血府逐瘀汤动员骨髓内皮祖细胞的影响因素分析

目的探讨血府逐瘀汤影响血管新生的相关因素。方法将24只SD大鼠随机分成血府逐瘀汤高、中、低剂量组和空白对照组,分别检测各组大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)、促红细胞生成素(EPO)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)和一氧化氮(NO)的含量,观察血府逐瘀汤对内皮祖细胞动员因素的影响。结果与空白对照组比较,血府逐瘀汤高剂量组对血清VEGF、血府逐瘀汤中剂量组对血清SDF-1和GM-CSF,3个药物剂量组对血清NO的水平均有显著提高(P0.05或P0.01),但高、中剂量组均能降低血清G-CSF的含量(P0.05)。结论血府逐瘀汤可通过提高VEGF、SDF-1、GM-CSF和NO的水平动员骨髓内皮祖细胞参与血管新生,动员途径呈现多样性和复杂性。     

UPLC-MS/MS法同时测定通塞脉微丸中10种有效成分

目的 建立同时测定通塞脉微丸中10种有效成分（绿原酸、芹糖甘草苷、毛蕊异黄酮苷、木犀草苷、甘草苷、阿魏酸、异甘草苷、哈巴俄苷、甘草素和肉桂酸）的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）分析方法。方法 采用BEHC₁₈（100 mm×2.1 mm,1.7 μm）色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min,采用电喷雾电离源（ESI）,多反应离子监测（MRM）扫描方式进行检测。结果 10种成分线性关系分别为绿原酸Y＝294.09 X＋17 624;芹糖甘草苷Y＝19.296 X＋748.42;毛蕊异黄酮苷Y＝670.8 X＋11 121;木犀草苷Y＝490.45 X＋2 938.3;甘草苷Y＝33.489 X＋555;阿魏酸Y＝127.76 X＋1 343.5;异甘草苷Y＝57.87 X＋804.81;哈巴俄苷Y＝13.125 X－20.365;甘草素Y＝29.057 X＋367.71;肉桂酸Y＝72.867 X＋1 301.5,且各相关系数（r）均大于0.999 0。精密度、重复性和稳定性良好;加样回收率在96.00%～104.67%,RSD值均小于3%。结论 所建立的方法准确、快捷,重复性好,可用于通塞脉微丸中绿原酸、芹糖甘草苷、毛蕊异黄酮苷、木犀草苷、甘草苷、阿魏酸、异甘草苷、哈巴俄苷、甘草素和肉桂酸10种有效成分的同时测定。     

当归挥发油对自发性高血压大鼠NO、vWF、EMPs表达水平影响＊

目的 通过观察当归挥发油对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats，SHR)血管内皮活性物质表达的影响来探讨其降压的作用机制。方法 将8周龄雄性Wistar大鼠作为正常组，每组6只。并将同周龄自发性高血压大鼠（SHR）随机分组，各组分别为模型组、缬沙坦组、当归低、中、高剂量组，每组6只。模型组和正常组给予等量蒸馏水，连续灌胃4周。采用无创血压检测系统测定给药前后大鼠尾动脉收缩压；给药4周后麻醉大鼠，腹主动脉采血，酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked immunosorbent assy，ELISA）检测大鼠血清中一氧化氮（Nitric oxide，NO）、血管假血友病因子（von Wilebrand factor，vWF）、内皮细胞膜微粒（Endothelial Microparticles，EMPs）表达水平。结果 ELISA结果显示：与正常组比较，模型组EMPs、vWF水平明显升高（P < 0.01），NO水平明显降低（P < 0.01），差异具有显著性；与模型组比较，各给药组EMPs、vWF水平明显降低（P < 0.01），NO水平明显升高（P < 0.01），差异具有显著性。结论 当归挥发油具有显著的降压效果，其降压作用可能与抑制血清中的EMPs、vWF以及促进了血清中的NO水平有关。     

