型,观察小半夏加茯苓颗粒的抑瘤作用,并检测各组小鼠的脾T淋巴细胞亚群的分布、CoA诱导的脾淋巴细胞增殖活性以及血清中TNF-α的含量。结果小半夏加茯苓颗粒对S180和H22荷瘤小鼠的肿瘤均具有明显抑制作用,抑瘤率分别为11.5%和9.3%;同时小半夏加茯苓颗粒可明显上调荷瘤小鼠CD4+、CD8+T细胞数量(P<0.01)及CD4+/CD8+比值(P<0.05);小半夏加茯苓颗粒可明显增强CoA诱导的荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力(P<0.01)以及血清中TNF-α的含量(P<0.05)。结论小半夏加茯苓颗粒可增强荷瘤小鼠的免疫功能,抑制模型鼠肿瘤的生长。     

野生仙人掌多糖对小鼠特异性免疫功能的调节作用

目的:观察野生仙人掌多糖(ODPs)对小鼠特异性(体液及细胞)免疫功能的调节作用。方法:采用环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,检测ODPs对血清溶血素IgMI、gG含量、脾淋巴细胞增殖反应和外周血T淋巴细胞亚群比例的影响;检测分离纯化的ODPs主要组分ODP-I对体外培养的淋巴细胞增殖作用。结果:ODPs能显著增强免疫抑制小鼠血清溶血素IgMI、gG的生成;显著增强免疫抑制小鼠T、B淋巴细胞的增殖能力,且均使之恢复至正常水平;显著降低免疫抑制小鼠CD4+T细胞亚群比例,从而显著降低CD4+/CD8+T细胞比值,使之接近正常水平,且均有剂量关系。ODP-I可极显著促进小鼠脾淋巴细胞自然增殖,协同有丝分裂原ConA或LPS诱导T、B淋巴细胞的增殖。结论:ODPs对免疫抑制小鼠特异性免疫功能具有调节作用,对体外淋巴细胞具有增殖作用,是一种良好的免疫调节剂。     

益血生髓颗粒对苯试剂诱导的再生障碍性贫血小鼠造血功能及T细胞亚群的影响

目的:研究益血生髓颗粒对苯试剂诱导的再生障碍性贫血(AA)模型小鼠造血及免疫功能的影响。方法:72只SPF级BALB/c小鼠随机分为正常对照组、AA模型组、益血生髓颗粒低剂量组(低剂量组)、益血生髓颗粒高剂量组(高剂量组)和司坦唑醇阳性药组(阳性对照组),除正常对照组其他各组小鼠注射苯和玉米油混合液2 ml/kg,每周4次,建立AA模型,正常组注射同体积玉米油,7周后,低剂量组用药1.2 g/(kg·d),高剂量组用药4.8 g/(kg·d),阳性对照药组予司坦唑醇2 mg/(kg·d),连续给药15 d后,检测血细胞(WBC、RBC、HGB、PLT)、骨髓有核细胞数(BMNC)、T淋巴细胞亚群(CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺、Th₁、Th₂)、血清白介素2(IL-2)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和HE染色骨髓病理学的变化情况。结果:与AA模型组比较,低、高剂量组和阳性对照组小鼠外周血四种血细胞数量、血清M-CSF、CD3⁺CD4⁺T和CD4⁺/CD8⁺比值升高(P<0.05),CD3⁺CD8⁺T、IL-2水平和Th₂细胞百分数降低(P<0.05),骨髓病理学显示骨髓组织增生较模型组活跃,造血细胞增多,非造血细胞减少。结论:益血生髓颗粒可通过对AA小鼠T细胞亚群的免疫调节和促进造血细胞增殖达到一定恢复造血功能的作用。     

铜绿假单胞菌注射液对K562细胞株处理后淋巴细胞凋亡及免疫功能的影响

 目的观察铜绿假单胞菌注射液对肿瘤微环境中正常人外周血淋巴细胞的凋亡的抑制作用及免疫增强作用。方法分离纯化正常人外周血淋巴细胞并与K562细胞株上清共培养,与不同浓度的铜绿假单胞菌注射液作用72h后,用酶标仪或流式细胞仪进行各项指标检测,观察铜绿假单胞菌注射液对人外周单个核细胞(PMBC)增殖率、凋亡率、坏死率、凋亡相关蛋白及细胞表面蛋白表达的影响。结果铜绿假单胞菌注射液能增强K562细胞株上清作用后淋巴细胞增殖,降低细胞凋亡率、坏死率,降低促凋亡蛋白Fas的表达,增加抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,增加CD25、CD69的表达,对CD4⁺/CD8⁺无显著影响。结论铜绿假单胞菌注射液可以抑制肿瘤微环境中正常人外周血淋巴细胞的凋亡、坏死,并能增强淋巴细胞的免疫功能。     