补阳还五汤延缓血管平滑肌细胞衰老的机制研究＊

目的 探讨补阳还五汤抑制血管平滑肌细胞衰老的作用及机制。方法 SD大鼠通过灌胃补阳还五汤汤剂和蒸馏水制备补阳还五汤含药血清和对照血清。用血管紧张素II （AngⅡ）诱导人主动脉血管平滑肌细胞（HA-VSMCs）衰老为模型，分别予金属基质蛋白酶-2（MMP-2）抑制剂ARP101、补阳还五汤含药血清和对照血清干预，并设立年轻对照组。衰老相关β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色测定SA-β-gal的活性；免疫印迹法和明胶酶谱法测定金属基质蛋白酶-2（MMP-2）表达及分泌水平。结果 与对照组相比，Ang II诱导的衰老组HA-VSMC中SA-β-gal阳性细胞百分率显著升高[（74.10 ± 4.64）% vs.（10.30 ± 1.92）%， p < 0.001]；同时MMP-2蛋白表达及分泌水平均显著增加。补阳还五汤含药血清干预的衰老HA-VSMC中SA-β-gal阳性细胞百分率较未干预的衰老细胞显著降低[（14.08 ± 5.15） vs. （74.10 ± 4.64）%， p < 0.001]，同时MMP-2蛋白表达及分泌水平均显著减少[（0.39 ± 0.16） vs. （0.93 ± 0.20）和（0.67 ± 0.13） vs. （1.81 ± 0.26），均p < 0.05]；而类似的结果未在对照血清干预的衰老HA-VSMC中观察到。ARP101干预也可降低衰老HA-VSMC中SA-β-gal阳性细胞百分率，而补阳还五汤含药血清对衰老细胞SA-β-gal阳性细胞百分率的抑制作用可被ARP101干预减弱。结论 补阳还五汤治疗可能通过抑制VSMCs中的MMP-2来延缓血管衰老。     

芪仙通络方对脑梗死恢复期患者神经功能恢复的影响及机制

目的 探讨芪仙通络方对脑梗死恢复期患者神经功能修复的影响及其机制。方法 选取2020年1月至6月温州市中医院神经内科住院的脑梗死恢复期患者100例，按随机数字表法平均分成观察组（50例）和对照组（50例）。对照组给予常规的西医治疗，观察组给予相同的西医治疗，并加服芪仙通络方，两组均连续治疗12周。比较两组治疗前后的临床疗效，神经功能缺损评分［美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）］，日常生活能力评定［改良Barthel指数（MBI）］，上下肢运动功能评定［Fugl-Meyer评定量表（FMA）评分］情况，以及外周血脑内脑源性神经营养因子（BDNF），血管内皮生长因子（VEGF）及细胞基质衍生因子-1（SDF-1）的水平。结果 观察组治疗总有效率为84.00%（42/50），高于对照组的66.00%（33/50），差异有统计学意义（Z=-7.365，P<0.05）；治疗前观察组和对照组治疗前MBI，FMA评分及NIHSS评分比较，差异无统计学意义；两组患者MBI指数及FMA评分均显著升高（P<0.01），NIHSS评分均明显降低（P<0.05，P<0.01）。与对照组治疗后比较，观察组患者MBI指数及FMA评分均明显升高，NIHSS评分均明显降低（P<0.05）。两组治疗前后BDNF水平差异无统计学意义；两组治疗后血清VEGF及SDF-1水平均高于本组治疗前，且观察组高于对照组（P<0.05）。结论 芪仙通络方可以有效改善脑梗死恢复期患者临床疗效，提高患者生活质量，改善患者的预后。该方作用机制可能通过促进患者外周血内源性VEGF，SDF-1的表达，从而激活SDF-1/趋化因子受体4（CXCR4）信号通路，诱导内皮祖细胞的募集和动员，促进血管新生及缺血脑组织的修复。     

白芷中活血化瘀有效组分的谱效关系

目的：探索玉屏风散（YPFS）诱导初期给药对Th2（Ⅱ型辅助性T细胞）型接触性超敏反应的效应,并利用HPLC-MS（液质联用）法测定玉屏风散含药血清中的成分。方法：Th2型接触性超敏反应造模采用Balb/c小鼠第1,2天用1.5%的异硫氰酸荧光素（FITC）溶液致敏腹部皮肤,第6天用0.6%的异硫氰酸荧光素（FITC）溶液攻击小鼠耳部皮肤,24 h后测定小鼠耳厚和耳重。致敏前给予地塞米松ip 剂量为0.67 mg·kg^-1,YPFS（3.25,6.5 g·kg^-1,ig）,毛蕊异黄酮（0.5,5,10 mg·kg^-1,ip）,芒柄花素（0.5,5,10 mg·kg^-1,ip）2 d,并在致敏第1~3天继续给药3 d,第4天停止给药（诱导初期给药）。含药血清检测采用ICR小鼠每天给予YPFS醇提物,连续给药3 d,空白对照组给予等体积的生理盐水。最后1次给药后1 h取血处死动物。血清经过乙酸乙酯萃取处理后,利用HPLC-MS法进行测定。结果：与正常组相比,模型组小鼠耳肿胀度及耳重显著增加（P<0.01）。玉屏风散醇提物3.25,6.5 g·kg^-1诱导初期给药能显著抑制小鼠耳肿胀度（P<0.01或P<0.05）,减轻过敏性炎症。玉屏风散醇提物含药血清经HPLC-MS测定出3个主要成分,经鉴定分别为升麻素、毛蕊异黄酮、芒柄花素。毛蕊异黄酮和芒柄花素5,10 mg·kg^-1诱导初期给药能显著抑制Th2型接触性超敏反应模型小鼠耳肿胀度,芒柄花素10 mg·kg^-1诱导初期给药显著降低耳重。结论：玉屏风散诱导初期给药能显著抑制FITC诱导的小鼠Th2型变应性接触性皮炎的耳肿胀度,含药血清测得的入血成分经过药效学实验验证,对Th2型过敏反应有抑制作用,表明血清中存在抗过敏作用的活性成分。     

毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的 探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白130（GP130）/Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子（STAT）信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响。方法 原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞，并利用免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）进行鉴定。分别加入5、10、20 μmol·L^-1毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h，然后加入100 μmol·L^-1过氧化氢（H₂O₂）处理24 h造成氧化损伤模型，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测各组细胞增殖情况选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度。实验分为空白组、模型组（H₂O₂ 100 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+LY294002组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+LY294002 10 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+Stattic组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+Stattic 3 μmol·L^-1）。CCK-8法、免疫荧光检测各组细胞增殖情况，流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3、p-蛋白激酶B（Akt）、GP130、白细胞介素-6（IL-6）的蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组细胞的增殖活力明显降低，细胞凋亡率明显升高（P<0.05）；与模型组比较，毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组细胞的增殖活力明显增加，细胞凋亡率明显降低（P<0.05）；与毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组比较，PI3K抑制剂LY294002和STAT3抑制剂Stattic均能明显降低细胞的增殖活力，增加细胞凋亡率（P<0.05）。与空白组比较，模型组细胞中p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平明显增加（P<0.05）；与模型组比较，各用药组p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论 毛蕊异黄酮能够促进氧化损伤的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡，并能通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt通路磷酸化、JAK2/STAT3通路磷酸化起作用。     

石榴补血糖浆对血虚小鼠造血功能的影响＊

目的 探讨石榴补血糖浆对环磷酰胺血虚证模型小鼠造血功能的影响及其相关机制。方法 采用环磷酰胺构建血虚证模型，分别用石榴补血糖浆、EPO和复方阿胶浆连续干预28d，取小鼠外周血液，分别进行红细胞（RBC）及白细胞（WBC）计数、血红蛋白（HGB）浓度测定以及红细胞比容（HCT），血小板计数（PLT）的含量；取小鼠双侧股骨，收集全部骨髓细胞，进行骨髓有核细胞计数；采用酶联免疫法（Elisa）测定小鼠血清中促红细胞生成素（Erythropoietin，EPO）的含量，Western blot、Real-Time PCR法检测造血干细胞因子（SCF）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的含量变化。结果 与对照组比较，石榴补血糖浆（4.6875 mL·kg^-1，9.375 mL·kg^-1，18.75 mL·kg^-1，28.125 mL·kg^-1）组小鼠血液中RBC，WBC，PLT，HCT，HGB均升高（P < 0.05）；与模型组相比，石榴补血糖浆9.375 mL·kg^-1剂量组EPO、SCF、GM-CSF表达量均显著提升（P < 0.05），骨髓有核细胞数增多（P < 0.05）。结论 石榴补血糖浆可以对血虚证模型小鼠起到一定的治疗作用，其作用机理可能与增加造血细胞因子EPO、SCF、GM-CSF的表达，提高骨髓有核细胞数有关。     