重组葡萄球菌肠毒素A及其突变体蛋白促淋巴细胞增殖作用的研究

 目的 观察重组葡萄球菌肠毒素A（rSEA）及其突变体蛋白对淋巴细胞增殖、活化作用及对淋巴细胞亚群分群的影响。方法 分离健康人外周血单个核细胞（PBMC）及小鼠脾淋巴细胞悬液，体外经rSEA及其3种突变体（rSEA/H187A、rSEA/H225A和rSEA/D227A）蛋白刺激后，采用噻唑蓝法（MTT）检测人和小鼠脾淋巴细胞增殖水平，采用流式细胞术检测人外周血中T淋巴细胞亚群（CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞）及活化CD4⁺、CD8⁺ T细胞和自然杀伤细胞（NK）的含量。结果 5~20 mg·L^-1的rSEA及其3个突变体蛋白对人PBMC和小鼠脾淋巴细胞均有明显促增殖作用（P<0.05）；经rSEA、rSEA/H225A刺激后的人PBMC中，CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞的含量明显高于对照组，rSEA/H187A能上调CD3⁺和CD8⁺T细胞，而rSEA/D227A只上调CD8⁺T细胞（P<0.05）；rSEA及3种突变体蛋白均能上调活化CD4⁺和CD8⁺T细胞，rSEA、rSEA/H187A、rSEA/H225A能上调NK细胞含量（P<0.05）。结论 rSEA及其3种突变体（rSEA/H187A、rSEA/H225A和rSEA/D227A）蛋白对淋巴细胞均有明显促增殖和活化作用，并可不同程度地上调T淋巴细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺ 及NK细胞的含量，为筛选出低毒、高效的升白细胞相关药物候选突变体奠定基础。
     

电针强壮穴对衰老模型大鼠T细胞免疫调节功能的影响

目的:研究电针强壮穴对D-半乳糖衰老模型大鼠T细胞免疫功能的影响,探讨电针对免疫衰老的调节机制。方法:3月龄SD大鼠50只,随机分为青年对照组、模型组、电针组、免疫抑制组、免疫抑制并电针组,除对照组以外,其余大鼠皮下注射D-半乳糖40d制作衰老模型。电针组、免疫抑制并电针组取"关元"后三里"穴进行电针治疗,每次15min,每周6次;免疫抑制组、免疫抑制并电针组于电针治疗第26、27天时,分别按50mg/kg给大鼠腹腔注射环磷酰胺,造成免疫抑制状态。噻唑蓝比色法检测脾脏T淋巴细胞增殖指数,酶联免疫吸附法检测脾脏T细胞分泌白介素-2(IL-2)和白介素-2受体(IL-2R)水平,流式细胞术检测CD8~+T细胞表面CD28分子(即CD8~+CD28~+T细胞)密度。结果:与对照组比较,模型组脾脏T细胞增殖指数明显降低(P<0.01),T细胞诱生IL-2、IL2 R分泌水平及CD8~+CD28~+T细胞表达也明显降低(P<0.01);与模型组相比,电针组上述各指标均明显升高(P<0.01)。经免疫抑制处理的免疫抑制组与模型组相比,上述各指标均明显降低(P<0.05,P<0.01);但经电针治疗的免疫抑制并电针组与免疫抑制组比较,上述各指标均明显升高(P<0.05,P<0.01);免疫抑制并电针组与模型组比较,除IL-2显示差异有统计学意义(P<0.05)外,其余指标无统计学意义差异(P>0.05);免疫抑制并电针组与电针组比较,除CD8~+CD28~+T细胞表达外,其余各指标的差异(P>0.05)。结论:电针强壮穴能调节T细胞免疫,延缓衰老,并能降低环磷酰胺对T细胞免疫的抑制效应,其作用途径可能是提高T细胞增殖能力、T细胞分泌IL-2及其受体水平,以及提高CD8~+T细胞表面分子CD28表达等。     