HPLC-QAMS同时测定屏风生脉胶囊中9个指标成分含量

目的 建立高效液相色谱一测多评法（HPLC-QAMS）同时测定屏风生脉胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷、芒柄花素、升麻素苷、升麻素、亥茅酚苷、麦冬甲基黄烷酮A及甲基麦冬二氢高异黄酮B含量的方法。方法 采用Agilent ZORAX StableBond C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱。多波长切换检测（0~36 min,254 nm,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷、芒柄花素、升麻素苷、升麻素和亥茅酚苷;36~60 min,296 nm,麦冬甲基黄烷酮A和甲基麦冬二氢高异黄酮B）,进样量10 μL。以升麻素为内参物,建立其他8个指标成分的相对校正因子（RCF）,并计算各成分含量。采用外标法（ESM）测定屏风生脉胶囊中9个指标成分含量对QAMS计算结果的准确性进行验证。结果 测定了3个厂家12批屏风生脉胶囊中9个指标成分的含量,9个指标成分分别在2.68~67.00（r=0.999 4）、1.76~44.00（r=0.999 1）、2.15~53.75（r=0.999 2）、4.37~109.25（r=0.999 7）、6.58~164.50（r=0.999 5）、2.49~62.25（r=0.999 2）、1.88~47.00（r=0.999 8）、1.36~34.00（r=0.999 2）、1.09~27.25 μg·mL^–1（r=0.999 3）有良好的线性关系。平均加样回收率及RSD分别为99.34%（1.40%）、97.25%（1.13%）、98.73%（1.33%）、100.09%（0.68%）、100.04%（0.77%）、98.46%（1.26%）、97.94%（1.06%）、96.89%（1.03%）和98.90%（0.72%）。QAMS与ESM所测结果差异无统计学意义。结论 该方法操作便捷、结果准确,可用于屏风生脉胶囊中9个指标成分含量的同时测定,实现多指标质量控制。     

消癌解毒方含药血清增强NK细胞杀伤结肠癌的作用及机制

目的 探讨消癌解毒方含药血清对自然杀伤（NK）细胞杀伤结肠癌细胞的增强作用及分子机制。方法 消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%、5%、10%）处理HCT-116细胞、NK-92MI细胞24 h，噻唑蓝（MTT）比色法检测其对细胞增殖的影响。选取低体积分数（0.1%、0.5%、1%）含药血清处理共培养的HCT-116细胞、NK-92MI细胞24 h，钙黄绿素-乙酰甲酯/碘化丙啶（Calcein-AM/PI）双染检测NK细胞对结肠癌细胞杀伤作用；流式细胞仪检测结肠癌细胞凋亡；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡、信号传导及转录激活蛋白4（STAT4）通路相关蛋白表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测干扰素（IFN）-γ分泌。结果 MTT比色法显示，与空白组比较，消癌解毒方含药血清（5%、10%）能有效抑制HCT-116、NK-92MI细胞增殖（P<0.01），但消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）对细胞增殖无明显影响。与空白组比较，消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）呈浓度依赖性的增强NK细胞对结肠癌细胞的杀伤活性，并诱导结肠癌细胞凋亡（P<0.01）。Western blot显示，与空白组比较，消癌解毒方含药血清能下调B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关xl蛋白（Bcl-xl）表达，上调Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达（P<0.05，P<0.01）；与共培养组比较，消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）能激活p-STAT4磷酸化，促进IFN-γ表达（P<0.05）。ELISA显示，与空白组比较，消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）能提高IFN-γ分泌量（P<0.01）。结论 消癌解毒方含药血清增强NK细胞杀伤结肠癌细胞活性的机制可能与激活STAT4通路，增加NK细胞IFN-γ分泌量，下调Bcl-xl、Bcl-2表达，上调Bax表达，进而促进结肠癌细胞凋亡相关。