rhG-CSF对化疗后骨髓抑制患者T淋巴细胞组成的影响

目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对化疗后骨髓抑制患者T淋巴细胞组成的影响。方法:化疗后出现Ⅱ°骨髓抑制的患者,给予皮下注射rhG-CSF150g,连续3d,用药前及用药后第3天用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞组成的变化。结果:流式细胞术分析发现,用药前CD4+T淋巴细胞占外周血CD3+T淋巴细胞比例为(52.96±8.45)%,用药后为(54.15±7.55)%,差异无统计学意义(P>0.05);用药前CD8+T淋巴细胞占外周血CD3+T淋巴细胞比例为(36.96±9.62)%,用药后为(34.56±8.32)%,差异无统计学意义(P>0.05);用药前CD4+CD25+T淋巴细胞占外周血CD4+T淋巴细胞比例为(4.56±1.32)%,用药后为(6.94±1.72)%,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:rhG-CSF对化疗后骨髓抑制患者CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞在CD3+T淋巴细胞中的百分比无明显影响;但增加了CD4+CD25+T淋巴细胞在CD4+T淋巴细胞中的百分比。     

中药狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡的影响

目的：研究中药狼疮静颗粒对BXSB狼疮性小鼠脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理。方法：运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡。结果：雄性BXSB小鼠脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡加速,中药狼疮静颗粒可明显抑制BXSB小鼠脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡率。结论：中药狼疮静颗粒通过抑制T、B淋巴细胞过度凋亡,可能阻抑了过量核酸抗原释放,从而抑制了B细胞的异常增生活化,使自身抗体产生减少而达到治疗系统性红斑狼疮目的。     

Beneficial therapeutic effect of Chinese herbal Bushen formula on CHB patients with mildly elevated alanine aminotransferase by down-regulating CD4+CD25+T cells

Ethnopharmacological relevance

To investigate the clinical effects of the Bushen formula on chronic hepatitis B (CHB) patients with mildly elevated alanine aminotransferase (ALT) (1–2 times ULN) and its relevant immune mechanism.

Materials and methods

Fifty CHB patients were enrolled, and they were categorized into two groups according to infection state, including CHB carrier group(24 patients) and mildly elevated ALT (1–2 times ULN) group (26 patients), and 12 healthy volunteers were collected as normal control group. In addition, patients with mildly elevated ALT were taking the Bushen formula for 6 months. Biochemical assessment, viral load quantitation and HBV markers were examined at the Department of Clinical Laboratory, Shanghai Shuguang Hospital. Peripheral blood mononuclear cells were separated from patients and healthy volunteers. T cells were separated from healthy blood, and Hepatitis B core antigen (HBcAg) was added to the culture media. The percentage of CD4+CD25+T cells and the expression levels of IFN-γ and IL-4 were examined by flow cytometry and the expression level of FoxP3 was examined by real-time PCR and flow cytometry. The Chinese medicine symptom complex score was calculated.

Results

The percentage of CD4+CD25+T cells and the expression level of Foxp3 in two CHB patient groups were higher than that in the normal control group, and the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression level of Foxp3 in the CHB carrier group were highest. The experiment in vitro showed that both the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression of Foxp3 were elevated by HBcAg in CD4+T cells separated from normal peripheral blood. In patients with mildly elevated ALT, the serum ALT level was significantly decreased from 81.77±18.24 U/L to 64.92±20.60 U/L and the serum HBV DNA level was significantly decreased from 6.54±0.95 (log) to 5.15±2.22 (log), and symptom scores were significantly decreased from 6.19±3.99 to 2.77±1.66 after administration of the Bushen formula. In addition, we found that the frequency of CD4+CD25+T cells correlated negatively with the expression level of IFN-γ in CD4+T cells from CHB patients with mildly elevated ALT, and the percentage of CD4+CD25+T cells was decreased from 11.07±4.30% to 8.70±3.49% and the expression level of IFN-γ in CD4+T cells was increased from 13.98±3.25% to 15.85±3.43% after administration of the Bushen formula.

Conclusion

In CHB patients, the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression of Foxp3 in peripheral blood were increased, which can be repeated in HBcAg-stimulated healthy CD4+T cells. The Bushen formula has positive effects on CHB patients with mildly elevated ALT (1–2 times ULN) by reducing serum ALT and HBV DNA levels, which is relevant with the decreasing of the percentage of CD4+CD25+T cells and the increasing of the expression level of IFN-γ in CD4+T cells.